一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法

技术领域

本发明涉及医学药物分析技术领域，具体为一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法。

背景技术

乳果糖是一种糖类化合物，也被称为巴伐克糖(Tagatose)。乳果糖与葡萄糖和果糖具有相似的结构，但其甜度约为蔗糖的90％，且对血糖水平的影响较小。乳果糖可以从乳糖通过酶解或氧化反应产生，也可以通过化学合成获得。作为一种低热量的替代糖，乳果糖在食品工业中被广泛应用，可以用于制作低糖、低卡路里的食品和饮料，同时也可作为糖尿病人士的替代甜味剂。在利用乳果糖制备食品的过程中，需要营养监控，因为糖类是人类日常饮食的重要组成部分，对于了解食物的营养价值和热量摄入起着重要作用。所以通过检测糖类含量，可以准确评估食物中的糖分含量，帮助人们控制糖分的摄入量，促进健康饮食。

糖类化合物含量检测是用于分析和确定食品、饮料或其他样品中糖类化合物的含量的过程。其中常见的糖类化合物含量检测方法有：1、全水分中总糖分析法：将样品溶解在水中，经酶解或酸酶解得到还原糖，然后使用反应试剂使还原糖与试剂产生可测量的化学反应，最后通过光度计、比色计或电化学方法测定光密度或电信号的强度来确定糖类化合物的含量；2、高效液相色谱法(HPLC)：通过将样品与色谱柱中的固定相相互作用，分离样品中的糖类化合物，并使用紫外检测器测定它们的浓度；3、气相色谱法(GC)：将样品中的糖类化合物转化为易挥发的衍生化合物，然后使用气相色谱仪分离和定量这些衍生化合物；4、糖度计法：通过测定样品的折射率或旋光度来确定糖类化合物的含量。除此之外，针对糖类化合物检测方法的报道还有很多，如薄层色谱法；5、薄层色谱法：根据样品的相对迁移距离和已知糖类标准品进行比较，来确定不同糖类的含量。基于上述的多种检测方法，其中薄层色谱法检测糖类相对误差较大，灵敏度较低；而液相色谱质谱联用法检测糖类样品配制方法相对较为繁琐且试验成本相对较高。

因此本发明提出了一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，来解决上述中存在的问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，解决了现有的糖类化合物含量检测方案虽然多，尤其是针对乳果糖进行检测时，大多都是过于繁杂，误差较大的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体包括以下步骤：

S1.溶液配制

取乳果糖对照品适量，加水溶解后，再用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液作为对照品溶液，取试验样品同法配制成每1ml中约含4mg的溶液作为供试品溶液；

S2.含量检测

分别取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图中乳果糖的峰面积，按峰面积以外标法计算乳果糖的含量。

优选的，所述步骤S2的液相色谱仪中流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，其体积比为22∶78，磷酸盐缓冲液的浓度为10mmo l/l。

优选的，所述步骤S2中液相色谱仪为示差折光检测器。

优选的，所述步骤S2的液相色谱仪中，流速：调节流速使主峰保留时间为15min-25min，柱温：40℃，检测器温度：40℃。

优选的，所述步骤S2的液相色谱仪中采用粒径为3μm，且以氨丙基键合硅胶为填充剂的色谱柱。

优选的，所述步骤S1中的溶剂为乙腈-水(4：1)，且需先加水溶解后，再用溶剂稀释。

(三)有益效果

本发明提供了一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法。具备以下

有益效果：

本发明提供了一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，主要是针对乳果糖进行的检测，而乳果糖是一种糖类化合物，且在紫外光范围内吸收度不高，故本发明采用示差折光检测器进行样品检测，示差折光检测器专属性强，有利于本发明在利用高效液相色谱法进行检测时，能有效地对糖类化合物的含量进行测定，以控制产品质量，该方法尚未有任何报道，操作简单，对其质量控制具有良好作用。

附图说明

图1为本发明空白溶液的液相色谱图；

图2为本发明系统溶液的液相色谱图；

图3为本发明对照品溶液的液相色谱图；

图4为本发明供试品溶液的液相色谱图；

图5为本发明的线性试验数据表图；

图6为本发明的回收率试验数据表图；

图7为本发明的进样精密度试验结果表图；

图8为本发明的对照品溶液稳定性试验结果表图；

图9为本发明的供试品溶液稳定性试验结果表图；

图10为本发明的耐用性试验结果表图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.5602g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(22：78)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：40℃；检测器温度：40℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例2：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.2486g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(22：78)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：40℃；检测器温度：40℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例3：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.8722g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(22：78)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：40℃；检测器温度：40℃

色谱柱：NH

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例4：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.5602g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(20：80)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：40℃；检测器温度：40℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例5：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.5602g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(24：76)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：40℃；检测器温度：40℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例6：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.5602g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(22：78)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：35℃；检测器温度：35℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例7：

本发明实施例提供一种糖类化合物含量检测的液相色谱分析方法，具体方法如下：

流动相A：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠二水合物1.5602g，溶于1000ml水中)

流动相B：乙腈

流动相比例：流动相A-流动相B(22：78)

流速：调节流速使主峰保留时间为15分钟至25分钟；进样量：10μl；柱温：45℃；检测器温度：45℃

色谱柱：氨丙基键合硅胶色谱柱

溶剂：水；稀释剂：乙腈-水(4∶1)

HPLC乳果糖含量检测的方法

供试品溶液：取试验样品，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取乳果糖对照品适量，加水溶解后，用稀释剂稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。

测试：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算乳果糖的含量。

实施例8：

如图1-10所示，本发明实施例提供一种验证方法，用于验证本发明方法的可行性，具体方法如下：

线性试验

取乳果糖对照品适量，用稀释剂稀释成0.4mg/ml、0.8mg/ml、2.0mg/ml、3.2mg/ml、4.0mg/ml、4.8mg/ml、6.0mg/ml的供试品溶液。精密量取上述线性溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果见图5。

图5中以峰面积为纵坐标Y，以该样品的浓度为横坐标X，进行线性回归，得线性方程相关系数r＝0.9994。

试验结果表明：乳果糖在0.3982～5.974mg/ml浓度范围内，峰面积与浓度间具有良好的线性关系。

准确度试验

取乳果糖对照品适量，精密称定，加水溶解后，用稀释剂稀释并制成每1ml中约含4mg的溶液作为对照品溶液；取试验样品约320mg、400mg、480mg精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。每个比例平行配制3份，作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液及对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算测得量和回收率，结果见图6，结果表明，本测定方法的准确度良好。

进样精密度试验

取“线性试验”项下100％浓度供试品溶液，照上述色谱条件连续进样6针，计算对照品溶液峰面积的变化情况，结果见图7，结果表明，连续进样6针，乳果糖峰面积平均值为349334，RSD为1.1％，符合规定(RSD≤2.0％)，说明该条件下乳果糖进样精密度良好。

溶液稳定性试验

精密量取供试品溶液及对照品溶液各10μl，分别于0、2、4、6、8、14、20、24、28、32、36、40、48、56、60、64小时进样，记录色谱图，考察峰面积的变化情况，结果见图8和图9。

由图8的试验结果表明，本品对照品溶液中乳果糖峰面积平均值为344693，RSD为1.3％，说明对照品溶液在64小时内稳定性良好。

由图9试验结果表明，本品供试品溶液中乳果糖峰面积平均值为360061，RSD为0.94％，说明供试品溶液在64小时内稳定性良好。

耐用性试验

按照乳果糖含量测定检查的色谱条件分别作适当变动(柱温：45℃、35℃；检测器温度：45℃、35℃；流动相水相浓度：8mmo l/l、12mmo l/l；流动相水相与有机相比例：24：76、20：80；色谱柱：同型号不同批号)，考察在不同条件下乳果糖的含量变化、理论塔板数情况，结果见图10。

试验结果表明：在拟定含量测定方法下，通过适当更改流动相的比例、盐浓度、柱温和不同型号色谱柱后，各物质相对保留时间没有明显变化，乳果糖理论板数均符合要求，各物质之间的分离度均符合要求，同一批样品的含量测定结果基本一致，说明本品含量测定方法耐用性良好。

本发明方法应用示差折光检测器，示差检测器对糖类检测灵敏度高，稳定性好，操作方便，适用于乳果糖含量的检测。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。