一种用于麻黄鸡富硒降塑的生物养殖方法

技术领域

本发明属于家禽类生物学养殖技术领域，更具体地说，涉及一种麻黄鸡的富硒降塑的生态学养殖技术。

背景技术

硒是人体必需的微量元素，研究发现，人体缺硒可引起某些重要器官的功能失调，导致许多严重疾病发生。研究表明，低硒或缺硒人群通过适量补硒不但能够预防肿瘤、肝病等的发生，而且可以提高机体免疫能力，维护心、肝、肺、胃等重要器官正常功能，预防老年性心、脑血管疾病的发生。

自然界中的硒又分为植物活性硒和无机硒两种，无机硒一般指亚硒酸钠和硒酸钠，包括有大量无机硒残留的酵母硒、麦芽硒，从金属矿藏的副产品中获得，无机硒有较大的毒性，且不易被吸收，不适合人和动物使用。植物活性硒通过生物转化与氨基酸结合而成，一般以硒蛋氨酸的形式存在，植物活性硒是人类和动物允许使用的硒源。同无机硒强化剂相比，生物有机硒安全性高，不易发生中毒，易被人体吸收利用，补硒效率高。

微塑料是指直径小于5微米、污水处理厂无法过滤、由高分子聚合物构成的颗粒或者纤维。塑料垃圾、洗涤化纤纺织品、行驶中的车辆轮胎、皮肤去角质产品等是产生微塑料的主要来源。

微塑料对水生动物生理的影响主要集中在消化系统、呼吸系统与生殖系统等,进而对生物的消化、呼吸与繁殖等造成影响,相关结果在鱼类、贝类、甲壳类动物、棘皮动物等中都有发现。

微塑料对人体健康的影响涉及到多个系统，包括神经系统、内分泌系统、免疫系统等。最新发现微塑料存在人体中是在动脉斑块中发现，有可能微塑料是动脉斑块组成的核心。所以一但我们生活中大量接触微塑料，可能会引起心脑血管疾病。

淮南麻黄鸡(Huainan partridge chicken)(简称麻黄鸡)是肉蛋兼用型安徽省优质地方良种鸡，具有青胫、青喙、公鸡全红羽，母鸡麻黄羽的外貌特征。现中心产区为安徽以及河南等淮河沿岸广大地区，具有皮薄肉嫩、肉质鲜美、蛋香黄多、风味独特等优点，深受广大群众的喜爱。麻黄鸡等家禽类动物在散养或集约式养殖过程中难免会摄入一些微塑料，除了给鸡本身健康带来危害外，它还会通过食物链最终富集于人的体内。

黄粉虫俗称面包虫，为鞘翅目、拟步甲科、粉甲属的昆虫，是人工养殖最理想的饲料昆虫，具有生长周期短、繁殖能力强，分布广泛、来源丰富、人工养殖成本低、营养价值丰富等优点。黄粉虫蛋白营养成分是动物蛋白饲料中最高的，又被称为“蛋白质饲料的宝库”。Elahi等在肉鸡日粮中添加黄粉虫，发现黄粉虫可以提高肉鸡生长性能。Benzertiha等研究表明，添加黄粉虫可以提高肉鸡体重和采食量，对肉鸡生长性能有一定的改善效果。

目前有越来越多的研究者已经验证黄粉虫对自然环境中的塑料聚合物具有较好的降解效果。产自亚洲和北美洲的黄粉虫幼虫都会啃食塑料，并且啃食塑料对其活性不会造成影响。碳-13同位素示踪实验证明，聚苯乙烯可被黄粉虫在体内完全降解并矿化为二氧化碳排出，一部分还能转化为虫体脂肪。研究人员在黄粉虫体内成功分离出可以以聚苯乙烯作为唯一碳源进行生长的聚苯乙烯降解细菌——微小杆菌YT2(Exiguobacteriumsp.YT2)。该菌株是国际上报道的首株保藏在菌株中心的聚苯乙烯降解细菌。此研究再次提供了科学有力的证据，能够证实微生物可直接有效地降解聚苯乙烯。

发明内容

1.发明要解决的技术问题

本发明要解决如下问题：

(1)如何通过安全且有效的方式让麻黄鸡等家禽类富硒，提高鸡肉品质和有机硒的含量。

(2)尽管已报道黄粉虫体内微生物可以降解自然界中的微塑料，或者说，黄粉虫可以啃食和降解塑料制品(聚苯乙烯)，但是黄粉虫能否在动物体内追踪“已吞噬的”微塑料，并实现将其有效降解，仍鲜有报道。如果能实现，如何操作，其添加多少的量最为合适？

(3)为了减少实际操作过程中的步骤，如何实现富硒降塑同时进行，如何获得最佳的富硒浓度和适当降塑所饲喂条数相统一，从而避免黄粉虫是因为啃食富硒生菜叶而影响其肠道降塑微生物的含量，导致降塑效果下降。

2.技术方案

为解决上述技术难题，本发明提供的具体技术方案如下：

针对现有无机硒安全性不如有机硒情况，本技术通过食物链两次转化，实现无机硒完全转化为有机硒，再通过中间两次动物富集，检测其活动力和精神状态，可以避免富集的硒含量异常对动物及人体可能造成的潜在伤害。

植物在自然环境下生长时，会吸收土壤里的营养物质并通过光合作用和生物转化，将无机硒转化为有机硒，这种过程产生的硒便是植物活性硒。土壤中加入无机硒——亚硒酸钠，然后通过植物根系吸收的方式，将无机硒直接转化为植物活性硒。这类人工培植的植物活性硒在人体内的吸收率较高，且被认为是安全有效的补硒方式。

考虑到生菜本身属于富硒植物，据报道其每100克含硒1.15毫克，利用生菜富硒较其他植物更易富集。生菜喜湿，更有助于无机硒的在土壤中转移和输送。通过开展相关实验发现，土壤富硒与叶片喷洒富硒是让生菜富硒的两种高效富硒方式。本技术选择双管齐下，以土壤富硒为主，以叶片富硒为辅的方式，以提高富硒效率。

种植生菜的土壤一次性添加了亚硒酸钠，并辅以生菜叶片直接喷洒亚硒酸钠溶液的方式，其中土壤添加亚硒酸钠一般范围为30-300mg/kg，本技术按照60mg/kg比例添加，富硒效果最佳。选择已经生长一定大小的生菜，即生菜叶长在6-12cm时最佳，以提高其移栽成活率、抗病性，并有助于吸收无机物质。叶片喷洒浓度为30mg/L，按照每株每天0.2ml喷洒，早晚各一次，每次0.1ml，连续6天，最终获得富集有机硒生菜。

为了便于无机硒在土壤中运输和转移，基于多次实验发现，偏酸性土壤、透气性好的土壤、还原性较强的土壤，以及水分较大的土壤更易于植物根系对土壤中矿物质的吸收。因此，土壤采用泥炭土:细沙土＝3:1比例配置，泥炭土来自于林边落叶较多的池底淤泥处理加工而成，该类土壤具有较强的还原性，配置细沙，使土壤疏松，透气性好；适当添加硫酸亚铁调节土壤pH值在6.0-6.5区间，并同时保证土壤具有还原性。

昼夜温差较大有利于生菜的快速生长，但生菜生长温度又不能超过25摄氏度，过高温度会使生菜产生更多的莴苣素，使生菜发苦，不利于后续黄粉虫食用。因此，实验过程中生菜自然生长温度白天温度范围为18-20摄氏度，或人工气候箱白天温度设置为20摄氏度，降低夜间最低温度，使夜间温度在6-8摄氏度，最终使昼夜温差小于10摄氏度；生菜种植需要每天日光照射不低于6小时或白炽灯照射不低于10小时，生菜在亚硒酸钠土壤连续生长不低于7天；土壤需每日浇水1次，保持土壤湿润。

黄粉虫选择体长在15-20mm长，40-60日左右的活力较强的幼虫在喂食麦麸同时，按照黄粉虫的体重10:1比投喂清水洗净擦干的经富硒的生菜叶，持续喂食黄粉虫一周，获得富集有机硒黄粉虫，对比富硒黄粉虫的活力较强的50％黄粉虫用于后续实验。筛选具体原则为：其一，外形特征：排除棕色和暗黑品种，选择色泽金黄、体表发亮，腹部白色明显；其二，运动特征：爬行速度快，喂食生菜时能迅速爬上去取食，光反应强烈，有光照时能迅速向黑暗环境爬行。

选择上述原则的富硒黄粉虫喂食同龄健康麻黄鸡，在喂食麻黄鸡之前，需饥饿黄粉虫2日待体内粪便排尽，以确保获黄粉虫体内全部均为有机硒。然后按照每日喂食麻黄鸡等家禽类10只/500g富硒黄粉虫，以实现黄粉虫富硒和降塑并举目标。

对于黄粉虫富硒效果和降塑效果检验的方法步骤不一，具体分述如下：

黄粉虫富硒可直接按照每日10只/500g富硒黄粉虫活虫的量进行饲喂，连续6日；如后续仍需富硒，可按照每日3-5只/500g投喂活虫，或将黄粉虫洗净、烫死、烘干磨成粉末按体重比加入饲料中，满30天即可使饲喂家禽达到富硒效果。

在黄粉虫降解麻黄鸡体内微塑料实验之前，为保证实验可行性和科学性，已开展了黄粉虫降解低等模式生物线虫体内微塑料实验和降解高等模式生物小鼠体内微生物实验，并摸索出麻黄鸡降塑的最适黄粉虫添加形式和添加量，部分内容已以实施例形式体现，此处不再赘述。

黄粉虫降塑实验检测需在饲喂微塑料之前4天，按照每日10只/500g黄粉虫活虫的量进行饲喂，连续饲喂4天，使麻黄鸡体内定值降塑微生物。然后将微塑料按照比例灌胃，再进行2天的的黄粉虫饲喂，并与麻黄鸡灌胃微塑料前后不饲喂黄粉虫进行比较，考察降塑效果。

具体检验实验步骤：麻黄鸡设置3组：阴性对照组为3只9个月大的健康雏鸡不做任何处理；3只阳性对照组为同龄雏鸡，并一次性加入200mg/kg浓度，粒径为100nm的聚苯乙烯绿色荧光微球，定容于0.5mL生理盐水，麻黄鸡选择无损主动吞咽的方式喂食；实验组为精选的黄粉虫按照麻黄鸡每500g体重每日10只黄粉虫喂食同龄健康麻黄鸡3只，连续喂食4天后进行阳性对照组实验操作处理，之后再次喂食按照每日10只/500g富硒黄粉虫，处理2日；后续，利用相关实验验证实验组与阴性对照组是否有富硒效果，利用相关实验验证实验组与阳性对照组是否有降塑效果。

硒含量检测实验，采用的检测方法为食品安全国家标准-食品中多元素的测定中的第一法电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)，使用主要仪器为电感耦合等离子质谱仪。其中使用的消解方法为微波消解法，与标准中不同的是本专利在消解内罐中加入5mL硝酸溶液，且硝酸溶液的浓度为1％；同时加入1mL30％过氧化氢溶液，防止起泡。

微塑料含量检测实验，按照张百刚等的方法进行操作，对动物的肝脏和肾脏进行速冻、固定及切片，将制得的切片置于荧光显微镜下拍照。家禽血液使用1mL注射器进行鸡翼下静脉采血，然后涂布载玻片直接使用荧光显微镜观察。设置荧光样品的激发光波长为460nm，选择相应的滤光镜组块。在目镜下，调整所用的物镜的放大倍数，本实验所用10倍镜。在显微镜下找到样本，将光源换成激发光后拍照，保存照片并进行处理。

家禽养殖企业为实现生态富硒降塑，可在家禽出售之前一个月按照3-5只/500g黄粉虫量饲喂30天，也可达到生态富硒降塑效果。

对于富硒技术，该技术已经在淮南麻黄鸡体内开展了富硒以及检测实验，因此，该技术除了可以应用于麻黄鸡之外，还可以应用于其他家禽类，包括其他地方家禽类，如泰和乌鸡、皖西大白鹅等。

对于降塑技术，该技术已经在淮南麻黄鸡、小鼠、线虫和鱼类等动物体内开展了降塑实验，因此，该技术除了可以应用于麻黄鸡之外，还可以应用于其他家禽类，以及其他人类直接食用的饲养类动物，如鱼类，家畜、飞鸟类、牛羊类等。

3.有益效果

采用本发明提供的技术方法，与现有技术相比，具有如下显著效果：

(1)本发明通过食物链将土壤中的硒转化为植物活性硒，提高了富硒的安全性，且在食物链中增加黄粉虫有助于避免高浓度的有机硒对动物体造成潜在的伤害。通过改善土壤理化性质提高了植物富硒的能力；通过土壤富硒结合叶片富硒，使的食物蔬菜富硒效果更强。

(2)利用黄粉虫富硒及其同时可以降解微塑料特性，将家禽类直接喂食富硒黄粉虫，将实现富硒降塑一举两得，同时，饲料中添加黄粉虫也可以改善畜禽类的肉质品质。

(3)本技术为了验证黄粉虫活体可以在动物体内讲解微塑料，先后开展了针对线虫、小鼠、淮南麻黄鸡等微塑料降解实验。实验证实了利用黄粉虫体内的摩根式菌属、哈夫尼菌属、菌KHJ-1以及柠檬酸杆菌等肠道菌群，可将上述几种动物体内的微塑料部分降解并矿化为二氧化碳排出，一部分还能转化为虫体脂肪。以此到达黄粉虫生态学降解动物体内微塑料的目的。考虑到目前还没有类似技术，本方法对于动物体内的微塑料可有效的降解，减少其含量，且操作简单，可适用于各大畜牧业厂商和个人农户对不同动物的降塑。使用本方法也降低了人们在食用含有微塑料的家禽类动物，减少微塑料的摄入，保护了人们的身体健康。

(4)本发明在探究黄粉虫是否可以进行生物学体内的降塑，经过研究表明，黄粉虫体内的菌群可以有效的降解生物体内的微塑料，因此可以将其菌群或黄粉虫体内的提取液以活菌的方式添加到动物的饲料中去，制成可降塑的饲料，该方法可进行降塑饲料的量产，以到达动物体内有效快速且简便的降塑目标，在饲料的生产行业以及养殖业都有很好的发展前景。

附图说明

图1麻黄鸡富硒降塑流程简图。

图2为实施例1不同土壤中添加亚硒酸钠的生菜叶片和两种富硒方式黄粉虫硒含量柱状图(NTT为泥炭土和细沙土混合土壤中添加60mg/kg亚硒酸钠培养的生菜叶片硒含量，PTT为普通土壤添加相同剂量亚硒酸钠培养的生菜叶片硒含量，YFX为饲喂喷洒亚硒酸钠溶液生菜叶片的黄粉虫硒含量，TFX为对照组即饲喂土壤加入亚硒酸钠的生菜叶片的黄粉虫硒含量，SWL为饲喂土壤及叶片均添加亚硒酸钠的生菜叶片的黄粉虫硒含量)

图3为实施例1中食物链富硒与对照组富硒麻黄鸡各器官硒含量柱状图(样品T打头代表实验组，C打头代表对照组，XY：血液；XZ:心脏；GZ：肝脏；WB：胃；JR：肌肉；SZ：肾脏；FB：肺)

图4为实施例2荧光微塑料在线虫体内分布图

图5为实施例2中1h后对照组线虫体内的荧光微塑料分布图

图6为实施例2中1h后实验组线虫体内的荧光微塑料分布图

图7为实施例2中3h后对照组线虫体内的荧光微塑料分布图

图8为实施例2中3h后实验组线虫体内的荧光微塑料分布图

图9为实施例3中实验组小鼠血液中荧光微塑料分布图

图10为实施例3中对照组小鼠血液中荧光微塑料分布图

图11为实施例3中小鼠肾脏切片的荧光微塑料分布图

图12为实施例3中小鼠肝脏切片的荧光微塑料分布图

图13为实施例4中实验组麻黄鸡血液中荧光微塑料分布图

图14为实施例4中对照组麻黄鸡血液中荧光微塑料分布图

图15为实施例4中对照组麻黄鸡肾脏切片的荧光微塑料分布图

图16为实施例4中实验组麻黄鸡肾脏切片的荧光微塑料分布

具体实施方法

为了进一步了解本发明的内容，结合附图及实施案例对本发明作详细的描述。

实施例1

在本实施案例中，将介绍无机硒通过食物链逐级富集传递到麻黄鸡，最终使麻黄鸡实现富硒过程。具体内容包括：

首先，处理种植生菜的土壤，选择泥炭土:细沙土按照3:1比例配置，搅拌均匀后，并不断拌入硫酸亚铁粉末，使用土壤酸碱度检测仪调节pH值为6.0左右为止。向土壤中一次性按照60mg/kg浓度添加亚硒酸钠，注意搅拌均匀。图2显示对比一般土壤，本专利的泥炭土+细沙土的土壤更易于生菜富集有机硒。

选择育苗期完成后移栽的长势较好的生菜20株，选择株高10cm左右，栽培入准备好的盆栽土壤中，人工气候箱控制光照按照10:14的光照和黑暗处理；光照温度设置20摄氏度，黑暗温度设置程序为10摄氏度5小时，8摄氏度4小时，10摄氏度5小时。同时按照30mg/L配置亚硒酸钠溶液，按照每株每天0.2ml喷洒，早晚各一次，每次0.1ml，连续6天，最终获得富含有机硒生菜；以此同时，每日浇水一次，始终保持种植生菜的土壤湿润。图2也显示对比单一土壤富硒和叶片富硒，土壤富硒为主，叶片为辅的富硒效果更好。

其次，黄粉虫选择孵化40-60日，体长为15-20mm，活力较强的幼虫在喂食麦麸同时，按照10:1的体重比投喂清水洗净擦干的富硒生菜叶，持续喂食黄粉虫一周，获得富含有机硒黄粉虫。选择色泽金黄发亮，运动速度快的高活力的黄粉虫用于后续实验。在利用黄粉虫喂食麻黄鸡之前，饥饿2日待体内粪便排尽，以确保获黄粉虫体内均为有机硒。

选择300g左右健康麻黄鸡9只，分为3组，每组3只，阴性对照组为3只不做任何处理；3只阳性对照组为同龄体重相当雏鸡，并一次性加入200mg/kg浓度，粒径为100nm的聚苯乙烯绿色荧光微球，定容至0.5mL生理盐水，麻黄鸡选择无损主动吞咽的方式喂食；实验组为精选的黄粉虫按照麻黄鸡每500g体重每日10只黄粉虫喂食同龄健康麻黄鸡3只，连续喂食4天后进行阳性对照组的荧光微塑料灌胃实验，之后再次按照相同剂量喂食麻黄鸡2日。

最后，生菜、黄粉虫以及麻黄鸡的血液、肾脏、肝脏、心脏、肺和肌肉等组织的硒含量测定均使用第一法电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)，生菜和黄粉虫富硒结果见附图2，麻黄鸡各脏器富硒结果如图3所示。由图3可知，食物链富硒效果明显好于对照组效果。

实施例2

在本实施案例中，将介绍聚苯乙烯进入线虫体内的情况以及黄粉虫肠道提取液对线虫体内聚苯乙烯塑料具有降解作用。具体内容包括：

本实施例使用的L4期野生型线虫(N2)，活性较好，置于25℃恒温箱中培养；本实施例选用生长发育至60天左右刚蜕皮的黄粉虫幼虫，体长大约为15-20mm，活性较强；NGM培养基用于线虫生长培养基；M9缓冲液用于清洗线虫表面荧光微球；体式显微镜用于挑线虫；荧光显微镜用于拍照观察；75％酒精用于杀菌消毒；0.9％的无菌氯化钠溶液用于黄粉虫肠道提取物的稀释；高压灭菌锅用于研钵的灭菌；2％的琼脂用于制作琼脂垫；本实施例使用的是粒径为100nm的聚苯乙烯绿色荧光微球，荧光微球的激发波长为460nm，发射波长505nm。

(1)观察聚苯乙烯微塑料在线虫体内的分布情况

设计在含有经过同步化的线虫的NGM培养基中，直接加入50ug/mL的高浓度聚苯乙烯荧光微球。1h后，将使用M9缓冲液清洗过的线虫在体式显微镜下挑出来放入载玻片中，将玻片置于荧光显微镜下，使用10倍镜观察，可见荧光微球被线虫取食后，经口进入咽管、肠管、直肠、部分由肛门排出(如图4)。

(2)制备黄粉虫幼虫肠道提取液

设计了两组实验进行比较。选取20只同日龄的黄粉虫，置于烧杯中用无菌水反复冲洗。再将清洗过的黄粉虫浸泡在75％的酒精中消毒一段时间。消毒后的黄粉虫再次用无菌水冲洗，置于培养皿中，用在酒精灯上烤过的剪刀剪去黄粉虫的头部，用玻璃棒从黄粉虫尾部缓慢向前挤出黄粉虫肠道内容物。全部取出后转移至无菌研钵中。将研钵置于冰块上研磨。再加入2mL无菌的0.9％NaCL溶液。研磨置均匀无可见絮状物，即为实验所需黄粉虫幼虫肠道提取液。

(3)将线虫暴露于黄粉虫肠道提取液和聚苯乙烯微塑料中

挑取20条L4期的实验组线虫转移到新的NGM培养基上，用移液枪吸取黄粉虫匀浆均匀平铺于实验组培养基中，对照组则不添加，处理7h。用大肠杆菌OP50溶液制备荧光纳米聚苯乙烯，其暴露浓度为50μg/mL。将其铺在NGM培养基上作为实验组，相同体积的E.coliOP50溶液铺在培养基中作为对照组。将同步化后的L1期的线虫分别放在实验组和对照组的培养基中培养，培养至L4期用于实验。

(4)观察黄粉虫肠道提取液对线虫体内微塑料的影响

挑取上述实验组中L4期的线虫，放至新的NGM培养基上，让线虫爬行一段时间后再用M9缓冲液冲洗线虫3次。用挑虫针挑取每组中活性最高的3只线虫分别至3个带有琼脂垫的载玻片上做好标记，重复3次。对照组与实验组操作一致，分别在荧光显微镜下观察1h、3h两组线虫体内荧光纳米聚苯乙烯的分布情况。

在加入等量聚苯乙烯荧光微球1h后，不添加黄粉虫肠道提取液的对照组线虫体内可见一条明亮的“荧光带”，荧光几乎遍布线虫全身(图5)。而添加的黄粉虫肠道提取液实验组线虫体内荧光分布与对照组位置一致，但荧光没有对照组清楚明亮，也并没有清晰的“荧光带”，整体偏暗，且后肠部分和肛门比其他部位的荧光更亮(图6)。3h后，对照组中线虫体内“荧光带”亮度(图7)比1h对照组暗，线虫咽喉部分的荧光强度减弱，荧光较为集中的分布在线虫的后肠部分。在3h实验组的图片中可以看出(图8)，线虫整体的荧光都变得微弱，几乎看不见线虫轮廓。与1h实验组对比，荧光强度较低。

实施例3

在本实施案例中，将介绍一种黄粉虫对小鼠体内聚苯乙烯微塑料具有降塑作用以及100nm的聚苯乙烯荧光微球在灌胃后会通过血液循环进入小鼠脏器内。具体内容包括：

本实施例使用的小鼠是6只7周龄清洁型雄性小鼠，体重大约为30～33g。健康活泼无不良反应。饲养在动物房，室温设置为(23±2)℃，相对湿度设置为45％-60％，昼夜交替周期为12h，适应环境1周后，期间小鼠自由进食进水。本实施例选用生长发育至60天左右刚蜕皮的黄粉虫幼虫，有利于小鼠咀嚼，体长大约为15-20mm，活性较强；本实施例使用1000mL大烧杯用于给小鼠喂食黄粉虫；12号灌胃针用于实验动物灌胃；冷冻切片机用于制作肾脏和肝脏切片；柠檬酸钠制备的抗凝血剂；本实施例使用的粒径为100nm的聚苯乙烯绿色荧光微球，荧光微球的激发波长为460nm，发射波长505nm，使用剂量规定小鼠为200mg/kg聚苯乙烯荧光微球。

(1)用黄粉虫作为饲料的蛋白添加饲喂小鼠

以黄粉虫作为实验组小鼠饲料蛋白的添加。将实验组3只小鼠分开，每1只小鼠单独置于大烧杯中。烧杯底部放上2只黄粉虫，将烧杯置于较为安静的环境中，让小鼠主动进食；若小鼠未主动进食，则用镊子夹起黄粉虫递至小鼠嘴边，辅助小鼠进食。观察小鼠直至小鼠取食完黄粉虫，放回鼠笼。实验组小鼠连续喂食1周的黄粉虫，而对照组小鼠则不需要喂食黄粉虫。

(2)喂食黄粉虫7天后进行小鼠灌胃前，将小鼠断水断粮6h，然后捉住小鼠尾巴将小鼠提起，并将小鼠固定，使用与注射器相连的灌胃器将配制的药剂送入小鼠胃内。本实施例采用一次性经口灌胃，小鼠灌胃所采用药剂是剂量为200mg/kg聚苯乙烯荧光微球，用生理盐水加至0.5mL，实验组和对照组所用剂量相同。

(3)通过观察小鼠血液中的荧光含量确定黄粉虫对小鼠体内的微塑料有降解作用。

小鼠灌胃后0.5h进行鼠尾采血，本实验选用剪尾采血。将所采小鼠尾部血液样品与柠檬酸钠制成的抗凝血剂1:1混匀后制成玻片，在荧光显微镜下观察。实验组的玻片样品中荧光点较少，荧光点分散且荧光强度较低，几乎无可见荧光(图9)。对照组的玻片样品中荧光点数量较多，荧光点较为集中，荧光强度较实验组强(图10)。

(4)通过观察小鼠的肝脏、肾脏切片确定微塑料会通过血液循环进入脏器中。

灌胃后对小鼠的肝脏和肾脏进行速冻、固定及切片。制作小鼠的肾脏和肝脏切片，并在荧光显微镜下观察。小鼠的肾脏切片中可见绿色荧光，分布均匀(图11)。而小鼠的肝脏切片中的荧光分布不均，部分区域荧光更明显(图12)。

实施例4

在本实施案例中，黄粉虫对淮南麻黄鸡血液中聚苯乙烯微球微塑料的降解作用以及黄粉虫对淮南麻黄鸡肾脏中聚苯乙烯微塑料的降解作用，具体包括：

本实施例使用1mL注射器用于鸡翼下静脉采血；冷冻切片机用于制作肾脏切片；荧光显微镜用于淮南麻黄鸡肾脏切片和血液的拍照观察；实施例所用的是粒径为100nm的聚苯乙烯绿色荧光微球。荧光微球的激发波长为460nm，发射波长505nm，使用剂量规定淮南麻黄鸡200mg/kg，用于淮南麻黄鸡的灌胃；柠檬酸钠用于制作抗凝血剂；本实施例选用生长发育至60天左右刚蜕皮的黄粉虫幼虫，体长大约为15-20mm，活性较强；淮南麻黄鸡6只，体重为约为300～500g，健康活泼无不良反应。

(1)给麻黄鸡饲喂黄粉虫以及麻黄鸡的灌胃操作

麻黄鸡喂食方法在实施例2基础上略有改动，实验组3只麻黄鸡每只每天喂食10只黄粉虫，连续喂食4天。灌胃后持续喂食2天黄粉虫。麻黄鸡灌胃方法在实施例2的基础上略有改动，灌胃前将麻黄鸡断水断粮6-8小时，将灌胃针沿着麻黄鸡的喙伸入1/5后，缓慢推动针内液体，使其浸润麻黄鸡鸡舌，利用麻黄鸡喝水习性，仰头吞咽液体，达到灌胃目的。

(2)通过观察麻黄鸡的血液样本确定黄粉虫对麻黄鸡血液中的微塑料具有降解作用。

麻黄鸡灌胃后0.5h进行鸡翼下静脉采血，将麻黄鸡固定好后，右手使用注射器待其安静后刺针，45°倾斜刺入皮肤，与血管平行进针0.2～0.4cm后刺入静脉血管，见回血即可停止收集血液。将收集的血液与柠檬酸钠制成的抗凝血剂1：1比例混合制成玻片。将玻片放在荧光显微镜下观察。血液检测结果显示实验组血液样本中，微球集中在一起形成团状物，微球荧光微弱难以看清(图13)。对照组血液样本中，微球荧光清晰明亮，与实验组形成鲜明的对比(图14)。

(2)通过观察麻黄鸡肾脏切片确定黄粉虫对麻黄鸡肾脏中的微塑料具有降解作用。

灌胃后再喂食2天黄粉虫，然后对实验组和对照组的淮南麻黄鸡的肾脏进行速冻、固定及切片。制作麻黄鸡肾脏切片，并在荧光显微镜下观察。对实验组和对照组麻黄鸡的肾脏切片进行比较。结果显示对照组的肾脏切片与实验组的肾脏切片有显著差异。对照组的切片中可见多个清晰明亮的荧光点(图15)，而实验组的切片中并没有清晰明亮的荧光点，且实验组的部分肾脏切片中荧光微弱几乎不可见(图16)。