一种桦树汁分离液在治疗痛风中的应用

技术领域

本发明涉及一种桦树汁分离液的制备及其在治疗痛风疾病中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

桦树为桦木科落叶乔木，主要分布于我国东北、华北、西南部分地区。天然桦树汁中富含单糖、多糖类物质、氨基酸、五环三萜类化合物、脂肪酸皂甙、蛋白质等多种物质，具有良好的生物学效用。《吉林中草药》中记载桦树汁可用于："止咳。治痰喘咳嗽。"在《黑龙江常用中草药手册》中则记载了，桦树汁具有："治坏血病，肾脏病，痛风。有清热解毒作用。"，桦树汁用于痛风治疗虽见记载，但当前并无桦树汁可用于痛风治疗的具体文献研究及临床使用信息，之前被认为是桦树汁中重要的生物活性成分之一的五环三萜类化合物，也并无研究报道其具有治疗痛风的功效，因此对天然桦树汁中可用于治疗痛风的有效物质及有效使用手段的研究开发具有迫切的现实需求。

天然的桦树汁中含有大量的单糖、双糖等还原性糖类物质，还原糖进入人体内，经糖激酶代谢后导致血尿酸水平升高，可诱发痛风疾病的发作，同时桦树汁中所含有的蛋白、游离脂肪酸等成分均不适于痛风病人的摄入，因此通过分离纯化工艺将天然桦树汁中此类成分去除，使其更适于痛风疾病治疗具备重要的实用意义。

超滤是一种利用多孔膜的拦截能力，通过物理截流的方式将溶液中不同分子量物质进行区分的膜分离技术，一般以0.1～5MPa的压力差为推动力，促使溶液通过具有不同孔径超滤膜，从而达到纯化和浓缩、筛分溶液中不同组分目的，适用于分子量1500dal～1000kdal的大分子物质。纳滤工艺则是一种介于反渗透和超滤之间的压力驱动膜分离过程，相比较于超滤工艺，纳滤工艺通常更适用于相对分子质量较小的物质的分离，如小分子无机物、有机盐、单糖、低聚糖等，针对相对分子量在100dal～800dal之间的小分子物质可进行良好的分离。

发明内容

本发明涉及一种桦树汁分离液，该分离液通过对天然桦树汁进行超滤-纳滤三级分离浓缩制备。

该桦树汁分离液由桦树汁中相对分子量在500dal～700dal范围内的物质组成。

该桦树汁分离液中多糖类物质的总含量不低于10%，优选不低于20%。

通过超滤-纳滤复合分离技术，对桦树汁中的大分子蛋白、小分子量的还原糖、游离脂肪酸等不适于痛风病人摄入的成分进行分离，使该桦树汁分离液具备多糖含量高、低还原性糖、低蛋白、低脂肪酸的特点，适用于痛风病人摄入。

该桦树汁分离液可用于痛风疾病的治疗，同时该桦树汁分离液也可与其他功效性成分联合使用，应用于抗痛风产品的开发。

本发明中涉及的桦树汁分离浓缩液通过以下技术途径实现。

在压力0.5～1.5MPa，25～45℃、流速1～4m/s条件下，利用1500dal截留分子量的超滤膜组件对桦树汁原液进行一级分离纯化，桦树汁原液循环超滤分离4h后，收集滤过液，得内含物相对分子量低于1500dal的桦树汁超滤液。

以桦树汁超滤液作为原料，在0.5～1.5MPa，25～45℃、流速1～4m/s条件下，利用700dal截留分子量的纳滤膜组件对桦树汁超滤液进行二级分离纯化，循环纳滤分离3h后，收集滤过液，得内含物相对分子量低于700dal的桦树汁纳滤液。

以桦树汁纳滤液为原料，在0.5～1.5MPa，25～45℃、流速1～4m/s条件下，利用500dal截留分子量的纳滤膜组件对制备得到的桦树汁纳滤液进行三级分离纯化，循环纳滤分离2h后，收集截流液，即得内含物相对分子量范围在500dal～700dal之间的桦树汁分离液。

经过超滤-纳滤三级分离浓缩工艺制备得到的桦树汁分离液，其多糖含量不低于10%。

具体实施方式

通过以下实施例对本发明进行具体的描述，同时以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制。

实施例1桦树汁分离液的制备及总多糖的含量测定

1.桦树汁分离液的制备。

取桦树汁约2000mL，在压力1.5MPa，35℃、流速4m/s条件下，利用1500dal截留分子量的超滤膜组件对桦树汁进行一级分离纯化，循环超滤分离2h后，收集滤过液，即得内含物相对分子量低于1500dal的桦树汁超滤液。

以桦树汁超滤液作为原料，在压力1.0MPa、35℃、流速2m/s条件下，利用700dal截留分子量的纳滤膜组件对制备得到的桦树汁超滤液进行二级分离纯化，循环纳滤分离2h后，收集滤过液，得内含物相对分子量低于700dal的桦树汁纳滤液。

以桦树汁纳滤液为原料，在压力0.5MPa，30℃、流速1.5m/s条件下，利用500dal截留分子量的纳滤膜组件对制备得到的桦树汁纳滤液进行三级分离纯化，循环纳滤分离2h后，收集截流液，即得内含物相对分子量范围在500dal～700dal之间的桦树汁分离液。

2.桦树汁分离液中多糖含量测定。

桦树汁中总糖质量与还原糖质量之差即为桦树汁中多糖质量。

桦树汁分离液中总糖含量的测定。

对照液的配置：

将葡萄糖标准品置于60°C的干燥箱中干燥24h，冷却后称取葡萄糖标准品2.5mg置于25mL容量瓶中，加蒸馏水溶解稀释至刻度，摇匀后即得0.1mg/mL的葡萄糖对照溶液。

分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8和1.2mL的葡萄糖对照液于试管中，用蒸馏水补足至2mL，分别加入1.5mL9%的苯酚溶液和2.5mL浓硫酸，混合均匀后放至室温冷却，在490nm处测定其吸光度值，绘制标准曲。

吸取0.5mL制备得到的桦树汁分离液，加蒸馏水补足2mL，相同处理方法操作后，测样品液的吸光度值，参照标准曲线，测得总糖含量。

桦树汁分离液中还原糖质量的测定。

参照二硝基水杨酸法进行还原糖的测定。

分别吸取0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.2mL的1mg/mL的葡萄糖溶液于试管内，用蒸馏水补至2.0mL，然后每管加入DNS液2.0mL，置于90℃恒温水浴锅中30min，取出冷却后，用蒸馏水稀释至100mL，在550nm处分别进行吸光度测定。以葡萄糖标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。吸取0.5mL制备得到的桦树汁分离液，加蒸馏水补足2mL，相同方法处理后，测样品液的吸光度值，参照标准曲线，测得还原糖含量。

经实验测定，在每毫升制备得到的该桦树汁分离液中，总糖含量为374.28mg，还原糖含量为67.37mg，多糖含量为306.91mg，多糖在该桦树汁分离液中的含量占比为36.9%。

实施例2桦树汁分离液治疗大鼠痛风实验

参照实施例 1 所述方法制备桦树汁分离液。

将48只雄性SD大鼠随机分为6组，每组8只。分别为模型组、空白组、阳性对照别嘌醇组、桦树汁分离液（高、中、低剂量）组。别嘌醇组每天灌胃别嘌醇5ml/kg，桦树汁分离液高、中、低剂量组分别每天灌胃18ml/kg、9ml/kg、3ml/kg桦树汁，空白组和模型组给予等体积生理盐水，每天1次，连续14d，第7天时，向模型组、阳性对照组、桦树汁组大鼠的膝关节注射尿酸钠盐晶体注射液(20g·L

大鼠膝关节肿胀度测量。

使用缚绳法分别于各组大鼠造模前、造模后的6、12、24、36h对大鼠膝关节同一部位的周长进行测量，参照肿胀度=造模后膝关节周长-造模前膝关节周长评价各组大鼠膝关节的肿胀度。

大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-18含量检测。

第14天采用10%水合氯醛麻醉各组大鼠。从腹主动脉抽取血液至真空采集管中，60000r·min

实验结果表明，在建模前后的6，12，24，36h，与空白组比较，模型组大鼠的膝关节明显肿胀。与模型组比，别嘌呤醇组与桦树汁分离液组大鼠的关节肿胀程度明显降低，表明桦树汁分离液可有效减轻痛风所致膝关节肿胀程度，且呈剂量相关性。

与空白组相比，模型组大鼠血清中IL-1β，IL-18，TNF-α含量显著增加。与模型组比较，桦树汁分离液组在IL-18、TNF-α、IL-1β含量方面，则显著低于模型组，结果表明桦树汁分离液可有效抑制尿酸钠所致痛风性关节炎大鼠炎症因子的生成，以高剂量桦树汁分离液组效果最为明显。

表1各组大鼠膝关节肿胀程度

表2对大鼠血清中炎症因子的影响

实施例3桦树汁分离液与桦树汁原液降血尿酸作用对比实验

参照实施例 1 所述方法制备桦树汁分离液。

将36只SPF级雄性大鼠（160g±10g），随机分为4组，每组9只，分组如下：空白组；模型组；桦树汁分离液组；桦树汁原液组。除空白组外，其余3组给予氧嗪酸钾1g/（kg·d），连续灌胃14天，以制备高尿酸血症动物模型，模型制备成功后，空白组和模型组给予等体积蒸馏水，桦树汁原液组每天灌胃桦树汁9mg/kg，桦树汁分离液组每天灌胃桦树汁9ml/kg，连续灌胃28天。

实验的第3周、第4周、第5周，禁食12h后，取大鼠尾部血，分离血清，并按照说明书测定大鼠血清UA，实验的第6周结束后，禁食12h，取腹主动脉血，离心，分离血清，测定大鼠血清UA。

实验结果表明，与空白组相比，模型组大鼠血清尿酸含量明显增加。与模型组比较，桦树汁原液组、桦树汁分离液组均能明显降低尿酸水平，且以桦树汁分离液组血清中尿酸含量降低尤为显著，见表3。

表3桦树汁对高尿酸血症模型大鼠血清UA含量的影响