类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物

相关申请的交叉引用

本专利申请要求基于2018年11月5日申请的日本专利申请2018－208414号的优先权，上述在先的专利申请中的全部公开内容通过引用而成为本说明书的一部分。

技术领域

本发明涉及一种新型的类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物。

背景技术

类胡萝卜素是一种作为饲料添加剂、食品添加剂、医药品等使用的有用的天然色素。类胡萝卜素中包含虾青素、角黄素、玉米黄质、β－隐黄质、番茄红素、β－胡萝卜素、金盏花红素、金盏花黄质、海胆烯酮、羟基海胆酮和3－羟基海胆烯酮等，也以混合物的形式使用。其中，虾青素作为属于养殖鱼的三文鱼、鳟鱼、红鲷鱼等的体色改良剂、家禽类的蛋黄颜色改良剂等饲料添加剂是有用的。另外，天然的虾青素作为安全的食品添加剂、健康食品材料在产业上的价值很高。金盏花黄质和金盏花红素可期待与虾青素同样地作为饲料添加剂、食品添加剂、医药品等的用途。

此外，β－胡萝卜素用作饲料添加剂、食品添加剂、医药品等，角黄素用作饲料添加剂、食品添加剂、化妆品等，玉米黄质用作食品添加剂、饲料添加剂等。此外，番茄红素、海胆烯酮、β－隐黄质、3－羟基海胆烯酮、羟基海胆酮等也可期待作为饲料添加剂、食品材料等的使用。作为这些类胡萝卜素的制造方法，已知有化学合成法、来自天然物的提取法、基于微生物培养的生产方法等。

然而，对类胡萝卜素报道过以抗炎作用、抗氧化作用为代表的各种有益的生理活性(专利文献1)，并需要增强其作用效果。另一方面，对使类胡萝卜素在血中的滞留性提高来增强其作用效果，迄今为止没有任何报道。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2014/051100号公报

发明内容

本发明人等如今发现类胡萝卜素中、特别是非对称型类胡萝卜素在血中表现出优异的滞留性，使用非对称型类胡萝卜素能够使血中的总类胡萝卜素的滞留明显增加。本发明是基于上述见解而完成的。

因此，本发明的目的在提供一种用于使类胡萝卜素在血中的滞留增加的新型组合物。

本发明包含以下的发明。

[1]一种类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物，是含有一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐而成的。

[2]根据[1]所述的组合物，其中，上述非对称型类胡萝卜素含有选自金盏花黄质(Adonixanthin)、金盏花红素(Adonirubin)、羟基海胆酮(Asteroidenone)、海胆烯酮(Echinenone)、3－羟基海胆烯酮、环氧玉米黄质(Antheraxanthin)、岩藻黄质(Fucoxanthin)、枳橙黄质(Citranaxanthin)、硅藻黄质(Diatoxanthin)、硅甲藻黄素(Diadinoxanthin)、毛莨黄素(Flavoxanthin)、新黄质(Neoxanthin)和玉红黄质(Rubixanthin)中的至少一者。

[3]根据[1]或[2]所述的组合物，其中，上述非对称型类胡萝卜素含有金盏花黄质。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的组合物，其中，上述组合物为对称型类胡萝卜素和非对称型类胡萝卜素的混合物。

[5]根据[4]所述的组合物，其中，上述对称型类胡萝卜素含有选自虾青素(Astaxanthin)、玉米黄质(Zeaxanthin)、八氢番茄红素(Phytoene)、六氢番茄红素(Phytofluene)、番茄红素(lycopene)、β－胡萝卜素(β-carotene)、角黄素(Canthaxanthin)、叶黄素(Lutein)、藏花酸(Crocetin)、紫黄素(Violaxanthin)和紫杉紫素(Rhodoxanthin)中的至少一者。

[6]根据[4]或[5]所述的组合物，其中，上述对称型类胡萝卜素含有虾青素，上述非对称型类胡萝卜素含有金盏花黄质。

[7]根据[1]～[6]中任一项所述的组合物，其中，上述类胡萝卜素为来自微生物、动物或植物的物质或化学合成品。

[8]根据[7]所述的组合物，其中，上述微生物为产类胡萝卜素副球菌(Paracoccuscarotinifaciens)。

[9]根据[1]～[8]中任一项所述的组合物，其中，相对于上述非对称型类胡萝卜素的总量的金盏花黄质的含量为5质量％以上。

[10]根据[1]～[9]中任一项所述的组合物，其中，相对于上述类胡萝卜素的总量的金盏花黄质的含量为2质量％以上。

[11]根据[1]～[10]中任一项所述的组合物，用于增加向摄取上述组合物的对象的器官或组织内传递的类胡萝卜素的总量。

[12]根据[1]～[11]中任一项所述的组合物，用于将摄取上述组合物的对象中的8－羟基－2’－脱氧鸟苷减少或抑制其产生。

[13]根据[1]～[12]中任一项所述的组合物，用于抑制摄取上述组合物的对象中的氧化应激。

[14]根据[1]～[13]中任一项所述的组合物，用于抗衰老。

[15]根据[1]～[14]中任一项所述的组合物，为缓释制剂。

[16]根据[1]～[15]中任一项所述的组合物，用于在人体中使用。

[17]根据[1]～[16]中任一项所述的组合物，其中，上述组合物为饮食品或食品添加剂。

[18]根据[1]～[17]中任一项所述的组合物，其中，上述组合物为功能性食品或医药品。

[19]一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐在类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物的制造中的使用。

[20]一种使对象的血中类胡萝卜素滞留量增加的方法，包括将一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的有效量向有此需要的对象给予或者使其摄取。

[21]用于增加类胡萝卜素的血中滞留量的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐。

根据本发明，能够使用非对称型类胡萝卜素使血中的总类胡萝卜素的滞留明显增加。另外，根据本发明，能够使非对称型类胡萝卜素有效地转移到器官、组织内。另外，根据本发明，在减少8－羟基－2’－脱氧鸟苷(8－OHdG)或抑制其产生上是有利的。

附图说明

图1是示出金盏花黄质给药组小鼠的血清中的金盏花黄质的浓度和虾青素给药组小鼠的血清中的虾青素的浓度的图。

图2是示出金盏花黄质给药组小鼠的血清及各器官中的反式金盏花黄质的比例、以及虾青素给药组小鼠的血清及各器官中的反式虾青素的比例的图。

图3是示出金盏花黄质给药组猴子的血清中的金盏花黄质的浓度和虾青素给药组猴子的血清中的虾青素的浓度的图。

图4是示出金盏花黄质给药组小鼠、虾青素给药组小鼠和对照给药组小鼠的血清中的8－OHdG的浓度的图。

具体实施方式

本发明的血中滞留增加用组合物的特征在于含有一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐。以金盏花黄质为代表的非对称型类胡萝卜素如后述的试验例1～4所示，其对于血中的滞留是有用的，此为意想不到的事实。

本发明的血中滞留增加用组合物含有一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐。本发明的组合物以非对称型类胡萝卜素为必需成分，能够用于使类胡萝卜素在血中的滞留量增加。即，本发明的非对称型类胡萝卜素具有血中的高滞留性，容易持续有效地从血中转移到器官中。因此，本发明的组合物也能够作为从血中向器官的缓释制剂使用。

类胡萝卜素一般是五个碳的异戊二烯单元键合多个而构成的化合物组，典型地具有8个异戊二烯单元键合而构成的基本结构。

类胡萝卜素可以为非环状(以下，也称为链状)的结构，也可以为链状嵌段与环状嵌段的组合，优选为链状嵌段与环状嵌段的组合。类胡萝卜素为链状嵌段与环状嵌段的组合时，构成链状嵌段的异戊二烯单元可举出1个以上，优选为2个以上的偶数，更优选为4个。另外，类胡萝卜素为链状嵌段与环状嵌段的组合时，环状嵌段例如配置于链状嵌段的至少一个末端，优选配置于链状嵌段的两末端。环状嵌段为由异戊二烯单元衍生的原子团，优选由至少2个以上的异戊二烯单元衍生，可以具有羟基、羰基和/或烷基等。链状嵌段和环状嵌段可以以单键连接，也可以以双键键合，还可以以三键键合。

另外，作为类胡萝卜素，可以为游离体、脂肪酸酯体。从吸收性的观点考虑，上述类胡萝卜素优选使用游离体。另外，类胡萝卜素可以为光学异构体、顺式-反式异构体等立体异构体。此外，这些类胡萝卜素优选用作有效成分。

类胡萝卜素在其分子结构上，可以分类为非对称型类胡萝卜素和对称型类胡萝卜素。根据本发明的优选方式，本发明的组合物为对称型类胡萝卜素和非对称型类胡萝卜素的混合物。以下，分别针对非对称型类胡萝卜素和对称型类胡萝卜素进行说明。

(非对称型类胡萝卜素)

本发明的血中滞留增加用组合物含有非对称型类胡萝卜素作为必需成分。非对称型类胡萝卜素是指不具有分子结构上的对称性的类胡萝卜素。不具有分子结构上的对称性的类胡萝卜素是指在距类胡萝卜素的分子中央(对称中心)完全相反的相等距离不存在相同的原子的类胡萝卜素。例如，类胡萝卜素为在链状嵌段的两末端配置有环状嵌段的结构时，非对称型类胡萝卜素可举出各环状嵌段分别表示不同的原子团的类胡萝卜素。应予说明，关于上述类胡萝卜素分子的对称性，各环状嵌段中的双键的位置的差异并不妨碍分子的对称性。例如，类胡萝卜素为在链状嵌段的两末端配置环状嵌段的结构，在距类胡萝卜素的分子中央(对称中心)完全相反的等距离处存在相同的原子，且各环状嵌段分别具有原子配置的对称性，但不具有双键的位置的对称性时(例如叶黄素等)，该类胡萝卜素不为非对称型类胡萝卜素而分类为对称型类胡萝卜素。

非对称型类胡萝卜素优选含有在器官中以反式体形式存在的比例大于以顺式体形式存在的比例的非对称型类胡萝卜素。

作为非对称型类胡萝卜素，没有特别限定，例如，可举出金盏花黄质、金盏花红素、羟基海胆酮、海胆烯酮、3－羟基海胆烯酮、环氧玉米黄质、岩藻黄质、枳橙黄质、硅藻黄质、硅甲藻黄素、毛莨黄素、新黄质、玉红黄质等，优选金盏花黄质。

金盏花黄质(3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4-酮，化学式：C

作为金盏花黄质的光学异构体，可以举出选自3S,3’R－体、3S,3’S－体、3R,3’S－体和3R,3’R－体中的至少1者，优选为3S,3’R－体。另外，作为金盏花黄质的顺式-反式异构体，可以为顺式体、反式体或它们的组合。作为金盏花黄质的顺式-反式异构体，优选为顺式体和反式体的组合或反式体。

金盏花红素(3-羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮，化学式：C

作为金盏花红素的顺式-反式异构体，可以为顺式体、反式体或它们的组合，作为顺式体，可以举出13－顺式体，优选为反式体。

非对称型类胡萝卜素可以单独使用一种，也可以组合二种以上使用，优选含有金盏花黄质。

(对称型类胡萝卜素)

本发明的组合物除了上述非对称型类胡萝卜素以外，还可以进一步含有对称型类胡萝卜素。对称型类胡萝卜素是指具有分子结构上的对称性的类胡萝卜素。具有分子结构上的对称性的类胡萝卜素是指在距类胡萝卜素的分子中央(对称中心)完全相反的等距离处存在相同原子的类胡萝卜素。具体而言，类胡萝卜素为在链状嵌段的两末端配置环状嵌段的结构时，对称型类胡萝卜素是指各环状嵌段示为相同原子团的类胡萝卜素。

另外，对称型类胡萝卜素优选含有在器官中以反式体形式存在的比例大于以顺式体形式存在的比例的对称型类胡萝卜素。

作为对称型类胡萝卜素，没有特别限定，例如，可举出虾青素、玉米黄质、八氢番茄红素、六氢番茄红素、番茄红素、β－胡萝卜素、角黄素、叶黄素、藏花酸、紫黄素、紫杉紫素等。因此，根据本发明的优选方式，对称型类胡萝卜素为选自虾青素、玉米黄质、β－胡萝卜素、八氢番茄红素和角黄素中的至少1者。

虾青素(3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮，化学式：C

作为虾青素的光学异构体，例如，可以举出选自3S,3’S－体、3S,3’R－体(内消旋体)、3R,3’R－体中的至少1者，优选为3S,3’S－体。另外，虾青素可以为分子中央的共轭双键的顺式体、反式体的异构体或它们的组合。作为顺式体，例如，可举出9－顺式体、13－顺式体、15－顺式体、二顺式体或它们的组合。虾青素优选为顺式体、反式体的异构体的组合或反式体。

玉米黄质(β,β-胡萝卜素-3,3’-二醇，化学式：C

作为玉米黄质的光学异构体，例如，可以举出选自3S,3’S－体、3R,3’S－体、3R,3’R－体中的至少1者，优选为3R,3’R－体。另外，作为玉米黄质的顺式-反式异构体，可以为顺式体、反式体或它们的组合。作为顺式-反式异构体，例如，可举出全反式体、9－顺式体、13－顺式体或它们的组合。另外，作为立体异构体的优选例子，可举出3R,3’R－全反式体、3R,3’R－9顺式体、3R,3’R－13顺式体或它们的组合。

对称型类胡萝卜素可以单独使用一种，也可以组合二种以上使用，优选含有虾青素。

此外，本发明的组合物优选为含有金盏花黄质作为非对称型类胡萝卜素、含有虾青素作为对称型类胡萝卜素的类胡萝卜素混合物。另外，上述类胡萝卜素混合物除了金盏花黄质和虾青素以外，还可以进一步含有金盏花红素、羟基海胆酮、海胆烯酮、3－羟基海胆烯酮等的非对称型类胡萝卜素和/或玉米黄质、角黄素、β－胡萝卜素等对称型类胡萝卜素。例如，依据日本特开2007－261972号公报、日本特开2009－50237号公报中记载的方法从产类胡萝卜素副球菌的干燥菌体中提取的类胡萝卜素混合物含有金盏花黄质、虾青素和金盏花红素，优选进一步含有选自角黄素、羟基海胆酮、β－胡萝卜素、海胆烯酮、3－羟基海胆烯酮和玉米黄质中的至少1者。

本发明中，类胡萝卜素也可以为药学上可接受的盐的形态，这些盐也包含于本发明中的类胡萝卜素。本发明中，类胡萝卜素也有时与酸或碱形成盐。本发明中，药学上可接受的盐只要是与虾青素、金盏花红素、金盏花黄质和/或玉米黄质形成药学上可接受的盐，就没有特别限定。具体而言，例如，可举出卤化氢酸盐(例如氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等)、无机酸盐(例如硫酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐等)、有机羧酸盐(例如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐等)、有机磺酸盐(例如甲烷磺酸盐、三氟甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐等)、氨基酸盐(例如天冬氨酸盐、谷氨酸盐等)、季铵盐、碱金属盐(例如钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如镁盐、钙盐等)等，但不限定于此。

本发明的类胡萝卜素可以为市售品，或者可以使用利用以往的化学合成法而制造的化学合成品、通过基于微生物的发酵法或来自微生物、动物或植物等的提取和纯化等而制造的来自微生物、动物或植物的物质(天然来源)。上述微生物包含细菌、藻类、酵母。这里，来自微生物、动物或植物的物质是指由微生物、动物或植物得到的生成物，可以优选为来源于副球菌属微生物的物质，更优选为来源于产类胡萝卜素副球菌(Paracoccuscarotinifaciens)的物质。

例如，作为来自微生物的虾青素、金盏花红素和金盏花黄质的提取和纯化方法，可举出下述方法。将产类胡萝卜素副球菌的干燥菌体供于使用了丙酮的室温提取，将提取液用蒸发器浓缩，浓缩液分离为二层时向浓缩物中加入己烷－氯仿(1:1)混合液，充分混和后，通过分液操作而得到有机溶剂层。将上述有机溶剂层用蒸发器浓缩干固。将浓缩干固物溶解于氯仿，利用硅胶柱来分离各类胡萝卜素。例如，可以通过将用丙酮:己烷(3:7)洗脱的馏分进一步利用HPLC(Shim－pack PRC－SIL(株式会社岛津制作所)、丙酮:己烷(3:7))进行纯化而得到金盏花红素游离体。另外，将用丙酮:己烷(5:5)洗脱的馏分浓缩，在4℃下放置，由此能够以晶体的形式得到虾青素游离体。此外，将用丙酮洗脱的馏分进一步利用HPLC(Shim－pack PRC－SIL，丙酮:己烷(4:6))进行纯化，由此能够得到金盏花黄质游离体。

另外，作为来自微生物的玉米黄质的提取和纯化方法，可举出下述的方法。可以使用丙酮等水溶性有机溶剂从副球菌属微生物的沉淀培养物或沉淀干燥物中提取玉米黄质。进而，向得到的水溶性有机溶剂提取液中加入非极性有机溶剂和/或水，进行液液萃取，由此也可以将玉米黄质进一步纯化。

另外，作为玉米黄质的提取和纯化方法，可以按照美国专利申请公开第2014/0113354号说明书中记载的步骤进行提取和纯化。例如，可以通过将培养物用丙酮等溶剂提取，将该丙酮提取物利用使用了乙酸乙酯－己烷(3:7)混合液的硅胶柱进行洗脱而得到玉米黄质。

本发明的组合物中的非对称型类胡萝卜素的含量只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，相对于组合物的总质量，例如，可举出0.1～99质量％，优选为0.1～95质量％，更优选为0.1～90质量％，进一步优选为0.1～85质量％。

另外，本发明的非对称型类胡萝卜素中的金盏花黄质的含量没有特别限定，例如，可举出0.1～99质量％，优选为1～99质量％，更优选为3～99质量％，进一步优选为5～99质量％。

另外，本发明的组合物中的总类胡萝卜素中的金盏花黄质的含量没有特别限定，例如，可举出0.1～99质量％，优选为0.5～99质量％，更优选为1～99质量％，进一步优选为2～99质量％。

另外，本发明的组合物中的对称型类胡萝卜素的含量只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，相对于组合物的总质量，例如，可举出0.1～99质量％，优选为0.1～95质量％，更优选为0.1～90质量％，进一步优选为0.1～85质量％。

本发明的组合物中的金盏花黄质、虾青素和金盏花红素的含量可以利用HPLC法、按照Toxicol Rep.2014 Aug 25；1:582-588.中记载的步骤进行测定。另外，本发明的组合物中的玉米黄质的含量可以利用HPLC法、按照日本专利第6132905号的[实施例]中记载的步骤进行测定。

本发明的组合物可以作为与上述类胡萝卜素一起根据需要配合口服上可接受或药学上可接受的添加剂而得的组合物而提供。作为上述添加剂，可举出溶剂、助溶剂、溶解剂、润滑剂、乳化剂、等渗剂、稳定化剂、保存剂、防腐剂、表面活性剂、调节剂、螯合剂、pH调节剂、缓冲剂、赋形剂、增稠剂、着色剂、芳香剂或香料等。

本发明的组合物可以通过将上述类胡萝卜素和根据需要的口服上可接受或药学上可接受的添加剂利用混合、溶解、分散、悬浮等公知的方法来制备。另外，本发明的组合物的制备中，只要不妨碍本发明的效果，也可以对由上述方法制备的混合物、溶解物、分散物、悬浮物等实施均质化处理、杀菌处理。

另外，本发明的组合物的形态只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，可以为固体、半固体(包括糊料、凝胶)或液体(包括油状、浆状)，优选为固体或液体。

另外，本发明的组合物的剂形只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，可举出注射剂、片剂(例如，裸片、糖衣片、薄膜包衣片、肠溶片、缓释片、口腔崩解片、舌下片、可咀嚼片等)、胶囊剂(例如，硬胶囊、软胶囊)、酏剂、丸剂、粉剂、散剂、颗粒剂、水剂、含片剂、糖浆剂、干糖浆剂、乳剂、悬浮剂、液剂、吸入剂、气雾剂、粉末吸入剂、栓剂、软膏、霜剂、凝胶剂、贴剂、巴布剂、乳液剂、滴剂、眼软膏剂、滴眼剂、滴鼻剂等。本发明的组合物的剂形优选为口服摄取或给药用剂形，可举出片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、干糖浆剂、乳剂、液剂、悬浮剂、水剂、含片剂等。

作为本发明的组合物的给药或摄取方法，没有特别限定，可举出基于点滴、静脉注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射等注射、口服、经粘膜、经皮、鼻腔内、口腔内等的给药或摄取，优选为口服摄取或给药。

作为本发明的组合物，可举出食品或饮料等饮食品、食品添加剂、饲料、医药品、准药品或化妆品，从摄取的简便性的观点考虑，优选饮食品。

本发明的饮食品可以为将本发明的组合物直接制备成饮食品的形式，可以为进一步配合有各种蛋白质、糖类、脂肪、微量元素、维生素类、植物提取物、以及其它有效成分(例如，乳酸菌、芽孢杆菌属菌(Bacillus)等细菌、酵母等真菌、食物纤维、DHA或EPA)等的形式、将本发明的组合物制成溶液状等液体、半液体状或固体状的形式，另外，也可以为将本发明的组合物添加于一般的饮食品中的形式。

作为上述饮食品，具体而言，例如，可以例示方便面、杀菌食品、罐头、微波食品、速食汤·味增汤类、冻干食品等速食食品类；清涼饮料、果汁饮料、蔬菜饮料、豆乳饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、酒精饮料、果冻饮料等饮料类；功能饮料；面包、意大利面、面条、蛋糕粉、面包粉等小麦粉制品；糖果、软糖、果冻、焦糖、口香糖、巧克力、曲奇、饼干、蛋糕、派、小吃、薄脆饼干、和糕点、餐后甜点等点心类；营养棒；能量棒；酱汁、番茄加工调味料、风味调味料、烹饪混合物、佐料类、色拉调料类、汤汁类、咖喱和炖煮的配料等调味料；加工油脂、黄油、人造黄油、蛋黄酱等油脂类；乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料、冰淇淋类、奶油类等乳制品；农产品罐头、果酱和橘子酱类、谷物等农产加工品；火腿、培根、香肠、烤猪肉等畜肉加工食品：冷冻食品等，但不限定于此。

本发明的饮食品还包括健康食品、营养补充剂、功能性食品(例如，包含特定保健用食品、营养功能食品或功能性显示食品)、特别用途食品(例如，包含患者用食品、婴儿用配方奶粉、孕产妇、哺乳妇女用奶粉或吞咽困难者和咀嚼困难者用食品)或婴儿用液体配方奶(也称为婴儿用液体奶)。如后所述，由于本发明的组合物具有对器官、组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的抑制或治疗作用，因此可提供用于抑制或治疗器官、组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的饮食品。即，本发明的饮食品能够作为用于具有由对器官、组织的氧化应激引起的疾病或症状的人的饮食品而提供。此外，也可以在功能性食品等饮食品中附加“期待抗氧化作用”、“减少氧化应激”、“用于抗衰老”等表达而提供。

本发明的组合物的摄取量或给药量没有特别限定，可以考察组合物的处方、非对称型类胡萝卜素的种类、纯度、对象的种类、对象的年龄或体重、症状、摄取或给药时间、组合物的形态、摄取或给药方法等而决定。另外，本发明的组合物优选以达到用于抑制或治疗对器官、组织的氧化应激或由其引起的症状的有效量的方式由1天的摄取量单位的形态构成。例如，口服摄取本发明的组合物时，可以以一种以上的非对称型类胡萝卜素和其药学上可接受的盐为体重60kg的成人每人每天0.01～10000mg、优选0.05～1000mg、更优选0.1～100mg的范围的摄取量或给药量的方式将该非对称型类胡萝卜素配合到组合物中。本发明中，除了与非对称型类胡萝卜素组合使用的类胡萝卜素以外的药剂可以分别以临床上可使用的摄取量或给药量为基准而适当地决定。

另外，本发明的组合物的1天的摄取量或给药量根据组合物的处方等而适当地选择。本发明的组合物的1天的摄取量或给药量例如可以以1次或多次使对象摄取或者进行给药，优选以1次使对象摄取或者进行给药。因此，本发明的组合物的1天的摄取或给药次数可举出1天1～5次，优选为1天1～3次，更优选为1天1次。

根据一个方式，应用本发明的组合物的对象只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，优选为哺乳动物，更优选为人等灵长类、狗、猫。该对象可以为健康者(健康动物)也可以为患者(患者动物)。

根据本发明的组合物，能够在摄取该组合物的对象中减少8－OHdG或抑制其产生。根据本发明的组合物，在能够减少血中的8－OHdG或抑制其产生上是有利的。特别是，由于金盏花黄质等非对称型类胡萝卜素的血中滞留增加作用大于虾青素等对称型类胡萝卜素，因此在能够进一步减少8－OHdG或者进一步抑制8－OHdG的产生上是有利的。

这里，已知8－OHdG为氧化应激标志物之一。通过将氧化应激标志物作为指标使用，能够以不侵害器官、组织等的方式根据血液等成分解析来把握暴露于活性氧等自由基的器官、组织等的损伤状态、其变化。8－OHdG通过作为细胞中的DNA的构成成分的脱氧鸟苷(dG)被由氧化应激产生的羟基自由基氧化而生成。因此，8－OHdG作为反映氧化应激高低的指标使用。

根据本发明的组合物，能够抑制对器官、组织的氧化应激。因此，根据本发明的组合物，能够抑制或治疗对器官、组织的氧化应激或由其引起的疾病(疾患)或症状。因此，根据本发明的一个方式，本发明的组合物可作为用于抑制或治疗对器官、组织的氧化应激或由其引起的疾病或症状的组合物而提供。这里，本说明书中的疾病或由其引起的症状的“抑制”是指通过非医疗手段对疾病或由其引起的症状进行改善，而且包含对假定的恶化预先做好准备并通过非医疗手段或医疗手段将疾病或由此引起的症状的产生或复发防患于未然的“预防”的含义。另外，“治疗”是指通过医疗手段对疾病或由此引起的症状进行改善。这里，改善包括停止、缓解或延迟疾病或由此引起的症状的发展或恶化。

作为由对上述器官或组织的氧化应激引起的疾病或症状，没有特别限定，例如，可举出脑神经疾病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、精神分裂症、双相情感障碍、脆性X综合征、肌肉萎缩性侧索硬化症、多聚谷氨酰胺疾病、朊毒体病、脑梗塞、中风、高血压、动脉硬化症、心绞痛、心脏病、癌症、慢性疲劳综合症、衰老、肌肉减少症、虚弱、机车综合症、炎症、呼吸系统疾病、皮肤病、消化系统疾病、白内障、糖尿病等。

本发明的组合物能够通过使用非对称型类胡萝卜素而增加向摄取对象的器官、组织内传递的类胡萝卜素的总量。此外，本发明的组合物能够增加总类胡萝卜素的血中滞留量，使类胡萝卜素缓慢地转移到器官内、组织内。因此，根据另一方式，本发明的组合物提供一种用于使类胡萝卜素转移到器官内、组织内或者滞留于器官、组织的组合物。作为上述器官、组织，例如，可举出脑、心脏、肺、脾脏、肝脏、肾脏、皮肤等。另外，作为脑的具体区域，例如，可举出大脑(例如，大脑皮质、大脑髄质)、小脑、中脑、纹状体(例如，纹状体被膜、尾状核)、海马体、延髓、间脑等。本发明的组合物由于能够转移和/或滞留于器官，因此在与各器官有关的疾病或由此引起的症状的抑制或治疗上是有利的。作为上述与大脑有关的疾病，例如，可举出阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、精神分裂症、双相情感障碍、脆性X综合征、肌肉萎缩性侧索硬化症、多聚谷氨酰胺疾病、朊毒体病、脑梗塞、中风、动脉硬化症、心绞痛、心脏病、癌症、慢性疲劳综合症、衰老等。

根据本发明的另一方式，提供抑制或治疗对对象的器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的方法或者使上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素转移到对象的器官或组织内的方法，包含：将含有有效量的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的组合物向对象给药或使其摄取。根据本发明的又一方式，提供使对象的血中类胡萝卜素滞留量增加的方法或者减少对象的8－OHdG或抑制其产生的方法，包含：将含有有效量的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的组合物向对象给药或使其摄取。根据本发明的又一方式，提供抑制或治疗对对象的器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的方法或者使上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素转移到对象的器官或组织内的方法，包含：将一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的有效量向有此需要的对象给药或使其摄取。根据本发明的另一方式，提供使对象的血中类胡萝卜素滞留量增加的方法或减少对象的8－OHdG或抑制其产生的方法，包含将一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的有效量向有此需要的对象给药或使其摄取。这里，“有效量”可以与1天的摄取量单位中的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐含量等同样地设定。另外，上述方法也可以仅通过非医疗手段而应用于对象。因此，根据本发明的另一方式，提供抑制对对象的器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的方法或者使上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素转移到对象的器官或组织内的方法(不包括医疗手段，例如，对人的医疗手段)，包含：将含有有效量的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的组合物向对象给药或使其摄取。根据本发明的又一方式，提供使对象的血中类胡萝卜素滞留量增加的方法或减少对象的8－OHdG或抑制其产生的方法(不包括医疗手段，例如对人的医疗手段)，包含：将含有有效量的一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的组合物向对象给药或使其摄取。根据本发明的又一方式，提供一种抑制或治疗对对象的器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的方法或者使上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素转移到对象的器官或组织内的方法(不包括医疗手段，例如对人的医疗手段)，包含：将一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的有效量向有此需要的对象给药或使其摄取。根据本发明的又一方式，提供一种使对象的血中类胡萝卜素滞留量增加的方法或者减少对象的8－OHdG或抑制其产生的方法(不包括医疗手段，例如对人的医疗手段)，包含：将一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的有效量向有此需要的对象给药或使其摄取。本发明的上述方法可以在本发明的组合物中根据本说明书所记载的内容而实施。

另外，根据本发明的另一方式，提供用于对器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的抑制或治疗或上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素向器官或组织内转移的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。根据本发明的又一方式，提供用于类胡萝卜素的血中滞留量的增加或8－OHdG的减少或抑制其产生的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。

另外，根据本发明的另一方式，提供作为用于对器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的抑制或治疗或者上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素向器官或组织内转移的组合物的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。根据本发明的又一方式，提供作为类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物或者用于8－OHdG的减少或抑制其产生的组合物的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。

另外，根据本发明的另一方式，提供用于对器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的抑制或治疗或者上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素向器官或组织内转移的组合物的制造中的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。根据本发明的又一方式，提供类胡萝卜素的血中滞留增加用组合物或者用于8－OHdG的减少或抑制其产生的组合物的制造中的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐的应用。

另外，根据本发明的另一方式，提供用于对器官或组织的氧化应激或由此引起的疾病或症状的抑制或治疗或者上述非对称型类胡萝卜素等类胡萝卜素向器官或组织内转移的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐。根据本发明的又一方式，提供用于类胡萝卜素的血中滞留量的增加或者8－OHdG的减少或抑制其产生的、一种以上的非对称型类胡萝卜素或其药学上可接受的盐。

上述的应用、化合物(非对称型类胡萝卜素)的形态都可以按照关于本发明的组合物或方法的记载而实施。

实施例

以下，通过制备例、试验例对本发明进行更具体的说明，但本发明的技术范围不限定于这些例示。应予说明，只要没有特别记载，本发明中使用的所有百分比、比率都基于质量。另外，只要没有特别说明，本说明书中记载的单位、测定方法都基于JIS标准。

依据日本特开2012－158569号公报中记载的方法，进行虾青素游离体、金盏花红素游离体和金盏花黄质游离体的制备。以下进行简要记载。

将产类胡萝卜素副球菌(Paracoccus carotinifaciens)的干燥菌体供于使用了丙酮的室温提取。将得到的提取液用蒸发器浓缩，浓缩液分离为二层时向浓缩物中加入己烷-氯仿(1:1)混合液进行充分混和后，利用分液操作而得到有机溶剂层。

将得到的有机溶剂层用蒸发器浓缩干固。使浓缩干固物溶解于氯仿，用硅胶柱来分离各类胡萝卜素。具体而言，将用丙酮:己烷(3:7)300mL洗脱的馏分进一步用HPLC(Shim－packPRC－SIL(株式会社岛津制作所)，丙酮:己烷(3:7))进行纯化，得到金盏花红素游离体(以下，也简称为金盏花红素)。另外，将用丙酮:己烷(5:5)洗脱的馏分浓缩，以4℃放置，由此以晶体形式得到虾青素游离体(以下，也简称为虾青素)。将用丙酮洗脱的馏分进一步用HPLC(Shim－pack PRC－SIL，丙酮:己烷(4:6))进行纯化，得到金盏花黄质游离体(以下，也简称为金盏花黄质)。

使用金盏花黄质作为非对称型类胡萝卜素，使用虾青素作为对称型类胡萝卜素。另外，使用ICR系统小鼠作为实验动物。小鼠使用14只，每4只作为金盏花黄质给药组和虾青素给药组，将6只作为对照给药组。分组中，基于开始给药前一天的体重，以各组的平均体重尽量均等的方式构成各组。

对各实验组，在开始给予给药物质前进行采血。

对各实验组分别口服给予金盏花黄质、虾青素和橄榄油(产品编号150-00276，和光纯药工业株式会社制)。金盏花黄质给药组和虾青素给药组中，使用柔性胃管，将金盏花黄质和虾青素以达到50mg/kg体重的容量进行1天1次、连续10天(将给药物质的给予开始日起算为第1天)的口服给药。对照给药组中，使用柔性胃管，以橄榄油0.05mL/kg体重进行1天1次、连续10天的口服给药。

给药期间，使小鼠自由摄取固体饲料(CE－2，CLEA Japan株式会社制)和自来水，以12小时明暗周期、23±3℃、相对湿度50±20％进行饲养。

各给药物质的最终给药的4小时后进行采血。分别测定从金盏花黄质给药组采取的血液的血清中的金盏花黄质的浓度(相对于1mL血清的浓度)、从虾青素给药组采取的血液的血清中的虾青素的浓度(相对于1mL血清的浓度)。具体而言，在1mL的血清中添加2mL的乙醇，其后，添加5mL的乙醚:己烷(2:8，v/v)溶液，进行搅拌。静置后，取出上层，用过滤器过滤，使其蒸发干固。使残留物溶解于丙酮:己烷(2:8，v/v)溶液，供于HPLC。HPLC仪器使用Hitachi L-6000 intelligent pump，L-4250UV-VIS detector。测定波长为450nm，柱子使用5μm Cosmosil 5SL-II(250×4.6mm内径)(NacalaiTesque株式会社制)。流动相使用丙酮:己烷(2:8，v/v)，以流速1.0mL/分钟进行测定。

应予说明，HPLC中，金盏花黄质的浓度以顺式体和反式体的各自的浓度进行测定。

另外，最终给药后的采血之后，在异氟烷麻醉下用加入肝素的乳酸林格氏液进行全身灌流后，采取视网膜、心脏、肺、脾脏、肝脏和肾脏。所采取的器官立即用液氮冻结，保存于－80℃。

分别测定从金盏花黄质给药组采取的各器官中的金盏花黄质的浓度(相对于各器官的重量的浓度)、从虾青素给药组采取的各器官中的虾青素的浓度(相对于各器官的重量的浓度)。具体而言，将各器官均质化，用丙酮反复萃取直到颜色消失。其后，用过滤器过滤，使丙酮蒸发，在该液体中添加乙醚:己烷(2:8，v/v)，萃取类胡萝卜素。进而，蒸发干固，使残留物溶解于丙酮:己烷(2:8，v/v)，供于HPLC。HPLC仪器使用Hitachi L-6000 intelligentpump，L-4250 UV-VIS detector。测定波长为450nm，柱子使用5μm Cosmosil 5SL-II(250×4.6mm内径)(NacalaiTesque株式会社制)。流动相使用丙酮:己烷(2:8，v/v)，以流速1.0mL/分钟进行测定。

应予说明，HPLC中，虾青素的浓度以顺式体和反式体的各自的浓度进行测定。

将从金盏花黄质给药组采取的血清中的金盏花黄质的浓度(顺式体和反式体的合计浓度)、以及从虾青素给药组采取的血清中的虾青素的浓度(顺式体和反式体的合计浓度)分别示于图1。应予说明，从对照给药组采取的血清中没有检测到金盏花黄质和虾青素。

根据图1的结果表明：金盏花黄质和虾青素都以高浓度存在于血清中(即，容易滞留在血液中)。其中，表明作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质特别容易滞留于血液中。

将从金盏花黄质给药组采取的各器官中的金盏花黄质的浓度、以及从虾青素给药组采取的各器官中的虾青素的浓度分别示于表1。测定值用平均值表示。应予说明，从对照给药组采取的各器官中没有检测到金盏花黄质和虾青素。

[表1]

根据表1的结果表明：金盏花黄质和虾青素都以高浓度存在于各器官(即，容易转移并滞留于各器官)。其中，表明作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质特别容易转移并容易滞留于各器官。

对试验例1的小鼠的血清和各器官中的金盏花黄质和虾青素分别确认反式体的比例。将结果示于图2。

根据图2的结果表明：金盏花黄质和虾青素都是各器官中的反式体的比例大于顺式体的比例。其中，表明作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质在各器官中的反式体的比例与顺式体的比例相比特别大。

分别称量制备例1中得到的金盏花黄质和虾青素，加入橄榄油进行悬浮，分别调整为10mg/mL的浓度，得到虾青素给药液和金盏花黄质给药液。应予说明，各给药液在使用时制备，在遮光下保持在冰上直到给药为止。

实验动物使用食蟹猴。食蟹猴使用2只，1只给予金盏花黄质给药液(金盏花黄质给药猴子)，另1只给予虾青素给药液(虾青素给药猴子)。给药液使用制备例2中得到的给药液，以金盏花黄质或虾青素的给药量为50mg/kg体重的用量进行1天1次、持续10天(将给药液的给予开始日起算为第1天)的给药。作为给药方法，将一次性导管从鼻腔插入到胃内，使用注射筒将给药液注入到胃内。应予说明，将给药液采取到注射筒中时，将给药液一边用搅拌器搅拌一边进行采取。另外，各给药时的给药量以各给药时刻的最新的体重(在驯化开始日、结束日、给药开始日和给药第8天的给药前，使用电子天秤(HP-40K或GP-40K，均为株式会社A&D制)分别测定体重)为基准进行计算。给药时刻为8：30～13：30。

对各食蟹猴在给药液的给药开始前和最终给药的4小时后分别进行采血，得到血清。具体而言，从各食蟹猴的大腿静脉采血约30mL，在室温下静置20～60分钟后，进行10分钟离心分离(室温，1700×g)而得到血清(约10mL)。得到的血清用超低温冰箱(－70℃以下)保存。

给药液的给药期间，将固体饲料约108g(约12g×9个)每天于14：00～16：00对各食蟹猴给予1次，回收残留的饵料直到第二天的给饵(给药日为给药前)。自由摄取自来水，以12小时明暗周期、23±3℃、相对湿度50±20％进行饲养。

对给药液的最终给药的4小时后的各血清分别测定从金盏花黄质给药猴子采取的血清中的金盏花黄质的浓度、以及从虾青素给药猴子采取的血清中的虾青素的浓度。具体而言，在1mL的血清中添加2mL的乙醇，其后，添加5mL的乙醚:己烷(2:8，v/v)溶液，进行搅拌。静置后，取上层，用过滤器过滤，使其蒸发干固。使残留物溶解于丙酮:己烷(2:8，v/v)溶液，供于HPLC。HPLC仪器使用Hitachi L-6000 intelligent pump，L-4250 UV-VISdetector。测定波长为450nm，柱子使用5μm Cosmosil 5SL-II(250×4.6mm内径)(NacalaiTesque公司制)。流动相使用丙酮:己烷(2:8，v/v)，以流速1.0mL/分钟进行测定。

另外，在给药液的最终给药后的采血之后，将戊巴比妥钠(东京化成工业株式会社制)水溶液(64.8mg/mL)以达到0.4mL/kg体重的容量进行挠侧皮静脉内给药而进行麻醉。测定体重后，放血使其安乐死，采取脑(大脑皮质、大脑髄质、小脑、中脑、纹状体被膜、纹状体尾状核、海马、延髄、间脑)、心脏、脾脏、肝脏、肾脏(右和左)、视网膜。所采取的各器官用超低温冰箱(－70℃以下)保存。

分别测定从金盏花黄质给药猴子采取的各器官中的金盏花黄质的浓度(相对于各器官的重量的浓度)、以及从虾青素给药猴子采取的各器官中的虾青素的浓度(相对于各器官的重量的浓度)。具体而言，将各器官均质化，用丙酮反复萃取直到颜色消失。其后，用过滤器过滤，使丙酮蒸发，在该液体中添加乙醚:己烷(2:8，v/v)，萃取类胡萝卜素。进一步，蒸发干固，使残留物溶解于丙酮:己烷(2:8，v/v)，供于HPLC。HPLC仪器使用Hitachi L-6000intelligent pump，L-4250UV-VIS detector。测定波长为450nm，柱子使用5μm Cosmosil5SL-II(250×4.6mm内径)(NacalaiTesque公司制)。流动相使用丙酮:己烷(2:8，v/v)，以流速1.0mL/分钟进行测定。

将从金盏花黄质给药猴子采取的血清中的金盏花黄质的浓度、以及从虾青素给药猴子采取的血清中的虾青素的浓度分别示于图3。

根据图3的结果表明：金盏花黄质和虾青素都以高浓度存在于血清中(即，容易滞留于血液中)。其中，表明作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质特别容易滞留于血液中。

将从金盏花黄质给药猴子采取的各器官中的金盏花黄质的浓度、以及从虾青素给药猴子采取的各器官中的虾青素的浓度分别示于表2。

[表2]

根据表2的结果表明：金盏花黄质和虾青素都以高浓度存在于各器官(即，容易转移并滞留于各器官)。其中，表明作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质特别容易转移并容易滞留于各器官。

分别称量制备例1中得到的金盏花黄质和虾青素，加入橄榄油进行悬浮，分别以达到30mg/mL的最终浓度的方式进行调整，得到虾青素给药液和金盏花黄质给药液。应予说明，各给药液在使用时制备。

使用金盏花黄质作为非对称型类胡萝卜素，使用虾青素作为对称型类胡萝卜素。另外，作为实验动物，使用ICR系统小鼠。小鼠使用30只，金盏花黄质给药组、虾青素给药组和对照给药组各10只。

金盏花黄质给药组、虾青素给药组中，使用制备例3中得到的给药液，以金盏花黄质或虾青素的给药量为300mg/kg体重的容量(10mL/kg体重)进行1天1次、持续14天(将给药液的给药开始日起算为第1天)的口服给药。对照给药组中，以橄榄油10mL/kg体重进行1天1次、持续14天的口服给药。作为给药方法，使用聚丙烯制一次性注射器和小鼠用胃管进行给药。

给药期间，使小鼠自由摄取固体饲料(CRF－1，Oriental Yeast工业株式会社制)和自来水，以12小时明暗周期、21.5～24.6℃、相对湿度52～71％进行饲养。

14天的给药结束后，在异氟烷吸收麻醉下从小鼠的后腔静脉进行采血。将所采取的血液在室温下放置约30分钟后，进行离心分离(1500×g，10分钟，4℃)采取血清，以－80℃冻结保管。其后，使用8-羟基-2-脱氧鸟苷ELISA试剂盒(ab201734)(Abcam公司制)作为8－OHdG测定用ELISA试剂盒，对所采取的血清的8－OHdG进行测定。

将从金盏花黄质给药组采取的血清中的8－OHdG的浓度、以及从虾青素给药组采取的血清中的8－OHdG的浓度和从对照给药组采取的血清中的8－OHdG的浓度分别示于图4。浓度用平均值±标准误差表示。对于血中8－OHdG浓度，对照给药组与其它试验组的比较使用Student的t检验(单侧检验)来检验平均值的差(**：p＜0.01vs对照给药组)。

根据图4的结果表明：金盏花黄质给药组和虾青素给药组的血中8－OHdG浓度都低，金盏花黄质和虾青素使8－OHdG减少或抑制其产生。特别是，作为非对称型类胡萝卜素的金盏花黄质给药组的血中8－OHdG浓度与对照给药组相比显著低，表明进一步使8－OHdG减少或进一步抑制其产生。