一种含酶解槐米提取物的组合物及其制备方法和在美容抗衰中的应用

技术领域

本发明涉及美容抗衰保健食品的技术领域，具体涉及一种含酶解槐米提取物的组合物及其制备方法和在美容抗衰中的应用。

背景技术

人的皮肤就和大树的年轮一样，随着时间流逝，树的年轮会越来越宽，人的皱纹间距也会越来越大，皮肤变的不再紧致，那是因为皮肤细胞组织老化、胶原蛋白流失造成的。当下医美机构和医生运用的治疗手段，比如注射微整形、光电仪器，以及线雕等这种抗衰多为物理性提拉，是浮于表面的。

美容抗衰老产品是当今保健食品行业风糜全球的产品，产品中有中药制剂，有维生素补充剂，有植物提取物，如葡萄籽提取物，有动物提取物，如胶原蛋白，均有一定的市场规模。但上述产品都有一定的缺点：1、中药原料存在功效物质含量低，功效不明确；2、维生素补充剂如维生素C、维生素E等抗氧化剂也存在不足之处，维生素C补充剂具有一定的抗氧化作用，但国家法规和国家标准对每维生素的每日摄入量有限量规定，规定的日服用量难以达到美容和抗衰老的保健功能；3、胶原蛋白同样存在功能单一，满足不了美容抗衰老的综合功能需求。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种含酶解槐米提取物的组合物，能促进内源性胶原蛋白的合成，提高皮肤保水增量；本发明的目的之二在于提供一种含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，步骤简单，适用于大规模生产。本发明的目的之三在于提供一种含酶解槐米提取物的组合物的应用，该组合物用于制备美容抗衰的保健食品或化妆品。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：酶解槐米提取物、余甘子提取物、洋葱提取物和绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。

进一步，所述酶解槐米提取物、余甘子提取物、绿茶提取物、洋葱提取物的质量比为（0 .1~3）：1：（0.2~1）：（1~5）。

进一步，所述酶解槐米提取物的制备方法，包括以下步骤：在槐米中加入发酵液进行微生物发酵，得到发酵槐米提取物，在发酵槐米提取物中加入酶进行酶解，酶解完成后进行灭酶，过滤弃渣，得到酶解液；将酶解液干燥后得到酶解槐米提取物。

更进一步，所述发酵液包括牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，二裂酵母的接种量为（0.5~2）×10

更进一步，所述微生物发酵的温度为35~38℃，时间为12~24h。

进一步，先向所述发酵槐米提取物加入槐米重量的15~25倍的水，再加入纤维素酶进行酶解，升温到45~55℃保温4~6h，完成酶解；酶解后，再升高温度至85~95℃灭酶20~40min、过滤弃渣，得到酶解液，对酶解液进行喷雾干燥，得到酶解槐米提取物。纤维素酶占槐米质量的0.2~0.6%。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入溶剂溶解，得到第一混合溶液；

2）将环糊精饱和溶液与步骤1）所得的第一混合溶液混合，搅拌至溶液澄清，得到第二混合溶液；

3）在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合，得到含酶解槐米提取物的组合物。

进一步，所述溶剂为为质量浓度为45~60%的乙醇，优选为质量浓度为50%的乙醇；乙醇的加入量为酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物总质量的2~3倍；环糊精饱和溶液与第一混合溶液的质量比为（0.5~1）：1；所述含酶解槐米提取物的组合物的剂型为液体、粉剂、胶囊和片剂中的一种。

进一步，步骤2）中，混合的温度为80~90℃，搅拌的时间为3~5h，优选为温度为85℃，时间为4h；步骤3）中，搅拌的时间为1~2h，优选为1.5h。

本发明的目的之三采用如下技术方案实现：

上述的含酶解槐米提取物的组合物的应用，所述含酶解槐米提取物的组合物用于制备保健食品或化妆品。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

（1）本发明的含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：酶解槐米提取物、余甘子提取物、洋葱提取物和绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。酶解槐米提取物通过抑制胶原蛋白的分解、巩固组织细胞，减少胶原蛋白的流失，使皮肤保水保湿的功能健全，达到美容抗衰的效果；绿茶提取物抑制胶原蛋白的糖基化，保持胶原蛋白的活性；洋葱提取物能提高胶原蛋白的合成量；余甘子可以提高皮肤的透皮性，促进皮肤的新陈代谢，防止色素沉积滋润皮肤，同时促进其他组分的吸收。该组合物的各原料组分能够起到协同增效的作用，对皮肤美容抗衰，锁水保湿具有显著效果。

（2）本发明的酶解槐米提取物需要先发酵，槐米经过微生物发酵使得槐米中难溶的物质溶解度提高，而且能将槐米的大分子蛋白质和大分子多糖等切割成小分子多肽和小分子多糖，更容易吸收和透过皮肤屏障；再将发酵槐米提取物进行酶解处理，使得发酵产物的活性物质进一步溶出，提高吸收和生物利用率。

（3）本发明的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：先将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入溶剂溶解，得到第一混合溶液；将环糊精饱和溶液与第一混合溶液混合，搅拌至溶液澄清，得到第二混合溶液；再在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合，得到含酶解槐米提取物的组合物。环糊精的内部空隙能够包合酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物形成包合化合物，因为余甘子提取物能促进吸收，所以将余甘子提取物复合在包合化合物的外层。该制备方法步骤简单，条件温和，适合大规模生产。

（4）本发明含酶解槐米提取物的组合物的应用，该组合物能作为原料之一制备保健食品或化妆品或者直接作为保健食品或化妆品，无论是内服还是外用均能促进胶原蛋白生成，都能起到美容抗衰的效果。

具体实施方式

下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。

本发明的含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：酶解槐米提取物、余甘子提取物、洋葱提取物和绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。酶解槐米提取物通过抑制胶原蛋白的分解、巩固组织细胞，减少胶原蛋白的流失，使皮肤保水保湿的功能健全，达到美容抗衰的效果；绿茶提取物抑制胶原蛋白的糖基化，保持胶原蛋白的活性；洋葱提取物提高胶原蛋白的合成；余甘子可以提高皮肤的透皮性，促进皮肤的新陈代谢，防止色素沉积滋润皮肤，同时促进其他组分的吸收。该组合物能够起到协同增效的作用，对皮肤美容抗衰，缩水保湿具有显著效果。

其中，酶解槐米提取物是槐米先经过微生物发酵，再经过酶解所得。槐米经过发酵后，能使得槐米中难溶物质的溶解度提高，还能将槐米的大分子蛋白质，大分子多糖等切割成小分子多肽和小分子多糖，更容易吸收和透过皮肤屏障。发酵液为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、水1000mL，调节pH为7.5。其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，NaCl提供无机盐。二裂酵母发酵过程产生氨基酸、维生素等营养物质，可以刺激细胞更新、延长细胞的寿命。

本发明的组合物的制备方法，包括以下步骤：先将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入溶剂溶解，得到第一混合溶液；将环糊精饱和溶液与第一混合溶液混合，搅拌至溶液澄清，得到第二混合溶液；再在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合，得到含酶解槐米提取物的组合物。环糊精的内部空隙能够包合酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物形成包合化合物，因为余甘子提取物能促进吸收，所以将余甘子提取物复合在包合化合物的外层。

实施例1

一种含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：3g酶解槐米提取物、1.5g余甘子提取物、1g洋葱提取物和3g绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。

所述酶解槐米提取物的制备方法，包括以下步骤：

1）将槐米进行清洗并粉碎，加入发酵液在36℃下进行微生物发酵18h，得到发酵槐米提取物；其中，所述槐米和发酵液的质量比为1：1。所述发酵液包括1000mL牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，二裂酵母的接种量为1×10

2）再向所述发酵槐米提取物加入槐米重量的20倍的水，加入占槐米质量0.5%的纤维素酶进行酶解，升温到50℃，保温5h后，完成酶解；酶解后，再升高温度至90℃进行灭酶30min，过滤弃渣，得到酶解液；将酶解液进行喷雾干燥，得到酶解槐米提取物。

上述的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入质量浓度为50%乙醇溶解，得到第一混合溶液；其中，质量浓度为50%乙醇的加入量为酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物总质量的2.5倍。

2）将环糊精饱和溶液与步骤1）所得的第一混合溶液在85℃下混合，搅拌4h至溶液澄清，得到第二混合溶液；环糊精饱和溶液与第一混合溶液的质量比为0.6：1；

3）在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合1.5h，得到含酶解槐米提取物的组合物。

实施例2

一种含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：0.1g发酵槐米提取物、1g余甘子提取物、0.2g洋葱提取物和1g绿茶提取物；其中，酶解酵槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。

所述酶解槐米提取物的制备方法，包括以下步骤：

1）将槐米进行清洗并粉碎，加入发酵液在37℃下进行微生物发酵18h，得到发酵槐米提取物；其中，所述槐米和发酵液的质量比为1：1。所述发酵液包括1000mL牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，二裂酵母的接种量为1×10

2）再向所述发酵槐米提取物加入槐米重量的15倍的水，加入占槐米质量0.2%的纤维素酶进行酶解，升温到45℃，保温6h后，完成酶解；酶解后，再升高温度至85℃进行灭酶40min，过滤弃渣，得到酶解液；将酶解液进行喷雾干燥，得到酶解槐米提取物。

上述的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入质量浓度为45%乙醇溶解，得到第一混合溶液；其中，质量浓度为45%乙醇的加入量为酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物总质量的2倍。

2）将环糊精饱和溶液与步骤1）所得的第一混合溶液在80℃下混合，搅拌5h至溶液澄清，得到第二混合溶液；环糊精饱和溶液与第一混合溶液的质量比为0.5：1；

3）在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合2h，得到含酶解槐米提取物的组合物。

实施例3

一种含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：3g酶解槐米提取物、1g余甘子提取物、1g洋葱提取物和5g绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。

所述酶解槐米提取物的发酵方法，包括以下步骤：

1）将槐米进行清洗并粉碎，加入发酵液在35℃下进行微生物发酵24h，得到发酵槐米提取物；其中，所述槐米和发酵液的质量比为0.5：1。所述发酵液包括1000mL牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，二裂酵母的接种量为2×10

2）再向所述发酵槐米提取物加入槐米重量的25倍的水，加入占槐米质量0.6%的纤维素酶进行酶解，升温到55℃，保温4h后，完成酶解；酶解后，再升高温度至95℃进行灭酶20min，过滤弃渣，得到酶解液；将酶解液进行喷雾干燥，得到酶解槐米提取物。

上述的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入质量浓度为60%乙醇溶解，得到第一混合溶液；其中，质量浓度为60%乙醇的加入量为酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物总质量的3倍。

2）将环糊精饱和溶液与步骤1）所得的第一混合溶液在90℃下混合，搅拌3h至溶液澄清，得到第二混合溶液；环糊精饱和溶液与第一混合溶液的质量比为1：1；

3）在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合1h，得到含酶解槐米提取物的组合物。

实施例4

一种含酶解槐米提取物的组合物，包括以下原料：2g酶解槐米提取物、g余甘子提取物、1g洋葱提取物和2g绿茶提取物；其中，酶解槐米提取物由槐米经过发酵和酶解而成。

所述酶解槐米提取物的制备方法，包括以下步骤：

1）将槐米进行清洗并粉碎，加入发酵液在38℃下进行微生物发酵12h，得到发酵槐米提取物；其中，所述槐米和发酵液的质量比为0.8：1。所述发酵液包括1000mL牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和二裂酵母，二裂酵母的接种量为0.8×10

2）再向所述发酵槐米提取物加入槐米重量的22倍的水，加入占槐米质量0.5%的纤维素酶进行酶解，升温到55℃，保温5h后，完成酶解；酶解后，再升高温度至90℃进行灭酶20min，过滤弃渣，得到酶解液；将酶解液进行喷雾干燥，得到酶解槐米提取物。

上述的含酶解槐米提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物混合，加入质量浓度为50%乙醇溶解，得到第一混合溶液；其中，质量浓度为50%乙醇的加入量为酶解槐米提取物、绿茶提取物和洋葱提取物总质量的2.1倍。

2）将环糊精饱和溶液与步骤1）所得的第一混合溶液在85℃下混合，搅拌2h至溶液澄清，得到第二混合溶液；环糊精饱和溶液与第一混合溶液的质量比为0.8：1；

3）在第二混合溶液中加入余甘子提取物，搅拌混合1h，得到含酶解槐米提取物的组合物。

应用例1

一种胶囊剂，应用实施例1所述组合物，其组分包括：组合物0.2克，维生素E0.1克，玉米淀粉0.1克。

胶囊剂的制备方法为：将各组分进行混合制粒，过筛，装胶囊，做成胶囊剂。

应用例2

一种片剂，应用实施例1所述组合物，其组分包括：组合物0.5克，维生素E0.5克，硬脂酸镁0.3克。

片剂的制备方法为：将各组分进行混合，计算片重，压片可得。

应用例3

一种软糖，应用实施例1所述组合物，其组分包括：白砂糖10克、糖浆20克、干明胶2克、组合物0.2克，苯甲酸酸钠0.1克，柠檬酸钠0.1克。按照软糖常规制作工艺制作而成。

应用例4

一种喷雾，应用实施例1所述组合物，按质量百分比计，其组成包括：组合物10%，0.5%柠檬酸，2.5%山梨醇，0.2-0.8%丁二醇，余量为水。

对比例1

对比例1与实施例1的不同之处在于：对比例1不加入酶解槐米提取物。

对比例2

对比例2与实施例1的不同之处在于：对比例2不加入洋葱提取物。

对比例3

对比例3与实施例1的不同之处在于：对比例3不加入余甘子提取物。

对比例4

对比例4与实施例1的不同之处在于：对比例4不加入绿茶提取物。

对比例5

对比例5与实施例1的不同之处在于：对比例5将酶解槐米提取物替换为等量的槐米提取物。槐米提取物是由槐米粉粹后，再加入质量浓度为50%乙醇提取所得。

对比例6

对比例6与实施例1的不同之处在于：对比例6将酶解槐米提取物替换为发酵槐米提取物，即只经过发酵不经过酶解。

性能测试

一、胶原蛋白含量和细胞活性测试

将实施例1~4和对比例1~6分为10组，再设有空白对照组别，即只加入水培养；每组将HaCaT细胞接种于24孔板 5*10

表1 各组的组合物中胶原蛋白的含量和细胞活性的数据

由表1可知，在UVB辐射后，细胞的胶原蛋白和细胞活性均受到损伤，但与空白对照组相比，各组的胶原蛋白含量和细胞活性含量均高于空白对照组，说明各组均具有不同程度上的抗氧化、保护胶原蛋白和维护细胞活性。其中，实施例1为最优实施例，对比例1~4的胶原蛋白含量和细胞活性与实施例1相比显著降低，说明酶解槐米提取物、洋葱提取物、余甘子提取物和绿茶提取物这四种成分缺一不可，其具有协同作用，能起到促进内源性胶原蛋白的合成和提高细胞活性的影响。对比例5中采用槐米提取物替换酶解槐米提取物，其效果明显低于实施例1，说明酶解槐米提取物相对于槐米提取物中有效成分溶解性更好，说明发酵将槐米提取物中的大分子蛋白质，大分子多糖等切割成小分子多肽和小分子多糖，经过酶解能进一步提高物料的吸收性，提高生物利用度，快速到达皮肤发挥作用。对比例6中采用发酵槐米提取物替换酶解槐米提取物，不经过酶解会降低胶原蛋白的合成量和细胞活性。

由此可见，实施例1~4的组合物内服或外用时实现促进胶原蛋白合成的技术效果，可用于制备美容抗衰的产品。

二、人体实验评价

对实施例1-4和对比例1-6的组合物进行抗衰老功效评价，并设置空白对照组（蒸馏水）。具体测试方法如下：利用VISIA测试仪，选取88名受试者分为11组每组8人，年龄35-55岁，皮肤均存在皮肤暗黄、产生皱纹、胶原纤维弹性下降、暗褐色斑点等现象。身体健康，无其糖尿病、肾病、皮肤病等他疾病，近期3个月无药物服用史。将本发明实施例1-4与对比例1-6制得的组合物按应用例3的步骤制成软糖，受试者连续3个月服用，对比3个月前后的皮肤状态，并计算各组的皱纹减少率、肤色提亮度和皮肤弹性改善度。测试结果如表2所示。

表2 各组的组合物性能测试结果

由表2可知，与空白对照组相比，各组软糖均能不同程度上减轻皱纹、提亮肤色和提高皮肤弹性。实施例1为最优实施例，对比例1的效果最差，说明酶解槐米提取物对效果影响最大，而对比例5中采用槐米提取物替换酶解槐米提取物，效果低于实施例1，说明经过发酵后的槐米提取物能生产更多有效成分，提高减轻皱纹、提亮肤色和提高皮肤弹性的效果，再将发酵槐米提取物经过酶解后，再使得发酵产物的活性物质进一步溶出，提高吸收和生物利用率。对比例6中采用发酵槐米提取物替换酶解发酵提取物，减轻皱纹、提亮肤色和提高皮肤弹性的效果均有所降低，说明酶解能使得发酵产物的活性物质进一步溶出，提高吸收和生物利用率。而对比例1~4的组合物效果均低于实施例1，说明酶解槐米提取物、洋葱提取物、余甘子提取物和绿茶提取物这四种成分缺一不可。本申请的组合物内服时具有美容抗衰的效果。

综上所述，本发明的组合物能有效促进内源性胶原蛋白的合成，提高皮肤保水增量，所以无论是内服还是外用均能促进胶原蛋白生成，都能起到美容抗衰的效果。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。