一种舒更葡糖钠杂质的分离纯化方法及其应用

技术领域

本发明涉及分离纯化领域，具体涉及一种舒更葡糖钠杂质的分离纯化方法。

背景技术

舒更葡糖钠(Sugammadex sodium)是由荷兰Organon公司开发的一种新型氨基甾类肌松药特异性拮抗剂，为修饰后的γ-环糊精，化学名称为6-全脱氧-6-全(2-羧基乙基)硫代γ-环糊精钠盐，分子式为C

舒更葡糖钠与临床中应用的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂类肌松药拮抗剂的作用机制不同，它是以一个分子对一个分子的形式，包裹罗库溴铵或维库溴铵等神经肌肉阻滞剂，形成紧密的络合物，从而使其失去活性。有研究显示，舒更葡糖纳与新斯的明或安慰剂相比，不良反应少且效果更好。舒更葡糖钠结构复杂，其分子结构上存在硫醚键，导致该化合物不稳定，纯化过程中易被氧化产生大量复杂的副产物及降解杂质，如亚砜、砜、二硫醚等一系列杂质。

舒更葡糖钠杂质多产生于侧链结构上，其结构与舒更葡糖钠结构近似，导致了舒更葡糖钠杂质的纯化非常困难。但是在药品的质量研究中，杂质研究是非常重要的一部分。一方面，杂质可能会影响药物的安全性，另一方面，杂质含量能够直接反映出药品的纯度。因此，开发一种简单高效且重现性好的分离纯化舒更葡糖杂质的方法，并得到高纯度的舒更葡糖杂质，对舒更葡糖钠合成工艺的优化和质量控制有着重要的意义。

其中，舒更葡糖钠杂质O的具体化学名为6A,6B,6C,6D,6E,6F,6G-heptakis-S-(2-Carboxyethyl)-6A,6B,6C,6D,6E,6F,6G-heptathio-γ-cyclodextrin Sodium，化学结构式为：

舒更葡糖钠杂质IMR的具体化学名为1,2-bis(6A-deoxy-6B,6C,6D,6E,6F,6G,6H-heptakis-S-(2-Carboxyethyl)-6B,6C,6D,6E,6F,6G,6H-octathio-γ-cyclodextrin-6A-yl)disulfane Sodium，化学结构式为：

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明提出了一种高纯度舒更葡糖钠制备方法。本发明对舒更葡糖钠的两个杂质进行研究，通过制备型高效液相色谱制备出高纯度的2个杂质(杂质O和杂质IMR)，为舒更葡糖钠合成工艺的优化和质量控制提供依据。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：

本发明中，所述的舒更葡糖钠杂质为杂质O或杂质IMR。

具体地，本发明中的分离纯化方法采用反相色谱法，所述反向色谱法采用C18色谱柱，流动相为乙腈-三氟乙酸水溶液。

具体地，所述反向色谱法的条件为：

色谱柱的规格为：月旭Xtimate C18填料，250×50mm，10μm；

流动相为乙腈：三氟乙酸水溶液＝22:78～24:76(V/V)；

流动相的流速为40～70mL/min；

进样体积为10～15mL；

检测波长为200nm；

其中，三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积分数为0.1％。

本发明中的分离纯化方法具体包含以下步骤：

1)配制样品溶液：取舒更葡糖钠杂质粗品，加入一定量的水并充分搅拌得到舒更葡糖钠粗品水溶液，再向舒更葡糖钠粗品水溶液中加入酸性溶剂和有机溶剂并充分搅拌，舒更葡糖钠杂质粗品溶解后，取上清液作为样品溶液；

具体地，舒更葡糖钠杂质粗品与水的质量比为1：7.5～50；和/或，舒更葡糖钠杂质粗品水溶液、酸性溶剂与有机溶剂的体积比为7.5～15：1：1。

具体地，所述酸性溶剂为体积分数为30％的三氟乙酸水溶液，和/或，所述有机溶剂为乙腈。

优选地，样品溶液中舒更葡糖钠的浓度为10～70mg/mL。

本发明的实施例中，所述舒更葡糖钠杂质粗品中，杂质的含量约为1％。

本发明的实施例中，具体地，若加入酸性溶剂和有机溶剂后仍有大量沉淀，可加入适量水使沉淀溶解，若溶液不澄清，但没有明显沉淀则不影响进样。

2)色谱分离过程：将色谱填料装填在色谱柱中，冲洗平衡后，将步骤1)获得的样品溶液用泵注射加入色谱柱内进样，进样后用流动相洗脱色谱柱，分批次收集洗脱液并分别检测各批次洗脱液中舒更葡糖钠杂质的纯度，将舒更葡糖钠杂质的纯度大于预设目标纯度的洗脱液合并为舒更葡糖钠杂质馏分；

具体地，采用高效液相色谱法检测各批次洗脱液中舒更葡糖钠杂质的纯度。

3)后处理：将舒更葡糖钠杂质馏分进行减压蒸馏浓缩后，冷冻干燥，得到舒更葡糖钠的杂质产品；

具体地，所述减压蒸馏浓缩采用旋转蒸发仪。

进一步地，所述步骤2)之后，将舒更葡糖钠杂质馏分合并后作为样品溶液进样，重复步骤2)一至两次后，再次进入步骤3)，得到舒更葡糖钠杂质产品，用于得到纯度更高的舒更葡糖钠杂质。

进一步地，采用本发明中的分离纯化方法得到的舒更葡糖钠杂质O、杂质R和其衍生物中的一种或多种用于作为标准品或对照品。

本发明的有益效果是：

1)本发明使用柱色谱方法，采用乙腈-三氟乙酸水溶液做流动相对样品进行分离纯化，具有极好的选择性。

2)本发明所使用的色谱填料具有机械强度高等优点，且其流动相为三氟乙酸水溶液和少量有机溶剂，与常规方法相比更加经济、环保，适用高纯度舒更葡糖钠杂质的制备，具有较高的经济效益和应用价值。

3)本发明与现有工艺相比，具有操作简单、效率高、重现性好、环境污染小等优点，结果稳定可靠。

4)本发明适用于分离纯化并得到高纯度的舒更葡糖钠同类杂质，具有较高的应用价值。

附图说明

图1为舒更葡糖钠杂质O纯品的HPLC谱图。

图2为舒更葡糖钠杂质IMR纯品的HPLC谱图。

具体实施方式

下面通过实施例更详细地说明本发明。但是本发明的范围并不限于这些实施例。

本发明实施例中针对舒更葡糖钠杂质纯度的检测均采用高效液相色谱法。

本发明的实施例如下：

实施例1

1)配制样品溶液：称取SUG-O粗品0.2g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解。若仍有大量沉淀，可加水至15～17mL，沉淀溶解。此时溶液不澄清，但没有明显沉淀则不影响进样。

2)色谱分离过程：将色谱填料月旭Xtimate C18装填在250×50mm色谱柱中，用0.1％三氟乙酸水溶液冲洗，之后将步骤1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，上样结束后继续用0.1％三氟乙酸水溶液:乙腈＝78:22洗脱，流速50mL/min在RT＝18～22min接得洗脱液，浓缩，重复以上操作进行二次纯化和三次纯化得到高纯度目标馏分，减压旋蒸浓缩，冷冻干燥，最后得到产品。

本实施例产品进行检测纯度，纯度是90％以上。

实施例2

1)配制样品溶液：称取SUG-O粗品0.5g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解。若仍有大量沉淀，可加水至15～17mL，沉淀溶解。此时溶液不澄清，但没有明显沉淀则不影响进样。

2)色谱分离过程：流动相为乙腈：0.1％TFA＝22:78；检测波长为200nm；流速为50mL/min；制备色谱柱为用Xtimate C18填料填装的C

本实施例产品进行检测纯度，纯度是90％以上。

实施例3

1)配制样品溶液：称取SUG-O粗品0.5g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解。若仍有大量沉淀，可加水至15～17mL，沉淀溶解。此时溶液不澄清，但没有明显沉淀则不影响进样。

2)色谱分离过程：流动相为乙腈：0.1％TFA＝24:76；检测波长为200nm；流速为50mL/min；制备色谱柱为用Xtimate C18填料填装的C18柱(250×50mm,10μm)，按上述条件进行杂质制备，进样15mL，收集目标杂质馏分(RT＝16～19min)，将洗脱液浓缩，重复以上操作进行二次纯化和三次纯化得到高纯度目标馏分，减压旋蒸浓缩，冷冻干燥，最后得到产品。

本实施例产品进行检测纯度，纯度是95％以上。

实施例4

1)配制样品溶液：称取SUG-IMR粗品0.1g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解至澄清。

2)色谱分离过程：流动相为乙腈：0.1％TFA＝24:76；检测波长为200nm；流速为50mL/min；制备色谱柱为用Xtimate C18填料填装的C

本实施例产品进行检测纯度，纯度是90％以上。

实施例5

1)配制样品溶液：称取SUG-IMR粗品0.2g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解至澄清。

2)色谱分离过程：流动相为乙腈：0.1％TFA＝24:76；检测波长为200nm；流速为50mL/min；制备色谱柱为用Xtimate C18填料填装的C

本实施例产品进行检测纯度，纯度是90％以上。

实施例6

1)配制样品溶液：称取SUG-IMR粗品0.2g，加10mL水超声溶解后逐滴加入1mL 30％TFA，样品析出，为白色絮状沉淀；加入1mL乙腈搅拌后溶解至澄清。

2)色谱分离过程：流动相为乙腈：0.1％TFA＝22:78；检测波长为200nm；流速为50mL/min；制备色谱柱为用Xtimate C18填料填装的C

本实施例产品进行检测纯度，纯度是94％以上。