一种改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方

技术领域

本发明涉及饲料领域，尤其涉及一种改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方。

背景技术

花鲈肉质坚实,洁白细嫩,味道鲜美而清香,营养丰富,是中国沿海地区广泛养殖的一种商品鱼类。据统计，2022年花鲈的产量为21.81万吨。随着集约化养殖规模的推广，我国花鲈产业得到迅猛发展。鱼粉作为水产饲料中的主要蛋白质来源，具有很高的可消化蛋白质含量和均衡的氨基酸分布，然而，用于制作鱼粉的鱼年捕获量急剧减少，鱼粉的价格在过去20年里增加了一倍以上，依靠鱼粉提供水产养殖的优质蛋白是不可持续的，鱼粉短缺已成为水产养殖业可持续发展的最大限制因素。因此，寻找新的优质蛋白源是亟需解决的问题。

目前的解决方案主要包括植物蛋白替代和提高饲料配方中粗脂肪含量，但是，提高饲料配方中粗脂肪含量会加剧鱼类的脂肪沉积，甚至造成脂肪肝，严重影响水产品品质；所以，市场中采用最多的是以豆粕替代鱼粉方法。豆粕蛋白质含量和消化率较高、氨基酸组成较平衡、且产量大、供应稳定,是理想的鱼粉替代原料之一。但是，豆粕中检测到大豆抗原、胰蛋白酶抑制剂、α-淀粉酶抑制因子、凝集素和植酸等抗营养因子，这些抗营养因子不仅降低食物的摄入量、适口性、消化酶活性，甚至进一步破坏肠道黏膜的完整性，从而诱发肠道营养型炎症，具体表现症状为：肠道黏膜通透性增加，肠道组织形态通常伴随粘膜皱襞缩短、固有层和粘膜下层肿胀、各种炎症细胞浸润和肠上皮细胞吸收数量减少等现象，更严重的是肠道菌群丰富度和多样性下降，ZO1等紧密连接相关基因和IL家族等炎症相关基因的表达也产生相应的变化。上述情况不仅影响花鲈品质，更制约花鲈养殖业的健康可持续发展。如今，迫切需要寻找一种新途径从根本上缓解高豆粕饲料导致花鲈营养型肠炎，同时达到增产目的。一种改善花鲈由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方及其制备方法成为人们亟待解决的问题！

炎症性肠病是一种胃肠道复发性非特异性疾病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。其发病特点是发作反复，严重时可能引发消化道穿孔或者大出血。且其发病机制是个体遗传易感性，环境因素，肠道微生物菌群，肠道粘膜功能以及免疫反应的共同作用。与炎症性肠炎不同，豆粕型肠炎仅由高含量豆粕引起，且症状也与之不尽相同。本配方中添加独特槲皮素，具有较好的抗炎作用，但目前关注的抗炎效果仅针对于炎症性肠病，对于在缓解豆粕型肠炎方面尚无报道。且由于炎症性肠病与豆粕型肠炎差异巨大，无法由其具有抗炎效果而类推同样能缓解豆粕型肠炎。

近年来，关于豆粕替代鱼粉的研究常有报道。覃应梅等研究了对饲喂高豆粕饲料配方的斜带石斑鱼补充丁酸钠和乳铁蛋白，结果显示能提高肠道胰蛋白酶活性和免疫能力，但是对肠道微生物没有明显影响；骆源等报道在高豆粕饲料中添加胆固醇和牛磺酸能有效提高凡纳滨对虾生长性能和饲料效率，但是对于肠道炎症效果并无描述。

但是以上方法效果并不全面，同时配方成分较为复杂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方。

为实现上述目的，本发明提供一种改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方，其特征在于，包括按每千克重量百分数计的以下组分：鱼粉15-25份、豆粕40-55份、面粉10-25份、酪蛋白10-15份、鱼油5-8份、豆油2-5份、磷脂1-2份、矿物质预混料0.5-1份、维生素预混料0.5-1.5份、胆碱0.5-1份、磷酸二氢钙1-2份、抗氧化剂0.1-0.5份、蛋氨酸0.1-0.2份、槲皮素0.25-0.75份，其中槲皮素不含0.25份和0.75份。

进一步，所述矿物质预混料每kg包括：MnSO

维生素预混料每kg包括：硫胺素：25mg；核黄素：45mg；盐酸吡哆醇：20mg；维生素B

进一步，包括按每千克重量百分数计的以下组分：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.40份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.5份。

进一步，其的制备方法如下：

1)将鱼粉与豆粕粉碎，之后过60目筛，其他固体原料也分别过60目筛；

2)将各固体原料采用由小到大、逐级混匀的方法混匀后加入鱼油与豆油过60目网筛；

3)再将枸杞多糖与水混匀后加入步骤2)的混合物中充分混匀后再过60目筛；其中，水的加量为饲料原料总重的35％即可。

本发明的饲料配方成分简单，操作简便；含有中草药成分物质，机体能完全代谢，绿色安全无污染；能改善由高豆粕引起的营养型肠炎。

附图说明

图1是实施例1的对比例1(a)、对比例2(b)、对比例3(c)、对比例4(d)和试验例(e)组织切片。

图2是实施例1的Alpha多样性指数组间差异箱型图。其中横坐标为分组名称，HFM：阴性对比例；QUE_2：试验例；纵坐标为相应指数的值。柱子间连线上的数字为T检验的P值(当P＜0.05时，认为有显著差异)。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：

1)配方：以下均按照按每千克重量百分数计。

对比例1：鱼粉44份、豆粕0份、面粉34.5份、酪蛋白11份、鱼油3.5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0份、槲皮素0份。

对比例2：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.9份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0份。

对比例3：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.65份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.25份。

对比例4：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.15份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.75份。

试验例：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.40份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.5份。

上述矿物质预混料每kg包括：MnSO

维生素预混料每kg包括：硫胺素：25mg；核黄素：45mg；盐酸吡哆醇：20mg；维生素B

2)制备饲料配方包括以下步骤：

①将鱼粉与豆粕粉碎，之后过60目筛，其他固体原料也分别过60目筛；

②将各固体原料采用由小到大、逐级混匀的方法混匀后加入鱼油与豆油过60目网筛；

③加入水充分混匀；再过60目筛；其中，加水量为饲料原料总重的35％；

④将混匀后的饲料根据需要的颗粒大小进行制粒，直径为2.5mm；

⑤制粒好的饲料在55℃的烘箱中烘干；

⑥烘干后的饲料置于室温下，待其冷却后进行过筛称量和包装，制成成品，存于-20℃待用。

3)饲喂及采样：将驯化好的鱼苗(花鲈，初体重：5.65±0.02g)用对应饲料分别饲喂56天，尾静脉取血采集血液、肠道等组织部位。

4)检测：测定肠道粘膜通透性相关指标、组织形态观察和肠道炎症相关细胞因子及紧密连接蛋白基因表达量的测定。

①测定肠道粘膜通透性相关指标结果见表1。D-乳酸和二胺氧化酶由肠道菌群产生，故仅测量血液指标，足以反映其肠道粘膜通透性。

表1肠道粘膜通透性相关指标表

注：同行肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示差异显著(P<0.05)。

二胺氧化酶是由肠黏膜上层绒毛细胞分泌的一种高活性胞内酶，是检测肠上皮完整性的重要指标，D-乳酸是细菌发酵的代谢产物，可由动物肠道菌群产生，正常情况下D-乳酸很少能被动物吸收进入血液，是反应肠黏膜通透性和损害程度的关键指标；因此血清中二胺氧化酶和D-乳酸含量越高，其肠道黏膜机械屏障受损就越严重，表现为肠道黏膜通透性增加。白蛋白是由肝脏实质细胞合成，且是血浆中含量最多的蛋白质，当其含量升高时，可以减少炎性因子白介素等对机体进一步造成伤害。本试验中，试验例二胺氧化酶含量相较于所有对照例均显著降低(P<0.05)；试验例D-乳酸含量相较于对比例2显著降低(P<0.05)，且相对于其它对比例无显著差异(P＞0.05)；试验例血清白蛋白含量相较于对照例1显著下降(P<0.05)，且相比于其它对比例有下降趋势，但并不显著(P＞0.05)。由此可见，饲喂本配方制成的试验例显著修复了由高豆粕造成的肠道黏膜屏障损伤。

②肠道切片

各例肠道组织切片结果见图1。结果显示，对比例1肠道切片中黏膜皱襞完整，排列紧密，所形成皱襞面积较大，且上皮细胞排列有序；但对比例2中黏膜皱襞有粘连现象发生，上皮细胞破损严重，甚至出现脱落现象；对比例3和对比例4中同样出现了粘连现象，且上皮细胞严重破损。而饲喂本饲料配方的试验例，黏膜皱襞相对完整且与肌层连接紧密，未发生脱落现象，上皮细胞明显排列更为规则有序且未发生脱落，整体而言，试验例肠道组织相较于对比例有明显改善，甚至其健康程度接近于对比例1。

③肠道微生物多样性

挑选了对比例1和试验例进行微生物多样性测序。Alpha多样性(Alphadiversity)反映样品物种丰富度(richness)及物种多样性(divers ity)，包括多种衡量指标：Chao1、Observed species、Shannon、Simpson、Faith’s PD、Pielou’s evenness和Good’s coverage。以Chao1和Observed species指数表征丰富度，以Shannon和Simpson指数表征多样性，以Faith’s PD指数表征基于进化的多样性，以Pielou’s evenness指数表征均匀度，以Good’s coverage指数表征覆盖度。

结果见图2，显示，试验例和对比例1所有Alpha多样性相关指数均无显著差异，证明其物种丰富度和物种多样性均接近于阴性对比例，即饲喂本配方的花鲈在物种多样性方面与饲喂全鱼粉饲料的花鲈基本一致。

④炎症因子及紧密连接基因表达量

本发明对饲喂相应饲料的花鲈样本进行转录组测序，并对基因差异表达分析和筛选。肠道上皮紧密连接蛋白的完整性对于肠道黏膜屏障具有重要作用，其受损会导致通透性增加，细菌、毒素等物质入侵机体进而引发炎症，紧密连接蛋白主要包括闭合蛋白(Claudins)、咬合蛋白(Occludin)、闭合小环蛋白(ZOs)及连接黏附分子(JAM)；结果显示，相比于阳性对比例和阴性对照例，试验例的闭合蛋白(Claudins)基因表达量显著提高，且与上述酶活指标对应，说明试验例花鲈肠道黏膜屏障在对高豆粕中抗营养因子影响有较高的抵抗作用；此外，试验例活化T细胞核因子基因表达量相较于阳性对照例也显著升高，说明本配方通过提高花鲈机体的免疫能力对豆粕引起的营养型肠炎作出反应；本饲料配方即能显著提高紧密连接蛋白相关基因表达量，通过促进紧密连接蛋白表达减少炎症发生，又能通过提高花鲈机体免疫力应对肠道炎症；所以，本饲料配方对于缓解由高豆粕引起的花鲈营养型肠炎具有很好的效果。

实施例2：改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料的制备

材料：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.65份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.25份。

所述矿物质预混料每kg包括：MnSO

维生素预混料每kg包括：硫胺素：25mg；核黄素：45mg；盐酸吡哆醇：20mg；维生素B

制备方法同实施例1。

用本实施例制备得到的改善花鲈营养型肠炎的高豆粕饲料用来饲喂驯化好的鱼苗56天，采集血液、肠道等组织部位，与实施例1中的试验例具有类似的效果。

实施例3：改善由高豆粕引起营养型肠炎的饲料配方的制备

材料：鱼粉22份、豆粕40份、面粉14.15份、酪蛋白11份、鱼油5份、豆油2.5份、磷脂1份、矿物质预混料0.6份、维生素预混料0.8份、胆碱0.6份、磷酸二氢钙1.2份、抗氧化剂0.3份、蛋氨酸0.1份、槲皮素0.75份。

所述矿物质预混料每kg包括：MnSO

维生素预混料每kg包括：硫胺素：25mg；核黄素：45mg；盐酸吡哆醇：20mg；维生素B

制备方法同实施例1。

用本实施例制备得到的改善花鲈营养型肠炎的高豆粕饲料用来饲喂驯化好的鱼苗56天，采集血液、肠道等组织部位，与实施例1中的试验例具有类似的效果。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。