用IL-33轴结合拮抗剂治疗急性呼吸窘迫综合征
文献发布时间：2023-06-19 19:07:35
背景技术
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种危及生命的病症，在该疾病的情况下肺部无法为人体的重要器官提供足够的氧气。ARDS的特征性症状包括严重的呼吸急促、快速的浅呼吸、疲倦、困倦或混乱、以及感觉虚弱。ARDS有许多潜在病因，其典型地会导致肺部严重发炎。此类病因可能包括肺炎(病毒性或细菌性)或严重流感、败血症、严重胸部损伤(例如严重创伤和/或多发性骨折)、胃内容物误吸(例如意外吸入呕吐物)、烟雾或有毒化学物质吸入、近乎溺水、肺挫伤、脂肪栓塞、肺血管炎、非心源性休克或输血不良反应。
尽管死亡通常与潜在的健康状况而非与ARDS本身有关，但由于ARDS通常是由严重的健康状况引起的，因此死亡率相对较高。尽管如此，需要为ARDS提供有效治疗，以改善患者结局。为ARDS提供有效的预防策略还可以通过缩短患者住院时间和将入院患者对重症监护的需求降低至入院初级保健机构来缓解医疗保健系统的压力。ARDS患者通常需要机械插管或使用呼吸机来辅助呼吸。流体和营养物质也可能需要通过鼻胃管供应给患者。有时，根据ARDS的严重程度和潜在的健康状况，患者可能会在医院住院数周或甚至数月。对于那些存活者，与神经和肌肉损伤有关的长期并发症可能持续存在，这可能导致疼痛和虚弱。
因此，需要用于治疗或预防ARDS的新颖的有效的疗法。
发明内容
本文提供了治疗或预防有风险的患者的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
在另一方面，本披露提供了一种治疗患者的低氧血症的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
在另一方面，本披露提供了一种治疗受试者的严重肺部炎症的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
在另一方面，本披露提供了一种治疗或预防患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，该方法包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
本文还提供了预防或治疗患者的急性呼吸功能不全的方法，该方法包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。在一些实例中，该方法用于治疗或预防由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的急性呼吸功能不全。
在另一方面，本披露提供了一种治疗和/或预防过度肺部炎症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂
在一些实例中，该IL-33轴结合拮抗剂是抗体或其抗原结合片段。
在一些实例中，该抗体或其抗原结合片段是包含以下的抗IL33抗体或其抗原结合片段：具有SEQ ID NO：37的序列的VHCDR1、具有SEQ ID NO：38的序列的VHCDR2、具有SEQ IDNO：39的序列的VHCDR3、具有SEQ ID NO：40的序列的VLCDR1、具有SEQ ID NO：41的序列的VLCDR2以及具有SEQ ID NO：42的序列的VLCDR3。
在一些实例中，该抗IL-33抗体或其抗原结合片段的VH和VL分别包含与SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：19具有至少95％、90％或85％同一性的氨基酸序列。
在一些实例中，该抗IL-33抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的序列的VH和具有SEQ ID NO：19的序列的VL。
在一些实例中，该抗IL-33抗体或其抗原结合片段选自人抗体、嵌合抗体和人源化抗体。
在一些实例中，该抗IL-33抗体或其抗原结合片段选自天然存在的抗体、scFv片段、Fab片段、F(ab′)2片段、微型抗体、双体抗体、三体抗体、四体抗体和单链抗体。
在一些实例中，该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
附图说明
参考以下附图对本披露进行描述，其中：
图1A示出了在感染了HRV-A并单独或与ILC2一起孵育7天的ALI中，cxcl10mRNA的显著增加(供体n＝5)。
图1B示出了在感染了HRV-A并单独或与ILC2一起孵育7天的ALI中，病毒反应蛋白IP-10的分泌显著增加(供体n＝5)。
图1C示出了感染了HRV-A的ALI激活了ILC2并诱导其分泌IL-5
图1D示出了激活的ILC2释放的细胞因子作用于ALI培养物以显著上调ccl26的表达(供体n＝5)
图1E示出了感染了HRV-A、然后与ILC2和抗警报素(alarmin)剂或同种型对照一起孵育的ALI阻止了ILC2的IL-5分泌
图2A示出了从获得自COVID-19阳性人的血清样品测得的IL-33(redIL-33/sST2复合物)和游离的还原形式的IL-33(还原型IL-33)的水平
图2B示出了从COVID-19阳性人和健康受试者对照获得的血清样品中IL-33/sST2复合物的水平
图3显示IL-33充当上游警报素细胞因子，其响应于肺损伤和细胞死亡而从肺上皮和内皮细胞中快速释放。
具体实施方式
一般定义
应理解，无论在什么情况下在本文用语言“包含”描述方面时，还提供了关于“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的其他类似方面。
除非明确声明或从上下文显而易见，如本文所用，术语“或”被理解为包括在内。如在本文中在诸如“A和/或B”等短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”两者、“A或B”、“A”和“B”。同样，如在诸如“A、B和/或C”等短语中所用的术语“和/或”意图涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
当用于修饰数值或数值范围时，术语“约”和“大约”指示在该值或范围以上多至10％和以下低至10％的偏差仍在所述值或范围的预期含义内。应理解，无论在什么情况下在本文用语言“约”或“大约”数值或范围描述方面时，还提供了提及指定数值或范围(没有“约”)的其他类似方面。
“施用(administer、administering、administration)”等是指可以用于使得能够递送药物(例如，如本文所述的IL-33轴结合拮抗剂，例如抗IL33抗体或其抗原结合片段)的方法。可以与本文所述的药剂和方法一起使用的施用技术可见于例如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics[治疗学的药理学基础]，现行版，Pergamon[培格曼出版公司]；和Remington’s，Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]，现行版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa[宾夕法尼亚州伊斯顿麦克出版公司]。在一些方面，肠胃外(例如，静脉内或皮下)施用IL-33轴结合拮抗剂。
“抗体”在最广泛的意义上使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性。
“抗原结合片段”和“结合片段”是指除了完整抗体之外的分子，其包含与完整抗体所结合的抗原结合的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fab’-SH、双体抗体、三体抗体、四体抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv)以及由抗原结合片段形成的多特异性抗体。
“互补决定区”和“CDR”在本文用于指负责抗原结合的抗体或抗原结合片段的氨基酸残基。
“低氧血症”是指血液中的氧气低于正常水平。更具体地说，它是动脉血缺氧。低氧血症通常根据动脉血中的氧分压(mmHg)降低来定义，但也根据氧含量(ml氧气/dl血液)或血红蛋白(红细胞内的氧结合蛋白)与氧的饱和度百分比降低来定义。在急性情况下，低氧血症可能引起诸如呼吸窘迫中的那些症状等症状。这些包括呼吸急促、快速的浅呼吸、胸痛、混乱、头痛和快速心跳呼吸急促。通过测量从动脉(动脉血气)采集的血样中的氧气水平来确定低氧血症。它也可以通过使用脉搏血氧计测量血液的氧饱和度来估计。根据与正常范围的差异，将低氧血症分类为轻度、中度或重度。通常适用以下定义：轻度低氧血症：PaO
“高碳酸血症”(也称为血碳酸过多症)是一种血液中二氧化碳(CO
如本文所用的“IL-33”蛋白是指白介素33，尤其是哺乳动物白介素-33蛋白，例如以UniProt编号095760保藏的人类蛋白。这种实体不是单一种类，而是以具有不同功能活性的几种形式存在，例如全长和蛋白水解加工形式或氧化和还原形式(Cohen等人，2015NatComm[自然通讯]6：8327；Scott等人，2018Sci Rep[科学报告]8：3363)。鉴于还原形式在体内和在体外快速氧化，通常现有技术对IL-33的提及可能与氧化形式的检测最相关。术语“IL-33”和“IL-33多肽”以及“IL-33蛋白”可互换地使用。
“白介素1受体样1(IL 1RL 1)”和“ST2”可互换地使用，并且是指来自任何脊椎动物来源的任何天然ST2，所述脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)，除非另外指示。ST2在本领域中也称为DER4、T1和FIT-1。该术语涵盖“全长”未加工的ST2、以及由细胞中的加工产生的任何形式的ST2。ST2的至少四种同种型是本领域已知的，包括可溶性ST2(sST2，也称为IL 1RL 1-a)和跨膜ST2(ST2L，也称为IL 1RL1-b)，其由双启动子系统的差异mRNA表达产生；以及ST2V和ST2LV，其由可变剪接产生。ST2L的结构域结构包括三个细胞外免疫球蛋白样C2结构域、一个跨膜结构域和一个胞质Toll/白介素-1受体(TIR)结构域。sST2缺少ST2L内包含的跨膜和胞质结构域，并且包括独特的9个氨基酸(a.a.)C末端序列(参见例如，Kakkar等人Nat.Rev.Drug Disc.[自然综述：药物发现]407：827-840，2008)。sST2可以用作诱饵受体以抑制可溶性IL-33。该术语还涵盖ST2的天然存在的变体，例如剪接变体(例如，缺少第三个免疫球蛋白基序并具有独特的疏水尾的ST2V和缺少ST2L的跨膜结构域的ST2LV)或等位基因变体(例如，如本文所述对哮喘风险具有保护作用或赋予哮喘风险的变体)。示例性人ST2的氨基酸序列可以例如在UniProtKB登录号001638下找到。ST2与共受体蛋白IL-1RAcP一起是IL-33受体的一部分。IL-33与ST2和共受体白介素-1受体辅助蛋白(IL-1 RAcP)的结合形成1∶1∶1三元信号传导复合物，以促进下游信号转导(Lingel等人Structure[结构]17(10)：1398-1410,2009；和Liu等人Proc.Nat.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]110(37)：14918-14924，2013)。
“IL-33轴结合拮抗剂”是指抑制IL-33信号传导分子与一种或多种其结合配偶体结合的相互作用的分子。如本文所用，IL-33轴结合拮抗剂包括IL-33拮抗剂、ST2拮抗剂(例如，ST2L拮抗剂)和IL-1RAcP拮抗剂。
如本文所用，术语如“治疗(treating或treatment或to treat)”或“缓解(alleviating或to alleviate)”是指治愈、减慢、减轻已诊断的病理病症或障碍的症状，和/或停止已诊断的病理病症或障碍的进展的治疗性措施。因此，需要治疗的那些患者包括已经诊断患有或怀疑患有所述障碍的那些。需要治疗的患者或受试者可以包括诊断患有2019冠状病毒(COVID-19)的那些和已经感染了严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的那些。
“治疗有效量”或“有效量”是指本披露的至少一种化合物或包含至少一种此类化合物的药物组合物当作为单次剂量或一系列剂量的一部分施用给患者时有效地产生至少一种治疗效果的量。最佳剂量通常可以使用实验模型和/或临床试验确定。治疗剂的最佳剂量可取决于患者的体质、体重和/或血容量。可以通过确定生物流体例如血液、血液级分(例如，血清)和/或尿液和/或来自患者的其他生物样品中的化合物(或化合物的代谢物)的水平来监测施用给患者的化合物的水平。本领域实施的检测化合物或其代谢物的任何方法都可以用于测量治疗方案过程期间化合物的水平。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换地使用。受试者可以是动物。在一些方面，受试者是哺乳动物，如非人动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠、小鼠、猴或其他灵长类动物等)。在一些方面，受试者是食蟹猴。在一些方面，受试者是人。
治疗方法
本披露提供了用于治疗或预防ARDS或与其相关的症状(包括低氧血症和/或过度肺部炎症)的方法。这些方法包括向受试者患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
在一些实例中，该受试者是有发展ARDS风险的患者。因此，该方法可以用于预防有风险的患者的ARDS。
如果受试者具有一种或多种以下状况，则他们可能有发展ARDS的风险：肺炎(病毒性或细菌性)或严重流感、败血症、严重胸部损伤(例如严重创伤和/或多发性骨折)、胃内容物误吸(例如意外吸入呕吐物)、烟雾或有毒化学物质吸入、近乎溺水、肺挫伤、脂肪栓塞、肺血管炎、非心源性休克或输血不良反应。
这些状况可能导致患上低氧血症和或过度(或“严重”)肺部炎症。因此，在具有一种或多种上述状况的患者中存在低氧血症或过度肺部炎症可以是用IL-33轴结合拮抗剂治疗以防止患上ARDS的候选者。
阻断IL-33信号传导轴可以防止任何以下肺部变得严重发炎的状况或事件后肺部炎症和细胞损伤循环的扩大：肺炎(病毒性或细菌性)或严重流感、败血症、严重胸部损伤(例如严重创伤和/或多发性骨折)、胃内容物误吸(例如意外吸入呕吐物)、烟雾或有毒化学物质吸入、近乎溺水、肺挫伤、脂肪栓塞、肺血管炎、非心源性休克或输血不良反应。由这些状况或事件引起的严重肺部炎症可能导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
因此，本披露提供了治疗或预防有风险的患者的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。在一些实例中，该方法用于预防所述患者的ARDS。在一些实例中，该患者可能患有过度肺部炎症。
在一些实例中，用于进行治疗的患者患有轻度、中度或中度至重度低氧血症。低氧血症的存在表明患者正在经历次优的气体交换并且有发展ARDS的风险。因此，该方法可以适用于患有低氧血症的患者，以便减少或抑制低氧血症，从而防止患上ARDS。
在其他实例中，本披露提供了治疗患者的低氧血症的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。在一些实例中，该低氧血症是轻度、中度或中度至重度低氧血症。
在一些实例中，在任何上述方法中，该患者可能患有高碳酸血症。
在一些实例中，本披露提供了治疗受试者的过度肺部炎症的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。在一些实例中，该患者患有ARDS或有发展ARDS的风险。
在一些实例中，在任何上述方法中，该过度肺部炎症可能由以下引起：肺炎(病毒性或细菌性)或严重流感、败血症、严重胸部损伤(例如严重创伤和/或多发性骨折)、胃内容物误吸(例如意外吸入呕吐物)、烟雾或有毒化学物质吸入、近乎溺水、肺挫伤、脂肪栓塞、肺血管炎、非心源性休克或输血不良反应。
在一些实例中，该方法减少或抑制ILC2的激活。在一些实例中，该方法减少或抑制肺中ILC2的激活。在一些实例中，该方法减少或抑制IL-5从ILC2中释放。
在一些实例中，该方法减少或抑制气道上皮中的ccl26表达。在一些实例中，该方法减少或抑制肺中的ccl26表达。CCL26对嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞具有趋化性。因此，在一些实例中，该方法减少嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞进入肺的趋化性。已经发现，支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数在早期ARDS中较低，但在晚期ARDS中增加，而嗜酸性粒细胞活性标记物升高与ARDS严重程度相关。因此，减少或抑制肺中的ccl26表达可以减少嗜酸性粒细胞向肺的趋化性，从而防止或减少ARDS的进展。
在一些实例中，在任何上述方法中，该患者患有肺炎。在一些实例中，该肺炎是病毒性肺炎。
在一些实例中，该患者患有冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染。在一些实例中，在任何上述方法中，该ARDS、低氧血症或过度肺部炎症由SARS-CoV-2诱导。
在一些实例中，该患者的动脉氧小于79mm HG。在一些实例中，该患者的氧分压在60与79mm HG之间，包括端值。在一些实例中，该患者的氧分压小于60mm HG。在一些实例中，氧分压在40与59mmHg之间，包括端值。在一些实例中，和重度低氧血症：该患者的氧分压是40mmHg。在一些实例中，该患者没有或尚未接受机械通气。
本文还披露了治疗或预防患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂，如本文所述的那些。
严重COVID-19感染的特征是肺血管内皮、气道和肺泡上皮损伤，从而导致细胞因子释放。这导致肺泡水肿、低氧血症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和死亡。
IL-33充当上游警报素细胞因子，其响应于损伤和细胞死亡而从肺上皮和内皮细胞中快速释放(图3)。这表明IL-33在急性肺损伤中具有病理生理作用。这些实例表明，在诊断为COVID-19感染后住院时，患者血清中的IL-33水平升高。
IL-33也已经被证明响应于细胞损伤和死亡，在病毒驱动的肺部感染(包括人鼻病毒、RSV、病毒性流感)中释放。急性和慢性肺损伤的动物模型类似地与IL-33升高和T1/2细胞因子(例如IL-6)上调相关(Kearley JA等人(2015)Immunology[免疫学])。还已知的是，COVID～19具有致细胞病变性，这可能导致从肺上皮和内皮细胞中释放预先储存的IL-33，以驱动和扩大炎症和细胞损伤的循环。
因此，IL33轴结合拮抗剂可用于防止从呼吸上皮和/或内皮中释放的IL-33蛋白作为COVID-19的结果的信号传导。阻断IL-33信号传导轴可以防止在COVID-19患者呼吸道中观察到的炎症和细胞损伤循环的扩大。事实上，阻断IL-33信号传导轴可以防止任何以下肺部变得严重发炎的状况或事件后肺部炎症和细胞损伤循环的扩大：肺炎(病毒性或细菌性)或严重流感、败血症、严重胸部损伤(例如严重创伤和/或多发性骨折)、胃内容物误吸(例如意外吸入呕吐物)、烟雾或有毒化学物质吸入、近乎溺水、肺挫伤、脂肪栓塞、肺血管炎、非心源性休克或输血不良反应。由这些状况或事件引起的严重肺部炎症可能导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ARDS的特征性症状包括严重的呼吸急促、快速的浅呼吸、疲倦、困倦或混乱、以及感觉虚弱。因此，适合地，本文提供了治疗患者的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或其一种或多种症状的方法，该方法包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
在另一方面，本文提供了治疗或预防患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了用于治疗或预防COVID-19的方法中的IL-33轴结合拮抗剂，该方法包括施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了有效量的IL-33轴结合拮抗剂在治疗或预防COVID-19的方法中的用途。本披露还提供了IL-33轴结合拮抗剂在制造用于治疗或预防COVID-19的药物中的用途。
在另一方面，本文提供了治疗患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了用于治疗COVID-19的方法中的IL-33轴结合拮抗剂，该方法包括施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了有效量的IL-33轴结合拮抗剂在治疗COVID-19的方法中的用途。本披露还提供了IL-33轴结合拮抗剂在制造用于治疗或预防COVID-19的药物中的用途。
适合地，该方法可以用于预防或治疗患者的由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的急性呼吸功能不全，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了用于治疗或预防由冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的急性呼吸功能不全的方法中的IL-33轴结合拮抗剂，该方法包括施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了有效量的IL-33轴结合拮抗剂在治疗或预防由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的急性呼吸功能不全的方法中的用途。本披露还提供了IL-33轴结合拮抗剂在制造用于治疗或预防由冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的急性呼吸功能不全的药物中的用途。适合地，这些方法、组合物或用途可以用于预防或治疗患者的由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的加重急性呼吸功能不全，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。
适合地，该方法可以用于预防或治疗患者的由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，其包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了用于治疗或预防由冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的ARDS的方法中的IL-33轴结合拮抗剂，该方法包括施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了有效量的IL-33轴结合拮抗剂在治疗或预防由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的ARDS的方法中的用途。本披露还提供了IL-33轴结合拮抗剂在制造用于治疗或预防由冠状病毒2(SARS-CoV-2)诱导的急性呼吸功能不全的药物中的用途。
适合地，治疗和/或预防被SARS-CoV-2感染的患者或患有COVID-19的患者的过度肺部炎症的方法包括向该患者施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了用于治疗或预防被SARS-CoV-2感染的患者或患有COVID-19的患者的过度肺部炎症的方法中的IL-33轴结合拮抗剂，该方法包括施用有效量的IL-33轴结合拮抗剂。本披露还提供了有效量的IL-33轴结合拮抗剂在治疗或预防被SARS-CoV-2感染的患者或患有COVID-19的患者的过度肺部炎症的方法中的用途。本披露还提供了IL-33轴结合拮抗剂在制造用于治疗或预防被SARS-CoV-2感染的患者或患有COVID-19的患者的细胞因子风暴的药物中的用途。过度肺部炎症的一个实例是“细胞因子风暴综合征”(CSS)或“细胞因子释放综合征”(CRS)。CSS是全身炎症反应综合征的一种形式，当大量白细胞被激活并释放炎性细胞因子，进而又激活更多的白细胞时，这就会发生。如图3所示，由COVID～19诱导的对肺上皮和/或肺泡内皮的损伤可能导致IL-33释放。IL33的释放诱导一系列炎症反应，从而可能导致大量白细胞(2型先天淋巴样细胞(ILC2)、嗜酸性粒细胞、自然杀伤细胞等)的募集和激活。大量白细胞的募集和激活可能会驱动并放大导致CSS或CRS的炎症循环。来自最近对中国武汉150例COVID-19确诊病例的回顾性多中心研究的死亡预测因素包括铁蛋白和IL-6升高，表明死亡可能是由病毒驱动的过度炎症所致(Ruan Q等人(2020)Intensive Care Med[重症监护医学])。因此，鉴于IL-33是响应于肺上皮损伤的炎症的主调节剂，IL-33的抑制可以有效地治疗或预防患者(例如，被SARS-CoV-2感染的患者)的过度肺部炎症。
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者已经确认或怀疑患有需要住院的COVID-19。在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者已经确认患有需要住院的COVID-19。在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者患有通过实验室测试和/或即时测试确认的SARS-CoV-2感染。在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者是成人(≥18岁)。
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，待治疗的患者在WHO的9分类别顺序量表上具有3至5级的得分。
临床改善的WHO的9分类别顺序量表：
0.未感染，无感染的临床或生物学证据
1.未住院，活动无限制
2.未住院，活动受限制
3.住院，不需要补氧
4.住院，需要补氧
5.住院，使用无创通气或高流量氧气设备
6.住院、插管和机械通气
7.住院、通气和附加器官支持(ECMO)
8.死亡
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者患有低氧血症。
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者具有一种或多种以下状况：肺部病症，如哮喘、COPD、肺气肿或支气管炎；心脏病，如心力衰竭；慢性肾脏疾病；肝脏疾病，如肝炎；影响大脑和神经的病症，如帕金森病、运动神经元疾病、多发性硬化症(MS)或脑瘫；糖尿病，如1型或2型糖尿病；镰状细胞病或该患者是否已切除脾脏；和/或免疫系统受损，如其中该患者患有HIV或AIDS，或其中该患者正在接受化疗。
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者在临床上肥胖。在一些实例中，该患者的BMI为40或更高。
在本文提供的方法、供使用的化合物和用途的一些实例中，该患者患有肺炎。该肺炎可以是经胸部影像学确认的肺炎。在一些实例中，该肺炎是病毒性肺炎。在一些实例中，该肺炎由SARS-CoV-2感染诱导。在一些实例中，该肺炎由以下诱导：甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、偏肺病毒、SARS-COV、中东呼吸综合征病毒(MERS-CoV)、汉坦病毒、单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、麻疹病毒、风疹病毒、巨细胞病毒、天花病毒或登革热病毒。在一些实例中，该肺炎由甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒或人副流感病毒诱导。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途显著减少了该患者接受呼吸支持(例如，侵入性或非侵入性呼吸支持，如机械通气或体外膜氧合(ECMO))的需要。
在本文提供的一些方法、供使用的化合物和用途中，该患者是人。在一些实例中，该患者是至少40岁、至少50岁、至少60岁、至少70岁、至少80岁或至少90岁。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途延长了至死亡的时间长度和/或提高了存活率。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途到第29天或更早(其中第1天被定义为向患者施用本文定义的疗法的第一剂的当天)，导致在9分类别顺序量表上至少2分的临床改善。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途减少了至出院的时间。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途减少了至该受试者被认为适合出院(在9分类别顺序量表上的得分为0、1或2)的时间。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途在第2、8、15、22和29天(其中第1天被定义为向患者施用本文定义的疗法的第一剂的当天)根据顺序量表将该受试者的恶化减少1、2或3分。
治疗COVID-19或该疾病的相关特征的方法的示例性实施例包括：
1.一种治疗或预防患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，该方法包括向该患者施用有效量的包含以下的抗IL33抗体或其抗原结合片段：具有SEQ ID NO：37的序列的VHCDR1、具有SEQ ID NO：38的序列的VHCDR2、具有SEQ ID NO：39的序列的VHCDR3、具有SEQID NO：40的序列的VLCDR1、具有SEQ ID NO：41的序列的VLCDR2以及具有SEQ ID NO：42的序列的VLCDR3。
2.一种预防或治疗患者的由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的急性呼吸功能不全的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如实施例1所述的抗IL33抗体或其抗原结合片段。
3.一种预防或治疗患者的由冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如实施例1所述的抗IL33抗体或其抗原结合片段。
4.一种治疗或预防被SARS-CoV-2感染的患者或患有COVID-19的患者的过度肺部炎症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如实施例1所述的抗IL33抗体或其抗原结合片段。
5.如任一项前述实施例所述的方法，其中该患者已经确认或怀疑患有需要住院的COVID-19。
6.如任一项前述实施例所述的方法，其中该患者患有呼吸窘迫和/或低氧血症。
7.如任一项前述实施例所述的方法，其中该患者具有一种或多种以下状况：
a.肺部病症，如哮喘、COPD、肺气肿或支气管炎；
b.心脏病，如心力衰竭；
c.慢性肾脏疾病；
d.肝脏疾病，如肝炎；
e.影响大脑和神经的病症，如帕金森病、运动神经元疾病、多发性硬化症(MS)或脑瘫；
f.糖尿病，如1型或2型糖尿病；
g.镰状细胞病或该患者是否已切除脾脏；和/或
h.免疫系统受损，如其中该患者患有HIV或AIDS，或其中该患者正在接受化疗。
8.如任一项前述实施例所述的方法，其中该患者的BMI为40或更高。
9.如任一项前述实施例所述的方法，其中该患者患有肺炎。
10.如任一项前述实施例所述的方法，其中该治疗显著减少了该患者接受呼吸支持的需要。
11.如实施例10所述的方法，其中该呼吸支持是侵入性的或非侵入性的。
12.如任一项前述权利要求所述的方法，其中该患者是至少40岁、至少50岁、至少60岁、至少70岁、至少80岁或至少90岁
13.如任一项前述实施例所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段有待肠胃外、例如静脉内或皮下施用给该患者。
14.如任一项前述实施例所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL分别包含与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：19具有至少95％、90％或85％同一性的氨基酸序列。
15.如实施例14所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的序列的VH和具有SEQ ID NO：19的序列的VL。
16.如任一项前述实施例所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段选自人抗体、嵌合抗体和人源化抗体。
17.如任一项前述实施例所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段选自天然存在的抗体、scFv片段、Fab片段、F(ab′)2片段、微型抗体、双体抗体、三体抗体、四体抗体和单链抗体。
18.如任一项前述实施例所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
19.如任一项前述实施例所述的方法，其中将该抗体以药学上可接受的形式施用给该患者。
在一些实例中，该方法用于与基线水平相比具有升高的总血清IL-33水平的患者。这些实例表明患有COVID-19的受试者的IL-33水平升高。患有COVID-19的住院受试者可能继续患上ARDS的症状。因此，鉴定具有升高的IL-33水平并且呈现与发展ARDS相关的症状(例如，低氧血症或严重肺部炎症)的受试者可以使得早期鉴定处于发展IL-33活性增加相关ARDS风险增加的患者成为可能。
这些实例还表明，人鼻病毒感染以IL-33依赖性方式驱动ILC2的激活。ILC2过度激活已经与ARDS的发病相关联。因此，似乎增加的IL-33活性可能是导致患上ARDS的肺炎(如病毒性肺炎)的常见病理机制。
因此，本文披露的方法可以用于具有高水平IL-33的患者。在一些实例中，该患者可能具有高水平的血清IL-33。在一些实例中，该患者可能具有高水平的血清IL-33/sST2复合物。
单独或与sST2复合的IL-33的水平可以通过本领域中可用的多种测定中的任一种来确定。
例如，IL-33(或IL-33/sST2复合物)的水平可以通过免疫测定来确定。
免疫测定典型地需要捕获试剂(如抗体)来捕获相关分析物，并且可选地需要探针试剂来检测相关分析物。合适的免疫测定技术是：ELISA(酶联免疫吸附测定)、S-plex、蛋白质印迹法、免疫细胞化学、免疫沉淀、亲和层析、生物层干涉法(Octet，佛特比奥公司(ForteBio))和生物化学测定如解离增强镧系元素荧光免疫测定(
蛋白质印迹分析通常包括制备蛋白质样品；使蛋白质样品在聚丙烯酰胺凝胶(例如，8-20SDS-PAGE，取决于抗原分子量)中进行电泳；将蛋白质样品从聚丙烯酰胺凝胶中转移到膜如硝化纤维素、PVDF或尼龙；将膜在封闭液(例如，具有3％BSA或脱脂乳的PBS)中进行封闭；将膜在洗涤缓冲液(例如，PBS-Tween 20)中洗涤；用稀释于封闭缓冲液中的一抗(感兴趣的抗体)封闭膜；将膜在洗涤缓冲液中洗涤；用稀释于封闭缓冲液中的与酶底物(例如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)或放射性分子(例如，32P或125I)缀合的二抗(其识别一抗，例如抗人抗体)封闭膜；将膜在洗涤缓冲液中洗涤；并且检测抗原的存在。本领域技术人员应知晓可以修改参数以增加所检测的信号并且降低背景噪声。对于关于蛋白质印迹方案的进一步讨论，参见例如Ausubel等人编辑(1994)Current Protocols in MolecularBiology[分子生物学实验指南](John Wiley&Sons，Inc.[约翰威利父子公司]，纽约)第1卷10.8.1处。
ELISA包括制备抗原；用抗原包被96孔微量滴定板的孔；将与可检测化合物如酶底物(例如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)缀合的感兴趣的抗体添加到孔中并且孵育一段时间；并且检测抗原的存在。在ELISA中，感兴趣的抗体不必与可检测化合物缀合；相反，可以将与可检测化合物缀合的二抗(其识别感兴趣的抗体)添加到孔中。此外，抗体可以包被孔而不是用抗原来包被孔。在这种情况下，与可检测化合物缀合的二抗可以在将感兴趣的抗原添加到包被的孔中之后来添加。本领域技术人员应知晓可以修改参数以增加所检测的信号以及本领域已知的ELISA的其他变化。对于关于ELISA的进一步讨论，参见例如Ausubel等人编辑(1994)Current Protocols in Molecular Biology[分子生物学实验指南](JohnWiley&Sons，Inc.[约翰威利父子公司]，纽约)第1卷13.2.1处。
在一些实例中，IL-33的水平可以通过使用称为S-plex测定的经修饰的ELISA来确定。S-plex测定可从梅索斯卡莱诊断有限责任公司(Meso Scale Diagnostics LLC)获得，附有合适的使用说明。
如本文所用的“高水平”意指高于基线值的水平。IL-33的基线值可以是从健康对照受试者的队列确定的IL-33或IL-33/sST2的预定量，或者它可以意指先前在患者中测量的IL-33或IL-33/sST2的基线水平。例如，这样的测量可能已经在对受试者的护理期间较早地确定，例如在患者入院之前获得的测量，其先决条件为对ARDS的易感性增加(例如，如果患者患有肺炎)。
因此，在一些实例中，本文披露的方法用于IL-33水平大于对照值、血清IL-33水平大于对照值或血清IL-33/sST2复合物水平大于对照值的患者。
在一些实例中，对照值包括从健康对照受试者获得的IL-33的预定义值。在一些实例中，对照值包括从患者获得的IL-33水平的先前值。
这种生物标记物分析可以使得能够鉴定已经受到肺损伤(例如，病毒感染、创伤等)，因此有发展ARDS风险的患者。这样的情况使得能够通过在表现出ARDS或与其相关的症状之前进行早期干预来预防ARDS。
因此，本文披露的方法可以用于预防ARDS，特别是在患者有发展ARDS的风险的情况下，例如，因为已知他们受到或他们已经受到对肺的损伤。
在一些实例中，该方法包括以下步骤：测量患者的IL-33水平，并且其中该患者具有超过对照IL-33值的IL-33水平，选择他们用于用本文披露的方法进行治疗。
在一些实例中，该方法用于患者中，其中该患者已经被确定为包括超过对照IL-33值的IL-33水平。
在一些实例中，本文提供的方法、供使用的化合物和用途减少了临床施用的氧的使用。IL-33轴结合拮抗剂。
可以适用于本文披露的方法的IL-33轴结合拮抗剂包括抗IL-33抗体或其抗原结合片段，包括33_640087-7B(如WO2016/156440中所述)、称为艾托奇单抗(etokimab)的ANB020(如WO2015/106080中所述)、9675P(如US2014/0271658中所述)、A25-3H04(如US2017/0283494中所述)、Ab43(如WO2018/081075中所述)、IL33-158(如US2018/0037644中所述)、10C12.38.H6.87Y.581lgG4(如WO2016/077381中所述)或其结合片段。其他示例性抗IL-33抗体或其抗原结合片段包括WO2016/156440、WO2015/106080、US2014/0271658、US2017/0283494、WO2018/081075、US2018/0037644或WO2016/077381中描述的任何其他抗IL-33抗体，将其全部通过引用并入本文。
其他示例性IL-33轴结合拮抗剂包括结合IL-33和/或其受体(ST-2)或共受体(IL1-RAcP)并阻断配体受体相互作用的多肽(例如，ST2-Fc蛋白，如WO2013/173761、WO2013/165894或WO2014/152195中描述的那些，将其各自通过引用以其整体并入本文；或可溶性ST2；或其衍生物)。
其他示例性IL-33轴结合拮抗剂还包括抗ST-2抗体或其抗原结合片段(例如，AMG-282(安进公司(Amgen))或STLM15(杨森公司(Janssen))或者WO2013/173761或WO2013/165894中描述的任何抗ST2抗体，将其各自通过引用以其整体并入本文)。
其他示例性IL-33轴结合拮抗剂包括基于IL-33受体的配体阱，如WO2018/102597中描述的那些，将其通过引用并入本文。
在一个实例中，该IL-33轴结合拮抗剂是结合分子。适合地，该结合分子可以是抗体或其抗原结合片段。
适合地，该结合分子与IL-33特异性结合。这样的结合分子也称为“IL-33结合分子”或“抗IL-33结合分子”。适合地，该结合分子与IL-33特异性结合并抑制或减弱IL-33活性。
适合地，该IL-33结合分子与还原型IL-33、氧化型IL-33或还原型IL-33和氧化型IL-33两者特异性结合。
适合地，该结合分子可以通过结合处于还原或氧化形式的IL-33来减弱或抑制IL-33活性。适合地，其中该结合分子抑制或减弱还原型IL-33活性和氧化型IL-33活性，这通过结合处于还原形式的IL-33(即通过结合还原型IL-33)来实现。
适合地，该结合分子抑制或减弱redIL-33和oxIL-33两者的活性，从而抑制或减弱ST2信号传导和oxIL-33活性两者。最近，ox-IL33而不是red-IL-33与晚期糖基化终产物受体(RAGE)结合。ox-IL33依赖性RAGE信号传导已经被证明抑制上皮细胞增殖和迁移。
适合地，该结合分子可以按小于以下的结合亲和力(Kd)与redIL-33特异性结合：5x10
适合地，该结合分子可以按大于或等于10
适合地，该IL-33结合分子可以竞争性地抑制IL-33与表1中提及的任何结合分子结合：
表1：示例性抗IL-33抗体VH和VL对
已经报道了所有这些结合分子均与IL-33结合，并且抑制或减弱ST-2信号传导。因此，与表1中描述的任何抗体竞争结合IL-33的结合分子或其结合片段可以抑制或减弱ST-2信号传导。
如果结合分子或其片段以在某种程度上阻断参考抗体与给定表位结合的程度与该表位特异性结合，则称该结合分子或其片段竞争性地抑制该参考抗体与该表位的结合。竞争性抑制可以通过本领域已知的任何方法确定，例如固相测定(如竞争ELISA测定)、解离增强镧系元素荧光免疫测定(
适合地，该IL-33结合分子可以是包含选自表1的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)对的互补决定区(CDR)的抗体或抗原结合片段。在其中，对(pair)1对应于WO2016/156440中描述的33_640087-7B的VH和VL结构域序列。对2-7对应于US2014/0271658中描述的抗体的VH和VL结构域序列。对8-12对应于US2017/0283494中描述的抗体的VH和VL结构域序列。对13对应于WO2015/106080中描述的ANB020的VH和VL结构域序列。对14-16对应于WO2018/081075中描述的抗体的VH和VL结构域序列。对17对应于US2018/0037644中描述的IL33-158的VH和VL结构域序列。对18对应于WO2016/077381中描述的10C12.38.H6.87Y.581lgG4的VH和VL结构域序列。
适合地，该IL-33结合分子可以竞争性地抑制IL-33与结合分子33_640087-7B(如WO2016/156440中所述)的结合。适合地，WO2016/156440披露到33_640087-7B以特别高的亲和力与redIL-33结合并且减弱了ST-2和RAGE依赖性IL-33信号传导两者。
适合地，该IL-33结合分子是包含以下的抗IL-33抗体或其抗原结合片段：包含SEQID NO：1的序列的重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，和包含SEQ ID NO：19的序列的轻链可变区(LCVR)的互补决定区(CDR)。这些CDR对应于源自33_640087-7B(如WO2016/156440中所述)的那些，33_640087-7B结合还原型IL-33并抑制其转化为氧化型IL-33。在WO2016/156440中充分描述了33_640087-7B，将其通过引用并入本文。因此，此抗体可以特别适用于本文所述的方法中以抑制或减弱ST-2和RAGE信号传导两者。
适合地，技术人员已知本领域中可用于鉴定抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区内的CDR的方法。适合地，技术人员可以例如进行基于序列的注释。CDR之间的区域通常是高度保守的，因此，可以使用逻辑规则来确定CDR位置。技术人员可以使用用于常规抗体的一组基于序列的规则(Pantazes和Maranas，Protein Engineering，Design andSelection[蛋白质工程化、设计与选择]，2010)，可替代地或另外地，他还可以基于多序列比对来完善规则。可替代地，技术人员可以使用BLAST+的BLASTP指令将抗体序列与根据Kabat、Chothia或IMGT方法操作的公众可获得的数据库进行比较，以鉴定最类似的注释序列。这些方法中的每一种均设计了独特的残基编号方案，根据该编号方案对高变区残基进行编号，然后根据某些关键位置确定六个CDR中的每一个的起始和结束。例如，在与最类似的注释序列比对后，可以将CDR从注释序列外推至非注释序列，从而鉴定CDR。合适的工具/数据库是：例如，Kabat数据库、Kabatman、Scalinger、IMGT、Abnum。
适合地，该结合分子是包含选自表1的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)对的IL-33抗体或抗原结合片段。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：1的序列的VH结构域和SEQ ID NO：19的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：7的序列的VH结构域和SEQ ID NO：25的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：11的序列的VH结构域和SEQ ID NO：29的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：13的序列的VH结构域和SEQ ID NO：31的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：16的序列的VH结构域和SEQ ID NO：34的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：17的序列的VH结构域和SEQ ID NO：35的序列的VL结构域。
因此，适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：18的序列的VH结构域和SEQ ID NO：36的序列的VL结构域。
适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含可变重链，该可变重链包含源自独立地选自SEQ ID NO：1、7、11、13、16、17和18的重链可变区的3个CDR。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含根据SEQ ID NO：1的重链可变区的3个CDR。
适合地，该IL-33抗体或抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区包含独立地选自SEQ ID NO：19、25、29、31、34、35和36的轻链可变区中的3个CDR。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区包含根据SEQ ID NO：19的轻链可变区中的3个CDR。
因此，适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含独立地选自SEQ ID NO：1、7、11、13、16、17和18的重链可变区的3个CDR，并且包含轻链可变区，该轻链可变区包含独立地选自SEQ ID NO：19、25、29、31、34、35和36的轻链可变区中的3个CDR。
因此，适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含根据SEQ ID NO：1的重链可变区的3个CDR，并且包含轻链可变区，该轻链可变区包含根据SEQ ID NO：19的轻链可变区中的3个CDR。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含具有VH CDR 1-3的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)，VH CDR1-3分别具有SEQ ID NO：37、38和39的序列，其中一个或多个VHCDR具有3个或更少的单个氨基酸取代、插入和/或缺失。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH结构域，该VH结构域包含分别为SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39的VHCDR 1-3。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH结构域，该VH结构域包含分别由SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39组成的VHCDR 1-3。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含具有VL CDR 1-3的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)，VL CDR 1-3分别具有SEQ ID NO：40、41和42的序列，其中一个或多个VLCDR具有3个或更少的单个氨基酸取代、插入和/或缺失。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VL结构域，该VL结构域包含分别为SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42的VLCDR 1-3。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VL结构域，该VL结构域包含分别由SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42组成的VLCDR 1-3。
因此，适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：37的序列的VHCDR1、具有SEQ ID NO：38的序列的VHCDR2、具有SEQ ID NO：39的序列的VHCDR3、具有SEQID NO：40的序列的VLCDR1、具有SEQ ID NO：41的序列的VLCDR2以及具有SEQ ID NO：42的序列的VLCDR3。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH具有与根据SEQ IDNO：1、7、11、13、16、17和18的VH具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH具有与根据SEQ IDNO∶1的VH具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中上文披露的VH具有如下序列，其中框架中的1、2、3或4个氨基酸缺失、用不同氨基酸插入和/或独立地替换。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VL具有与根据SEQ IDNO：19、25、29、31、34、35和36的VL具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VL具有与根据SEQ IDNO：19的VL具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中上文披露的VL具有如下序列，其中框架中的1、2、3或4个氨基酸独立地缺失、用不同氨基酸插入和/或替换。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH具有与根据SEQ IDNO：1、7、11、13、16、17和18的VH具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，并且该VL具有与根据SEQ ID NO：19、25、29、31、34、35和36的VL具有至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH具有由SEQ ID NO：1、7、11、13、16、17和18组成的氨基酸序列，并且该VL具有由SEQ ID NO：19、25、29、31、34、35和36组成的氨基酸序列。
适合地，该IL-33抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH具有由SEQ ID NO：1组成的氨基酸序列，并且该VL具有由SEQ ID NO：19组成的氨基酸序列。
组合物和施用
本文所述的医学用途和方法中的IL-33拮抗剂可以以药物组合物的形式施用给患者。
适合地，本文中对“一种/该(a/the)IL-33拮抗剂”的任何提及也可以指包含一种/该(an/the)IL-33拮抗剂的药物组合物。适合地，该药物组合物可以包含一种或多种IL-33拮抗剂。
适合地，该IL-33拮抗剂可以按药学有效量施用以用于体内治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)、SARS-CoV-2感染和/或其症状。
适合地，应当将IL-33拮抗剂的“药学有效量”或“治疗有效量”理解为意指足以实现与IL-33有效结合并实现益处，例如改善如本文中医学用途/方法中所述的疾病或病症的症状的量。
适合地，该IL-33拮抗剂或其药物组合物可以根据前述治疗方法/医学用途以足以产生治疗效果的量施用给人或其他动物。
适合地，该IL-33拮抗剂或其药物组合物可以按常规剂型施用给此种人或其他动物，该剂型通过根据已知技术将IL-33拮抗剂与常规药学上可接受的载体或稀释剂组合来制备。
本领域技术人员应认识到，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特征通过与其组合的活性成分的量、施用途径以及其他熟知变量来确定。本领域技术人员应进一步了解，包含一种或多种种类的IL-33拮抗剂的混合物可以被证明是特别有效的。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的IL-33拮抗剂的量将根据所治疗的受试者和特定的施用方式而变化。适合地，该药物组合物可以按单次剂量、多次剂量或经确定时间段以输注形式施用。适合地，也可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗性或预防性反应)。
适合地，该IL-33拮抗剂经配制以便促进IL-33拮抗剂的施用并提升其稳定性。
适合地，药物组合物经配制以包含药学上可接受的无毒的无菌载体，如生理盐水、无毒缓冲剂、防腐剂等。
适合地，该药物组合物可以包含药学上可接受的载体、无菌水性或非水性溶液、悬浮液和/或乳液。
适合地，用于可注射用途的药物组合物可以包括无菌水性溶液(在可溶于水时)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。在此类情况下，该组合物必须是无菌的并且应当具有达到容易注射的程度的流动性。在制造和储存条件下它应当是稳定的，并且将被保存以防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。
用于本文披露的治疗方法中的合适配制品描述于Remington′s PharmaceuticalSciences[雷明顿药物科学](Mack Publishing Co.[麦克出版公司])第16版(1980)中。
适合地，可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来实现对微生物作用的预防。在许多情况下，在该药物组合物中包括等渗剂将是合适的。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂来实现可注射组合物的延长吸收。
适合地，可以通过以下方式来制备无菌可注射溶液：将IL-33轴结合拮抗剂以所需的量根据需要与一种本文列举的成分或这些成分的组合掺入适当的溶剂中，随后进行过滤灭菌。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒剂中来制备分散液，该无菌媒剂含有基础分散介质以及来自以上列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法可以是真空干燥和冷冻干燥，这些方法产生活性成分的粉末以及来自其以前的无菌过滤溶液的任何其他所需成分。
将IL-33拮抗剂或其药物组合物施用给有需要的受试者的方法可以由本领域技术人员容易地确定。
适合地，该IL-33轴结合拮抗剂或其药物组合物的施用途径可以是例如口服、肠胃外、通过吸入或局部。适合地，如本文所用的术语肠胃外包括例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、经直肠或经阴道施用。
适合地，该IL-33拮抗剂或其药物组合物可以按可接受的剂型(包括例如胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液)口服施用。
适合地，肠胃外配制品可以是单次推注剂量、输注或负荷推注剂量，随后是维持剂量。这些组合物可以按特定的固定或可变的间隔施用，例如每天一次，或基于“根据需要”施用。
适合地，可以将上文所述的用于制备本文所述的药物组合物的组分以试剂盒的形式包装和出售。这样的试剂盒将适合地具有标签或包装说明书，指示相关药物组合物可用于治疗患有或倾向于患有疾病或障碍的受试者。
实例
实例1
呼吸道病毒感染与80％的哮喘加重发作相关。这些加重的医疗费用高，导致发病，并且在一些情况下甚至导致死亡。因此，需要新颖的治疗工具来缓解病毒加重和由此引发的炎症。改善治疗的第一步是了解病毒性气道炎症的机制。已经开发出一种新颖的肺气液界面(ALI)共培养系统，以了解病毒感染期间上皮与第2组先天淋巴样细胞(ILC2)之间的串扰。它们位于肺粘膜内，快速响应于由受损上皮释放的警报素细胞因子(IL-33、TSLP和IL-25)。ILC2是前线免疫细胞，其在驱动炎症反应中起着至关重要的作用。它们的活性已经与ARDS的病理生理学相关联。
在此模型系统中，具有抗IL-33活性的药物候选分子能够防止由感染的上皮细胞驱动的ILC2激活。
将原代支气管上皮细胞(龙沙公司(Lonza))接种到24孔板中的0.4μm孔聚酯膜上，使其浸没在培养基中7天，然后气提。这促进了基底细胞分化为杯状细胞和纤毛细胞。在病毒感染前将培养物维持21天。
将ILC2通过CD161表达细胞的阳性选择从外周血单核细胞中分离出，并且通过流式细胞术对CD127+、CRTH2+和c-KIT+/-细胞进行分选。
qPCR分析-将ALI裂解到TRI
细胞因子分析-从ALI培养物的基底外侧区域收集上清液，并且使用来自R&D系统公司(R&D systems)的
使ALI经28天分化，在病毒经由纤毛细胞进入的顶端侧上感染人鼻病毒-A(HRV-A)2小时。然后将从人白细胞锥分离的ILC2添加到ALI培养物的基底外侧区域中，并且将其孵育4-7天。
使ALI感染+/-HRV-A，然后单独或与ILC2一起孵育7天。通过观察病毒反应基因cxcl10的上调和病毒反应蛋白IP-10的分泌来评价病毒感染。在HRV-A感染后，cxcl10mRNA和IP-10释放显著增加。通过将ALI单独与ILC2一起孵育，反应没有改变(供体n＝5)(图1A和1B)。
受感染的ALI分泌了激活ILC2并诱导其分泌IL-5的警报素细胞因子(图1C)。随后，激活的ILC2释放了作用于ALI培养物的细胞因子，以显著上调ccl26的表达，ccl26对嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞具有趋化性(图1D)。(供体n＝5)
还将受感染的ALI与ILC2和IL-33结合拮抗剂一起孵育。该IL-33轴结合拮抗剂抑制了HRV-A感染的ALI诱导的ILC2分泌IL-5(图1E)。这表明IL-33轴结合拮抗剂可用于防止ILC2激活，因此可用于预防或治疗肺中的炎症以及与其相关的病症，如ARDS。
实例2
在来自100名同意进行标题如下研究的人供体的100份COVID阳性血清样品中测量了血清中IL-33的量：“评价常规分子即时测试对到医院就诊的成人的COVID-19的临床影响：一项前瞻性、干预性、非随机实施前后研究(CoV-19POC)(Evaluating the clinicalimpact of routine molecular point-of-care testing for COVID-19in adultspresenting to hospital：A prospective，interventional，non-randomized pre andpost implementation study(CoV-19POC))”；REC参考：20/SC/0138；IRAS项目ID：280621。
在特异性免疫测定中测量了游离的还原形式的IL-33(redIL-33)和IL-33-sST2复合物(IL-33/sST2)。样品分析使用定制S-PLEX测定(默沙东公司(MSD))，使用由阿斯利康公司(AstraZeneca)内部开发的同种型特异性IL-33单克隆抗体来进行，这使得检测下限能够在fg/ml范围内。一式两份地分析了样品。
图2A中展示的结果示出了COVID-19样品中的IL-33/sST2和redIL-33水平。图2B显示与健康血清对照相比，COVID-19阳性血清样品中的IL-33/sST2复合物水平显著升高。
实例3
进行了一项II期研究，以评价将MEDI3506添加到治疗COVID-19的最佳支持治疗中的安全性和功效。MEDI3506(在本文中也披露为33_640087-7B)是一种中和IL33的全人单克隆抗体。IL33是一种广泛作用的损伤反应细胞因子，其响应于病毒感染和组织损伤而释放。最佳支持治疗由治疗医生和国际指南决定。研究患者是成人(≥18岁)，其通过实验室测试和/或即时测试确认SARS-CoV-2感染，并且在9分顺序量表上得分为3至5级：
0.未感染，无感染的临床或生物学证据
1.未住院，活动无限制
2.未住院，活动受限制
3.住院，不需要补氧
4.住院，需要补氧
5.住院，使用无创通气或高流量氧气设备
6.住院、插管和机械通气
7.住院、通气和附加器官支持(ECMO)
8.死亡
如果患者符合任何以下标准，则他们不参加该研究：
·先前在9分顺序量表上得分为6或7的患者。
·如由高级主治临床医生所决定的，参加研究对其无最佳益处的任何患者。
·已知活动性感染HIV或者乙型或丙型肝炎。
·第4阶段严重的慢性肾脏疾病或需要透析(即，估计肾小球滤过率＜30mL/min/1.73m
·以下心脏疾病的病史：
ο首次剂量前3个月内的心肌梗塞
ο不稳定型心绞痛
ο临床显著的节律障碍(心电图[ECG]上的长QT特征、持续性心动过缓[≤55bpm])、左束支传导阻滞、心脏起搏器或室性心律失常)病史或家族性长QT病史
·筛选12导联ECG，可测量的根据Fridericia校正的QTc间期(QTc intervalaccording to Fridericia correction，QTcF)＞500ms。
·预计在72小时内转移到为非研究中心的另一家医院。
·对任何研究药物过敏。
·实验性地超说明书使用药品作为COVID-19的治疗。
·参加研究药品的另一项临床研究的患者。
·活动性结核病定义为需要当前治疗结核病
该研究分两个阶段进行。第1阶段将评价MEDI3506作为护理标准(SoC)的附加项的初步安全性和功效。预期将有多达60名患者随机进行初步分析。患者将被随机分配接受SoC或作为SoC的附加项的MEDI3506。患者将在第1天被随机分配。随机分配到MEDI3506组的患者将以单次300mg IV剂量被施用MEDI3506。如果患者在第15天或之前进行侵入性通气，则将施用第二剂的300mg IV MEDI3506。
进行第2阶段以提供验证性数据，以全面评价疾病结局。第2阶段还将在扩展阶段分析严重不良事件(AE)、总体AE、疾病释放的合并感染并发症(例如，肺炎和败血性休克)以及总体死亡率。有待纳入第2阶段的患者数量将由第1阶段的结果决定。
主要终点将被测量为至9分类别顺序量表上至少2分的临床改善(从随机分配开始)的时间、至出院后的存活时间、或至被认为适合出院(在顺序量表上得分为0、1或2)的时间，到第29天以先到者为准。
次要终点如下：
·在第2、8、15、22和29天，根据顺序量表未恶化1、2或3分的患者比例。
·氧气使用的持续时间(天)和无氧天数。
·通气的持续时间(天)和无通气天数。
·任何形式的新通气使用的发生率和新通气使用的持续时间(天)。
·第2、8、15和29天依据治疗组的反应率(数量和％)。
·至出院后的存活时间。
·第15、29和60天的死亡率。
·从治疗开始日期到死亡的时间。
·SpO
·体格检查。
·临床实验室检查。
·生命体征(血压/心率/体温/呼吸频率)。
·不良事件。
·ICU和住院的持续时间(天)。
·NEWS2，在住院期间每天以及在第15天和第29天评估。
探索性终点如下：
·在第1、3、5、8、11、15天和(可选的)第29天住院期间，对口咽/鼻拭子中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)进行的定性和定量聚合酶链式反应(PCR)确定。
另外的序列
SEQ ID NO 37：SYAMS
SEQ ID NO 38：GISAIDQSTYYADSVKG
SEQ ID NO 39：QKFMQLWGGGLRYPFGY
SEQ ID NO 40：SGEGMGDKYAA
SEQ ID NO 41：RDTKRPS
SEQ ID NO 42：GVIQDNTGV
序列表
<110> 免疫医疗有限公司
<120> 用IL-33轴结合拮抗剂治疗急性呼吸窘迫综合征
<130> IL33-111-WO-PCT
<160> 42
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 VH
<400> 1
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ala Ile Asp Gln Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Lys Phe Met Gln Leu Trp Gly Gly Gly Leu Arg Tyr Pro
100 105 110
Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
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<210> 2
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 2 VH
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ser Asp Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 3
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 4
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr
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Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser His Tyr Val Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 5
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Trp
100 105 110
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115 120
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 6 VH
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Gly His Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Pro Thr Tyr Ser Arg Ser Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 7 VH
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Arg Tyr Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Ile Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 9 VH
<400> 9
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Ser Ala Arg Ser Arg Tyr His Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 10 VH
<400> 10
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 11 VH
<400> 11
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Gln Ser Ser His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 12 VH
<400> 12
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Ser Ser Tyr Leu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Leu Ala Thr Arg His Val Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 13
<211> 139
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 13 VH
<400> 13
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Gln Val Gln Leu Met Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
20 25 30
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser
35 40 45
Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
50 55 60
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Arg Asn Ser Asn Thr Asp Tyr Asn Gln Lys
65 70 75 80
Phe Lys Ala Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val
85 90 95
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100 105 110
Cys Ala Arg Pro Leu Tyr Tyr Tyr Leu Thr Ser Pro Pro Thr Leu Phe
115 120 125
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 14 VH
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20 25 30
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35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<210> 15
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 15 VH
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Phe Tyr
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 16 VH
<400> 16
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Phe Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ile His Gly Ile Arg Ala Ala Tyr Asp Ala Phe Ile Ile
100 105 110
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115 120
<210> 17
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 17 VH
<400> 17
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<210> 18
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 18 VH
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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85 90 95
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115
<210> 19
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 VL
<400> 19
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Glu Gly Met Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Arg Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
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65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Ile Gln Asp Asn Thr Gly Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 2 VL
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 3 VL
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Pro Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 4 VL
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 5 VL
<400> 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Val Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 6 VL
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Trp Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 7 VL
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 26
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 8 VL
<400> 26
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Val
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 27
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 9 VL
<400> 27
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ser Asn Met Arg Val Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Asp Asp Ser Gln
85 90 95
Lys Ala Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 10 VL
<400> 28
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ser Asn Met Arg Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Trp Ala Trp Asp Asp Ser Gln
85 90 95
Lys Val Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 29
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 11 VL
<400> 29
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ser Asn Met Arg Arg Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Gln
85 90 95
Lys Val Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 30
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 12 VL
<400> 30
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ser Asn Met Arg Arg Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Gln
85 90 95
Lys Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 31
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 13 VL
<400> 31
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val
20 25 30
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr
35 40 45
Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
50 55 60
Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
85 90 95
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys Thr Tyr Pro
100 105 110
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 14 VL
<400> 32
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ile Asn
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser His Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Gln Ser Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 15 VL
<400> 33
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ile Asn
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser His Arg Leu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Gln Pro Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 34
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 16 VL
<400> 34
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ile Asn
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser His Arg Leu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Gln Pro Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 17 VL
<400> 35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys His
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Tyr Asn Gln Gly Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 36
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 18 VL
<400> 36
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Lys Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Leu Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 HCDR1
<400> 37
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 HCDR2
<400> 38
Gly Ile Ser Ala Ile Asp Gln Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 HCDR3
<400> 39
Gln Lys Phe Met Gln Leu Trp Gly Gly Gly Leu Arg Tyr Pro Phe Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 LCDR1
<400> 40
Ser Gly Glu Gly Met Gly Asp Lys Tyr Ala Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 LCDR2
<400> 41
Arg Asp Thr Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PAIR 1 LCDR3
<400> 42
Gly Val Ile Gln Asp Asn Thr Gly Val
1 5
- 用于治疗选自脓毒症、脓毒症休克、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多器官功能障碍综合征(MODS)的疾病的NK-1受体拮抗剂
- 用于治疗急性呼吸窘迫综合征的基质结合囊泡(MBV)