一种富含生物活性多肽固体饮料及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种富含生物活性多肽固体饮料及其制备方法。

背景技术

紫河车为健康人胎盘得干燥制品，性味：甘、咸、温。归经：归心、肺、肾经。功能主治：温肾补精，益气养血，温而不燥，补而不滞。状元阳，补元气，益精血，安神志。治疗虚劳赢瘦，骨蒸盗汗，咳嗽气喘，食少气短，阳痿遗精，不孕少乳。治疗一切虚弱及气血不足之证。

新鲜胎盘含性腺激素，卵巢激素，黄体激素，含有含氮多糖体：由乙酰氨基葡萄糖、右旋半乳糖、甘露醇组成。还含有蛋白质、多肽、胆碱、多种氨基酸及微量元素。

经典成方制剂有《扶寿精方》中的河车再造丸，用于滋阴养血，补肺益肾；《医宗金鉴》的先天再造丸，用于益气补血，壮阳固肾；《医学心悟》的补天大造丸用于大补阴阳气血；《诸证辨疑》中的大造丸具有滋阴养血，补益肺肾之功效；《医方集解》的大造丸可用于养阴气，补肺肾。除此之外，还有长春广嗣丹的补肾兴阳，苁蓉河车丸能固本培元，温补肾气。

现代制剂有胎盘片，临床上用于子宫发育不良，不孕不育，亦可用于神经衰弱，增强机体免疫力。胎盘组织液，治疗内分泌障碍，胃及十二指肠溃疡，术后肠粘连，神经衰弱症。除此之外，还有胎盘脂多糖注射液、胎盘多肽注射液、胎盘氨基酸口服液等。

经典成方制剂常采用传统的中药炮制方法，如高温干燥或高温煎煮提取法；然而，这类操作方法虽然可以很容易将产品中残留的病毒或微生物灭活，但是也可以使产品中的活性物质降低或失活，降低产品的功效。同时，胎盘多肽、脂多糖、氨基酸等具有蛋白质或多肽的性质，溶液型制剂的稳定性、和运输、保存等均影响胎盘多肽的生物学活性。

发明内容

本发明目的在于提供一种可以温和的提取分离胎盘活性多肽的方法，通过对原料病毒筛查，制备工艺中采用低pH病毒灭活和纳滤过滤技术，可以有效去除病原微生物；采用低温冷冻干燥技术，最大限度的保证胎盘提取物的生物学活性，同时解决制剂稳定性、运输和保存等因素对胎盘多肽生物学活性的影响等问题。制备出的固体饮料，除具备免疫调节功效以外，还具抗氧化、抗衰老、清除自由基等多种生理功能。为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种富含生物活性多肽固体饮料，其组分的含量如下：乳清蛋白50—80g/L，水溶性淀粉20—50g/L，黄精多糖2—5g/L，枸杞多糖2—5g/L，茯苓提取物2—5g/L，酪蛋白钙肽50—150mg/L，胎盘多肽30—80mg/L，剩余为纯化水。

优选的，其组分的含量如下：乳清蛋白50—60g/L，水溶性淀粉20—40g/L，黄精多糖2—3g/L，枸杞多糖2—3g/L，茯苓提取物2—3g/L，酪蛋白钙肽50—100mg/L，胎盘多肽40—60mg/L剩余为纯化水。

所述的胎盘多肽的制备方法：(1)原材料的收集与检测：胎盘必须取自健康产妇，并进行抗HIV

所述的一种富含生物活性多肽固体饮料的制备方法，按照处方量分别称取/量取辅料，根据原液中多肽的含量，加入纯化水将胎盘多肽的原液稀释到30～80微克/ml，按照规程依次加入并溶解辅料后，0.45μm～0.22μm逐级过滤；滤液用罐装机分装到已经处理好的冻干瓶中，并进行冷冻干燥；冻干过程如下：

(1)降温：2h-4h从常温降至-40℃，-40℃维持2h-4h；并抽真空；

(2)一次升华：6-10h，从-40℃升温至-10℃，-10℃恒温恒压25～35h；

(3)二次升华：5-10h，从-10℃升温至20℃，20℃恒温5-8h；

(4)压盖胶塞，轧盖。

本发明的有益效果：本申请通过对原料病毒筛查，制备工艺中采用低pH病毒灭活和纳滤过滤技术，可以有效去除病原微生物；采用低温冷冻干燥技术，最大限度的保证胎盘提取物的生物学活性，同时解决制剂稳定性、运输和保存等因素对胎盘多肽生物学活性的影响等问题。制备出的固体饮料，除具备免疫调节功效以外，还具抗氧化、抗衰老、清除自由基等多种生理功能。

附图说明

图1为本发明申请工艺流程图；

图2为双辛可宁酸(BCA)法测定原液中多肽的含量标准曲线。

具体实施方式

1.原材料的收集与检测

胎盘必须取自健康产妇。凡患传染性肝炎、恶性肿瘤、免疫缺陷症、艾滋病、性病(梅毒、淋病)及急性传染病尚未恢复的产妇分娩的胎盘，以及人工流产、死胎、畸形儿的胎盘不得使用。胎盘娩出后，应立即由接生人员用无菌操作放入无菌容器中，并立即冷藏(-10℃以下)，在收集运输过程中也应冷藏。抗HIV

2.解冻与清洗

生理盐水解冻(30个胎盘，50～80L生理盐水)，剪去脐带。生理盐水清洗至基本无血色(3～5次)，纯化水充分清洗至电导＜100μs/cm。滤干、绞肉机搅碎。

3.匀浆与离心

按1:3～6(W/V)加入生理盐水含0.5mM EDTA，匀浆20～50min。匀浆液用平板式离心机低速离心，去除不溶性残渣组织，用生理盐水含0.5mM EDTA洗滤至原始体积。收集离心液。

4.巴氏灭菌

离心液转入保温罐，加热至55～60℃，保温10～12h。

5.酸化与澄清

溶液冷却至室温，用4MHCl调pH3.0±0.2，37℃恒温1h(需搅拌)。酸化液用管式离心机离心，控制进料速度，去除沉淀。上清液用5M NaOH调pH6.8～7.2，加入絮凝剂至万分之一～五，再次校正pH，低温静置过夜，虹吸上清。

6.纳滤

上清液分别用于0.45μm和20nm的滤膜过滤，用于可能残留的微生物及病毒的过滤，收集滤液，用无菌的容器保存，得到原液。

7.配料与过滤

按照处方量分别称取/量取辅料。

处方：

根据原液中多肽的含量，加入纯化水将胎盘多肽的原液稀释到30～80微克/ml，按照规程依次加入并溶解辅料后，0.45μm～0.22μm逐级过滤。

8.罐装与冻干

除菌过滤后的滤液用罐装机分装到已经处理好的冻干瓶中，并进行冷冻干燥；冻干过程如下：

(1)降温：2h～4h从常温降至-40℃，-40℃维持2h～4h；并抽真空。

(2)一次升华：6～10h，从-40℃升温至-10℃，-10℃恒温恒压25～35h；

(3)二次升华：5～10h，从-10℃升温至20℃，20℃恒温5～8h；

(4)压盖胶塞，轧盖。

9.原液及成品检验

(1)原液检测：

①双辛可宁酸(BCA)法测定原液中多肽的含量，原理是碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫色的络合物，测定其在562nm波长处的吸光度值，并与标准曲线对比，计算待测样品的含量。

②E-玫瑰花环法检测胎盘多肽的免疫活性，原理为人T细胞膜上具有能与绵羊红细胞(SRBC)表面糖肽相结合的受体(E受体，即CD2分子)。SRBC与T细胞在含有血清的平衡盐水中结合，形成以T细胞为中心，四周环绕SRBC，状如环瑰花环细胞集团，故称E花环试验。

通过优化淋巴细胞和绵羊红细胞的最佳浓度组合后，从表上表可以看出，胎盘多肽能够促进T淋巴细胞增殖，有免疫活性，而且胎盘提取液浓度为50μg/ml时，免疫活性最高。

(2)成品检测：

按照国家标准GB/T 29602-2013《固体饮料》、GB 29921-2013《食品中致病菌限量》、GB2762-2017《食品中污染物限量》等标准规范方法，对实施例中含胎盘多肽的固体饮料的各项质量指标进行检测。

本页为报告末页

含胎盘多肽的固体饮料的食品添加剂、致病菌指标和重金属指标等各项质量指标均符合《固体饮料》等标准规范要求，品质优良，安全性高。