PD-1/PD-L1、TGFβ和DNA-PK联合抑制用于治疗癌症

发明领域

本发明涉及用于治疗癌症的联合疗法。具体地说，本发明涉及抑制PD-1/PD-L1、TGFβ和DNA-PK的治疗性组合，还可以或选性地包括化疗、放疗或放化疗。所述治疗性组合尤其意在用于治疗PD-L1表达检测呈阳性癌症的患者。

背景技术

尽管放疗是治疗许多不同类型癌症的标准治疗方法，但治疗耐药性仍是一个严重问题。放疗耐药性的机制多样且复杂，包括DNA损伤反应通路(DDR)改变、免疫细胞功能调节以及免疫抑制细胞因子如转化生长因子β(TGFβ)水平升高。对抗耐药性的策略包括将放疗与针对这些机制的疗法相结合。

DDR抑制剂有望作为放疗的组合伙伴。放疗通过破坏DNA杀死癌细胞，引起细胞尝试修复损伤时DDR通路活化。虽然正常细胞中有多条DDR通路，但在恶性疾病进展过程中通常会丢失一条或多条通路，由此导致癌细胞更加依赖于留存的通路，增加了发生遗传错误的可能性。这使得癌细胞对DDR抑制剂特别敏感。由于DNA双链断裂(DSB)被认为是辐射诱导细胞死亡的主要原因，因此，靶向DSB修复机制例如非同源末端连接(NHEJ)等的DDR抑制剂与放疗联用可能特别有益。确实，DNA-PK(一种NHEJ必需的丝氨酸苏氨酸激酶)的抑制剂已在临床前模型中显示出使癌细胞对放疗敏感的功效(据文献)。在临床中，正在对DNA-PK抑制剂M3814与放疗联用进行评估(clinicaltrials.gov标识NCT02516813)。

正在对各种靶向免疫抑制通路的治疗(例如TGFβ和程序性死亡配体1(PD-L1)/程序性死亡1(PD-1))进行独立的研究以及他们与放疗联用的研究。细胞因子TGFβ具有参与维持免疫自身耐受方面的生理作用，但在癌症中，它会通过影响先天和适应性免疫来促进肿瘤生长和免疫逃逸。由PD-L1/PD-1信号传导介导的免疫检查点可抑制T细胞活性，并被癌症用来抑制抗肿瘤T细胞反应。PD-L1和TGF-β配体均因放疗上调并被认为促进了耐药性。

美国专利申请公开号US20150225483A1，其通过引用纳入本文，记载了一种双官能融合蛋白，该融合蛋白将抗程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体与作为TGFβ中和“阱”的可溶性转化生长因子贝塔受体II型(TGFβRII)胞外域结合为一个单分子。具体地，该蛋白质是一个异四聚体，由抗-PD-L1的两条免疫球蛋白轻链和两个重链构成，两条重链包含抗-PD-L1重链和通过柔性甘氨酸-丝氨酸接头与之基因融合的人TGFβRII胞外域(见图1)。该抗-PD-L1/TGFβ阱分子被设计为靶向肿瘤微环境中的两个主要免疫抑制机制。美国专利申请公开第US20150225483A1号记载了按照基于患者体重的剂量进行抗-PD-L1/TGFβ阱分子的给药。国际申请PCT/US18/12604记载了抗PD-L1/TGFβ阱分子的非体重依赖性给药方案。

仍然需要开发治疗癌症的新的治疗选择。并且，需要比现有疗法具有更高功效的疗法。本发明的优选联合疗法显示出比各种治疗单用更高的功效。

发明内容

以下所述的各个实施方式都可以与本文所述任一其他实施方式组合，只要不彼此矛盾。此外，本文所述各种实施方式的范围包括其中所述化合物药学上可接受的盐。因此，本文所述所有化合物都隐含了“或其药学上可接受的盐”。以下所述某一方面的实施方式可与这一方面或其他方面的任一其他实施方式组合，只要不彼此矛盾。

本发明源于发现可用抑制PD-1/PD-L1、TGFβ和DNA-PK的化合物联合治疗患有癌症的对象。当用这些化合物的治疗与化疗、放疗或放化疗联用时可进一步改善治疗效果。因此，在第一方面，本发明提供了一种治疗有需要的对象中癌症的方法，所述方法给予所述对象PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂。优选地，所述PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂融合。还提供了抑制患有恶性肿瘤的对象中肿瘤生长或进展的方法。还提供了抑制对象中恶性细胞转移的方法。还提供了降低对象中转移发生和/或转移肿瘤生长的风险的方法。还提供了诱导具有恶性细胞的对象中肿瘤消退的方法。联合治疗在对象中引起客观反应，优选完全缓解或部分缓解。一些实施方式中，所述癌症经鉴定是PD-L1阳性癌性疾病。

根据本发明治疗的具体癌症类型包括但不限于肺癌、头颈癌、结肠癌、神经内分泌系统癌、间充质癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌及它们的组织学亚型。一些实施方式中，癌症选自小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、结直肠癌(CRC)、原发性神经内分泌肿瘤和肉瘤。

PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，可能进一步与化疗、放疗或放化疗联合，可以在癌症的一线、二线或更高线治疗中给药。一些实施方式中，选择SCLC广泛性疾病(ED)、NSCLC和SCCHN进行一线治疗。一些实施方式中，癌症对先前的癌症治疗具有抗性或变得具有抗性。本发明的联合疗法还可用于治疗曾经接受过一种或多种化学疗法或经历了放疗但这些先前治疗无效的患癌对象。二线或以上治疗的癌症可以是预治疗复发性转移性NSCLC、不可切除的局部晚期NSCLC、SCLC ED、预治疗SCLC ED、不适合全身性治疗的SCLC、预治疗复发性或转移性SCCHN、符合再照射条件的复发性SCCHN、预治疗微卫星状态低不稳定性(MSI-L)或微卫星状态稳定的(MSS)转移性结直肠癌(mCRC)、mCRC(即MSI-L或MSS)患者的预治疗子集和无法切除或转移性微卫星不稳定高(MSI-H)或错配修复缺陷型实体瘤，它们在先前治疗后进展且没有令人满意的替代治疗选择。一些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK联合疗法，还可以与化疗、放疗或放化疗联用，用来治疗晚期或转移性MSI-H或错配修复缺陷型实体瘤，它们在先前治疗后进展且没有令人满意的替代治疗选择。

优选实施方式之一中，治疗的对象是人。

优选实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂是生物分子。优选地，它是多肽，更优选地是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。一些实施方式中，抗PD-L1抗体用于治疗人类对象。一些实施方式中，PD-L1是人PD-L1。

一些实施方式中，抗PD-L1抗体包含重链和轻链，所述重链包含三个互补决定区(CDR)，具有分别对应于CDRH1、CDRH2和CDRH3的SEQ ID NO:1、2和3所示氨基酸序列，所述轻链包含三个互补决定区(CDR)，具有分别对应于CDRL1、CDRL2和CDRL3的SEQ ID NO:4、5和6所示氨基酸序列。抗PD-L1抗体优选包含具有SEQ ID NO:7或8所示氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的轻链。一些优选实施方式中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗(avelumab)。最优选实施方式中，抗PD-L1抗体是与TGFβ受体II(TGFβRII)的胞外域融合的抗PD-L1抗体，并且包括具有SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的轻链(在本公开中亦称“抗PD-L1/TGFβ阱”)。

一些实施方式中，抗PD-L1抗体通过静脉内(例如静脉输注)或皮下给药，优选静脉内给药。更优选地，抗PD-L1抗体以静脉输注的形式给药。最优选地，抑制剂给药50-80分钟，非常优选以1小时静脉输注的形式给药。一些实施方式中，隔周(即每两周一次或“Q2W”)按约10mg/kg体重的剂量给药抗PD-L1抗体。一些实施方式中，抗PD-L1抗体按800mg的固定剂量方案以1小时IV输注Q2W给药。

TGFβ抑制剂可以是小分子或生物分子，例如多肽。一些实施方式中，TGFβ抑制剂是抗TGFβ抗体或TGFβ受体，例如人TGFβRII的胞外域或其能够结合TGFβ的片段，起TGFβ阱的作用。优选实施方式之一中，TGFβ抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂融合。更优选地，TGFβ抑制剂是与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体融合的人TGFβRII胞外域或其能够结合TGFβ的片段，例如抗PD-L1/TGFβ阱，如前所述。

某些方面中，DNA-PK抑制剂是小分子。优选为(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇(“化合物1”)或其药学上可接受的盐。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂经口服给药。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂按每日一次或两次(即“QD”或“BID”)约1至800mg的剂量给药。优选地，DNA-PK抑制剂按约100mg QD、200mgQD、150mg BID、200mg BID、300mg BID或400mg BID的剂量给药，更优选约400mg BID。

优选实施方式之一中，对于DNA-PK抑制剂的II期推荐剂量是每日两次口服400mg，对于阿维鲁单抗的II期推荐剂量是每第二周10mg/kg的IV。优选实施方式之一中，对于DNA-PK抑制剂的II期推荐剂量为每日两次每次400mg，以胶囊的形势，对于阿维鲁单抗的II期推荐剂量为800mg Q2W。

优选实施方式之一中，DNA-PK抑制剂的剂量为每日两次(BID)口服400mg，抗PD-L1/TGFβ阱的剂量为每两周IV给药1200mg。另一个优选实施方式中，DNA-PK抑制剂的剂量为每日两次(BID)口服400mg，抗PD-L1/TGFβ阱的剂量为每三周IV给药1800mg。又一优选实施方式中，DNA-PK抑制剂的剂量为每日两次(BID)口服400mg，抗PD-L1/TGFβ阱的剂量为每三周IV给药2400mg。

根据本发明，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂可以融合在一个或多个分子中。优选地，PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂融合，例如以形成前文所述的抗PD-L1/TGFβ阱分子。

其他实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂与化疗(CT)、放疗(RT)或放化疗(CRT)联用。化疗药可以是依托泊苷、阿霉素、托泊替康、伊立替康、氟尿嘧啶、吉西他滨、紫杉醇、铂类药(platin)、蒽环类及其组合。优选实施方式之一中，化疗药可以是阿霉素。临床前研究显示与DNA-PK抑制剂具有抗肿瘤协同作用而不增加主要毒性。

一些实施方式中，依托泊苷通过约1小时的静脉输注给药。一些实施方式中，依托泊苷每三周在第1至3天(即“D1-3 Q3W”)按约100mg/m

一些实施方式中，阿霉素每21-28天按40至60mg/m

一些实施方式中，托泊替康每三周在第1至第5天(即“D1-5 Q3W”)给药。

一些实施方式中，给予蒽环类药物，直至达到最大终身累积剂量。

放疗可以是用电子、光子、质子、阿尔法(α)发射体、其他离子、放射性核苷酸、硼捕获中子及其组合进行的治疗。一些实施方式中，放疗包含约35-70戈瑞(Gy)/20-35次(fraction)。

在另一方面，本发明还涉及推介PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂组合的方法，优选地，所述组合进一步与化疗，放疗或放化疗联合，包括向目标受众宣传用所述组合来治疗患癌对象的用途，例如基于取自对象的样品中的PD-L1表达进行所述治疗，所述样品优选肿瘤样品。PD-L1表达可以通过免疫组化测定，例如使用一种或多种抗PD-L1一抗。

本文还提供包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂和至少药学上可接受的赋形剂或佐剂的药物组合物，其中优选融合的PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂。PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以单个单位剂量形式或多个单位剂量形式的方式提供。

本文还提供联合用于治疗的PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，特别是用于癌症治疗，其中，这些化合物的给药优选伴随化疗、放疗或放化疗。本文还提供用于治疗的PD-1轴结合拮抗剂，特别是用于癌症治疗，其中，PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联合给药，优选伴随化疗、放疗或放化疗。本文还提供了用于治疗的TGFβ抑制剂，特别是用于治疗癌症，其中，所述TGFβ抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂联合给药，优选伴随化疗、放疗或放化疗。本文还提供用于治疗的DNA-PK抑制剂，特别是用于治疗癌症，其中，所述DNA-PK抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合给药，优选伴随化疗、放疗或放化疗。本文还提供用于治疗的与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂，特别是用于癌症治疗，其中与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂与DNA-PK抑制剂联合给药，优选伴随化疗、放疗或放化疗。

本文还提供PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和/或DNA-PK抑制剂用于制造药物的用途，优选用于治疗癌症的药物，并且，这些化合物的给药优选伴随有化疗、放疗或放化疗。本文还提供选自PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的化合物用于制造药物中的用途，优选用于治疗癌症的药物，其中，所述化合物与该组化合物中的其余化合物联合给药，并且，这些化合物的给药优选伴随化疗、放疗或放化疗。本文还提供与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂用于制造药物的用途，优选用于治疗癌症的药物，其中，与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂与DNA-PK抑制剂联合给药，这些化合物的给药优选伴随化疗、放疗或放化疗。

本文还提供一种治疗方法，优选癌症的治疗方法，包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的给药，优选与化疗、放疗或放化疗联合。

另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含PD-1轴结合拮抗剂和包装插件，所述包装插件包含将PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含TGFβ抑制剂和包装插件，所述包装插件包含将TGFβ抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包括与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂和包装插件，所述包装插件包含将所述与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂与DNA-PK抑制剂并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含DNA-PK抑制剂和包装插件，所述包装插件包含将DNA-PK抑制剂与TGFβ抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含将PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂与TGFβ抑制剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含将TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含将PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联用并优选进一步与化疗、放疗或放化疗联合用来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。试剂盒的化合物可以包含在一个或多个容器中。实施方式之一中，试剂盒包含第一容器、第二容器和包装插件，其中，第一容器包含至少一个剂量的药物，该药物包含与TGFβ抑制剂融合的PD-1轴结合拮抗剂，第二容器包括至少一种剂量的药物，该药物包含DNA-PK抑制剂，包装插件包含使用药物治疗对象的说明，优选与化疗、放疗或放化疗联用。所述说明可以指明所述药物旨在用于治疗患有免疫组化(IHC)检测测定为PD-L1表达阳性的癌症的对象。

各种实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂融合并包含分别如WO 2015/118175中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:1所示的重链和轻链，和/或所述DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐。

附图说明

图1显示了阿维鲁单抗和抗PD-L1/TGFβ阱的重链序列。(A)SEQ ID NO:7代表阿维鲁单抗的全长重链序列。具有SEQ ID NO:1、2和3所示氨基酸序列的CDR用下划线标注。(B)SEQ ID NO:8表示无C-末端赖氨酸的阿维鲁单抗重链序列。具有SEQ ID NO:1、2和3所示氨基酸序列的CDR用下划线标注。(C)SEQ ID NO:10代表抗PD-L1/TGFβ阱的重链序列。具有SEQID NO:1、2和3所示氨基酸序列的CDR用下划线标注。

图2(SEQ ID NO:9)显示了阿维鲁单抗和抗PD-L1/TGFβ的轻链序列。具有SEQ IDNO:4、5和6所示氨基酸序列的CDR用下划线标注。

图3显示，在同系MC38肿瘤模型中，化合物1(亦称M3814)联合阿维鲁单抗(无DNA损伤剂)相比单一治疗增强肿瘤生长抑制并改善生存期。从第0天开始每日使用M3814；在第3、6和9天使用阿维鲁单抗。

图4显示，在同系MC38模型中，放疗、M3814和阿维鲁单抗联合产生了比单独放疗、放疗与M3814或放疗与阿维鲁单抗更好的肿瘤生长控制。

图5显示抗PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814并行给药或依次给药在4T1模型中的抗肿瘤作用。BALB/c小鼠肌内(i.m.)接种0.5×10

图6显示抗-PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814组合在GL261-Luc2模型中的抗肿瘤作用。白化C57BL/6小鼠通过在前囟之前1mm、之侧2mm(右侧)和之后2mm颅内注射来原位接种1×10

图7显示抗PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814并行给药在MC38肿瘤模型中的抗肿瘤作用。C57BL/6小鼠i.m.接种0.25×10

图8显示抗-PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814组合在MC38模型中的抗肿瘤作用。C57BL/6小鼠右侧大腿i.m.接种0.25×10

图9显示抗-PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814组合在4T1模型中增强的远位效应。BALB/c小鼠在乳腺脂肪垫中接种0.5×10

图10显示4T1模型中经抗-PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814治疗的肿瘤中的CD8

图11显示4T1模型中经抗-PD-L1/TGFβ阱(称为M7824)、放疗和M3814治疗的肿瘤中基因表达的改变。BALB/c小鼠i.m.接种0.5×10

具体实施方式

提供以下定义以帮助读者。除非另外定义，本文使用的所有专业术语、符号和其它科学专有词汇旨在具有本发明所属领域技术人员通常所理解的含义。一些情形中，本文出于阐明和/或便于引用目的对具有常规理解含义的术语给予定义，本文中包括此类定义不应理解为表示显著区别于本领域常规理解。

除非上下文另有明确指示，否则“一”、“所述”等包含复审含意。因此，例如，提及抗体是指一种(个)或多种(个)抗体或至少一种(个)抗体。因此，“一(个或种)”、“一(个或种)或多(个或种)”和“至少一(个或种)”可以互换使用。

当用于修饰数字定义的参数(例如PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂或DNA-PK抑制剂的剂量，或本文所述联合疗法的治疗时间长短)时，“约”表示该参数可比该参数的指定数值低或高10％之多。例如，约10mg/kg的剂量可以在9mg/kg和11mg/kg之间变化。

将药物“给予”或“给药”到患者(以及该表述的语法等同形式)指直接给药和/或间接给药，所述直接给药可以是医疗专业人员对患者给药也可以是自我给药，所述间接给药可以是开药处方行为。例如，医师指示患者自行给药或向患者提供药物处方即为偶向患者给药。

“抗体”是能够通过至少一个免疫球蛋白分子可变区内的抗原识别位点特异性结合例如碳水化合物、多核苷酸、脂类、多肽等目标的免疫球蛋白分子。本文中，术语“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，除非另作说明，还包括与完整抗体竞争特异性结合的所述抗体的任何抗原结合片段或抗体片段，包括抗原结合部分的融合蛋白(例如抗体-药物偶联物、与细胞因子融合的抗体或与细胞因子受体融合的抗体)，包括抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型，具有多表位特异性的抗体组合物，以及多特异性抗体(例如双特异性抗体)。

抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”包含完整抗体的一部分，其仍能够与抗原结合和/或是完整抗体的可变区。抗原结合片段包括例如Fab、Fab'、F(ab')

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指细胞毒性的一种形式，其中，与某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上Fc受体(FcR)结合的分泌型Ig令这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后以细胞毒素杀死靶细胞。抗体武装细胞毒性细胞，并且是通过这种机制杀死靶细胞所必需的。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的Fc表达汇总见Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)第464页表3。

“抗PD-L1抗体”或“抗PD-1抗体”指阻断癌细胞上表达的PD-L1与PD-1的结合的抗体或其抗原结合片段。治疗人类对象的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，抗PD-L1抗体特异性结合人PD-L1并阻断人PD-L1与人PD-1的结合。治疗人类对象的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，抗PD-1抗体特异性结合人PD-1并阻断人PD-L1与人PD-1结合。所述抗体可以是单克隆抗体，人抗体，人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。一些实施方式中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且，在优选实施方式中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。一些实施方式中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。结合人PD-L1并且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的单克隆抗体的例子可见WO2007/005874、WO2010/036959、WO2010/077634、WO2010/089411、WO2013/019906、WO2013/079174、WO2014/100079、WO2015/061668和美国专利第8,552,154、8,779,108和8,383,796号。本发明的治疗方法、药物和用途中用作PD-L1抗体的特异性抗人PD-L1单克隆抗体包括，例如但不限于，包含WO2015/118175中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:1所示重链和轻链的抗体，阿维鲁单抗(MSB0010718C)，纳武单抗(nivolumab，BMS-936558)，MPDL3280A(IgG1工程化的抗PD-L1抗体)，BMS-936559(全人抗PD-L1、IgG4单克隆抗体)，MEDI4736(Fc结构域有三处突变以去除抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性的工程化IgG1κ单克隆抗体)和包含WO2013/019906中SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:21分别所示重链和轻链可变区的抗体。

“生物标志物”通常指指示疾病状态的生物分子及其定量和定性指标。“预后生物标志物”与疾病转归相关，与治疗无关。例如，肿瘤缺氧是阴性的预后标志物–肿瘤缺氧越高，疾病转归为阴性的可能性就越高。“预测性生物标志物”指示患者是否可能对特定疗法产生积极反应。例如，HER2分型通常用于乳腺癌患者来确定这些患者是否可能对赫赛汀(曲妥珠单抗，基因泰克(Genentech))有反应。“反应生物标志物”提供了对疗法反应的量度，因此提供了疗法是否有效的指示。例如，前列腺特异性抗原水平基底通常表示针对前列腺癌患者的抗癌疗法正在奏效。当标志物用作识别或选择患者进行本文所述治疗的基础时，可以在治疗前和/或治疗过程中测量标志物，并且由临床医生将获得的值用于评估以下任何一项：(a)个体最初接受治疗可能的适宜性；(b)个体最初接受治疗可能的不适宜性；(c)对治疗的反应性；(d)个体继续接受治疗的可能性的适宜性；(e)个体继续接受治疗的可能性的不宜性；(f)调整剂量；(g)预测临床收益可能性；或(h)毒性。如本领域技术人员会明白的，在临床情境中生物标志物的测量清楚地表明该参数被用作开始、继续、调整和/或停止给予本文所述给药的基础。

“血液”指对象循环血的所有成分，包括但不限于红细胞、白细胞、血浆，凝血因子，小蛋白，血小板和/或冷沉淀。这通常是人类患者提供血液时提供的血液类型。血浆在本领域中被称为血液的黄色液体成分，全血中的血细胞通常悬浮于其中。它约占总血液量的约55％。血浆可以通过将一管含有抗凝剂的新鲜血液在离心机中离心直到血细胞落到管底来制备。然后将血浆倒出或抽出。血浆的密度约为1025kg/m

“癌症”、“癌性”或“恶性”是指或描述哺乳动物中通常以失控细胞生长为特征的生理状况。癌症的例子包括但不限于：癌，淋巴瘤，白血病，母细胞瘤和肉瘤。这些癌症更具体的例子包括鳞状细胞癌，骨髓瘤，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，神经胶质瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，急性髓性白血病，多发性骨髓瘤，胃肠(道)癌，肾癌，卵巢癌，肝癌，成淋巴细胞性白血病，淋巴细胞性白血病，结直肠癌，子宫内膜癌，肾癌，前列腺癌，甲状腺癌，黑素瘤，软骨肉瘤，神经母细胞瘤，胰腺癌，多形性胶质母细胞瘤，宫颈癌，脑癌，胃癌，膀胱癌，肝癌，乳腺癌，结肠癌和头颈癌。

“化疗”是一种包括化疗药即可用于治疗癌症的化合物的疗法。化疗药的例子包括烷基化剂，例如噻替帕和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯并多巴(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美多巴(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙撑亚胺和甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)，曲他胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯(acetogenin)(特别是布拉它辛(Bullatacin)和拉它辛酮(Bullatacinone)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(Dronabinol))；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物托泊替康(CPT-11(伊立替康)，乙酰喜树碱，斯考普莱叮(scopolectin)和9-氨基喜树碱))；苔藓抑素(bryostatin)；培美曲塞(pemetrexed)；卡利斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；隐藻素(cryptophycins)(特别是隐藻霉素1和隐藻素8)；尾海兔素(dolastatin)；杜卡霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；TLK-286；CDP323，口服α-4整联蛋白抑制剂；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，环磷酰胺，雌莫司汀，异环磷酰胺，甲氮芥(mechlorethamine)，盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)，美法仑，新恩比兴(Novembichin)，苯非斯汀(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲洛磷胺(trofosfamide)和乌拉莫司汀(uracil mustard)；]亚硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)，氯脲霉素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其加利车霉伽马ll和加利车霉欧米茄ll(参见，例如Nicolaou等，(1994)，Angew.Chem Intl.Ed.Engl.33:183)；达尼霉素(dynemicin)，包括达尼霉素A；埃斯佩拉霉素(esperamicin)；以及新卡司他汀发色团(neocarzinostatinchromophore)和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团，阿克拉西诺菌素(aclacinomysins)，放线菌素，安曲霉素(authramycin)，重氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素，放线菌素C(cactinomycin)，卡拉比星(carabicin)，洋红霉素(carminomycin)，嗜癌素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放线菌D(dactinomycin)，道诺霉素，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸)，阿霉素(包括吗啉代-阿霉素，氰基吗啉代-阿霉素，2-吡咯啉-阿霉素，阿霉素HCl脂质体注射液和脱氧阿霉素)，表柔比星，伊索比星，伊达比星，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素例如丝裂霉素C，霉酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycins)，培洛霉素(peplomycin)，博替罗霉素(potfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，奎拉霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链脲菌素(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他汀(zinostatin)和佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药，例如甲氨蝶呤，吉西他滨，替加氟(tegafur)，卡培他滨，埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如迪诺特宁(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶罗呤(pteropterin)和三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤，硫咪嘌呤(thiamiprine)和硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷(6-azauridine)，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，二脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)和伊马替尼(imatinib)(2-苯基氨基嘧啶衍生物)，以及其他c-Kit抑制剂；抗肾上腺素，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，例如叶酸；乙酰葡醛酯(aceglatone)，醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝曲布辛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲塞(edatraxate)；德弗法明(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；亚丝醌(diaziquone)；伊弗尼辛(elfornithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；洛尼达宁(lonidainine)；美登木素生物碱，例如美登素和安托霉素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫口比丹莫(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；喷司他汀(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK聚多糖复合物(JHS Natural Products公司，尤金，俄勒冈州)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；司佐弗兰

“临床转归”、“临床参数”、“临床反应”或“临床终点”指与患者对治疗的反应有关的任何临床观测或测量。临床转归的非限制性例子包括肿瘤反应(TR)、总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)、无疾病生存期、肿瘤复发时间(TTR)、肿瘤进展时间(TTP)、相对风险(RR)，毒性或副作用。

本文中，“组合”或“联合”指在一种或多种其他活性方式(modality)(其中，一种或多种活性方式可以融合)之外提供第一活性方式。本文所述的组合或联合其范围包括组合方式或成员(即活性化合物、组分或药剂)的任何组合方案，例如PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合，它们可包含在单个或多个化合物和组合物中。应当理解，单个组合物、制剂或单位剂量形式(即固定剂量组合)中的任何方式都必须具有相同的给药方案和递送途径。这并不意味着必须将这些方式配制成一起递送(例如包含于同一组合物、制剂或单位剂量形式)。相互组合的方式可以由同一或不同制造商制造和/或配制。因此，组合成员可以是例如完全分开的且各自独立销售的药物剂量形式或药物组合物。优选地，TGFβ抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂融合，因此包含在单个组合物中并具有相同的给药方案和递送途径。

“联合疗法”、“与……联合”或“与……结合”在本文中表示采用至少两种不同治疗方式(即化合物、成分、靶向剂或治疗剂)的任意形式的并行(concurrent)、平行、同时(simultaneous)，依次或间歇治疗。因此，该术语是指在给予对象一种治疗方式在给予对象另一种治疗方式之前、期间或之后。组合中的治疗方式可以按任意次序给予。治疗活性方式一起给药(例如以同一或分开的组合物、制剂或单位剂量形式的形式同时给药)或分开给药(例如在同一天或不同的日子按照任何符合各组合物、制剂或单位剂量形式各自适宜给药方案的次序)，给药方式和给药方案按照医护人员的指示或监管机构的规定。通常，各种治疗方式按照针对该治疗方式确定的剂量计划和/或时间计划来给药。任选地，可在联合疗法中采用四种或更多种方式。另外，本文提供的联合疗法可以与其他类型的疗法联用。例如，其他抗癌治疗可选自化疗、手术、放疗(辐射)和/或激素疗法，还包括与对象当前护理标准相关的其他疗法。优选地，本文提供的联合疗法与化疗，放疗或放化疗联合使用。

“完全缓解”(“complete response”或“complete remission”)指治疗使得所有癌症征兆消失。这并不总是意味着癌症已经治愈。

本文中，“包括”或“包含”意在表示所述组合物和方法包括列明的元素但不排除其它元素。用于定义组合物和方法时，“基本由……组成”表示排除对于该组合物和方法来说具有任意重要意义的其它要素。“由……组成”表示对于要求保护的组合物和基本方法步骤，排除其他成分中的微量元素。这些过渡词各自定义的实施方式都包括在本发明范围之内。因此，应当认为，所述方法和组合物可以包括另外的步骤和组分(包含…)或者可选性地包括不重要的步骤和组合物(基本上由…组成)或者仅包括明示的方法步骤或组合物(由…组成)。

“剂”和“剂量”是指用于给药的特定量的活性物质或治疗药物。这样的量包含在“剂量形式”中，“剂量形式”指物理上彼此离散的、适合作为人类对象和其他哺乳动物的单位剂量的单元，每个单元均包含经计算可产生预期的起效、耐受和疗效的预定量的活性物质，以及与之组合的一种或多种合适的药物赋形剂如载体。

“双抗体”指如下所述构建而成的小抗体片段：在V

本文中，“DNA-PK抑制剂”指抑制DNA-PK活性的分子。优选的，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐。

“增强T细胞功能”指诱导、引发或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能，或令衰竭或失活的T细胞再生或再活化。增强T细胞功能的例子包括：相对于干预前的水平，提高CD8+T细胞的y-干扰素分泌，提高增殖，增强抗原反应性(例如病毒、病原体或肿瘤清除率)。实施方式之一中，增强的水平至少为50％，或者60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量这种增强的方式是本领域普通技术人员所知道的。

“Fc”指包含通过二硫键保持在一起的两H链羧基末端部分的片段。抗体的效应功能决定于Fc区中的序列，该区也被某些类型细胞上的Fc受体(FcR)识别。

本发明中抗体的“功能片段”包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区、或保留或改变了FcR结合能力的抗体的Fc区。功能性抗体片段的例子包括由抗体片段形成的多特异性抗体、单链抗体分子和线性抗体。

“Fv”是含有完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域非共价紧密结合而成的二聚体组成。这两个结构域折叠产生六个高变环(H链和L链各提供3个环)，这些环贡献了用于抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅含三个抗原特异性HVR的半个Fv)也能够识别并结合抗原，但亲和力低于完整结合位点。

“人抗体”是具有对应于人产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列和/或如本文中所述用任意人抗体制造技术制备的抗体。人抗体的这一定义特特别排除含有非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域所知的各种技术来产生人抗体，包括噬菌体展示文库(参见例如，Hoogenboom和Winter(1991)，JMB 227:381；Marks等(1991)JMB 222:581)。制备人单克隆抗体的方法可可见：Cole等(1985)Monoclonal Antibodies and CancerTherapy,Alan R.Liss,第77页；Boerner等(1991),J.Immunol 147(l):86；van Dijk和vande Winkel(2001)Curr.Opin.Pharmacol 5:368)。人抗体可以通过将抗原给予转基因动物来制备，所述转基因动物经修饰响应抗原挑战而生产上述抗体但其内源基因座被禁用，例如经免疫的转基因小鼠(xenomice)(参见例如涉及转基因小鼠(XENOMOUSE)技术的美国专利第6,075,181号和第6,150,584号)。另可见例如Li等(2006)，PNAS USA,103:3557，是关于通过人B细胞杂交瘤技术生成人抗体。

非人(如鼠)抗体的“人源化”形式是包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。实施方式之一中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受者抗体)，其中，受者HVR的残基被替换为具有所需特异性、亲和性和/性能的非人物种(供者抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物HVR的残基。一些情形中，人免疫球蛋白的框架区(“FR”)残基替换成对应的非人残基。并且，人源化抗体可包含受者抗体或供者抗体中没有的残基。可进行这些修饰来进一步改善抗体性能，例如结合亲和力。通常，人源化抗体包含基本上全部的至少一个、通常两个可变结构域，其中，全部或基本上全部高变环对应于非人免疫球蛋白序列的高变环，并且全部或基本全部FR区是人免疫球蛋白序列的FR区，但FR区可以包含一个或多个改善抗体性能的各别FR残基取代，例如结合亲和力、异构化、免疫原性等。FR中这些氨基酸取代的数目是通常是H链中不超过6，L链中不超过3。人源化抗体还任选包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更详细的信息可见例如：Jones等(1986)Nature321:522；Riechmann等(1988),Nature 332:323；Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2:593；Vaswani和Hamilton(1998),Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105；Harris(1995)Biochem.Soc.Transactions 23:1035；Hurle和Gross(1994)Curr.Op.Biotech.5:428；以及美国专利第6,982,321号和第7,087,409号。

本文中，“免疫球蛋白”(Ig)与“抗体”可互换使用。基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本异四聚体单元称为J链的其他多肽组成，具有10个抗原结合位点，IgA抗体则包含2-5个基本4链单元，它们可聚合成与J链组合的多价组合体。就IgG而言，四链单元通常约150,000道尔顿。每条L链通过一共价二硫键与H链相连，而两条H链根据H链的同种型通过一个或多个二硫键彼此相连。各H链和L链也有规则间隔的链内二硫桥。每条H链在N端有可变结构域(V

“输注”指出于治疗目的经静脉将含药溶液引入体内。通常，这通过静脉注射(IV)袋实现。

“分离的”指分子或生物或细胞材料基本上不含其他物质。一方面，术语“分离的”指与天然来源中存在的其他DNA或RNA、或蛋白质或多肽、或细胞或细胞器、或组织或器官分离的核酸(例如DNA或RNA)，或蛋白质或多肽，或细胞或细胞器、或组织或器官。术语“分离的”还指基本不含基本上不含细胞材料、病毒材料或培养基(用重组DNA技术生产时)或化学前体或其他化学物质(在化学合成时)的核酸或肽。并且，“分离的核酸”包括非天然以片段形式存在以及天然状态下不存在的核酸片段。术语“分离的”在本文中还指从其他细胞蛋白分离的多肽，并且意在包括纯化的和重组的多肽。术语“分离的”在本文中还指与其他细胞或组织分离的细胞或组织，并且旨在涵盖培养的和工程化的细胞或组织。例如，“分离的抗体”是已经从其生产环境的组分(例如天然或重组)中回收和/或分离、鉴定的抗体。优选地，分离的多肽与生产环境的所有其他组分分离。其生产环境中的杂质成分，例如重组转染细胞产生的杂质成分，通常会干扰抗体的研究、诊断用途或治疗用途，这些杂质充分可能包括酶、激素以及其他蛋白类或非蛋白类溶质。优选实施方式中，多肽将被纯化至：(1)据例如Lowry法测定大于95重量％的抗体，并且，在一些实施方式中，大于99重量％的抗体；(1)足以用旋杯测序仪获得至少15残基的N末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)非还原或还原条件下SDS-PAGE并用考马斯蓝或优选用银染色测定的均质。“分离的抗体”包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体天然环境的至少一种组分将不会存在。然而，分离的多肽或抗体通常经过至少一个纯化步骤来制备。

“转移性”癌症指已经从身体某一部位(例如肺)扩散到身体另一部位的癌症。

本文中，术语“单克隆抗体”指获自基本均质抗体群体的抗体，即，群体的各抗体是相同的，除了可能会少量存在的可能的天然突变和/或翻译后修饰(例如异构化和酰胺化)。单克隆抗体具有针对单个抗原性位点的高度特异性。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相比，每一单克隆抗体针对抗原上单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体制备的优点还在于它们是由杂交瘤培养物合成的，不受其他免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”表示该抗体获自基本均质抗体群这一特征，不应解释为需要通过任何特定的方法来产生抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可用多种技术来制备，包括例如杂交瘤法(例如Kohler和Milstein(1975)Nature 256:495；Hongo等(1995)Hybridoma 14(3):253；Harlow等(1988)《抗体：实验室手册》(Antibodies:A LaboratoryManual)(冷泉港实验室出版社，第2版；Hammerling等(1981)“单克隆抗体与T细胞”(In:Monoclonal Antibodies and T-CeIl)，Hybridomas 563(纽约州爱思唯尔)，重组DNA法(参见例如美国专利第4,816,567号)，噬菌体展示技术(参见例如Clackson等(1991)Nature352:624；Marks等(1992)JMB 222:581；Sidhu等(2004)JMB 338(2):299；Lee等(2004)JMB340(5):1073；Fellouse(2004)PNAS USA 101(34):12467；和Lee等(2004)J.Immunol.Methods 284(1-2):119)，以及在具有部分或全部人类免疫球蛋白基因座或人类免疫球蛋白序列编码基因的动物中生产人类或类人抗体的技术(参见例如WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等(1993)PNAS USA90:2551；Jakobovits等(1993)Nature 362:255；Bruggemann等(1993)Year in Immunol.7:33；美国专利第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号和第5,661,016号；Marks等(1992)，Bio/Technology 10:779；Lonberg等(1994)Nature 368:856；Morrison(1994)Nature 368:812；Fishwild等(1996)NatureBiotechnol.14:845；Neuberger(1996),Nature Biotechnol.14:826；以及Lonberg和Huszar(1995),Intern.Rev.Immunol.13:65-93)。本文中的单克隆抗体具体包括嵌合抗体(免疫球蛋白)，其中，重链和/或轻链有部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，同时，一条或多条链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体的相应序列相同或同源，还包括此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物学活性(参见例如美国专利第4,816,567号；Morrison等(1984)PNASUSA,81:6851)。

“纳米抗体(nanobodies)”指单域抗体，是由单个单体抗体可变结构域组成的片段。像完整抗体一样，它们能够选择性结合特定抗原。单域抗体的分子量仅12–15kDa，比普通抗体(150–160kDa)小得多。第一个单域抗体是从骆驼科动物重链抗体工程改造而来(例如参见W.Wayt Gibbs，“纳米抗体(Nanobodies)”，Scientific American Magazine(2005年8月))。

“客观缓解”指可测量的缓解，包括完全缓解(CR)或部分缓解(PR)。

“部分缓解”指一处或多处肿瘤或病变的大小或体内癌症的程度应治疗而减小或降低。

“患者”和“对象”在本文可互换使用，指需要癌症治疗的哺乳动物。通常，患者是被诊断出一种或多种癌症症状或有发生一种或多种癌症症状的风险的人。某些实施方式中，“患者”或“对象”可指非人哺乳动物，例如非人类灵长类动物、狗、猫、兔子、猪、小鼠或大鼠，或用于筛选、表征和评估药物和疗法的动物。

本文中，“PD-1轴结合拮抗剂”指抑制PD-1轴结合伴侣例如PD-L1与PD-1相互作用从而干扰PD-1信号传导并由此去除PD-1信号传导轴的信号传导所致T-细胞功能异常的分子，结果是恢复或增强T细胞功能。本文中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体，优选所述抗体与TGFβ抑制剂融合。实施方式之一中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1/TGFβ阱分子。

本文中，“PD-L1表达”指细胞表面上PD-L1蛋白或细胞或组织内PD-L1mRNA的任何可检测水平的表达。可以在肿瘤组织切片IHC检测中或通过流式细胞术用诊断性PD-L1抗体检测PD-L1蛋白的表达。或者，可采用与PD-L1特异性结合的结合剂(例如抗体片段、亲和体(affibody)等)通过PET成像检测肿瘤细胞的PD-L1蛋白表达。检测和测量PD-L1 mRNA表达的技术包括RT-PCR和实时定量RT-PCR。

“PD-L1阳性”癌症，包括“PD-L1阳性”癌性疾病，是包含细胞表面存在PD-L1的细胞的癌症。术语“PD-L1阳性”还指在其细胞表面产生足够水平的PD-L1从而抗PD-L1抗体通过介导所述抗PD-L1抗体与PD-L1结合而具有治疗效果的癌症。

“药学上可接受的”表示所述物质或组合物必须与组成制剂和/或治疗哺乳动物所用的其他成分在化学和/或毒理学上相容。“药学上可接受的载体”包括生理相容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的例子包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种及其组合。

“复发性”癌症是继诸如手术等初始治疗的疗效后在初始部位或远位再长出的癌症。局部“复发”癌症是在先前治疗的癌症相同位置在治疗后复发的癌症。

一项或多项症状(及该表述的语法等同表述)的“消减”指症状的严重程度或频率降低或症状消除。

“血清”指可与凝固的血液分离的透明液体。血清与血浆不同，血浆是正常未凝结血液的液体部分，其中包含红细胞和白细胞以及血小板。血清是既非血细胞(血清不包含白细胞和红细胞)亦非凝血因子的成分。它是不包括协助形成血凝块的纤维蛋白原的血浆。血清与血浆之间的差异在于血凝。

“单链Fv”，也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成单个多肽链中的V

“基本相同”表示多肽与参照氨基酸序列显示至少50％，优选60％、70％、75％或80％，更优选85％、90％或95％，最优选99％的氨基酸序列相同性。比较序列的长度一般至少10个氨基酸，优选至少15个连续氨基酸，更优选至少20、25、50、75、90、100、150、200、250、300或350个连续氨基酸，最好是全长氨基酸序列。

“适合疗法”或“适合治疗”指与患有相同癌症并接受相同治疗但出于比较目的所考虑的特征不同的患者相比，患者可能表现出一种或多种更理想的临床转归。一方面，所考虑的特征是遗传多态性或体细胞突变(参见例如Samsami等(2009)J Reproductive Med 54(1):25)。另一方面，所考虑的特征是基因或多肽的表达水平。一方面，更理想的临床转归是相对较高的肿瘤缓解可能性或相对较好的肿瘤缓解，例如肿瘤负荷降低。在另一方面，更理想的临床转归是相对更长的总生存期。在另一方面，更理想的临床转归是相对更长的无进展生存期或肿瘤进展前时间。在另一方面，更理想的临床转归是相对更长的无病生存期。在另一方面，更理想的临床转归是肿瘤复发的相对消减或延迟。在另一方面，更理想的临床转归是相对减少的转移。在另一方面，更理想的临床转归是相对较低的相对风险。在另一方面，更理想的临床转归是相对降低的毒性或副作用。一些实施方式中，同时考虑一种以上的临床转归。在这样的一个方面，具有诸如基因多态性某基因型等特征的患者比患有相同癌症并接受相同治疗但不具有上述特征的患者可表现出一种以上的更理想的临床转归。如本文所定义，这样的患者被认为适合治疗。在另一个这样的方面，具有某特征的患者可能表现出一种或多种理想的临床转归但同时表现出一种或多种不太理想的临床转归。然后将对临床转归做综合考虑，并根据患者的具体情况和临床结果的相关性做出患者是否适合治疗的决定。一些实施方式中，在集体决策中，无进展生存期或总生存期的权重大于肿瘤缓解。

“持续缓解”指在用本文所述治疗剂或联合疗法的治疗停止后的持续的治疗效果。一些实施方式中，持续缓解的持续时间与治疗持续时间至少相同，或者比治疗持续时间长至少1.5、2.0、2.5或3倍。

“系统性”或“全身性”治疗指药物随血流游走而到达并影响全身细胞的治疗。

本文中，“TGFβ抑制剂”指干扰TGFβ配体与其结合伴侣相互作用(例如TGFβ与TGFβ受体(TGFβR)之间相互作用)以抑制TGFβ活性的分子。TGFβ抑制剂可以是TGFβ结合拮抗剂或TGFβR结合拮抗剂。实施方式之一中，TGFβ抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂融合。另一实施方式中，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体与TGFβRII的胞外域或能够结合TGFβ的TGFβRII片段融合。某特定实施方式中，融合蛋白包含WO 2015/118175中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:1分别所示的重链和轻链。另一实施方式中，融合蛋白是WO 2018/205985记载的融合蛋白之一。一些实施方式中，融合蛋白是该公开中表2列出的构建体之一，例如其中的构建体9或15。另一些实施方式中，具有WO 2018/205985中重链序列SEQ ID NO:11和轻链序列SEQ ID NO:12的抗体通过连接序列(G4S)xG与WO 2018/205985中SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15所示TGFβRII胞外域序列融合，其中x为4-5。

“TGFβRII”或“TGFβ受体II”指具有野生型人TGFβ受体2型同种型A序列(例如NCBI参考序列(RefSeq)登录号NP_001020018(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列)的多肽，或具有野生型人TGFβ受体2型同种型B序列(例如NCBI参考序列(RefSeq)登录号NP_003233(SEQ IDNO:12)的氨基酸序列)的多肽，或具有与氨基酸序列SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12基本相同序列的多肽。TGFβRII可保留具有野生型序列的TGFβ结合活性的至少0.1％、0.5％、1％、5％、10％、25％、35％、50％、75％、90％、95％或99％。表达的TGFβRII多肽没有信号序列。

“能够结合TGFβ的TGFβRII片段”指NCBI RefSeq登录号NP_001020018(SEQ ID NO:11)或NCBI RefSeq登录号NP_003233(SEQ ID NO:12)的任何部分，或长度至少20(例如至少30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、175或200)个氨基酸且与SEQ IDNO:11或SEQ ID NO:12基本相同的序列，该序列保留野生型受体或相应的野生型片段的至少部分TGFβ结合活性(例如至少0.1％、0.5％、1％、5％、10％、25％、35％、50％、75％、90％、95％或99％)。通常，此类片段是可溶性片段。示例性的此类片段是具有SEQ ID NO:13序列的TGFβRII胞外域。

本文中，“TGFβ表达”指细胞或组织内TGFβ蛋白或TGFβmRNA的任何可检测水平的表达。可以在肿瘤组织切片IHC检测中或通过流式细胞术用诊断性TGFβ抗体检测TGFβ蛋白的表达。或者，可采用与TGFβ特异性结合的结合剂(例如抗体片段、亲和体(affibody)等)通过PET成像检测肿瘤细胞的TGFβ蛋白表达。检测和测量TGFβmRNA表达的技术包括RT-PCR和实时定量RT-PCR。

“TGFβ阳性”癌症，包括“TGFβ阳性”癌性疾病，是包含分泌TGFβ的细胞的癌症。术语“TGFβ阳性”还指其细胞内产生足够水平的TGFβ使得TGFβ抑制剂由此具有治疗效果的癌症。

在本发明的每种情形中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂或DNA-PK抑制剂的“治疗有效量”指在按剂量并经多个必要时段给予癌症患者时将具有预期的治疗效果(例如减轻、改善、缓解或消除患者一种或多种癌症表现)或癌症患者治疗期间任何其他临床结果的有效量。治疗效果不一定在一个剂量给药后出现，可能仅在一系列剂量给药后出现。因此，治疗有效量可以一次或多次给药来给予。所述治疗有效量可以根据诸如疾病状态、年龄、性别、个体的体重以及PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂或DNA-PK抑制剂在个体中引起所需缓解的能力等因素而不同。治疗有效量也是治疗有益效果超过PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂或DNA-PK抑制剂的任何毒性或有害作用的量。

“治疗”病症或患者或对病症或患者“的治疗”指采取步骤来获得有益或期望的结果，包括临床结果。就本发明目的而言，有益的或期望的临床结果包括但不限于减轻、改善一种或多种癌症症状；疾病程度的减轻；疾病进展的延缓或减缓；改善、缓解或稳定疾病状态；或其他有益的结果。应理解，述及“处理”或“治疗”包括预防以及已有症状的缓解。对状态、紊乱或状况的“处理”或“治疗”包括：(1)防止或者延迟所述状态、紊乱或状况在对象中出现，所述对象可能患有或易患所述状态、紊乱或状况但尚未经历或表现出所述状态、紊乱或状况的临床或亚临床症状，(2)抑制所述状态、紊乱或状况，即阻止、减少或延迟疾病的发生发展或其复发(就维持治疗而言)或其至少一种临床或亚临床症状，或者(3)消解或缓解疾病，即致使所述状态、紊乱或状况或其至少一种临床或亚临床症状发生消退。

当用于诊断有或怀疑有癌症的对象时，“肿瘤”指任意大小的恶性或潜在恶性的肿瘤或组织块，包括原发瘤和继发瘤。实体瘤是通常不包含囊肿或液体区域的异常组织生长或组织块。不同类型的实体瘤用形成它们的细胞类型命名。实体瘤的例子是肉瘤，癌和淋巴瘤。白血病(血液癌症)通常不形成实体瘤。

本文中，“单位剂量形式”指指物理上彼此离散的、适合治疗对象的治疗制剂单元。然而，应该理解，本发明组合物的每日总用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何特定对象或生物体的具体有效剂量水平取决于多种因素，包括正在治疗的疾病和疾病的严重程度；所用特定活性物质的活性；所用的具体组合物；对象的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给药时间和所用特定活性物质的排泄率；治疗时长；与所用特定一种或多种化合物联合或共同施用的药物和/或其他治疗手段，以及医学领域众所周知的类似因素。

“可变”指这样的情形，即可变结构域某些区段的序列在抗体之间差异很大。V结构域介导抗原结合并定义特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在整个可变结构域范围内并不是均匀分布的。相反，它集中在轻链和重链可变结构域中被称为高变区(HVR)的三个区段中。可变结构域中高度保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各包含四个FR区，主要采用β-折叠构型，通过三个HVR相连，形成环间连接，并在某些情况下形成β-折叠结构的一部分。各条链中的HVR通过FR区紧密相连，并与另一条链中的HVR一起形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等(1991年)，《免疫学相关序列》(Sequences ofImmunological Interest)，第5版，美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是表现出各种效应功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

抗体的“可变区”或“可变结构域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可以分别称为“V

本文中，方便起见，多个项目、结构元素、组成元素和/或材料可以共同列表的形式呈现。然而，这些列表应理解为如同将列表中的每个成员单独认定为独立且独特的成员。因此，除非有相反提示，不应当仅因它们处于同一列表中而将该列表中任一各别成员理解为该列表中任何其他成员实际上的等同物。

浓度、量以及其他数值数据在本文中可以范围的格式表示或呈现。应当理解，这样的范围格式仅是为了简明，因此应当灵活地解释为不仅包括明确记载的作为范围限值的数值，而且包括该范围内所有单独数值或子范围，就如同这每个数值和子范围都被明确记载。例如，数值范围“约1至约5”应理解为不仅包括明确记载的约1至约5的数值，还包括在所述范围内的单个数值和子范围。因此，包括在该数值范围内的是各个值，例如2、3和4，以及子范围，例如从1-3、2-4和3-5等，以及1、2、3、4和5。同样的原理适用于仅列出一个最小值或最大值的范围。并且，无论记载的范围或特征的幅度如何，都应采用这种解释。

本说明书中用到的缩写有：

1L： 一线

2L： 二线

ADCC： 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

BID： 每日两次

CDR： 互补决定区

CR： 完全缓解

CRC： 结直肠癌

CRT： 放化疗

CT： 化疗

DNA： 脱氧核糖核酸

DNA-PK： DNA-依赖性蛋白激酶

DNA-PKi： DNA依赖性蛋白激酶抑制剂

DSB： 双链断裂

ED： 广泛性疾病

Eto： 依托泊苷

Ig： 免疫球蛋白

IHC： 免疫组化

IV： 静脉内

mCRC： 转移性结直肠癌

MSI-H： 微卫星状态高度不稳定

MSI-L： 微卫星状态低度不稳定

MSS： 微卫星状态稳定

NK： 自然杀伤细胞

NSCLC： 非小细胞肺癌

OS： 总生存期

PD： 疾病进展

PD-1： 程序性死亡受体1

PD-L1： 程序性死亡配体1

PES： 聚酯砜

PFS： 无进展生存期

PR： 部分缓解

QD： 每日一次

QID： 一日四次

Q2W： 每两周

Q3W： 每三周

RNA： 核糖核酸

RP2D： 建议II期剂量

RR： 相对风险

RT： 放疗

SCCHN： 头颈部鳞状细胞癌

SCLC： 小细胞肺癌

SoC： 护理标准

SR： 持续缓解

TID： 一日三次

TGFβ： 转化生长因子β

Topo： 托泊替康

TR： 肿瘤缓解

TTP： 肿瘤进展前的时间

TTR： 肿瘤复发前的时间

说明性实施方式

一些化疗和放疗能促进免疫原性肿瘤细胞死亡并塑造肿瘤微环境从而促进抗肿瘤免疫。用DNA修复抑制剂抑制DNA-PK可触发并增强放疗或化疗诱导的免疫原性细胞死亡，并可能由此进一步增强T细胞反应。干扰素基因(STING)通路刺激物的激活以及随后的I型干扰素和PD-L1表达诱导是DNA中双链断裂反应的一部分。并且，体细胞突变负荷高的肿瘤对检查点抑制剂特别有反应性，这可能是因为新抗原形成的增加。尤其，在错配修复缺陷型CRC中有很强的抗PD1反应。DNA修复抑制剂可能进一步增加肿瘤的突变率并由此增加新抗原的种类。不受任何理论的束缚，发明人认为，汇聚双链断裂(DSB)，例如通过抑制DSB修复，特别是与诸如放疗或化疗之类DNA破坏性干预措施相结合，或在遗传不稳定的肿瘤中，可使肿瘤对PD-1轴结合拮抗剂治疗敏感，所述PD-1轴结合拮抗剂例如抗PD-L1抗体，例如重链的三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3且轻链的三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的抗PD-L1抗体，所述抗PD-L1抗体优选与TGFβ抑制剂融合。抑制PD-1和PD-L1之间相互作用可增强T细胞反应并介导临床抗肿瘤活性。PD-1是活化T细胞表达的关键免疫检查点受体，其介导免疫抑制并主要在外周组织中发挥作用，其中，T细胞可能会遇到免疫抑制性PD-1配体PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，它们由肿瘤细胞、基质细胞或这两种细胞表达。在上调PD-L1表达之外，放疗还会引起免疫抑制性细胞因子(如TGFβ)水平升高，从而将免疫抑制细胞引至肿瘤微环境中。

本发明部分源自出人意料地发现DNA-PK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂组合以及DNA-PK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合放疗、化疗或放化疗的组合效益，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂包含三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的重链和三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的轻链。将DNA-PK与PD-1轴结合拮抗剂相加被认为是禁忌的，因为，DNA-PK是VDJ重组中的主要酶并因此具有潜在的免疫抑制作用，以致DNA-PK缺失在小鼠中导致SCID(严重的合并免疫缺陷)表型。相反，与单一治疗相比，本发明的组合延迟了肿瘤的生长。出人意料的还包括，进一步加入TGFβ抑制剂进一步抑制了肿瘤的生长。设计治疗方案和剂量以显示潜在的协同作用。临床前数据表明，相比DNA-PK抑制剂或抗PD-L1/TGFβ阱，DNA-PK抑制剂(特别是化合物1)联合PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂(特别是融合为抗PD-L1/TGFβ阱分子形式)，或者还联合放疗，有协同作用(例如参见图3或4)。

因此，一方面，本发明提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，该方法包括给予对象PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，优选联合化疗、放疗或放化疗。应该理解的是，在本发明的方法中应用治疗有效量的PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，这足以治疗一种或多种与PD-L1、TGFβ和DNA-PK相关的疾病或紊乱的症状。

尤其，本发明提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，该方法包括给予对象PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，其中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区，并且，所述抗PD-L1抗体与TGFβ抑制剂融合。

实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，优选单克隆抗体。实施方式之一中，抗PD-L1抗体发挥抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。实施方式之一中，抗PD-L1抗体是人抗体或人源化抗体。实施方式之一中，抗PD-L1抗体是分离的抗体。优选实施方式之一中，抗PD-L1抗体与TGFβ抑制剂融合。多种实施方式中，抗PD-L1抗体的特征包括如以上所述一项或多项特征的组合。

实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，选自阿维鲁单抗，德瓦鲁单抗(durvalumab)和阿特朱单抗(atezolizumab)。阿维鲁单抗的记载可见国际专利申请公开第WO 2013/079174号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。德瓦鲁单抗的记载可见国际专利申请公开第WO2011/066389号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。

阿特朱单抗的记载可见国际专利申请公开第WO 2010/077634号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。

实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，选自纳武单抗，派姆单抗(pembrolizumab)和西米普利单抗(cemiplimab)。纳武单抗的记载可见国际专利申请公开第WO 2006/121168号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。派姆单抗的记载可见国际专利申请公开第WO 2008/156712号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。

西米普利单抗的记载可见国际专利申请公开第WO 2015/112800号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。

一些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1/TGFβ阱分子。

用于本发明的治疗方法、药物和用途的其他示例性PD-1轴结合拮抗剂是mAb7(亦称RN888)、mAb15、AMP224和YW243.55.S70。mAb7(亦称RN888)和mAb15的记载可见国际专利申请公开第WO 2016/092419号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。AMP224的记载可见国际专利申请公开第WO 2010/027827号和第WO 2011/066342号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。YW243.55.S70的记载可见国际专利申请公开第WO 2010/077634号，其公开内容通过引用全文纳入本申请。

靶向PD-1或PD-L1的其他抗体或药剂是例如CT-011(Curetech)、BMS-936559(Bristol-Myers Squibb公司)、MGA-271(Macrogenics公司)、达卡巴嗪和兰伯单抗(Lambrolizumab，MK-3475)。

多种实施方式中，抗PD-L1抗体介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。多种实施方式中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。阿维鲁单抗(以前称为MSB0010718C)是免疫球蛋白(Ig)G1同种型的全人单克隆抗体(参见例如WO 2013/079174)。阿维鲁单抗选择性结合PD-L1并竞争性阻断其与PD-1的相互作用。作用机制依赖于对PD-1/PD-L1相互作用的抑制以及基于自然杀伤细胞(NK)的ADCC(参见例如Boyerinas等(2015)，Cancer Immunol Res3:1148)。与靶向T细胞的抗PD-1抗体相比，阿维鲁单抗靶向肿瘤细胞，因此，预计其其副作用较少，包括自身免疫相关安全性问题风险更低，因为PD-L1阻断保留了完好的PD-L2/PD-1通路来促进外周自我耐受(参见例如Latchman等(2001)，Nat Immunol 2(3):261)。

阿维鲁单抗，其序列及其许多特性已记载于WO 2013/079174，其中，它被命名为A09-246-2，具有如SEQ ID NO:32和33所示的重链和轻链序列，如本专利申请图1(SEQ IDNO:7)和图2(SEQ ID NO:9)所示。然而，经常观察到，在抗体产生的过程中，重链的C末端赖氨酸(K)被切掉。该修饰对抗体-抗原结合没有影响。因此，一些实施方式中没有阿维鲁单抗重链序列的C末端赖氨酸(K)。没有C端赖氨酸的阿维鲁单抗重链序列如图1B(SEQ ID NO:8)所示，图1A(SEQ ID NO:7)显示阿维鲁单抗的全长重链序列。并且，如WO 2013/079174中所示，阿维鲁单抗的特性之一是能够引起抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，由此通过诱导肿瘤细胞裂解来直接作用于带有PD-L1的肿瘤细胞而不表现出任何明显的毒性。优选实施方式之一中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，具有图1A或1B(SEQ ID NO:7或8)和图2(SEQID NO:9)所示的重链和轻链序列，或是其抗原结合片段。

一些实施方式中，TGFβ抑制剂选自TGFβ受体、TGFβ配体阻断抗体或TGFβ受体阻断抗体、抑制TGFβ结合伴侣之间相互作用的小分子、以及与TGFβ受体结合并与内源性TGFβ竞争结合的无活性突变TGFβ配体。优选地，TGFβ抑制剂是能够结合TGFβ的TGFβ受体或其片段。

示例性的TGFβ配体阻断抗体包括勒德莫单抗(lerdelimumab)、美替木单抗(metelimumab)、弗雷索单抗(fresolimumab)、XPA681、XPA089和LY2382770。示例性的TGFβ受体阻断抗体包括1D11、2G7、GC1008和LY3022859。

在一些方面，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇，具有化合物1的结构：

，或其药学上可接受的盐。

化合物1的详细记载可见2016年3月24日公开的美国专利申请US2016/0083401(在本文中称为“'401公开”)，其全部内容通过引用并入本申请。化合物1在'401公开的表4中被标为化合物136。化合物1在表现DNA-PK抑制的多项检测和治疗模型中具有活性(参见例如'401公开的表4)。因此，如本文详细描述的，化合物1或其药学上可接受的盐可用于治疗一种或多种与DNA-PK活性相关的疾病。

据晶体学和酶动力学研究显示，化合物1是DNA-PK的强效选择性ATP竞争性抑制剂。DNA-PK及其他五个蛋白因子(Ku70、Ku80、XRCC4、连接酶IV和Artemis)在通过NHEJ修复DSB中起着至关重要的作用。DNA-PK的激酶活性对于正确和及时的DNA修复以及癌细胞的长期存活至关重要。不希望受任何特定理论的束缚，据信化合物1的主要作用是抑制DNA-PK活性和DNA双链断裂(DSB)修复，从而导致DNA修复的改变和DNA破坏剂抗肿瘤活性的增强。

应当理解，尽管本文描述的方法可能提及化合物1的制剂、剂量和给药方案/计划，但这些制剂、剂量和/或给药方案/计划同样适用于化合物1的任何药学上可接受的盐。因此，一些实施方式中，化合物1的药学上可接受的盐或其药学上可接受的盐的剂量或给药方案选自本文所述化合物1的任何剂量或给药方案。

药学上可接受的盐可包含另一种分子，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他反离子。反离子可以是任何能稳定亲本化合物上电荷的有机或无机部分。并且，药学上可接受的盐在其结构中可具有一个以上的带电原子。当多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分时可以具有多个反离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个反离子。如果本发明的化合物是碱，则所需的药学上可接受的盐可以用本领域任何合适的方法来制备，例如用无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等或用有机酸例如例如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等吡喃糖基酸、诸如柠檬酸或酒石酸等α羟基酸、诸如天冬氨酸或谷氨酸等氨基酸、诸如苯甲酸或肉桂酸等芳族酸、诸如对甲苯磺酸或乙磺酸等磺酸来处理游离碱。如果本发明的化合物是酸，则可以用任何合适的方法来制备所需的药学上可接受的盐，例如用无机或有机碱例如胺(伯、仲或叔)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等来处理游离酸。合适的盐的说明性例子包括但不限于衍生自氨基酸(例如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺，仲胺和叔胺以及环胺(例如哌啶、吗啉和哌嗪)的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

实施方式之一中，本发明的治疗组合用于治疗人类对象。实施方式之一中，抗PD-L1抗体靶向人PD-L1。对于这些人类患者，使用该治疗联合治疗的主要预期获益是使用所述抗体尤其是阿维鲁单抗或抗PD-L1/TGFβ阱的风险/获益比的增加。

实施方式之一中，所示癌症被鉴定为PD-L1阳性癌性疾病。药效分析显示，PD-L1的肿瘤表达可能预示治疗效果。根据本发明，如果至少0.1％至至少10％、优选至少0.5％至5％、最优选至少1％的癌细胞的细胞表面存在PD-L1，则宜将癌症视为PD-L1阳性。实施方式之一中，PD-L1表达通过免疫组化(IHC)来确定。

某些实施方式中，本发明提供了对以过度或异常细胞增殖为特征的疾病、紊乱和病况的治疗。此类疾病包括增生性疾病或过度增生性疾病。增生性和过度增生性疾病的例子包括癌症和骨髓增生性疾病。

另一个实施方式中，所述癌症选自肺癌、头颈癌、结肠癌、神经内分泌系统癌、间充质癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、胶质母细胞瘤以及它们的组织学亚型(例如腺癌、鳞状癌、大细胞癌)。优选实施方式之一中，所述癌症选自小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、结直肠癌(CRC)、原发性神经内分泌肿瘤和肉瘤。

多种实施方式中，本发明的方法用作一线、二线、三线或更晚期的治疗方案。某线治疗指按患者接受不同药物或其他疗法进行治疗的顺序。一线治疗方案是首先给予的治疗，二线或三线治疗则分别在一线治疗后或二线治疗后进行。因此，一线疗法是针对疾病或病况的第一治疗。在癌症患者中，一线治疗(有时依次初级治疗或初级处置)可以是手术、化疗、放疗或这些疗法的组合。通常，患者会接受后续的化疗方案(二线或三线治疗)，原因是患者未表现出正面的临床转归或者仅表现出对一线或二线治疗的亚临床疗效或虽表现出正面的临床疗效但后来又复发，有时疾病此时对曾引起早期正面疗效的早期治疗表现出抗性。

如果本发明治疗组合的安全性和临床获益得以确认，则PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的这种组合证明是癌症患者的一线治疗。尤其，该组合可能成为癌症患者的新标准疗法，所述癌症选自SCLC广泛性疾病(ED)、NSCLC和SCCHN。

优选地，本发明的治疗组合用于癌症较晚期的治疗，尤其是二线或更高线的治疗。对先前治疗的数量没有限制，只要对象曾经历过至少一个周期的先前癌症治疗。所述先前癌症治疗周期指的是用例如一种或多种化疗药、放疗或放化疗对对象进行明确计划/阶段的治疗，而这些前期治疗对对象治疗失败，不论所述前期治疗完成或比计划提前中止。原因之一可能是癌症对先前的治疗有抗性或变得有抗性。当前用于治疗癌症患者的护理标准(SoC)通常涉及毒性管理和旧式化疗方案管理。SoC与严重不良事件的高风险相关，这些不良事件很可能会影响生活品质(例如继发性癌症)。抗PD-L1抗体/DNA-PK抑制剂组合(优选阿维鲁单抗和(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐的毒性情况看来比SoC化疗要好得多。实施方式之一中，在对单一和/或多化疗、放疗或放化疗有抗药性的癌症患者中，抗PD-L1抗体/DNA-PK抑制剂组合(优选阿维鲁单抗和(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐)与SoC化疗相比疗效相当但耐受性更好。由于DNA-PK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂的作用方式不同，因此认为本发明的治疗增加免疫相关不良事件(irAE)的可能性很小，尽管这三种药物都靶向免疫系统。

优选实施方式之一中，在癌症的二线或更高线治疗(优选二线治疗)中给予DNA-PK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂，所述癌症选自先前治疗过的复发性转移性NSCLC、不可切除的局部晚期NSCLC、先前治疗过的SCLC ED、不适合系统性治疗的SCLC、先前治疗过的复发性或转移性SCCHN、适合再次照射的复发性SCCHN以及先前治疗过的微卫星状态低度稳定(MSI-L)或微卫星状态稳定的(MSS)转移性结直肠癌(mCRC)。SCLC和SCCHN尤其是系统性先前治疗过的。全部mCRC的85％发生MSI-L/MSS。一旦确立了DNA-PK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂组合在患者中的安全性/耐受性和有效性状况，例如用标准剂量的抗PD-L1/TGFβ阱分子和推荐II期剂量(RP2D)的DNA-PK抑制剂，在本文所述的各种情形中，即可针对包括化疗(例如依托泊苷或托泊替康)、放疗或放化疗来诱导双链断裂的其他扩展队列进行研究。

在联合疗法中采用抗PD-L1抗体的一些实施方式中，给药方案包括整个疗程按照约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/kg的剂量、约14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔给予抗PD-L1抗体。在联合疗法中抗PD-L1抗体的其他实施方式中，给药方案包括按约0.005mg/kg至约10mg/kg的剂量且本患者剂量递增来给药抗PD-L1抗体。其他剂量递增实施方式中，剂量之间的间隔逐渐缩短，例如，第一和第二剂量之间约30天(±2天)，第二和第三剂量之间约14天(±2天)。某些实施方式中，对于第二剂量之后的剂量，给药间隔是约14天(±2天)。某些实施方式中，对象接受静脉内(IV)输注包含任意本文所述抗PD-L1抗体的药物。一些实施方式中，联合疗法中的抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，该单抗按照选自以下集和的剂量静脉内给药：约1mg/kg Q2W(Q2W＝每两周一剂)、约2mg/kg Q2W、约3mg/kg Q2W、约5mg/kg Q2W、约10mg/kg Q2W、约1mg/kg Q3W(Q3W＝每三周一剂)、约2mg/kg Q3W、约3mg/kg Q3W、约5mg/kg Q3W和约10mg Q3W。本发明的一些实施方式中，联合疗法中的抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，该单抗按照选自以下剂量的剂量给药：约1mg/kg Q2W、约2mg/kg Q2W、约3mg/kg Q2W、约5mg/kg Q2W、约10mg/kg Q2W、约1mg/kgQ3W、约2mg/kg Q3W、约3mg/kg Q3W、约5mg/kg Q3W和约10mg/kg Q3W。一些实施方式中，治疗周期从联合治疗的第一天开始，持续2周。这样的实施方式中，联合疗法优选给药至少12周(6个治疗周期)，更优选至少24周，甚至更优选患者达到CR后至少2周。

联合疗法中采用抗PD-L1抗体的一些实施方式中，给药方案包括按约400-800mg统一剂量(flat dose)Q2W给予抗PD-L1抗体。优选地，统一给药方案为400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg750mg或800mg统一剂量Q2W。更优选地，统一给药方案是800mg统一剂量Q2W。联合疗法中采用抗PD-L1抗体的一些更优选实施方式中，给药方案为按约14天(±2天)的间隔静脉内给予800mg的固定剂量。

另一实施方式中，抗PD-L1抗体(优选阿维鲁单抗)每两周静脉注射(Q2W)。某些实施方式中，抗PD-L1抗体每两周(Q2W)按约10mg/kg体重的剂量经50-80分钟静脉内给药。更优选实施方式中，阿维鲁单抗的剂量为每两周(Q2W)1小时静脉输注给予10mg/kg体重。某些实施方式中，抗PD-L1抗体按每两周(Q2W)约800mg的固定剂量经50-80分钟静脉内给药。更优选实施方式中，阿维鲁单抗的剂量为每2周(Q2W)1小时静脉输注给药800mg。鉴于不同地点输液泵之间的差异，允许的时间窗为负10分钟到正20分钟。

药代动力学研究表明，10mg/kg剂量的阿维鲁单抗达到了优异的受体占用率和可预测的药代动力学特征(参见例如Heery等(2015)，Proc 2015ASCO年会，摘要3055)。该剂量耐受性良好，并且经观察到抗肿瘤活性表现，包括持续缓解。由于给药原因，阿维鲁单抗可以在每个周期的计划给药日之前或之后最多3天给药。药代动力学模拟还表明，在现有体重范围内，800毫克Q2W的阿维鲁单抗暴露差异小于10毫克/千克Q2W。在群体中位体重附近，暴露率相似。采用基于体重的剂量给药时，低体重对象的暴露率倾向于略低于群体中的其余对象，采用统一剂量时则略高。这些暴露差异所提示的信息预计对于整个群体中的任意体重都没有临床意义。并且，在所有体重分类中，预计800mg Q2W给药方案能得到C

在联合疗法中采用抗PD-L1/TGFβ阱的某些实施方式中，给药方案包括按约1200mg至约3000mg的剂量给药抗PD-L1/TGFβ阱，例如约1200mg至约3000mg、约1200mg至约2900mg、约1200mg至约2800mg、约1200mg至约2700mg、约1200mg至约2600mg、约1200mg至约2500mg、约1200mg至约2400mg、约1200mg至约2300mg、约1200mg至约2200mg、约1200mg至约2100mg、约1200mg至约2000mg、约1200mg至约1900mg、约1200mg至约1800mg、约1200mg至约1700mg、约1200mg至约1600mg、约1200mg至约1500mg、约1200mg至约1400mg、约1200mg至约1300mg、约1300mg至约3000mg、约1400mg至约3000mg、约1500mg至约3000mg、约1600mg至约3000mg、约1700mg至约3000mg、约1800mg至约3000mg、约1900mg至约3000mg、约2000mg至约3000mg、约2100mg至约3000mg、约2200mg至约3000mg、约2300mg至约3000mg、约2400mg至约3000mg、约2500mg至约3000mg、约2600mg至约3000mg、约2700mg至约3000mg、约2800mg至约3000mg、约2900mg至约3000mg、约1200、约1300、约1400、约1500、约1600、约1700、约1800、约1900、约2000、约2100、约2200、约2300、约2400、约2500mg、约2600mg、约2700mg、约2800mg、约2900mg或约3000mg。某些实施方式中，每两周一次给予对象约1200mg抗PD-L1/TGFβ阱分子。某些实施方式中，每三周一次给予对象约1800mg抗PD-L1/TGFβ阱分子。某些实施方式中，每三周一次给予对象约2400mg抗PD-L1/TGFβ阱分子。某些实施方式中，每两周一次给予对象约1200mg具有第一多肽和第二多肽的蛋白产物，所述第一多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，所述第二多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:9。某些实施方式中，每三周一次给予对象约1800mg具有第一多肽和第二多肽的蛋白产物，所述第一多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，所述第二多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:9。某些实施方式中，每三周一次给予对象约2400mg具有第一多肽和第二多肽的蛋白产物，所述第一多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，所述第二多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:9。

一些实施方式中，提供的方法包括每日一次、两次、三次或四次给予包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的药学上可接受的组合物每日给药一次(“QD”)，特别是持续地每日给药一次。一些实施方式中，包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的药学上可接受的组合物每日给药两次，特别是持续地每日给药两次。一些实施方式中，每日给药两次指化合物或组合物按“BID”方式给药，或在一天中两个不同时刻给予两个对等剂量。一些实施方式中，包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的药学上可接受的组合物每日给药三次。一些实施方式中，包含化合物1或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物按“TID”方式给药，或在一天中三个不同时刻给予三个对等剂量。一些实施方式中，包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的药学上可接受的组合物每日给药四次。一些实施方式中，包含化合物1或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物按“QID方式给药，或在一天中四个不同时刻给予四个对等剂量。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)在禁食条件下给予患者，并且每日总剂量是任何本文及前文述及的剂量。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)在进食条件下给予患者，并且每日总剂量是任何本文及前文述及的剂量。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)口服给药。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂，优选化合物1或其药学上可接受的盐，持续地每日一次或两次口服给药。优选实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)按照约1至约800mg剂量每日一次(QD)或每日两次(BID)给药。优选实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)按约400mg剂量每日两次(BID)给药。

主治医师可酌情给予认为对患者健康必要的并行治疗。一些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂与化疗(CT)、放疗(RT)或化疗和放疗(CRT)联用。如本文所述，一些实施方式中，本发明提供了治疗、稳定或减轻一种或多种PD-L1、TGFβ和DNA-PK相关疾病或紊乱的严重程度或进展的方法，包括给予有需要的患者PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及联用的其他化疗药。某些实施方式中，化疗药选自依托泊苷、阿霉素、托泊替康、伊立替康、氟尿嘧啶、铂类、蒽环类及其组合。

某些实施方式中，其他化疗药是依托泊苷。依托泊苷与DNA和拓扑异构酶II酶形成三元复合物，有助于复制过程中DNA解链。这避免DNA链重新连接并引起DNA链断裂。癌细胞比健康细胞更依赖于这种酶，因为它们分裂得更快。所以，依托泊苷治疗引起DNA合成错误并促进癌细胞凋亡。不受任何特定理论的束缚，据信，DNA-PK抑制剂阻断DNA中DSBs修复的主要途径之一，从而令修复过程延迟并增强依托泊苷的抗肿瘤活性。体外数据显示化合物1与依托泊苷组合相比依托泊苷单用有协同作用。因此，一些实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐与依托泊苷的组合是协同性的。

某些实施方式中，所述其他化疗药是托泊替康、依托泊苷和/或蒽环类治疗，或者作为单独的细胞生长抑制剂或者作为双联或三联方案的组成部分。对于此类化疗，DNA-PK抑制剂可优选每日一次或两次给药并与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂优选融合成抗PD-L1/TGFβ阱，每两周给药一次或每三周一次。在采用蒽环类药物的情形中，一旦达到最大终生累积剂量即停止蒽环类药物治疗(因为心脏毒性)。

某些实施方式中，其他化疗药是铂类药。铂类药是基于铂的化疗药。本文中，术语“铂类药(platin)”与术语“铂化剂(platinating agent)”可互换使用。铂化剂是本领域众所周知的。一些实施方式中，铂类药(或铂化剂)选自顺铂、卡铂、奥沙利铂，奈达铂和赛特铂。一些实施方式中，其他化疗药是依托泊苷与铂类药两者的组合。某些实施方式中，所述铂类药是顺铂。某些实施方式中，所提供的方法还包括对患者进行放疗。一些实施方式中，其他化疗药是依托泊苷和顺铂两者的组合。

某些实施方式中，其他治疗剂选自道诺霉素、阿霉素、表柔比星、伊达比星、戊柔比星(valrubicin)、米托蒽醌、紫杉醇、多西他赛(docetaxel)和环磷酰胺。

其他实施方式中，其他治疗剂选自CTLA4药(例如伊匹木单抗(ipilimumab)(BMS公司))；GITR药(例如MK-4166(MSD公司))；疫苗(例如“sipuleucel-t”(Dendron公司)或SoC类(例如照射、多西他赛、替莫唑胺(temozolomide，MSD公司)、吉西他滨或紫杉醇)。其他实施方式中，其他治疗剂是免疫增强剂，例如疫苗、免疫激发性抗体、免疫球蛋白、药物或佐剂，包括但不限于“sipuleucel-t”、BMS-663513(BMS)、CP-870893(辉瑞/VLST)、抗OX40(AgonOX公司)或CDX-1127(CellDex公司)。

可与本发明的创新药联用的其他癌症疗法或抗癌药包括手术、放疗(例如γ照射、中子束放疗、电子束放疗、质子疗法、近距离放疗(brachytherapy)、低剂量放疗和全身性放射性同位素)、免疫反应调节剂(例如趋化因子受体拮抗剂、趋化因子和细胞因子(例如干扰素、白介素、肿瘤坏死因子(TNF)和GM-CSF))、热疗和冷冻疗法、减轻任何不良作用的物质(例如止痛药、类固醇、消炎药)以及其他获批的化疗药物。

某些实施方式中，其他治疗剂选自抗生素、血管加压药、类固醇、强心剂、抗血栓形成剂、镇静剂、阿片样物质或麻醉剂。

某些实施方式中，其他治疗剂选自头孢菌素、大环内酯类、青霉烷类(penams)、β-内酰胺酶抑制剂、氨基糖苷类抗生素、氟喹诺酮类抗生素、糖肽类抗生素、青霉烯类(penems)、单内酰环类、碳青霉烯类(carbapenmems)，硝基咪唑类抗生素、林可胺类(lincosamide)抗生素、血管加压药、正性强心剂、类固醇、苯二氮平类药、苯酚，α2-肾上腺素受体激动剂、GABA-A受体调节剂、抗血栓形成剂、麻醉剂或阿片类药。

本发明方法中的DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)及其组合物以及与之联合的PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和其他化疗药采用前文所述任何能够有效治疗或减轻疾病严重程度的量和给药途径来给药。所需的确切量因对象而异，这取决于对象的物种、年龄和总体健康状况、感染的严重程度、具体药物、其给药方式等。

一些实施方式中，本发明提供了一种治疗有需要的患者中选自以下的癌症的方法：肺癌、头颈癌、结肠癌、神经内分泌系统癌、间充质癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌及它们的组织学亚型(例如腺癌、鳞状癌、大细胞癌)，所述包括给予所述患者约1至约800mg、优选地约10至约800mg、更优选以约100至约400mg量的DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)，各种情形中所述DNA-PK都与PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和至少一种选自铂类药和依托泊苷的其他治疗剂联用，它们的量按照当地护理指南临床标准而定。

一些实施方式中，提供的方法包括每日一次、两次、三次或四次给予包含化疗药的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物每日给药一次(“QD”)。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物每日给药两次。一些实施方式中，每日给药两次指化合物或组合物按“BID”方式给药，或在一天中两个不同时刻给予两个对等剂量。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物每日给药三次。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物按“TID”方式给药，或在一天中三个不同时刻给药三个对等的剂量。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物每日给药四次。一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物按“QID”方式给药，或在一天中四个不同时刻给药四个对等的剂量。

一些实施方式中，包含化疗药的药学上可接受的组合物进行不同天数(例如14、21、28)且治疗之间间隔不同天数(0、14、21、28)的到给药。一些实施方式中，化疗药在禁食条件下对患者给药，并且每日总剂量是任一上文和本文所述的每日总剂量。一些实施方式中，化疗药在进食条件下对患者给药，并且每日总剂量是任一上文和本文所述的每日总剂量。一些实施方式中，方便起见，化疗药口服给药。一些实施方式中，口服给药时，化疗药与膳食和水一起给药。另一实施方式中，将化疗药分散在水或果汁(例如苹果汁或橙汁)中以悬浮液的形式口服给药。一些实施方式中，口服给药时，化疗药在禁食状态下给药。化疗药也可以通过皮内、肌内、腹膜内、经皮、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下，脑内、阴道内、透皮、直肠、粘膜、吸入、或耳、鼻、眼局部、或皮肤给药。给药方式可由医护人员来酌情决定，并可能部分取决于病症的部位。

某些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)与放疗联合给药。某些实施方式中，提供的方法包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)联合依托泊苷和顺铂之一或两者来给药，其中，所述方法还包括对患者进行放疗。某些实施方式中，放疗包含约35-70戈瑞(Gy)/20-35次(fraction)。一些实施方式中，按照标准分次(每周5日，每日1.8至2Gy)给予放疗，可至总剂量达到50-70Gy。可以想见也可以是其他分次方案，例如，每次低剂量但每日两次，同时DNA-PK抑制剂也每日两次给药。也可以在较短的时间内给予较高的每日剂量。实施方式之一中，采用立体定向放疗和伽玛刀。姑息治疗设定中，也广泛采用其他分次方案，例如25Gy分5次或30Gy分10次。所以情形中，抗PD-L1/TGFβ阱优选每两周给药一次或每三周一次。至于放疗，疗程是进行放疗的时间范围。这些干预措施适用于以电子、光子和质子、阿尔法发射体或其他离子给予的治疗，以放射性核苷酸进行的治疗，例如给予甲状腺癌患者的

一些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂被同时、分别或按任意顺序依次给药。PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂按任意顺序(即同时或依次)分开在多个组合物、制剂或单位剂量形式中或以单一组合物、制剂或单位剂量形式给予患者。实施方式之一中，治疗增生性疾病的方法可包括DNA-PK抑制剂、TGFβ抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂组合的给药，其中，各组合伴侣按任意顺序同时或依次给药，并按照联合治疗有效量给药，例如协同有效量，例如对应于本文所述量的每日剂量或间歇性剂量。本发明联合疗法的各个联合伴侣可在治疗期间于不同时刻分开给药，或者以分开的组合物形式或单一组合形式并行给药。通常，在此类联合疗法中，将第一活性成分即至少一种DNA-PK抑制剂的与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂配制为分开的药物组合物或药物。分别配制时，这至少三种活性成分可以同时或依次给药，任选地，可通过不同途径。任选地，组合中每种活性成分的治疗方案具有不同但有重叠的递送方案，例如每日、每日两次相对于单次给药或按周给药。第二和第三活性成分(PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂)可以彼此独立地在至少一种DNA-PK抑制剂之前或之后基本上同时递送。某些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂包含在含有PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的同一组合物中同时给药。某些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂分处于多个组合物中同时给药，即PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以各自独立的单位剂量形式同时给药。应当理解，根据合适的给药方案，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂可同日或非同日按任意顺序给药。因此，本发明应理解为包括所有这些同时或交替治疗方案，并且，术语“给药”或“给予”应据此来解释。

一些实施方式中，抗-PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂同时、分开或依序给药，并可按照任意顺序。抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂按任意顺序(即同时或依次)分开在多个组合物、制剂或单位剂量形式中或以单一组合物、制剂或单位剂量形式给予患者。实施方式之一中，治疗增生性疾病的方法可包括DNA-PK抑制剂与抗PD-L1/TGFβ阱组合的给药，其中，各组合伴侣按任意顺序同时或依次给药，并按照联合治疗有效量给药，例如协同有效量，例如对应于本文所述量的每日剂量或间歇性剂量。本发明联合疗法的各个联合伴侣可在治疗期间于不同时刻分开给药，或者以分开的组合物形式或单一组合形式并行给药。通常，在此类联合疗法中，将第一活性成分即至少一种DNA-PK抑制剂的与抗PD-L1/TGFβ阱配制为分开的药物组合物或药物。分别配制时，这至少两种活性成分可以同时或依次给药，任选地，可通过不同途径。任选地，组合中每种活性成分的治疗方案具有不同但有重叠的递送方案，例如每日、每日两次相对于单次给药或按周给药。第二活性成分(抗PD-L1/TGFβ阱)可在至少一种DNA-PK抑制剂之前或之后基本上同时递送。某些实施方式中，抗PD-L1/TGFβ阱包含在含有抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂的同一组合物中同时给药。某些实施方式中，抗PD-L1/TGFβ阱与DNA-PK抑制剂分处于多个组合物中同时给药，即抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂以各自独立的单位剂量形式同时给药。应当理解，根据合适的给药方案，抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂可同日或非同日按任意顺序给药。因此，本发明应理解为包括所有这些同时或交替治疗方案，并且，术语“给药”或“给予”应据此来解释。

一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)在医师的指导或控制下，对象在首次接受DNA-PK抑制剂之前接受PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂；以及(b)在医师的指导或控制下，所述对象接受DNA-PK抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)在医师的指导或控制下，对象在首次接受PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂之前接受DNA-PK抑制剂；以及(b)在医师的指导或控制下，所述对象接受PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)向对象开具自我给药处方并确保所述对象在首次DNA-PK抑制剂给药之前已经给予自己PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂；以及(b)将DNA-PK抑制剂给予所述对象。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)向对象开具自我给药处方并确保所述对象在首次PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给药之前已经给予自己DNA-PK抑制剂；以及(b)将PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给予所述对象。一些实施方式中，所述联合方案包括，在对象于DNA-PK抑制剂首次给药之前接受了PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂之后给予所述对象DNA-PK抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)在对象先于首次DNA-PK抑制剂给药接受了PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂之后，确定分离自所述对象的癌症样品中DNA-PK水平高于首次接受PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂之前的先前测定的DNA-PK水平，和(b)给予对象DNA-PK抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括，在对象于PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂首次给药之前接受了DNA-PK抑制剂之后给予所述对象PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂。

一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)在医师的指导或控制下，对象在首次接受TGFβ抑制剂之前接受PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂；以及(b)在医师的指导或控制下，所述对象接受TGFβ抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)在医师的指导或控制下，对象在首次接受PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂之前接受TGFβ抑制剂；以及(b)在医师的指导或控制下，所述对象接受PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)向对象开具自我给药处方并确保所述对象在首次TGFβ抑制剂给药之前已经给予自己PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂；以及(b)将TGFβ抑制剂给予所述对象。一些实施方式中，所述联合方案包括以下步骤：(a)向对象开具自我给药处方并确保所述对象在首次PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂给药之前已经给予自己TGFβ抑制剂；以及(b)将PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂给予所述对象。一些实施方式中，所述联合方案包括，在对象于TGFβ抑制剂首次给药之前接受了PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂之后给予所述对象TGFβ抑制剂。一些实施方式中，所述联合方案包括，在对象于PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂首次给药之前接受了TGFβ抑制剂之后给予所述对象PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂。

本文还提供了与DNA-PK抑制剂和TGFβ抑制剂联合用作药物的PD-1轴结合拮抗剂。类似地，提供了与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂组合用作药物的DNA-PK抑制剂。类似地，提供了与PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂组合用作药物的TGFβ抑制剂。类似地，提供了与DNA-PK抑制剂组合用作药物的抗PD-L1/TGFβ阱。类似地，提供了用作药物的TGFβ抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂的组合。还提供了与DNA-PK抑制剂和TGFβ抑制剂组合用于治疗癌症的PD-1轴结合拮抗剂。类似地，提供了与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂组合用于治疗癌症的DNA-PK抑制剂。类似地，提供了与PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂组合用于治疗癌症的TGFβ抑制剂。类似地提供了与DNA-PK抑制剂组合用于治疗癌症的抗PD-L1/TGFβ阱。类似地，提供了用于治疗癌症的TGFβ抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂的组合。

还提供了包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合。还提供了用作药物的包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合。还提供了用于治疗癌症的包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合。

应当理解，在上述各种实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂优选两者融合，更优选对应于抗PD-L1/TGFβ阱。

还提供了一种组合用于制造用于治疗癌症的药物的用途，所述组合包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂，其中，所述抗PD-L1抗体优选包含三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的重链和三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的轻链。

以上本说明书标题为“治疗组合及其使用方法”部分关于治疗组合、包括其使用方法及其所有方面和实施方式所讲述的内容，在适宜的情况下均是有效且适用的，不局限于用于癌症治疗的药物、PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和/或DNA-PK抑制剂及其组合、各方面内容和实施方式。

一些实施方式中，本发明提供了包含PD-1轴结合拮抗剂的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含TGFβ抑制剂的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含PD-L1/TGFβ阱的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含DNA-PK抑制剂优选化合物1或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，本发明提供了化疗药的药学上可接受的组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和至少药学上可接受的赋形剂或佐剂的药物组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂和至少药学上可接受的赋形剂或佐剂的药物组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含PD-1轴结合拮抗剂，DNA-PK抑制剂和至少药学上可接受的赋形剂或佐剂的药物组合物。一些实施方式中，本发明提供了包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂和至少药学上可接受的赋形剂或佐剂的药物组合物。前文和下文各种实施方式中，所述抗PD-L1抗体优选包含三个互补决定区具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的重链和三个互补决定区具有氨基酸序列SEQID NO:4、5和6的轻链，更优选的是，所述抗PD-L1抗体与TGFβ抑制剂融合。一些实施方式中，包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的组合物与包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和/或化疗药的组合物分开。一些实施方式中，DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)的组合物与PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和/或化疗药处于同一组合物中。

一些实施方式中，包含融合的PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂的组合物与包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药的组合物分开。一些实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂与TGFβ抑制剂融合并且与DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药处于同一组合物中。

某些实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)以及依托泊苷和顺铂中至少其一，任选地，还有PD-1轴结合拮抗剂和/或TGFβ抑制剂。一些实施方式中，所提供的包含DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)以及依托泊苷和顺铂中至少其一的组合物配制成用于口服给药。

此类可药用组合物的例子在下文和本文中有进一步描述。

用于本发明组合物的药学上可接受的运载体、佐剂和载剂包括但不限于：离子交换剂、氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白质如人血清白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶体二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素类物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。

本发明组合物通过吸入、喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或通过储库植入来口服、肠胃外给药。本文中，术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，所述组合物口服、腹膜内或静脉内给药。

用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了化合物1或其药学上可接受的盐和/或化疗药之外，液体剂型还可包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油(尤其是棉籽油，花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂，例如湿润剂，乳化剂和混悬剂，甜味剂，调味剂和芳香剂。

可以按照本领域所知的技术采用合适的分散剂或湿润剂和助悬剂来配制可注射制剂，例如无菌的可注射水性或油质混悬剂。无菌注射制剂也可以是配制在无毒的肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂、混悬剂或乳剂，例如配制在1,3-丁二醇中的溶液剂。可用的可接受的载剂和溶剂包括水和林格氏溶液U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，常将无菌的非挥发油用作溶剂或悬浮介质。为此，可采用各种低刺激非挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，注射剂的制备中还用到脂肪酸如油酸。

可将可注射制剂灭菌，例如通过细菌截留过滤器过滤，或引入能在用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂。

为了延长PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂，DNA-PK抑制剂(优选化合物1)和/或其他化疗药的作用，通常宜减慢皮下或肌内注射的吸收。这可通过用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮在油性载剂中来延缓胃肠外给药的PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药的吸收。通过形成PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药包含于可生物降解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中的微胶囊基质来制备可注射的贮库形式。可根据药物与聚合物之比以及所用特定聚合物的性质来控制药物的释放速率。其它可生物降解聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射制剂还可通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。

用于直肠或阴道给予的组合物优选栓剂，可以通过将本发明化合物与合适的无刺激性赋形剂或运载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在环境温度下为固体而在体温下为液体，所以会在直肠腔或阴道腔内融化并释放出活性化合物。

口服给药的剂量形式包括胶囊剂，片剂，丸剂，粉剂和颗粒剂，水性混悬剂或溶液剂。在这类固体剂型中，活性化合物与至少一种以下物质混合：惰性的药学上可接受的赋形剂或运载体如柠檬酸钠或磷酸氢钙和/或a)填充剂或增量剂、例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶(acacia)，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液调凝剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，以及以上所述的混合物。就胶囊、片剂和丸剂而言，剂型中还可含有缓冲剂。

相似类型的固体组合物也可作为填充剂用于采用诸如乳糖及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以制备成有包衣或外壳的，如肠溶包衣和药物制剂领域熟知的其它包衣。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是仅在肠道的某一或某些部分或优先在肠道的某一或某些部分释放活性成分的组合物，所述释放可以是缓释方式。可以使用的包埋组合物的例子包括聚合物和蜡。

PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药还可以带有上述一种或多种赋形剂的微囊化形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以制备成有包衣或外壳的，如肠溶包衣、控释包衣和药物制剂领域熟知的其它包衣。此类固体剂形中，可以将PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。此类剂形还可常规地包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。就胶囊、片剂和丸剂而言，剂型中还可含有缓冲剂。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是仅在肠道的某一或某些部分或优先在肠道的某一或某些部分释放活性成分的组合物，所述释放可以是缓释方式。可以使用的包埋组合物的例子包括聚合物和蜡。

PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂(优选化合物1或其药学上可接受的盐)和/或化疗药的局部或透皮给药剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、搽剂(lotion)、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性成分在无菌条件下与药学上可接受的运载体和任何可能需要的防腐剂或缓冲剂混合。用于该化合物局部给药的示例性运载体是矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将提供的药学上可接受的组合物配制成合适的含有活性成分的搽剂或乳霜剂，其中，活性成分悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的运载体中。合适的运载体包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。眼科制剂，滴耳剂和滴眼剂也在本发明的范围之内。

此外，本发明还考虑采用透皮贴剂，透皮贴剂的附加优点包括提供化合物向身体的受控递送。此类剂型可通过将化合物溶解或分配在适当的介质中来制备。还可采用吸收促进剂来增加化合物的透皮通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。

本发明药学上可接受的组合物可任选地通过鼻喷雾或吸入给药。此类组合物癌症药物制剂领域中公知的技术来制备，并制备成配成在盐水中的溶液，其中采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶剂或分散剂。

通常，将PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂包含在适合些对象给药的药物组合物中，其中，所述药物组合物包含PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂和药学上可接受的运载体。许多情形中，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，或氯化钠。药学上可接受的运载体还可包含少量辅助物质，例如润湿剂或乳化剂，防腐剂或缓冲剂，由此可延长PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂的保质期或有效性。

本发明的组合物可以是多种形式。这包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。优选形式取决于预期的给药方式和治疗应用。典型的优选组合物为可注射或可输注溶液的形式，例如类似于用于人类被动免疫的那些组合物。优选的给药方式是肠胃外给药(例如静脉内，皮下，腹膜内或肌内)。优选实施方式之一中，PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂通过静脉输注或注射给药。另一优选实施方式中，PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂通过肌内或皮下注射给药。

在制造和储存条件下，治疗组合物通常必须是无菌且稳定的。可将组合物配制成溶液、微乳液、分散剂、脂质体或其他适合于高药物浓度的有序结构。可通过将所需量的活性PD-1轴结合拮抗剂或TGFβ抑制剂加入合适的溶剂中并根据需要与前文列举的一种或多种成分组合然后过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将活性成分加入无菌载剂中来制备分散剂，所述无菌载剂包含基础分散介质和所需的前文所述其他成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情形中，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这些方法由预先无菌过滤的溶液形成活性成分与任意其他所需成分的粉末。可以保持溶液适当的流动性，例如采用诸如卵磷脂等包衣，在分散剂的情况下则通过维持所需的粒径，还可采用表面活性剂。通过在组合物中包含延迟吸收的物质，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。

实施方式之一中，阿维鲁单抗为用于静脉内给药的无菌、澄清、无色溶液。阿维鲁单抗药瓶中的内容物无热原，且不含抑菌性防腐剂。将阿维鲁单抗配制成20mg/mL溶液，装在一次性玻璃瓶中，用橡胶隔塞住并用铝聚丙烯翻边包封(flip-off seal)来密封。出于给药目的，阿维鲁单抗必须用0.9％氯化钠(普通生理盐水溶液)稀释。给药过程中使用顺序连接的带有低蛋白结合性的0.2微米过滤器的管道，所述过滤器由聚醚砜(PES)制成。

另一方面，本发明设计一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂联合TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含DNA-PK抑制剂和包装插件，所述包装插件包含用DNA-PK抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含TGFβ抑制剂和包装插件，所述包装插件包含用TGFβ抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含抗PD-L1/TGFβ阱和包装插件，所述包装插件包含用抗PD-L1/TGFβ阱联合DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂联合TGFβ抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。还提供了一种试剂盒，包含抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用抗PD-L1/TGFβ阱和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。试剂盒可包含第一容器、第二容器、第三容器和包装插件，其中，第一容器包含至少一个剂量的包含PD-1轴结合拮抗剂的药物，第二容器包含至少一个剂量的包含DNA-PK抑制剂的药物，第三容器包含至少一个剂量的包含TGFβ抑制剂的药物，包装插件包含用这些药物治疗对象的说明。第一、第二和第三容器可以由相同或不同形状(例如小瓶(vial)、注射器和瓶子(bottle))和/或材料(例如塑料或玻璃)组成。试剂盒可进一步包含可用于药物给药的其他物质，例如稀释剂、过滤器、静脉输液袋和管线、针头和注射器。所述说明可以指明药物旨在用于治疗患有例如据免疫组化(IHC)检测、FACS或LC/MS/MS测定为PD-L1阳性癌症的对象。

以上本说明书前文标题为“治疗组合及其使用方法”部分关于治疗组合、包括其使用方法及其所有方面和实施方式所讲述的内容，在适宜的情况下均是有效且适用的，不局限于“药物制剂和试剂盒”部分的药物制剂和试剂盒及其各方面内容和实施方式。

本文还提供了诊断、预测、预后和/或治疗方法，它们至少部分地基于对目标标志物表达水平鉴定的确定。尤其，癌症患者样品中人PD-L1的量可用于预测患者是否可能对采用本发明治疗组合的癌症治疗产生有益反应。一些实施方式中，癌症患者样品(优选血清样品)中人TGFβ的量可用于预测患者是否可能对采用本发明治疗组合的癌症治疗产生有益反应。

所述方法可以使用任意合适的样品。非限制性例子包括一下一种或多种：血清样品、血浆样品、全血、胰液样品、组织样品、肿瘤裂解物或肿瘤样品，它们可以分离自针刺活检、空芯穿刺活检(core biopsy)和针吸物。例如，在治疗之前以及任选地在用本发明治疗联合治疗时从患者获取组织、血浆或血清样品。将患者治疗中获得的表达水平与开始治疗前获得的值进行比较。所得信息可以是预后性的，即它可以提示患者对癌症治疗产生了有益或是不利的反应。

应当理解，用本文所述诊断检测获得的信息可以单独使用或与其他信息联用，例如但不限于对象其他基因的表达水平、临床化学参数、组织病理学参数、或是年龄、性别和体重。单独使用时，用本文所述诊断检测获得的信息可用于确定或鉴定治疗的临床转归，选择接受治疗的患者或治疗患者等。另一方面，与其他信息联用时，用本文所述诊断检测获得的信息可用于帮助确定或鉴定治疗的临床转归，帮助选择接受治疗的患者或帮助治疗患者，等等。尤其，在一个方面，表达水平可以诊断组的形式运用，组中每个表达水平都对患者的最终诊断、预后或治疗选择有贡献。

可用任意合适的方法来测量PD-L1或TGFβ的蛋白、DNA、RNA或者PD-L1或TGFβ水平其他合适的读值，这方面的例子可见本文记载并且/或者是本领域技术人员所熟知的。

一些实施方式中，确定PD-L1或TGFβ水平包括确定PD-L1或TGFβ表达。一些优选实施方式中，PD-L1或TGFβ水平由患者样品中的PD-L1或TGFβ蛋白浓度来确定，例如采用PD-L1或TGFβ特异性配体，例如抗体或特异性结合伴侣。结合事件可以用例如竞争性或非竞争性方法来检测，包括采用标记的配体或PD-L1或TGFβ特异性部分，例如抗体，或采用标记的竞争性部分，包括标记的PD-L1或TGFβ标准品，它们与标志物蛋白竞争结合事件。如果标志物特异性配体能够与PD-L1或TGFβ形成复合物，则复合物的形成可指示样品中PD-L1或TGFβ的表达。多种实施方式中，可用以下方法测定标志物蛋白的表达，包括：定量蛋白质印迹、多种免疫检测形式、ELISA、免疫组化、组织化学、或肿瘤裂解物的FACS分析、免疫荧光染色、基于珠的悬浮免疫检测，Luminex技术或邻位连接技术。优选实施方式之一中，采用一种或多种一级抗PD-L1或抗TGFβ抗体通过免疫组化测定PD-L1或TGFβ的表达。

另一实施方式中，通过包括微阵列芯片、RT-PCR、qRT-PCR、多重qPCR或原位杂交的方法测定生物标志物RNA水平。本发明实施方式之一中，DNA或RNA阵列包括固定在固体表面上的聚核苷酸排布，所述聚核苷酸由PD-L1或TGFβ基因传递或与PD-L1或TGFβ基因杂交。例如，就测定PD-L1或TGFβ的mRNA而言，可以在适当的样品制备步骤(例如组织匀浆)后视需要分离样品的mRNA，并与标志物特异性探针杂交，特别是在带扩增或不带扩增的微阵列平台上，或与用于基于PCR的检测方法的引物杂交，例如，用针对标志物mRNA上局部有特异性的探针进行的PCR延伸标记。

已记载有多种肿瘤组织切片IHC检测中用于量化PD-L1蛋白表达的方法(Thompson等(2004)PNAS 101(49):17174；Thompson等(2006)Cancer Res.66:3381；Gadiot等(2012)Cancer 117:2192；Taube等(2012)Sci Transl Med 4,127ra37；和Toplian等(2012)NewEng.J Med.366(26):2443)。方法之一采用PD-L1表达阳性或阴性的简单二元终点，阳性结果根据表现出细胞表面膜染色组织学证据的肿瘤细胞的百分比来定义。将肿瘤组织切片计作PD-L1表达阳性指全部肿瘤细胞的至少1％，优选5％。

可将PD-L1或TGFβ的mRNA表达水平与定量RT-PCR常用的一种或多种参照基因(例如泛素C)的mRNA表达水平进行比较。一些实施方式中，根据与合适的对照的PD-L1或TGFβ表达水平(蛋白质和/或mRNA)比较，将恶性细胞和/或肿瘤中浸润性免疫细胞的PD-L1或TGFβ表达(蛋白质和/或mRNA)水平确定为“过表达”或“升高”。例如，对照PD-L1或TGFβ蛋白或mRNA表达水平可以是同型非恶性细胞中或匹配的正常组织切片中定量的水平。

优选实施方式之一中，通过肿瘤样品中PD-L1或TGFβ的表达来预测本发明治疗组合的功效。可以对福尔马林固定和石蜡包埋样本的连续切片进行采用抗PD-L1或抗TGFβ一级抗体的免疫组化检测，所述样本来自接受抗PD-L1抗体(如阿维鲁单抗)或抗TGFβ抗体治疗的患者。

本公开内容还提供了用于确定本发明组合是否适合癌症患者的治疗性处置的试剂盒，其包括用于确定分离自患者的样品中PD-L1或TGFβ的蛋白质水平或其RNA表达水平的工具和使用说明。另一方面，试剂盒还包含用于免疫疗法的阿维鲁单抗。在本发明的一个方面，高PD-L1或TGFβ水平的测定表示用本发明治疗联合治疗患者时PFS或OS增加。试剂盒的实施方式之一中，用于确定PD-L1或TGFβ蛋白水平的手段是分别特异性结合PD-L1或TGFβ的抗体。

在另一方面，本发明提供了与TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联合推介PD-1轴结合拮抗剂的方法，包括向目标受众宣传基于取自对象的样品中PD-L1和/或TGFβ的表达将所述组合用于治疗患有癌症的目标对象的用途。在另一方面，本发明提供了与PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合推介DNA-PK抑制剂的方法，包括向目标受众宣传基于取自对象的样品中PD-L1和/或TGFβ的表达将所述组合用于治疗患有癌症的目标对象的用途。在另一方面，本发明提供了与PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂联合推介TGFβ抑制剂的方法，包括向目标受众宣传基于取自对象的样品中PD-L1和/或TGFβ的表达将所述组合用于治疗患有癌症的目标对象的用途。在另一方面，本发明提供了推介包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合的方法，包括向目标受众宣传基于取自对象的样品中PD-L1和/或TGFβ的表达将所述组合用于治疗患有癌症的目标对象的用途。宣传可用任意可用的手段进行。一些实施方式中，通过伴随本发明治疗组合市售制剂的包装插件进行宣传。宣传也可以通过伴随PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂或其他药物(当治疗为采用本发明组合和其他药物的治疗时)的市售制剂的包装插件来进行。宣传可以通过与医生或卫生保健提供者的书面或口头交流进行。一些实施方式中，宣传通过包装插件进行，其中，所述包装插件提供在测量PD-L1和/或TGFβ表达水平之后接受采用本发明治疗性组合的治疗的说明，一些实施方式中，所述治疗还联用其他药物。一些实施方式中，宣传之后用本发明的治疗组合联用或不联用其他药物对患者进行治疗。一些实施方式中，包装插件指示：如果患者的癌症样品具有PD-L1和/或TGFβ生物标志物水平高的特征，则用本发明的治疗组合对患者进行治疗。一些实施方式中，包装插件指示：如果患者的癌症样品表现为低PD-L1和/或TGFβ生物标志物水平，则不用本发明的治疗组合对患者进行治疗。一些实施方式中，高PD-L1和/或TGFβ生物标志物水平表示这样的测得PD-L1和/或TGFβ水平，所述测得PD-L1和/或TGFβ水平关联患者接受本发明治疗联合治疗时PFS和/或OS增加的可能性，反之亦然。一些实施方式中，PFS和/或OS相比未接受本发明治疗联合治疗的患者降低。一些实施方式中，通过包装插件来进行宣传，其中，所述包装插件提供了在首先测量PD-L1和/或TGFβ之后接受抗PD-L1/TGFβ阱联合DNA-PK抑制剂的治疗的说明。一些实施方式中，宣传之后是用抗PD-L1/TGFβ阱联合DNA-PK抑制剂并联用或不联用其他药物来治疗患者。适用于本发明的其他推介和指导方法或商业方法可见例如US2012/0089541(针对其他药物和生物标志物)。

以上本说明书前文标题为“治疗组合及其使用方法”部分关于治疗组合、包括其使用方法及其所有方面和实施方式所讲述的内容，在适宜的情况下均是有效且适用的，不局限于“其他诊断、预测、预后和/或治疗方法”部分的方法和试剂盒及其各方面内容和实施方式。

本文引用的所有参考文献通过引用并入本发明的公开。

应当理解，本发明不限于本文描述的特定分子、药物组合物、用途和方法，因为这些都是当然可变的。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方式的目的，并不意在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书限定。说明书中详细描述了本发明的必要技术。未详细描述的其他技术对应于本领域技术人员公知的已知标准方法，或者在引用的参考文献、专利申请或标准文献中有更详细的记载。如果本申请中没有给出其他提示，则仅将它们用作示例，不认为它们对本发明来说是必不可少的，它们可以用其他合适的工具和生物材料来代替。

尽管与本文所述类似或等同的方法和材料可用于本发明的实施或检验，以下描述合适的实施例。在实施例中，(尽可能)采用没有污染性活性物质的标准试剂和缓冲液。尤其，实施例应理解为它们并不限于明确展示的特征组合，例举的特征可以无限制地重组，只要解决了本发明的技术问题。类似地，任何权利要求的特征可以与一个或多个其他权利要求的特征组合。已通过概述和详述予以说明的本发明不受以下实施例的限制。

实施例

使用鼠结肠肿瘤模型MC38在小鼠中阐示M3814(化合物1)和阿维鲁单抗的组合效力。该模型允许采用免疫健全的小鼠，这是研究阿维鲁单抗的T细胞介导的抗肿瘤作用的必要条件。实验设置包括通过在动物右侧腹注射1x10

研究结果显示，M3814和阿维鲁单抗的联合治疗明显优于任何一种单一疗法(图3)。数据的Kaplan-Meyer评估显示，各治疗组肿瘤尺寸与第0天的初始体积相比倍增所需的中位时间第1组为6天，第2组为10天，第3组为13天，第4组为20天。第13天的算得相应T/C值第2组为47％，第3组为60％，第4组为21％。总体上对治疗耐受良好。

用鼠结肠肿瘤模型MC38在小鼠中阐示M3814(化合物1)、阿维鲁单抗和放疗的组合效力。该模型允许采用免疫健全的小鼠，这是研究阿维鲁单抗的T细胞介导的抗肿瘤作用的必要条件。实验设置包括通过在动物右侧腹注射1x10

研究结果显示，M3814、阿维鲁单抗和IR联合治疗显著优于M3814和IR以及阿维鲁单抗和IR(图4)。数据的Kaplan-Meyer评估显示，各治疗组肿瘤尺寸与第0天的初始体积相比倍增所需的中位时间第1组为10天，第2组为21天，第3组为10天，第4组未得出，因为至第28天研究结束60％的动物没有达到相应的肿瘤体积。总体上对治疗耐受良好。

实施例3A：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联组合在小鼠乳腺肿瘤模型中增强抗肿瘤活性

在带4T1乳腺肿瘤的BALB/c小鼠中评估了抗PD-L1/TGFβ阱(在图中亦称M7824)、M3814(化合物1)和放疗三联疗法的抗肿瘤功效，其中，抗PD-L1/TGFβ阱(492μg；第0、2、4天)与放疗(8Gy，第0-3天)并行给药。抗PD-L1/TGFβ阱或放疗单一疗法相比同型对照显著减小肿瘤体积(第10天，P值分别为P<0.0001和P<0.0001)。相反，M3814单一疗法对肿瘤生长没有明显影响(P＝0.1603，第10天)。然而，相比M3814或放疗单用，M3814与放疗联合显著减小肿瘤体积(第10天，P值分别为P<0.0001和P<0.0001)；并且，相比M3814或放疗单用，M3814与抗PD-L1/TGFβ阱联合显著减小肿瘤体积(第10天，P值分别为P<0.0001和P<0.0001)(图5，A-B)；这表明M3814与放疗或与抗PD-L1/TGFβ阱协同作用来增强抗肿瘤功效。相比放疗或抗PD-L1/TGFβ阱单用，放疗与抗PD-L1/TGFβ阱联合引起类似的肿瘤生长抑制增强(第10天，P值分别为P<0.0001和P<0.0001)(图5，A-B)。采用三联组合疗法，相比任一双联治疗组合，肿瘤体积进一步缩小(第10天，所有P值均为P<0.0001)(图5，A-B)。此外，三联疗法相比其他疗法更大程度地延长了生存期；中位生存期为27.5天，而放疗与M3814双联组合的中位生存期为22.5天(P＝0.0002)，抗PD-L1/TGFβ阱与放疗双联组合的中位生存期为18天(P<0.0001)，抗PD-L1/TGFβ阱与M3814双联组合的中位生存期为13天(P<0.0001)(图5C)。

还在带4T1乳腺肿瘤的BALB/c小鼠中评估了抗PD-L1/TGFβ阱(492μg；第4、6、8天)和放疗(8Gy，第0-3天)依次给药时三联疗法的抗肿瘤功效。与并行给药的结果相似，放疗后给予抗PD-L1/TGFβ阱时，单药疗法相比同型对照减少肿瘤体积(第11天，P值分别为P<0.0001和P<0.0001)而三联疗法相比抗PD-L1/TGFβ阱与放疗(P＝0.0040，第11天)、抗PD-L1/TGFβ阱与M3814(P<0.0001，第11天)或M3814与放疗(P<0.0001，第11天)的双联疗法进一步减小肿瘤体积(图5，D-E)。三联疗法相比其他任何疗法都更大程度地延长生存期；相比抗PD-L1/TGFβ阱与放疗(19天，P＝0.0005)、抗PD-L1/TGFβ阱与M3814(15天，P<0.0001)或M3814与放疗(21.5天，P＝0.0019)的双联疗法，中位生存期为29天(图5F)。综上所述，这些结果表明，在4T1模型中，相比双联疗法或单一疗法，抗PD-L1/TGFβ阱、M3814和放疗的三联疗法增强抗肿瘤活性，无论给药方案是并行还是依次。

实施例3B：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗与M3814的三联组合在小鼠胶质母细胞瘤(GBM)小鼠肿瘤模型中增强抗肿瘤活性

GL261胶质母细胞瘤(GBM)小鼠模型被广泛用于GBM免疫治疗的临床前试验，但具有中等免疫原性，并且已知其逃避宿主免疫识别。因此，用GL261肿瘤模型来评估添加抗PD-L1/TGFβ阱和/或M3814治疗是否改善放疗的效果，后者是对GBM患者标准治疗的一部分。抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联疗法相比单独放疗更大程度地延长生存期(P＝0.0248)，而抗PD-L1/TGFβ阱与放疗(P＝0.1136)或抗PD-L1/TGFβ阱与放疗(P＝0.1992)的双联组合相比单独放疗没有明显延长生存期(图6)。

实施例3C：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814的三联组合在MC38结直肠癌模型中增强抗肿瘤活性

在MC38结直肠癌模型中，双联疗法部分抑制肿瘤生长。然而，相比抗PD-L1/TGFβ阱与M3814(P>0.0001，第10天)和M3814与放疗(P>0.0001，第10天)的双联组合，抗PD-L1/TGFβ阱、放疗与M3814三联疗法引起更好的肿瘤消退(图7A-B)。实际上，整个实验过程中，接受三联疗法的所有小鼠(100％，10只小鼠中的10只)都获得了完全的肿瘤消退。相比之下，仅在一个其他治疗组中观察到完全肿瘤消退，即抗PD-L1/TGFβ阱与放疗的双联疗法(56％，9只小鼠中的5只)，其他治疗组都没有完全消退(0％，10只小鼠中0只)(图7B)。三联疗法相比其他疗法还更大程度地延长生存期。实验结束时(100天)，三联组合组中仍有90％的小鼠存活，超过放疗与M3814(27天，P<0.0001)、抗PD-L1/TGFβ阱与放疗(77天，P＝0.0406)以及抗PD-L1/TGFβ阱与M3814(17.5天，P<0.0001)双联组合的中位生存期(图7C)。

实施例3D：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联组合在MC38模型中诱导显著的远位效应

研究测试了抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联疗法在带有原发肌内(i.m.)MC38肿瘤和远位皮下(s.c.)MC38肿瘤的C57BL/6小鼠中的潜在远位效应。仅对原发肿瘤进行局部分次照射。与4T1和GL261-Luc2模型相似，即使与抗PD-L1/TGFβ阱和放疗相比，三联疗法仍显著降低原发肿瘤的肿瘤生长(P＝0.0006，第20天)(图8A)。相比抗PD-L1/TGFβ阱与放疗的双联组合，三联疗法还能够诱导远位效应并显著降低继发肿瘤的生长(P＝0.0072，第20天)(图8B)。

实施例3E：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联组合在4T1模型中诱导远位效应

为了在4T1模型中测试抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联疗法的潜在远位效应，在BALB/c小鼠中原位注射表达荧光素酶的4T1肿瘤细胞系(4T1-Luc2-1A4)，并评估自发性肺转移。用小动物照射研究平台(SARRP)仅对原发原位肿瘤进行局部照射，并在IVIS光谱系统上通过生物发光成像(BLI)观察体内和离体肺转移。治疗开始后第9、14和21天的体内成像显示，抗PD-L1/TGFβ阱与放疗双联疗法和抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联疗法均降低平均BLI(肺转移的指标)至检测下限(LLoD)之下，而其他治疗组则没有(图9A)。第23天，相比同型对照(P＝0.0006)、抗PD-L1/TGFβ阱(P＝0.0104)、放疗(P＝0.0070)以及放疗+M3814(P＝0.0207)，三联疗法显著降低离体肺的BLI水平，但与抗PD-L1/TGFβ阱+放疗双联疗法的比较除外(P＝0.1605)(图9B)。这些结果表明，抗PD-L1/TGFβ阱和放疗在4T1模型中协同诱导远位效应。

实施例3F：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联组合在4T1模型中增加CD8

4T1荷瘤BALB/c小鼠的免疫组化(IHC)分析显示，治疗开始后10天，抗PD-L1/TGFβ阱、放疗与M3814的组合引起CD8

实施例3G：抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814三联组合诱导EMT、纤维化和VEGF通路标签的基因表达改变

为了评估抗PD-L1/TGFβ阱、放疗和M3814治疗对肿瘤微环境的影响，通过RNA测序(RNAseq)分析4T1肿瘤组织，并评估EMT、纤维化和VEGF通路的相关基因标签。相比同型对照，抗PD-L1/TGFβ阱显著降低EMT标签评分(P<0.0001)，而单独放疗则无显著效果(图11A)。尽管M3814单一疗法对EMT标签也没有影响，但抗PD-L1/TGFβ阱与M3814组合相比抗PD-L1/TGFβ阱单一疗法显著降低标签评分(P＝0.0077)，这表明该双联组合可能有协同效应(图11A)。三联治疗相比抗PD-L1/TGFβ阱与M3814组合或抗PD-L1/TGFβ阱与RT组合并未显著降低EMT标签，但相比放疗与M3814组合确实降低了EMT标签(图11A)，这表明该作用主要由抗PD-L1/TGFβ阱驱动，并且抗PD-L1/TGFβ阱与M3814之间具有潜在的协同作用。

放疗略微(虽然不显著)增加4T1肿瘤的纤维化标签评分(P＝0.0550)，而M3814显著降低了该评分(P＝0.0002)，抗PD-L1/TGFβ阱趋于但非显著降低纤维化标签(图11B)。抗PD-L1/TGFβ阱与M3814联合相比抗PD-L1/TGFβ阱单一疗法进一步降低纤维化标签(P＝0.0007)，但添加了放疗的三联组合相比抗PD-L1/TGFβ阱与M3814双联疗法显著提高纤维化标签(P<0.0001)。但是，三联组合的标签评分与同型对照没有显著差异(图11B)，这表明放疗抵消了M3814和抗PD-L1/TGFβ阱联合治疗所见的纤维化相关基因表达下降。

最后，VEGF通路标签评分不受任一单一疗法的影响(图11C)。然而，相比同型对照(P<0.0001)、抗PD-L1/TGFβ阱单一疗法(P＝0.0037)和M3814单一疗法(P＝0.0004)，抗PD-L1/TGFβ阱与M3814双联组合显著降低该标签。三联疗法相比抗PD-L1/TGFβ阱和M3814组合不影响VEGF通路标签，但相比M3814与放疗组合(P＝0.0287)和抗PD-L1/TGFβ阱与放疗组合(P＝0.0217)降低标签评分(图11C)。这些结果表明，三联组合观察到的VEGF通路基因表达降低主要是抗PD-L1/TGFβ阱与M3814之间潜在的协同效应驱动的。

实施例3A-G的材料和方法：

细胞系

4T1鼠乳腺癌细胞获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。4T1-Luc2-1A4荧光素酶细胞获自Caliper/Xenogen。GL261-Luc2鼠神经胶质瘤细胞系来自PE(Xenogen)(Caliper)。MC38鼠结肠癌细胞系为Scripps研究所惠赠。

将4T1细胞培养在补充有10％热灭活胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基中(生命技术公司(Life Technologies))，4T1-Luc2-1A4细胞也培养在RPMI1640培养基中，并植入无血清培养基和50％基质胶中。GL261-Luc2细胞培养在含有10％FBS和1X青霉素/链霉素/L-谷氨酰胺的杜氏改良尹氏培养基(DMEM)中。将MC38细胞培养在含有10％FBS的DMEM中(生命技术公司)。所有细胞在无菌条件下培养，并于37℃和5％CO

小鼠

BALB/c、C57BL/6和白化C57BL/6小鼠分别获自Charles River实验室(CharlesRiver Laboratories)、Jackson实验室(Jackson Laboratories)或Envigo公司。关于4T1-Luc2-1A4细胞远位效应实验，所有研究均由Mi生物研究公司(Mi Bioresearch)进行，BALB/c小鼠获自Envigo公司。所有实验用小鼠均为6至12周龄的雌鼠。所有小鼠笼养于无病原体的设施中，自由进食和饮水。

鼠肿瘤模型

4T1肿瘤模型

对于疗效和生存期研究，在第-6天，将0.5×10

对于远位效应实验，在第-9天，将0.5×10

对于IHC研究，在第-7天，将0.5×10

对于RNAseq研究，在第-6天，将0.5×10

GL261肿瘤模型

对于功效研究，在第-7天通过颅内注射将GL261-Luc2细胞(10μl中1×10

MC38肿瘤模型

对于疗效和生存期研究，在第-7天，将0.25×10

对于MC38远位效应研究，在第-7天，在右大腿内侧接种0.25x10

治疗

对于所有研究，在治疗开始当天(第0天)将小鼠随机分成各治疗组。

抗PD-L1/TGFβ阱与同型对照

抗PD-L1/TGFβ阱为抗人PD-L1全人免疫球蛋白1(IgG1)单克隆抗体与人TGF-β受体II胞外域融合。同型对照是抗PD-L1的突变形式，完全没有PD-L1结合性。在荷瘤小鼠中，抗PD-L1/TGFβ阱(164，492μg)或同型对照(133，400μg)配制于0.2mL PBS中静脉注射(i.v.)给药。图例中列出了每个实验的确切剂量和治疗计划。荷瘤小鼠用1-3个剂量间隔2天治疗1-4天。

M3814与载剂对照

M3814是一种选择性DNA-PK抑制剂，载剂是含0.25％

放疗

为了评估放疗与抗PD-L1/TGFβ和/或M3814的组合，将小鼠随机分成以下治疗组：同型对照(133，400μg)+载剂对照(0.2mL)，放疗(3.6、7.5、8、10Gy/日)，抗PD-L1/TGFβ阱(164，492μg)，M3814(50，150mg/kg)，抗PD-L1/TGFβ阱+M3814，抗PD-L1/TGFβ阱+放疗，M3814+放疗，或抗PD-L1/TGFβ阱+M3814+放疗。所有非抗PD-L1/TGFβ阱组均包含同型对照，所有非M3814组均包含载剂对照。为了对肌内(i.m.)肿瘤进行放疗，用带铅屏蔽的准直仪将递送定位到小鼠的荷瘤腿。通过定时暴露于铯137γ辐照仪(

对于GL261研究，通过Xstrahl生命科学小动物照射研究平台进行了放疗。用10mm准直仪进行治疗(220kV，13.0mA)，以2个等重射束递送7.5Gy的总剂量。在第0天进行一次放疗。

肿瘤生长与生存期

用数字卡尺每周两次测量4T1和MC38模型的肿瘤大小，并用WinWedge软件自动记录。用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm

为了在治疗开始后第9、14和21天获取体内BLI图像，制备15mg/ml的D-荧光素(Promega)，在成像前10分钟，在1-2％异氟烷气体麻醉下，每只小鼠腹膜内(i.p.)注射150mg/kg。BLI用IVIS光谱(帕金埃尔默公司(PerkinElmer)，马塞诸塞州)进行。成像之前对原发肿瘤进行遮蔽以便能对胸腔区域的转移信号进行定量。采用CCD芯片大合并(binning)，并调整曝光时间(10秒至2分钟)至获得每个图像至少数百个计数并避免CCD芯片饱和。用Living Image 4.3.1(帕金埃尔默公司，马塞诸塞州)软件分析图像。

在第23天对所有动物进行离体BLI。在对小鼠进行安乐死之前10分钟给它们注射D-荧光素(150mg/kg)。然后取肺，称重，并置于黑色24孔板各孔中的D-荧光素(300μg/ml，配于盐水中)中。然后采用大(高灵敏度)合并对所有收获的组织进行2-3分钟的成像。必要时，去除或屏蔽发出高亮信号的组织，以便对板进行重新成像从而尽可能检出信号较弱的组织。

抗CD8免疫组化和定量

在Leica Bond自动染色仪上用既定方案对固定在

用Definiens Tissue Studio软件对CD8a染色进行量化。在有效组织区域中选择ROI；排除切片边缘和坏死区域。通过计数苏木精染色细胞核确定细胞总数。设定高于背景的DAB色原阈值来检测阳性信号。计点胞质/膜区域染色阳性的细胞得出CD8a

RNA-seq分析：

用总共1278个基因组成的Qiagen靶向RNAseq基因包进行RNAseq。EMT和纤维化基因标签是基于Qiagen基因列表，而VEGF通路标签则基于Broad’s经典通路(Broad'sCanonical Pathways)中的Biocarta VEGF通路。对于这些基因集，标签评分定义为每个基因标签中所有基因的平均log

统计学分析

用GraphPad Prism软件7.0版进行统计分析。对于功效研究，肿瘤体积数据以图形方式表示，以多种符合表示均值±SEM，以多种线形表示各个小鼠。为了评估治疗组之间肿瘤体积的差异，进行双向方差分析(ANOVA)，然后进行Tukey多重比较检验。生成Kaplan-Meier图来显示治疗组的存活情况以及对数秩(Mantel-Cox)检验评估的显著性。对于离体肺成像分析，用曼·惠特尼(Mann Whitney)检验来比较治疗组之间的生物发光(光子/秒)。为了量化IHC图像中的CD8a

以下为优选实施方式：

1.一种治疗有需要的对象中癌症的方法，包括给予所述对象PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂。

2.如第1项所述的方法，还包括放疗。

3.如第1或第2项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

4.如第1至3项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区。

5.如第4项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

6.如第1至4项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体并且包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:7或8的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

7.如第1至4项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂是阿维鲁单抗。

8.如第1至7项中任一项所述的方法，其中，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐。

9.如第1至8项中任一项所述的方法，其中，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐，

其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且

其中，所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

10.如第1至9项中任一项所述的方法，其中，对象是人。

11.如第1至10项中任一项所述的方法，其中，癌症选自肺癌、头颈癌、结肠癌、神经内分泌系统癌、间充质癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌及它们的组织学亚型。

12.如第1至11项中任一项所述的方法，癌症选自小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、结直肠癌(CRC)、原发性神经内分泌肿瘤和肉瘤。

13.如第1至12项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂在癌症的一线治疗中给药。

14.如第1至13项中任一项所述的方法，其中，癌症选自SCLC广泛性疾病(ED)、NSCLC和SCCHN。

15.如第1至14项中任一项所述的方法，其中，对象经历过至少一轮先前的癌症治疗。

16.如第15项所述的方法，其中，所述癌症对先前的治疗有抗性或变得有抗性。

17.如第1至12项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂在癌症的二线或更高线治疗中给药。

18.如第17项所述的方法，其中，所述癌症选自预治疗复发性转移性NSCLC、不可切除的局部晚期NSCLC、SCLC ED、预治疗SCLC ED、不适合全身性治疗的SCLC、预治疗复发性或转移性SCCHN、符合再照射条件的复发性SCCHN、预治疗微卫星状态低不稳定性(MSI-L)或微卫星状态稳定的(MSS)转移性结直肠癌(mCRC)。

19.如第1至18项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，并且

其中，抗PD-L1抗体通过静脉输注50-80分钟来给药。

20.如第1至19项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，并且

其中，抗PD-L1抗体每两周一次(Q2W)按约10mg/kg体重或约800mg剂量给药。

21.如第1至20项中任一项所述的方法，其中，TGFβ抑制剂通过静脉输注给药。

22.如第1至21项中任一项所述的方法，其中，DNA-PK抑制剂口服给药。

23.如第1至22项中任一项所述的方法，其中，DNA-PK抑制剂每日一次(QD)或每日两次(BID)给药，剂量为约1至约800mg。

24.如第1至23项中任一项所述的方法，其中，DNA-PK抑制剂每日两次(BID)给药，剂量为约400mg。

25.如第1至24项中任一项所述的方法，还包括给予对象化疗(CT)、放疗(RT)或化疗和放疗(CRT)。

26.如第25项所述的方法，化疗是选自依托泊苷、阿霉素、托泊替康、伊立替康、氟尿嘧啶、铂类、蒽环类及其组合的一项或多项。

27.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是依托泊苷。

28.如第27项所述的方法，其中，依托泊苷通过静脉输注约1小时来给药。

29.如第27或28项所述的方法，依托泊苷每三周在第1至3天(D1-3Q3W)按约100mg/m

30.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是托泊替康。

31.如第30项所述的方法，其中，托泊替康每三周在第1至5天(D1-5Q3W)给药。

32.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是顺铂。

33.如第32项所述的方法，其中，顺铂通过静脉输注约1小时来给药。

34.如第32或33项所述的方法，其中，顺铂每三周一次(Q3W)按约75mg/m

35.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是依托泊苷和顺铂，并且

其中，依托泊苷和顺铂以任意顺序依次给药或基本同时给药。

36.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是蒽环类药物，并且

其中，蒽环类药物给药直至达到最大终身累积剂量。

37.如第25项所述的方法，还包括放疗，

其中，放疗包含约35-70Gy/20-35次。

38.如第25或37项所述的方法，其中，放疗选自用电子、光子、质子、α发射体、其他离子、放射性核苷酸、硼捕获中子及其组合进行的治疗。

39.如第1至38项中任一项所述的方法，包括前导期，前导期完成之后可以可选地有维持期。

40.如第39项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂在前导期或在维持期并行给药并可以或选性地在另一阶段非并行给药，或者，PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂在前导期和维持期非并行给药。

41.如第40项所述的方法，其中，所述并行给药包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂按任意顺序依次给药或基本同时给药。

42.如第39至41项中任一项所述的方法，其中，前导期包括DNA-PK抑制剂单独给药或与选自PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、化疗和放疗的一种或多种治疗并行给药。

43.如第39至42项中任一项所述的方法，其中，维持期包括PD-1轴结合拮抗剂单独给药或与DNA-PK抑制剂或TGFβ抑制剂并行给药，或以上都不包括。

44.如第39至43项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂的并行给药。

45.如第39至43项中任一项所述的方法，其中，前导期包括DNA-PK抑制剂给药，维持期包括在前导期完成之后PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给药。

46.如第39项所述的方法，其中，前导期包括DNA-PK抑制剂和依托泊苷并行给药，任选地还包括顺铂，其中，维持期包括在前导期完成之后的PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给药，任选地还包括DNA-PK抑制剂，并且，所述癌症是SCLC ED。

47.如第39至46项中任一项所述的方法，其中，前导期包括DNA-PK抑制剂、依托泊苷和顺铂的组合。

48.如第39至47项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂和依托泊苷并行给药，任选地还包括顺铂，并且，可以任选地在前导期完成之后包括维持期，维持期包括PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给药，其中，所述癌症是SCLC ED。

49.如第39至48项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂、依托泊苷和顺铂联合给药。

50.如第26项所述的方法，其中，所述化疗是依托泊苷和顺铂，所述癌症是SCLCED，并且，

其中，依托泊苷任选地与顺铂一起给药，可多至6个周期或直至出现SCLC ED进展。

51.如第39至45项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂、伊立替康和氟尿嘧啶的并行给药，并且，癌症是mCRC MSI-L。

52.如第39至45项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂与放疗或放化疗的并行给药，其中，维持期包括前导期完成后的PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂给药，其中，所述癌症是NSCLC或SCCHN。

53.如第39至45项中任一项所述的方法，其中，前导期包括PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂与放疗的并行给药，并且，所述癌症是NSCLC或SCCHN。

54.如第1至53项中任一项所述的方法，其中，所述癌症基于取自对象的样品中的PD-L1表达来选择。

55.一种药物组合物，包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂、DNA-PK抑制剂和至少一种药学上可接受的赋形剂或佐剂。

56.如第55项所述的药物组合物，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

57.如第55或56项所述的药物组合物，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区。

58.如第57项所述的药物组合物，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQID NO:9的轻链。

59.如第55至57项中任一项所述的药物组合物，其中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体并且包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:7或8的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

60.如第55至57项中任一项所述的药物组合物，其中，PD-1轴结合拮抗剂是阿维鲁单抗。

61.如第55至60项中任一项所述的药物组合物，其中，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐。

62.如第55至61项中任一项所述的药物组合物，其中，DNA-PK抑制剂是(S)-[2-氯-4-氟-5-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基)-苯基]-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-甲醇或其药学上可接受的盐，

其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且

其中，所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

63.用于治疗、优选用于治疗癌症的如第55至62项中任一项所述的药物组合物。

64.如第63项所述的所述用途的药物组合物，其中，所述组合物用于治疗癌症，并且所述癌症基于取自所述对象的样品中的PD-L1表达来选择。

65.用于治疗、优选用于治疗癌症的包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合。

66.如第65项所述的所述用途的组合，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

67.如第65或66项所述的所述用途的组合，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区。

68.如第65至67项中任一项所述的所述用途的组合，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

69.如第65至68项中任一项所述的所述用途的组合，其中，所述组合用于治疗癌症，并且所述癌症基于取自待治对象的样品中的PD-L1表达来选择。

70.包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合。

71.如第70项所述的组合，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

72.如第70或71项所述的组合，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区。

73.如第70至72项中任一项所述的组合，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

74.包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的组合用于制造药物、优选用于治疗癌症的药物的用途。

75.如第74项所述的用途，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

76.如第74或75项所述的用途，其中，所述PD-1轴结合拮抗剂包含重链和轻链，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:1、2和3的三个互补决定区，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:4、5和6的三个互补决定区。

77.如第74至76项中任一项所述的用途，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的，并且所述融合分子包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的重链和具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链。

78.如第74至77项中任一项所述的用途，其中，所述组合用于制造用于治疗癌症的药物，并且

其中，所述癌症基于取自对象的样品中的PD-L1表达来选择。

79.一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂联合TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

80.一种试剂盒，包含DNA-PK抑制剂和包装插件，所述包装插件包含用DNA-PK抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

81.一种试剂盒，包含TGFβ抑制剂和包装插件，所述包装插件包含用TGFβ抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

82.一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂联合DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

83.如第82项所述的试剂盒，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂是融合的。

84.一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂和DNA-PK抑制剂联合TGFβ抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

85.一种试剂盒，包含TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂联合PD-1轴结合拮抗剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

86.一种试剂盒，包含PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂以及包装插件，所述包装插件包含用PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂来治疗或延缓对象中癌症进展的说明。

87.如第79至86项中任一项所述的试剂盒，所述说明可以指明所述药物旨在用于治疗免疫组化(IHC)检测测定为PD-L1表达阳性的癌症对象。

88.推介PD-1轴结合拮抗剂、TGFβ抑制剂和DNA-PK抑制剂的方法，包括向目标受众宣传用所述组合来治疗患有癌症的对象的用途，所述癌症优选基于取自对象的样品中PD-L1表达选择的癌症。

89.如第88项所述的方法，其中，PD-L1表达是用一种或多种抗PD-L1第一抗体通过免疫组化法测定的。

90.如第1至18项中任一项所述的方法，其中，PD-1轴结合拮抗剂和TGFβ抑制剂融合成抗PD-L1/TGFβ阱分子；并且，其中抗PD-L1/TGFβ阱分子按每两周1200mg IV的剂量、每三周1800mg IV的剂量或每三周2400mg IV的剂量给药。

序列表

<110> 默克专利有限公司(Merck Patent GmbH)

<120> PD-L1、TGFß和DNA-PK联合抑制用于治疗癌症

<130> P18-079

<150> 62/667,263

<151> 2018-05-04

<160> 13

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 1

Ser Tyr Ile Met Met

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 2

Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 3

Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 4

Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 5

Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val

1 5 10

<210> 7

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 7

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 8

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 8

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 9

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 10

<211> 607

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 10

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

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