组合物在制备预防或治疗肺损伤药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药领域。具体地，本发明涉及组合物在制备预防或治疗肺损伤疾病的药物中的用途。

背景技术

肺功能损伤是指肺部出现了混合性通气障碍的现象，此种疾病对患者身体造成的损害很大。肺功能受损会使患者出现咳嗽、痰多的现象，随着病情的加重，患者会出现呼吸不畅、体力不支、身体体质不佳的现象。肺功能损伤一般是各种疾病造成的，主要包括支气管炎以及肺气肿、肺脓肿亦或者是肺栓塞等疾病，也可能是肺炎、结核、气胸以及肺大疱、肺肿瘤等。病变一般发生在气管、支气管粘膜以及周围的组织。

PM2.5亦称作细颗粒物，是指环境空气中空气动力学当量直径小于等于2.5微米的颗粒物。PM2.5进入机体后，通过多种途径刺激炎性细胞释放大量炎症因子，诱发剧烈的炎症反应，过多的炎症因子本身所具有的机体破坏性会对呼吸道正常组织或细胞造成损伤，破坏肺泡腔血管基底膜和毛细血管膜结构，增加细胞膜通透性，导致细胞内各种蛋白酶等内容物漏出。

目前该疾病的治疗以药物治疗为主，常见有抗生素药物，如青霉素、阿莫西林、头孢菌素等，其治疗目的是抗感染治疗，防止疾病进一步发展；止咳药物，其治疗目的是缓解患者咳嗽症状；还有一些祛痰的药物等，但这些药物并不能从根本上治疗疾病，同时还会有一些副作用。而中医治疗最大的优势是未病先治、既病防变，在防治肺损伤方面，中医采用扶正祛邪的治疗原则，一是要扶助正气，增强机体免疫力，二是要祛邪，抵御外邪、驱邪外出，提高人体免疫力以及适应能力，防止疾病的发生及进一步加重。中成药可改善肺损伤患者肺功能，减少机体炎性因子的释放，整体上提高机体免疫力，改善肺功能。目前还没有有效的预防和治疗PM2.5造成高气道损伤的中成药。因此，预防或治疗肺损伤，尤其是PM2.5造成肺损伤的药物仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了组合物在制备药物中的用途，利用该组合物可以有效地预防或治疗肺损伤疾病，为相关科学研究和临床应用奠定基础，应用前景好。

本发明提出了组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于预防或治疗肺损伤，所述组合物包括：青皮、枳实、紫苏梗、厚朴、茯苓、法半夏、胆南星、蝉蜕、木蝴蝶、生姜、神曲。

青皮、枳实疏肝理气、调畅气机、气顺则痰消，为君药。紫苏梗、厚朴加强疏肝解郁，理气化痰之力；茯苓、法半夏、胆南星健脾和胃、燥湿化痰，以除生痰之源，共为臣药。蝉蜕、木蝴蝶疏风清热宣肺，润燥利喉开音，以除口干烟燥、声音嘶哑诸症，生姜、神曲合中化滞，共为佐使药。几味药之间共同作用，可以有效地起到预防或治疗肺损伤的效果。

根据本发明的实施例，上述组合物在制备药物中的用途还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述组合物包括：青皮40-60份、枳实40-60份、紫苏梗40-60份、厚朴40-60份、茯苓40-60份、法半夏40-60份、胆南星40-60份、蝉蜕40-60份、木蝴蝶40-60份、生姜6-8份和神曲40-60份。几味药以上述比例复配，具有较好的药效，可以有效地起到预防或治疗肺损伤的效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括：茯苓、法半夏、枳实、青皮、胆南星、橘红、砂仁、豆蔻、槟榔、合欢皮、神曲、紫苏梗、生姜、蝉蜕、木蝴蝶和厚朴。

青皮、枳实疏肝理气、调畅气机、气顺则痰消，为君药。槟榔、紫苏梗、厚朴、合欢皮合用，加强疏肝解郁，理气化痰之力；茯苓、砂仁、法半夏、橘红、豆蔻、胆南星健脾和胃、燥湿化痰，以除生痰之源，共为臣药。蝉蜕、木蝴蝶疏风清热宣肺，润燥利喉开音，以除口干烟燥、声音嘶哑诸症，生姜、神曲合中化滞，共为佐使药。诸药合用，共奏疏肝理气，化痰利咽之效。几味药之间共同作用，可以有效地起到预防或治疗肺损伤的效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括：茯苓40-60份、法半夏40-60份、枳实40-60份、青皮40-60份、胆南星40-60份、橘红40-60份、砂仁40-60份、豆蔻15-35份、槟榔40-60份、合欢皮40-60份、神曲40-60份、紫苏梗40-60份、生姜6-8份、蝉蜕40-60份、木蝴蝶40-60份和厚朴40-60份。几味药以上述比例复配，具有较好的药效，可以有效地起到预防或治疗肺损伤的效果。

根据本发明的实施例，所述肺损伤是因吸入PM2.5所致的。

根据本发明的实施例，所述组合物用于减轻肺组织结构受损、肺泡萎陷、肺泡间隔断裂和/或炎性细胞浸润。

根据本发明的实施例，所述组合物用于降低肺组织细胞中血清酸性磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性和乳酸脱氢酶活性。

酸性磷酸酶(ACP)是一种主要存在于巨噬细胞的溶酶体酶，可参与机体的防御反应，当巨噬细胞吞噬异物裂解死亡后，就会有大量的ACP从巨噬细胞释放到肺泡灌洗液中。碱性磷酸酶(AKP)主要由肺泡II型细胞产生，其含量多少提示肺泡II型细胞受损程度。乳酸脱氢酶(LDH)是一种广泛存在于机体各组织细胞中的胞浆酶，肺泡腔内的LDH主要来源于肺泡细胞损伤后渗漏和血液渗漏，肺泡腔内LDH水平可反映肺组织细胞膜受损程度，是一种反映细胞毒性的指标。发明人发现，本发明的组合物可以有效地降低ACP、AKP和LDH活性，尤其适用于预防或治疗吸入PM2.5致高气道损伤所引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述组合物用于降低肺组织中IL-17mRNA表达量、降低Th17mRNA表达量和Treg mRNA表达量的比值和/或提高Foxp3 mRNA表达量。

Th17和Treg均由CD

叉状头翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)是识别Treg细胞的常规标志物，是Treg细胞分化和表达功能的关键因子，可通过分泌TGF-β等抑炎因子，减轻炎症浸润，促进病毒清除，避免过度非特异免疫应答，抑制Th2应答，在抵抗胞外病原体入侵和抑制自身免疫中起着保护作用。

发明人发现，本发明的组合物可以降低肺组织中IL-17mRNA表达量、降低Th17mRNA表达量和Treg mRNA表达量的比值和/或提高Foxp3 mRNA表达量，尤其适用于预防或治疗吸入PM2.5致高气道损伤所引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述药物的剂型为丸剂、片剂或胶囊。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示了根据本发明一个实施例的各组大鼠肺部组织病理形态(200×)，a为对照组；b为模型组；c为A组；d为B组；e为I组；f为J组。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

在该实施例中，按照下列方法制备中药组合物：

1、配方组成：

茯苓50份、法半夏50份、枳实50份、青皮50份、胆南星50份、橘红50份、砂仁50份、豆蔻25份、槟榔50份、合欢皮50份、神曲50份、紫苏梗50份、生姜7.5份、蝉蜕50份、木蝴蝶50份、厚朴50份。

2、制备方法：

(1)按上述的配方称量，将枳实、青皮、神曲分别以文火清炒，炒至药材表面颜色发黄，备用；

(2)将厚朴用生姜水来制取药材后，备用；

(3)取茯苓、砂仁、胆南星各一半量，粉碎成140细粉，过筛，混匀，备用；

(4)将配方中的另九味药材及茯苓、砂仁、胆南星三味药材的剩余量加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至在温度为85℃时相对密度为1.32的稠膏与步骤(3)制备的细粉混匀，干燥，粉碎，制成细小颗粒，装入胶囊，即得。

实施例2

在该实施例中，按照下列方法制备中药组合物：

1、配方组成：

青皮50份、枳实50份、紫苏梗50份、厚朴50份、茯苓50份、法半夏50份、胆南星50份、蝉蜕50份、木蝴蝶50份、生姜7.5份和神曲50份。

2、制备方法：

(1)按上述的配方称量，将枳实、青皮、神曲分别以文火清炒，炒至药材表面颜色发黄，备用；

(2)将厚朴用生姜水来制取药材后，备用；

(3)取茯苓、砂仁、胆南星各一半量，粉碎成140细粉，过筛，混匀，备用；

(4)将配方中的另四味药材及茯苓、砂仁、胆南星三味药材的剩余量加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至在温度为85℃时相对密度为1.32的稠膏与步骤(3)制备的细粉混匀，干燥，粉碎，制成细小颗粒，装入胶囊，即得。

实施例3

在该实施例中，按照下列方法制备中药组合物：

1、配方组成：

茯苓60份、法半夏60份、枳实60份、青皮60份、胆南星60份、橘红60份、砂仁60份、豆蔻35份、槟榔60份、合欢皮60份、神曲60份、紫苏梗60份、生姜8份、蝉蜕60份、木蝴蝶60份、厚朴60份。

2、制备方法：

(1)按上述的配方称量，将枳实、青皮、神曲分别以文火清炒，炒至药材表面颜色发黄，备用；

(2)将厚朴用生姜水来制取药材后，备用；

(3)取茯苓、砂仁、胆南星各一半量，粉碎成120细粉，过筛，混匀，备用；

(4)将配方中的另九味药材及茯苓、砂仁、胆南星三味药材的剩余量加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至在温度为85℃时相对密度为1.28的稠膏与步骤(3)制备的细粉及适量辅料混匀，压制成片，包薄膜衣，即得片剂。

实施例4

在该实施例中，按照下列方法制备中药组合物：

1、配方组成：

茯苓40份、法半夏40份、枳实40份、青皮40份、胆南星40份、橘红40份、砂仁40份、豆蔻15份、槟榔40份、合欢皮40份、神曲40份、紫苏梗40份、生姜6份、蝉蜕40份、木蝴蝶40份、厚朴40份。

2、制备方法：

(1)按上述的配方称量，将枳实、青皮、神曲分别以文火清炒，炒至药材表面颜色发黄，备用；

(2)将厚朴用生姜水来制取药材后，备用；

(3)将配方中的十二味中药，粉碎成80目的细粉，过筛、混合均匀。

(4)将每100重量份的粉末加35重量份的炼蜜；再与适量的纯化水混合搅拌均匀、炼药、出条、制丸、干燥、筛丸、选丸，即制成丸剂。

实施例5

在该实施例中，按照下列方法制备中药组合物：

1、配方组成：

茯苓45份、法半夏45份、枳实45份、青皮45份、胆南星45份、橘红45份、砂仁45份、豆蔻20份、槟榔45份、合欢皮45份、神曲45份、紫苏梗45份、生姜7份、蝉蜕45份、木蝴蝶45份、厚朴45份。

2、制备方法：

(1)按上述的配方称量，将枳实、青皮、神曲分别以文火清炒，炒至药材表面颜色发黄，备用；

(2)将厚朴用生姜水来制取药材后，备用；

(3)取茯苓、砂仁、胆南星各一半量，粉碎成130细粉，过筛，混匀，备用；

(4)将配方中的另九味药材及茯苓、砂仁、胆南星三味药材的剩余量加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至温度为65℃、相对密度为1.18的浸膏，加乙醇调整含醇量至60％，取上清液，回收乙醇浓缩至温度为85℃、相对密度为1.28-1.32的稠膏；

(5)再将与步骤(3)制备的细粉及135份蔗糖、65份淀粉制粒，即得。

对比例1

与实施例1的区别之处在于不含青皮。

对比例2

与实施例1的区别之处在于不含紫苏梗。

对比例3

与实施例1的区别之处在于不含茯苓和法半夏。

对比例4

与实施例1的区别之处在于将青皮和枳实替换为橘皮和枳壳。

对比例5

与实施例1的区别之处在于将紫苏梗和厚朴替换为柴胡和甘草。

对比例6

与实施例1的区别之处在于将茯苓和法半夏替换为白术和款冬花。

实施例6

在该实施例中，研究实施例1制备的中药组合物对PM2.5所致大鼠气道高反应的干预作用。

一、试验药物的制备：

I组(本发明实施例1)、J组(本发明实施例2)、A组(对比例1)、B组(对比例2)、C组(对比例3)、D组(对比例4)、E组(对比例5)、F组(对比例6)、对照组(蒸馏水)。

将上述原料以实施例1的方法制备成药物组合物。

二、试验方法

1.PM2.5的采集与处理

于陕西中医药大学四号教学楼楼顶，使用天虹大流量采样器采集大气PM2.5于玻璃纤维膜上，采样高度为20m。将载有PM2.5的玻璃纤维膜剪掉边缘部分，裁剪为1cm×1cm大小，分装于50ml离心管中，加入纯水至40ml，低温超声震荡60min，将PM2.5洗脱，1800目筛过滤，滤液真空冷冻干燥，收集PM2.5颗粒4℃保存备用。

PM2.5溶液的配制：临用前，取0.22g PM2.5颗粒，溶于4mL生理盐水中，配成浓度为0.05g/mL混悬液，超声震荡10min。本实验中PM2.5的染毒剂量为10.8mg/kg，每次给予PM2.5生理盐水混悬液的体积为20μL/100g。

2.PM2.5致高气道大鼠模型的建立

105只SD大鼠适应性喂养1周后，采用简单随机法分为对照组10只及造模组95只。参考文献造模方法，采用鼻滴法给予大鼠PM 2.5溶液构建高气道模型，用10-100μL移液枪吸取相应剂量PM 2.5混悬液，缓慢滴入大鼠鼻腔，隔天染毒，连续24次，对照组鼻滴等量生理盐水。染毒及给药期间观察各组大鼠毛发、精神状况、口腔和鼻腔分泌物等情况。末次染毒后，观察大鼠体征表现；随机抽取5只造模组大鼠取肺组织作病理观察，见肺组织见大量炎症细胞浸润，肌层纤维排列紊乱，符合慢性咽炎动物模型特征，则判断为建模成功。

3.分组及给药

将造模成功的90只大鼠进行分组，每组10只，模型组与上述对照组给予同体积无菌水，剩余8组大鼠分别将I、J组和A、B、C、D、E、F组药物按照0.48g/kg的剂量连续灌胃给药14天，每天1次。末次给药结束后，禁食12小时，10％水合氯醛麻醉，腹主动脉采血；收集肺泡灌洗液，4℃，3500r离心10min，取上清液测定ACP、AKP、LDH活性；摘取肺组织固定于4％多聚甲醛中，脱水，石蜡包埋，HE染色，中性树脂封片，于光镜下观察病理变化；RT-qPCR测定肺组织中IL-17、Foxp3 mRNA的表达。

4.统计学方法

采用SPSS 26.0软件进行数据分析。计量资料均符合正态分布以(x±s)表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较，数据方差齐用LSD法，方差不齐用Tamhane'T2法，P＜0.05为差异有统计学意义。

三、实验结果

1.各组大鼠一般情况比较

空白组大鼠全程未出现明显异常，毛发、精神状况行为表现正常，口腔和鼻腔无明显分泌物，呼吸正常。模型组大鼠在造模35天后出现精神怠、少动，毛发发黄无光泽，鼻腔、口腔分泌物增多，呼吸急促伴有咳嗽、喘息。I、J组和A、B、C、D、E、F组大鼠随着给药时间，上述症状、体征逐步缓解。

2.各组大鼠肺部组织形态学结果

图1为本发明各组大鼠肺部组织病理形态(200×)，a为对照组；b为模型组；c为A组；d为B组；e为I组；f为J组。对照组大鼠肺组织结构清晰，肺泡腔结构完整，间质无炎性细胞浸润；模型组大鼠肺组织结构受损，肺泡萎陷，肺泡间隔断裂，可见大量炎性细胞浸润。I、J组大鼠肺泡腔渗血和炎性细胞浸润等现象较模型组和A组、B组减轻，其中I组现象减轻最明显。由此，表明该药物可减轻PM2.5所致大鼠肺部病理损伤，抑制促炎细胞因子的产生。

3.BALF中各生化指标测定

各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的生化指标结果如下表1所示。本实验通过对细胞毒性指标ACP、AKP、LDH活力进行测定，观察各组动物的肺部细胞和肺泡-毛细血管屏障损伤情况。通过表1可知，与对照组比较，模型组大鼠BALF中的ACP、AKP、LDH活力明显升高(p＜0.01)；与模型组相比，I、J、A、B、C、D、E、F组BALF中的ACP、AKP、LDH活力均显著降低(p＜0.01)，但I、J组降低明显，其中I组最明显。由此，表明该药物可以降低肺泡灌洗液内细胞毒性指标水平，有效改善肺泡细胞膜和肺泡上皮-毛细血管膜通透性。

表1各组大鼠BALF中生化指标水平

注：

4.各组大鼠肺组织IL-17、Foxp3 mRNA表达量和Th17/Treg比值

各组大鼠肺组织IL-17mRNA表达量、Foxp3 mRNA表达量、Th17 mRNA表达量与TregmRNA表达量的比值(记作Th17/Treg)结果如表2所示。与对照组比较，模型组大鼠肺组织中IL-17mRNA表达量、Th17/Treg比值明显升高(P＜0.05)、Foxp3 mRNA表达量明显下降(P＜0.05)；与模型组相比，中药各给药组IL-17mRNA表达量、Th17/Treg比值明显下降(P＜0.05)、Foxp3 mRNA表达量明显升高(P＜0.05)，其中I组效果最佳。表明药物可抑制促炎因子IL-17表达，促进Treg分化、抑制Th17生成，从而纠正Th17/Treg失衡，使机体免疫恢复稳态，从而改善PM2.5引起的高气道反应。

表2各组大鼠肺组织IL-17mRNA表达量、Foxp3 mRNA表达量和Th17/Treg比值

注：

四、实验结论

本发明的组合物可以有效改善肺泡细胞膜和肺泡上皮-毛细血管膜通透性，抑制促炎因子IL-17表达，促进Treg分化、抑制Th17生成，从而纠正Th17/Treg失衡，使机体免疫恢复稳态，改善PM2.5引起的高气道反应所导致的肺损伤。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。