一种苓桂术甘汤颗粒的制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体地，本发明涉及一种苓桂术甘汤颗粒的制备方法。

背景技术

苓桂术甘汤为古代经典名方，具有温阳化饮，健脾利湿的功效。苓桂术甘汤出自东汉张仲景《伤寒论》，由茯苓四两、桂枝三两(去皮)、白术二两、甘草(炙)各二两组成，煎服方法为“以水六升，煮取三升，去滓，分温三服”。现代方剂学“苓桂术甘汤”处方为：茯苓12g，桂枝(去皮)9g，白术6g，炙甘草6g，水煎服。

专利CN112294869A公开了一种苓桂术甘汤提取物及其制备方法，首先取桂枝或/和肉桂，与白术混合，加水润透，水蒸气蒸馏，收集挥发油、芳香水以及混合药渣；然后取甘草或/和炒甘草，与茯苓以及所述混合药渣混合，加水提取，所得提取液经过滤以及浓缩，制备水提物清膏；然后用所述芳香水，加入环糊精，充分溶解后对挥发油进行包合，制备包合液；最后将包合液与水提物清膏干燥，制备浸膏粉，加入药用辅料混合，得到苓桂术甘汤提取物。采用该方法得到的苓桂术甘汤提取物中桂枝和白术的挥发性成分含量高，与传统汤剂基本一致，可用于苓桂术甘汤小试工艺提取。由于中试阶段处方量及提取设备的变化，挥发油的收集难度会增大，芳香水的含量也会大幅度增加，因此若进行放大生产需要对提取工艺进行改进。

苓桂术甘汤中包含挥发油的药材有桂枝和白术，经定性其挥发油的主要成分是桂枝中的桂皮醛，桂皮醛含量受温度影响较大，若将其先提取挥发油，在制粒时加入，可以减少浓缩加工过程对桂皮醛含量的影响。在苓桂术甘汤处方中，桂枝投料占比为25％，单提桂枝挥发油收率为0.1％，复方提取时受其他成分溶出的影响，挥发油很难被直接收集到，理论收率仅为0.025％，小试时约0.005％。由于小试设备采用电热套水蒸气蒸馏，受热、导热性能均优于中试提取设备，而且小试收集挥发油装置为玻璃材质，冷凝效果优于中试设备，挥发油在形成收集过程中损耗较小，相对容易收集，而中试提取设备较大，少量的挥发油在随水蒸气流入挥发油冷凝装置时很容易附着在壁上难以聚集，因此在中试阶段会出现挥发油难以收集的现象，收集到的均为芳香水，难以分层得到较纯的挥发油。包合技术采用的挥发油/芳香水与β-环糊精比例一般为1：10，在工艺放大时，20kg的苓桂术甘汤投料量会收集到大约8kg的芳香水，若将所有芳香水进行包合，颗粒的最终制成量将远远大于规定，难以实现。因此在苓桂术甘汤颗粒工艺放大阶段，挥发油的收集、挥发油/芳香水的包合是技术难点。

现有技术公开的苓桂术甘汤制备工艺都包含挥发油和芳香水的收集，但在实际生产时，挥发油在中试阶段是很难直接收集到的，一方面是设备原因，另一方面，苓桂术甘汤中的甘草在煎煮时会产生大量的泡沫，挥发油在随水蒸气上升过程中受到大量泡沫的影响，难以继续上升到冷凝管，会增加挥发油在混合提取时的收集难度。行业内常用的解决办法是优先煎煮挥发油成分，再将其他成分共同投料煎煮，随之产生的问题是在收集挥发油的同时会使其他成分的含量随煎煮时间增加而升高，不利于整体指标成分的控制。而且，在中试复方中收集到的一般都是芳香水，芳香水的量是挥发油的150倍左右，由于量太大会对后续的包合工艺会造成难度，不利于苓桂术甘汤颗粒的制备。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苓桂术甘汤颗粒的制备方法，该方法适用于苓桂术甘汤颗粒的放大生产，操作过程简单；采用超高效液相色谱法对苓桂术甘汤中的关键成分进行定性、定量分析，可用于苓桂术甘汤颗粒生产过程中的质量控制。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为:

一种苓桂术甘汤颗粒的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎；

(2)分别取饮片茯苓，桂枝，白术，甘草，上四味加7倍量的水煎煮3～5小时，收集芳香水，提取液经200目趁热过滤，得到药液；

(3)药液在60℃，真空度小于0.065mpa的条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液165ml～550ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉；

(4)将收集到的芳香水进行二次蒸馏，得到约100ml的二次蒸馏液，加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

优选的，在所述苓桂术甘汤颗粒制备过程中采用超高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，型号为ACQUITY UPLC BEH C18，参数为100mm×2.1mm，1.7μm，以乙腈为流动相B

。

优选的，所述检测方法用于桂皮醛、甘草苷、甘草酸、肉桂酸中一种或多种成分的定性、定量检测。

优选的，所述检测方法具体包括以下步骤：

(1)参照物溶液的制备：取甘草苷对照品、肉桂酸对照品、桂皮醛对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含甘草苷40μg、肉桂酸6μg、桂皮醛5μg、甘草酸铵200μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

(2)供试品溶液的制备：取供试品0.1g～0.5g置具塞锥形瓶中，按照液料比为50～500的比例加入浓度为25％～100％的甲醇作为提取溶剂，密塞，超声处理5～50分钟，放冷，摇匀，离心5分钟，取上清液滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，型号为ACQUITY UPLC BEHC18，100mm×2.1mm，1.7μm，以乙腈为流动相B

(4)测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即可。

本发明的技术方案所取得的有益效果在于：(1)对提取工艺进行改进，对芳香水进行二次蒸馏：若采用浓缩等方法收集芳香水，芳香水中的桂皮醛受温度影响会遭到破坏，含量会大幅度降低；但若将芳香水进行二次蒸馏，冷凝回收，不仅不会对桂皮醛产生影响，可以达到与收集挥发油同样的效果，而且芳香水经过二次蒸馏后体积明显减少，包合顺利，经包合后加入到颗粒中，最终成品中桂皮醛的含量大于400mg/kg；(2)采用超高效液相色谱法对苓桂术甘汤中的关键成分甘草苷、肉桂酸、桂皮醛和甘草酸进行定性、定量分析，可以在生产过程中进行含量监测，有利于产品的质量控制。

附图说明

图1为实施例10不同柱温下供试品叠加图谱；

图2为实施例11不同流速下供试品叠加图谱；

图3为实施例12不同比例甲醇提取溶剂下供试品叠加图谱；

图4为实施例13不同提取时间下供试品叠加图谱；

图5为实施例14不同取样量下供试品叠加图谱；

图6为实施例15不同液料比下供试品叠加图谱；

图7为实施例17甘草苷、肉桂酸、桂皮醛和甘草酸的线性标准曲线图。

具体实施方式

为了更好理解本发明的技术方案和优点，以下通过具体实施方式对本发明做进一步说明。

实施例1

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓6.7kg，桂枝5.0kg，白术5.0kg，甘草3.3kg，上四味加7倍量的水煎煮5小时，收集芳香水，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液550ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的芳香水进行二次蒸馏，得到约100ml的二次蒸馏液，加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例2

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓6.7kg，桂枝5.0kg，白术5.0kg，甘草3.3kg，上四味加7倍量的水煎煮5小时，收集芳香水，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液165ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的芳香水进行二次蒸馏，得到约100ml的二次蒸馏液，加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例3

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓6.7kg，桂枝5.0kg，白术5.0kg，甘草3.3kg，上四味加7倍量的水煎煮3小时，收集芳香水，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液550ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的芳香水进行二次蒸馏，得到约100ml的二次蒸馏液，加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例4

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓6.7kg，桂枝5.0kg，白术5.0kg，甘草3.3kg，上四味加7倍量的水煎煮3小时，收集芳香水，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液165ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的芳香水进行二次蒸馏，得到约100ml的二次蒸馏液，加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例5

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓55.20g，桂枝41.40g，白术41.40g，甘草27.60g，上四味加7倍量的水煎煮3小时，收集挥发油，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液550ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的挥发油加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例6

(1)前处理：将茯苓饮片破碎过筛，将桂枝饮片破碎。

(2)分别取饮片茯苓55.20g，桂枝41.40g，白术41.40g，甘草27.60g，上四味加7倍量的水煎煮3小时，收集挥发油，提取液经200目趁热过滤，得到药液。

(3)药液在60℃左右，真空度小于0.065mpa条件下浓缩，其中生药：料液约为1：1，得到浓缩液165ml，浓缩液经冷冻干燥得到干膏粉。

(4)将收集到的挥发油加入一定量的β-环糊精包合，将包合物加入干膏粉中混合均匀后进行制粒，干燥，得到苓桂术甘汤颗粒。

实施例7：分别取饮片茯苓55.20g，桂枝41.40g，白术41.40g，甘草27.60g，上四味加水1200ml，煎煮35分钟得到药液，然后继续煎煮至煎液量体积约550ml，得到浓缩液，冷冻干燥，得到干膏粉。

实施例8：分别取饮片茯苓55.20g，桂枝41.40g，白术41.40g，甘草27.60g，上四味加水1200ml，煎煮时间为35分钟得到药液，然后继续煎煮至煎液量体积约165ml，得到浓缩液，冷冻干燥，得到干膏粉。

实施例1～8样品的出膏率如表1所示。

表1

实施例9

参照物溶液的制备：取甘草苷对照品、肉桂酸对照品、桂皮醛对照品、甘草酸铵对照品(作为甘草酸的对照品，在流动相中会转化为甘草酸)适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含甘草苷40μg、肉桂酸6μg、桂皮醛5μg、甘草酸铵200μg的溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备：取供试品约0.2g，置具塞锥形瓶中，加入提取溶剂75％甲醇20ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)10分钟，放冷，摇匀，离心(3500r/min)5分钟，取上清液滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ACQUITY UPLC BEH C18，100mm×2.1mm，1.7μm)，以乙腈为流动相B

使用PDA全波长扫描，检测基准样品含量测定图谱，根据甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸4个目标峰的190nm～400nm全波长扫描结果，色谱峰最大吸收波长结果如表2所示，各目标峰在266nm的波长处均响应值较好。

表2

实施例10

检测方法同实施例9，柱温分别设置为25℃、30℃、35℃、40℃，检测波长为266nm，不同柱温下目标峰系统适用性参数结果如表3，不同柱温下叠加图谱如图1。因供试品为真空干燥得到，故图谱中未检测到桂皮醛对应色谱峰，结果表明，甘草苷、肉桂酸及甘草酸分离度及拖尾因子无较明显差异。

表3

实施例11

检测方法同实施例9，流速分别设置为0.1ml/min、0.2ml/min、0.3ml/min，检测波长为266nm，不同流速下目标峰系统适用性参数结果如表4、不同流速下供试品对比如图2。结果表明，流速为0.1ml/min时，甘草苷的分离度最佳，但图谱基线相对不稳；流速为0.3ml/min时，基线平稳，但甘草苷与相邻色谱峰(芹糖甘草苷)重合；流速为0.2ml/min时，甘草苷分离度达到定量要求，图谱基线平稳。

表4

实施例12

检测方法同实施例9，检测波长为266nm，供试品溶液的制备方法为：取基准样品粉末约0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂10ml，超声(250W，40kHz)处理30分钟，放冷，补足重量，摇匀滤过即得，其中提取溶剂为25％、50％、75％、100％甲醇。不同比例甲醇提取溶剂下供试品含量测定结果如表5、图3。因不同提取溶剂对不同成分影响有差异，通过平均赋予四个成分权重(各占0.25)的方法，比较其总分，结果显示以75％甲醇较好。

表5

实施例13

检测方法同实施例9，供试品溶液制备时提取时间分别为5、10、15、20、30、40、50分钟，检测波长为266nm，不同提取时间下供试品含量测定结果如表6、图4。结果显示提取时间为5分钟时，平行样间相对平均偏差大于3％，可能是由于超声时间较短，供试品中仍有部分固体未完全分散；在提取时间为5～50分钟条件下，各定量成分变异系数均小于3％，提取时间对各定量成分的提出量影响较小。

表6

实施例14

检测方法同实施例9，取样量分别为0.1g、0.2g和0.5g，检测波长为266nm，不同取样量下供试品含量测定结果如表7、图5。结果显示平行样相对平均偏差均小于3％，符合规定；计算3个不同取样量的变异系数，结果显示各定量成分变异系数均小于2％。

表7

实施例15

检测方法同实施例9，供试品溶液制备过程中提取溶剂与取样量的比例(液料比)分别为50、100、250、350和500倍，检测波长为266nm，不同液料比下供试品含量测定结果如下表8、图6。数据显示，平行样相对平均偏差除500倍液料比大于3％外，均符合平行样要求；比较各成分变异系数差异，肉桂酸、桂皮醛、甘草酸变异系数大于3％；比较不同液料比提取得到各成分含量值，发现100倍液料比提取得到各成分含量较高。

表8

实施例16

检测条件同实施例9，检测波长为266nm，进行专属性、精密度、重复性、线性、准确度及稳定性实验。

专属性：选用溶剂空白、对照品溶液和供试品溶液进行专属性实验，结果表明，阳性样品与对照品溶液的保留时间一致，试剂空白样品和阴性样品在目标物保留时间附近无干扰，专属性符合方法验证要求。

精密度：取同一份供试品溶液连续进样6针，记录色谱图。结果表明，甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸各定量成分峰面积的RSD％值均小于1％，表明仪器精密度良好。

重复性：取同一批供试品，平行制备6份供试品溶液。结果表明，甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸各定量成分含量的RSD％值均小于2.0％，符合药典规定，说明该方法重复性良好，符合含量测定的方法学验证要求。

线性：称取甘草苷20.52mg、肉桂酸6.004mg、桂皮醛204.2mg、甘草酸19.74mg，加甲醇稀释为每ml含甘草苷82.8μg、肉桂酸12.008μg、桂皮醛20.42μg、甘草酸394.80μg的混合对照母液，依次稀释并测定，记录色谱图并积分，计算峰面积，线性标准曲线图如图7，各定量成分浓度及峰面积数据如表9。线性标准曲线图以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作标准曲线，结果显示甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸在线性范围内线性关系良好，R2均在0.999以上。

表9

准确度：称取已测定含量的供试品6份，每份约0.2g，精密称定，置于锥形瓶中，分别平行各加入甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸适量，记录色谱图，结果表明，各定量成分的回收率均在92％～105％范围内，且RSD％值均小于2.0％，表明本方法准确度良好，符合含量测定的方法学验证要求。

稳定性：取同一份供试品溶液，配制后在第0h、1h、3h、6h、9h、12h、18h、24h进样，记录色谱图，结果显示，各定量成分的峰面积RSD％值均小于2.0％，表明供试品溶液在24小时内基本稳定。

实施例17

采用实施例9所述方法，检测波长为266nm，对实施例1～8不同阶段样品中的桂皮醛、甘草苷、甘草酸、肉桂酸进行含量测定，检测结果如表10、11、12、13所示。结果表明，制备工艺的调整会对苓桂术甘汤中关键成分的含量产生影响，药液经浓缩后桂皮醛的含量明显减少，实施例3样品中各成分的含量在标准范围内。

表10

表11

表12

表13

需要说明的是，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。