一株能够降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15和应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其是一株能够降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15和应用。

背景技术

高尿酸血症是指嘌呤代谢紊乱，尿酸（uric acid，UA）水平高于正常值所导致的代谢性疾病。2021年《高尿酸血症和痛风病证结合诊疗指南》中提出在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸浓度＞420μmol/L，即被认为是高尿酸血症。据统计，沿海地区患高尿酸血症的人群比例较高。高尿酸血症的发生主要是由于人体内尿酸增多或者尿酸排泄减少导致的，约2/3的尿酸盐从肾脏排泄，1/3的尿酸盐从肠道排泄，肠道菌群构成的微生态系统已被认为是高尿酸血症治疗的新靶点。肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）是肾功能的重要指标，肾脏损害伴随着尿素氮和血肌酐的增加。目前治疗高尿酸血症主要依赖药物治疗，如别嘌呤醇、非布司他、苯溴马隆和丙磺舒等，但是肾脏和胃肠道等毒副作用较大，因此肠道菌群的研究具有重要意义。

肠道菌群与高尿酸血症关系。升高的血尿酸会反向诱发机体及肠道的慢性炎症，改变肠道内环境，从而影响菌群种类分布及数量的变化，加重机体高尿酸血症症状。Shao等通过核磁共振氢谱及高通量测序技术分析了痛风患者和健康人群各26份粪便样品，发现痛风患者的粪便菌群多样性明显下降，而拟杆菌属、紫单胞菌科和厌氧绳菌科等致病性细菌类群的丰富度却显著升高。另外，早在1952年，Buzard等率先通过体外抑菌实验证明，肠道细菌对尿酸具有分解作用。植物乳杆菌ZXH-1304S降解肌酐和尿酸的活力研究（《食品工业科技》2019年）中已报道植物乳杆菌ZXH-1304S在Wistar大鼠体内可显著降低肌酐和尿酸的含量。中国发明专利公开号：CN115287240A，公开日期：2022年11月4日，公布了一株具有高尿酸血症及痛风防治作用的植物乳杆菌及其应用，主要是通过长期灌胃高尿酸模型小鼠，植物乳杆菌LTJ48可显著其血清尿酸水平，具有明显的降尿酸效果，并对高尿酸模型下小鼠具有护肾作用。中国发明专利公开号：CN115287239A，公开日期：2022年11月4日，公布了一株具有体外降解核苷、嘌呤及降尿酸能力的植物乳杆菌及其应用，植物乳杆菌LTJ1具有优秀的体外降解核苷、嘌呤能力，并能在细胞水平降低尿酸水平。越来越多的证据指出，肠道菌群不仅与高尿酸血症的发生有关，而且与高尿酸血症的治疗效果息息相关。

现代女性由于生活压力的不断增加，饮食作息的不合理化，卫生情况以及激素水平的变化导致体内微生态系统紊乱，乳杆菌减少，大肠埃希菌、葡萄球菌等致病菌数量增加，打破了阴道的菌群平衡，引起感染。导致引起多种疾病如细菌性阴道炎、外阴阴道假丝酵母菌病、需氧菌性阴道病等。大量研究表明，细菌感染后可活化内皮细胞、巨噬细胞及中性粒细胞等，释放大量炎症因子，如IL-6、IL-8 及TNF-α，对机体产生损伤、破坏。目前市售的私处护理产品通常加入中药提取物、抗生素和其他化学杀菌剂，这类产品虽然杀菌率高，短期内可杀死大量女性阴道致病菌群，但在杀死致病菌同时也会杀死阴道常驻菌和益生菌群，破坏私处微生态平衡，甚至降低对致病菌的抵抗力。因此，微生物疗法，对于女性私处健康意义重大。

中国发明专利公开号：CN104721668A，公开日期：2015年6月24日，公开了一种私处护理液，由下述物质组成：猪苓、苍术、百部、蛇床子、土茯苓、苦参、山茱萸、菊花、石榴皮、白矾、苹果香精、苯甲酸。经检测，该私处护理液对淋病双球菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌、疱疹病毒具有很强的杀灭能力，但有益的乳杆菌也被杀灭，不利于私处整体环境平衡，破坏私处整体抵抗力。中国发明专利公开号：CN112675219A，公开日期：2015年6月24日，公布了一种修复女性私处微生态平衡的组合物及其制备方法和应用。其中组合物由五倍子、蛇床子、丹皮、苦参与植物乳杆菌ATCC8014发酵产物简单搭配而成，对51名女性进行了实体检测，对菌群密集度，菌群多样性以及优势菌株进行了检测，但比较粗略。中国发明专利公开号：CN115137758A，公开日期：2022年10月4日，公布了一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用。提供植物乳杆菌CGMCC NO.16871菌丝体，可降低促炎因子IL-4、IL-1β和TNF-α的含量，减轻炎症损伤，从而发挥抵抗疾病的作用，维持阴道的健康环境。因为是菌丝体，提供的是一种凝胶制剂，而未提供清洗液。同时采用牛津平板法测定对大肠埃希菌和葡萄球菌的抑菌作用，无法得出确定数值，且体外操作，与实际阴道环境真实情况差距较大。同时以上菌株没有降低尿酸的报道。

因此，开发出一种杀菌能力强，又不会破坏私处微生态平衡，同时能够修复女性私处微生态平衡的产品是非常有意义的。

本发明主要是采用单菌株，即植物乳杆菌OPB15，可以降低小鼠尿酸，同时其上清液为植物乳杆菌 OPB15 发酵产物用作洗液可以修复女性私处微生态平衡。植物乳杆菌OPB15为本实验室首次独立分离得到，并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，尚未有植物乳杆菌OPB15对高尿酸血症小鼠调节肠道菌群，降低尿酸，以及同时修复女性私处微生态平衡的相关专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一株能够降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15和应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一株能够降低小鼠尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15，其名称为：OPB15，分类名称为：植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），保藏编号为：CGMCC No.27735，保藏日期：2023年6月29日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

进一步地，所述植物乳杆菌OPB15具有以下生物学特性：

（1）菌体特征：革兰氏阳性杆状细菌，不形成孢子，非运动性的细菌；

（2）菌落特征：直径为1.0～1.2mm，正面圆形，中央凸起，边缘整齐，表面湿润光滑，不透明，稍有酸味；

（3）生长特性：在37℃恒温条件下，在MRS培养基培养12h到达对数末期；

（4）对模拟胃肠液具有较强耐受能力。

进一步地，所述植物乳杆菌OPB15具有降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的功能。

如上所述的植物乳杆菌OPB15在制备能够降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的普通食品和/或特殊功能食品和/或保健食品和/或化妆品和/或医疗器械和/或消毒品和/或药物中的应用。

进一步地，所述普通食品、特殊功能食品、保健食品、药物、化妆品、医疗器械、消毒品具有如下至少一种作用：

降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平，具体为降低小鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平，增加尿液中肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）排泄量；

或者，降低高尿酸血症小鼠尿酸水平，恢复小鼠结肠绒毛长度，改善结肠组织形态；

或者，降低高尿酸血症小鼠尿酸水平，恢复受损结肠组织、增加杯状细胞数量；

或者，发酵产物修复私处微生态平衡，具体为增加有益菌乳酸菌数量，减少致病菌大肠埃希菌和葡萄球菌数量；

或者，发酵产物修复私处微生态平衡，具体为降低小鼠阴道分泌物中IL-6、IL-8及 TNF-α水平。

进一步地，所述植物乳杆菌OPB15为活菌株、菌株代谢物或灭活的菌株。

进一步地，所述药物或化妆品还含有药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体包括：填充剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。

进一步地，所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉或糊精中的一种或多种；所述稀释剂为乙醇或甘油中的一种或两种；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种；所述粘合剂为淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种；所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。

如上所述的植物乳杆菌OPB15在制备发酵食品、后生元、酵素中的应用。

进一步地，所述应用包括将植物乳杆菌OPB15作为发酵微生物，利用食品原料进行发酵。

本发明取得的优点和积极效果为：

1、本发明植物乳杆菌OPB15能够耐受胃肠道环境，提高胃肠道存活率，有利于菌株定植，可用于制备降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的功能性菌剂、食品和药物。

2、本发明植物乳杆菌OPB15能够恢复绒毛长度，改善肠腺排列；恢复受损的结肠组织、增加杯状细胞数量，有效改善肠道菌群结构。

3、本发明植物乳杆菌OPB15可显著降低血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）的水平，增加尿液中肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）排泄量。

4、本发明植物乳杆菌OPB15发酵产物增加有益菌乳酸菌数量，减少致病菌大肠埃希菌和葡萄球菌数量；其发酵产物可降低小鼠阴道分泌物中IL-6、IL-8 及 TNF-α水平；恢复私处微生态平衡，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明中植物乳杆菌OPB15的菌落形态图；

图2为本发明中植物乳杆菌OPB15的显微镜图片；

图3为本发明中植物乳杆菌OPB15的基因组序列BLAST结果距离树图；

图4为本发明中植物乳杆菌OPB15对高尿酸血症小鼠结肠组织H&E染色图；

图5为本发明中植物乳杆菌OPB15对高尿酸血症小鼠结肠组织AB-PAS染色图。

一株能够降低小鼠尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15，其名称为：OPB15，分类名称为：植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），保藏编号为：CGMCC No.27735，保藏日期：2023年6月29日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，下属实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

具体实施例中所涉及的各种实验操作，均为本领域的常规技术，本文中没有特别注释的部分，本领域的普通技术人员可以参照本发明申请日之前的各种常用工具书、科技文献或相关的说明书、手册等予以实施。

一株能够降低小鼠尿酸、修复女性私处微生态平衡的植物乳杆菌OPB15，其名称为：OPB15，分类名称为：植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），保藏编号为：CGMCC No.27735，保藏日期：2023年6月29日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

较优地，所述植物乳杆菌OPB15具有以下生物学特性：

（1）菌体特征：革兰氏阳性杆状细菌，不形成孢子，非运动性的细菌；

（2）菌落特征：直径为1.0～1.2mm，正面圆形，中央凸起，边缘整齐，表面湿润光滑，不透明，稍有酸味；

（3）生长特性：在37℃恒温条件下，在MRS培养基培养12h到达对数末期；

（4）对模拟胃肠液具有较强耐受能力。

较优地，所述植物乳杆菌OPB15具有降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的功能。

如上所述的植物乳杆菌OPB15在制备能够降低尿酸、修复女性私处微生态平衡的普通食品和/或特殊功能食品和/或保健食品和/或化妆品和/或医疗器械和/或消毒品和/或药物中的应用。

较优地，所述普通食品、特殊功能食品、保健食品、药物、化妆品、医疗器械、消毒品具有如下至少一种作用：

降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平，具体为降低小鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平，增加尿液中肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）排泄量；

或者，降低高尿酸血症小鼠尿酸水平，恢复小鼠结肠绒毛长度，改善结肠组织形态；

或者，降低高尿酸血症小鼠尿酸水平，恢复受损结肠组织、增加杯状细胞数量；

或者，发酵产物修复私处微生态平衡，具体为增加有益菌乳酸菌数量，减少致病菌大肠埃希菌和葡萄球菌数量；

或者，发酵产物修复私处微生态平衡，具体为降低小鼠阴道分泌物中IL-6、IL-8及 TNF-α水平。

较优地，所述植物乳杆菌OPB15为活菌株、菌株代谢物或灭活的菌株。

较优地，所述药物或化妆品还含有药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体包括：填充剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。

较优地，所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉或糊精中的一种或多种；所述稀释剂为乙醇或甘油中的一种或两种；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种；所述粘合剂为淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种；所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。

如上所述的植物乳杆菌OPB15在制备发酵食品、后生元、酵素中的应用。

较优地，所述应用包括将植物乳杆菌OPB15作为发酵微生物，利用食品原料进行发酵。

具体地，相关制备及检测如下：

实施例1：植物乳杆菌OPB15的筛选

（一）乳杆菌的分离筛选

（1）取0.1mL酸奶样品（取自新疆喀什地区喀什市阿瓦提乡牧民家中自酿酸奶）接种于脱脂乳培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养48h。用接种环挑取少许菌液，划线接种于MRS琼脂培养基平皿中。

（2）48小时后，根据菌落的形状，大小，颜色等，用接种环挑取不同的菌落进行划线分离纯化。

（3）经过革兰氏染色和过氧化氢酶分析，保留革兰氏染色阳性杆菌和过氧化氢酶阴性菌。

（4）获取最终菌株的菌体及菌落特征：革兰氏阳性杆状细菌，不形成孢子，非运动性的细菌（图1）；直径约1.0～1.2mm，正面圆形，中央凸起，边缘整齐，表面湿润光滑，不透明，稍有酸味（图2）。

（二）乳杆菌的分子生物学鉴定

（1）单菌基因组抽提

（A）将所筛选得到的乳杆菌培养过夜；

（B）使用索莱宝细菌基因组DNA提取试剂盒，货号1600，取培养过夜的菌悬液1mL于1.5mL离心管中，12000r/min离心1min，尽量吸出上清；

（C）向菌体中加入200μL终浓度为20mg/mL的溶菌酶，37℃处理40min；

（D）向（C）步骤中所得混合液加入溶液A（10mmol/L、pH＝8.0的Tris-HCl和1mmol/L的EDTA混合液，浓度为0.08g/mL的SDS，浓度为1.5mol/L的NaCl），用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20μL的rRNaseA（10mg/mL），充分颠倒混匀，室温静置30min；

（E）向管中加入20μL的蛋白酶K，充分混匀，55℃消化60min；消化期间颠倒离心管数次，直至样品呈清亮粘稠状，证明样品消化完全；

（F）向管中加入200μL溶液B（体积比为酚：氯仿：异戊醇＝25:24:1的混合液），充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30 min，沉淀会消失；

（E）向管中加入200μL无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，将溶液跟絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min；

（F）12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中；

（G）向吸附柱中加入600μL漂洗液（75%乙醇），12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中，重复一次；

（H）12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于50℃温箱放置数分钟；

（I）将吸附柱放到灭菌后的1.5mL离心管中，向吸附膜中央悬空滴加100μL经65℃水浴预热的脱洗液（通用），室温放置5min，12000rpm离心1min；

（J）离心所得洗脱液再加入到吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到该乳杆菌的基因组DNA。

所述乳杆菌的 16S rDNA 基因序列如下：

TTAGGCGGCTGGTTCCTAAAAGGTTACCCCACCGACTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTACTCTCGCGAGTTCGCAACTCGTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACCAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTGATAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTATCCATGTCCCCGAAGGGAACGTCTAATCTCTTAGATTTGCATAGTATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAATGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCATTCATCGTTTACGGTATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTACCCATACTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTTTCCCAGTTTCCGATGCACTTCTTCGGTTGAGCCGAAAGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTAGCCGTGGCTTTCTGGTAATACCGTCATACCTGAACAGTTACTCTCAGATATGTTCTTCTTTAACAACNGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTCACTGCTATACATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTCGAGTGAGTGGCGAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGTTTGAAAGATGGCTTCGGCTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAACTCAAGGAATTGACGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGACCTTACCNNTCTGACATACTATGCAAATCTAGAGAT。

（2）16S r DNA PCR

细菌16S r DNA 50μLPCR反应体系：Taq酶24μL；dd H

PCR条件：94℃5min (即step1)；94℃30s(即step2)；55℃30s(即step3)；72℃30s(即step4)；step2至step4（30×）；72℃5min。

制备1％琼脂糖凝胶，之后将PCR产物与10000×loading buffer混合，上样量2μL，120V跑30min，然后进行凝胶成像；

将得到PCR产物送专业测序公司，将得到的测序结果与使用BLAST在Gen Bank中进行搜索和相似性比对（见图3），将其鉴定为植物乳杆菌的菌株，-80℃保存。

实施例2：植物乳杆菌OPB15对模拟胃肠液具有良好的耐受性

体外模拟胃液：将0.1mol/L磷酸钾缓冲液的pH值调至2.5，加入胃蛋白酶（10g/L），混合均匀后过0.22μm无菌膜，即可得到模拟胃液。

体外模拟肠液：将0.1mol/L磷酸钾缓冲液的pH值调至6.8，加入胰酶（10g/L），猪胆盐（3g/L），混合均匀后过0.22μm无菌膜，即可得到模拟肠液。

模拟胃消化：

取3.0 mL植物乳杆菌OPB15的培养液离心3min，收集菌丝体，置于3.0 mL、 pH值2.5的模拟胃液环境中，37 ℃、90 r/min 厌氧条件下模拟胃液消化。于0、1.0、2.0、3.0 h时取样，采用稀释涂布平板计数法对活菌进行计数，并计算存活率。

模拟肠消化：

取3.0 mL植物乳杆菌OPB15的培养液离心3min，收集菌丝体，置于3.0 mL、pH 值为6.8的模拟肠液环境中，37 ℃、120 r/min 厌氧条件下模拟肠液消化。于0、2.0、4.0、6.0、8.0 h时取样，采用稀释涂布平板计数法对活菌进行计数，并计算存活率。

存活率(％)以该培养液中在取样时的活菌数与在第0h时活菌数之比计算，以％表示。实验结果如表1、表2所示，结果表明，植物乳杆菌OPB15对人工模拟胃肠液具有较好的耐受能力。

实施例3：植物乳杆菌OPB15发酵产物的制备

(1)将4℃保存的甘油管植物乳杆菌OPB15接种于MRS液体培养基中活化，36℃培养18h，活化2次；再将活化的菌种接于MRS液体试管培养基中，36℃培养18h，得到种子液；

(2)按5％(V/V)的接种量将种子液接入于发酵罐中，发酵温度为36℃，pH值控制在6.0，发酵时间为48h，得发酵液；

(3)将上述发酵液进行离心，上清液与沉淀进行分离，上清液即为植物乳杆菌发酵产物，离心条件为12000rpm离心25min。加入质量百分数分别为0.5％的海藻酸钠、2％壳聚糖和3.5％透明质酸钠作为保护剂。将上述液体用高压破碎机破碎，设置温度为4℃，破碎压力为150MPa，即得植物乳杆菌OPB15的发酵产物。

实施例4：各实验组对高尿酸血症小鼠尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）的影响。

SPF级Balb/c小鼠40只，雄性，体质量为18～20 g，温度20～25 ℃，相对湿度(50±5)%，光照时间12 h /12 h环境下饲养。随机分为4组，每组10只，设为正常组（即空白对照组）、模型组、阳性对照组和实验组（即植物乳杆菌组）。①空白对照组：给予正常饲料喂养，溶媒单独灌胃；②模型组：给予氧嗪酸钾（250 mg/kg，溶媒为质量浓度5%CMC-Na 水溶液）；③阳性对照组：给予氧嗪酸钾（250 mg/kg，溶媒为质量浓度5%CMC-Na 水溶液）+别嘌醇 (5mg/kg)；④实验组（即植物乳杆菌组）：给予氧嗪酸钾（250 mg/kg，溶媒为质量浓度5%CMC-Na水溶液）+植物乳杆菌组（1.8×10

如表3所示，各组血清中 UA、BUN、Cr 水平比较，模型组小鼠经灌胃氧嗪酸钾后，UA水平明显高于正常组 (P<0.05)，表明高尿酸血症小鼠模型造模成功。

经过给与植物乳杆菌14d 治疗后，与模型组比较，益生菌实验组血清中尿酸水平显著降低 (P<0.05)，同时益生菌组小鼠血清尿酸水平接近于阳性组小鼠尿酸水平。另外从数据可以观察到，实验组的尿液中排泄量也呈现较高水平，与正常组水平接近。与模型组比较，血清肌酐和尿素氮水平均有明显的降低 (P<0.05)，益生菌组对血清尿素氮水平的改善作用略低于阳性组，血清肌酐的水平从1.03μmol /L降低至0.66 μmol /L，改善幅度接近一倍，效果显著(P<0.05)。尿素氮与肌酐的变化，表明益生菌对肾脏具有一定的保护作用。同时尿液中排泄的肌酐水平为37.22 mmol/L，接近于正常组。

实施例5：植物乳杆菌OPB15对模型小鼠结肠组织的病理变化的影响

针对实施例4，用无菌手术剪将清洗干净的结肠组织样本剪下2 cm，放置于10%福尔马林溶液固定过夜，然后制备结肠组织石蜡切片。切片用苏木精-伊红染色（HE染色），阿利新蓝-过碘酸雪夫染色（AB-PAS染色）。光学显微镜下观察结肠组织病理学变化，并拍照保存（图4和图5）。

图4 HE染色图片表明，模型组绒毛最短且松散破碎，肠组织肠壁较对照组明显变薄，黏液层厚度变薄，黏膜下层损伤；与模型组相比，阳性对照组和益生菌组小鼠的肠腺排列整齐，结构基本正常，黏液层厚度增厚，绒毛长度显著提高。表明植物乳杆菌OPB15可改善结肠组织形态，从而保护肠道。

图5AB-PAS染色图片表明，模型组中的杯状细胞明显减少，并且排列松散。而益生菌实验组和阳性组可使杯状细胞恢复至整齐状态，增加杯状细胞数量，修复受损的结肠组织，从而保护肠道。

实施例6：发酵产物对细菌性阴道病模型小鼠的治疗作用

植物乳杆菌OPB15发酵产物组（见实施例3）。大肠埃希菌（ATCC25922）和金黄色葡萄球菌（ATCC25923）由中国食品药品检定研究所提供。将大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌分别配置成浓度为1.0×10

SPF级Balb/c小鼠40只，雌性，体质量为18～20 g，温度20～25 ℃，相对湿度(50±5)%，光照时间12 h /12 h环境下饲养。随机分为4组，每组10只，设为正常对照组、模型组、阳性对照组和实验组（即植物乳杆菌OPB15发酵产物组）。①正常对照组：生理盐水冲洗阴道（0.05mL/100g）；②模型组：生理盐水冲洗阴道（0.05mL/100g）；③阳性对照组：妇炎康凝胶治疗（0.01g/100g）；④实验组：植物乳杆菌OPB15发酵产物涂抹治疗（0.02g/100g）；连续治疗14天。停药3d 后每只小鼠用无菌 PBS 液充分灌洗阴道，每只均取阴道灌洗液 200 μL，并收集于无菌试管中。收集小鼠阴道灌洗液，同时取小鼠部分子宫组织，经研磨、裂解、匀浆、离心，取上清液，按IL-6、IL-8和TNF-α测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）操作说明进行阴道灌洗液IL-6、IL-8和TNF-α 水平检测。采用酶标仪检测 450 nm 波长下各孔吸光度（A）值。

从表4中可以看出，模型组与正常组相比，小鼠阴道内的大肠埃希菌和葡萄球菌的数量显著上升（P＜0.05），乳酸菌数量呈现显著下降（P＜0.05），说明，阴道内致病菌增加，有益处的乳酸菌数量下降。发酵产物实验组与模型组比较，经过发酵产物治疗小鼠的大肠埃希菌和葡萄球菌的数量显著下降（P＜0.05），而乳酸菌数量显著增加（P＜0.05），说明经过发酵产物治疗后，阴道内微生物环境显著改善，有益菌增多，致病菌减少，且乳酸菌数量比妇炎康阳性对照组显著增多。同时从数据中看到，实验组乳酸菌数量也优于正常组，有利于治疗后长期维护阴道微生态环境平衡。

如表5所示，与正常对照组比较，模型小鼠阴道分泌物中炎症因子IL-6、IL-8及TNF-α水平显著增加（P＜0.05）。给予发酵产物干预后，IL-6、IL-8及 TNF-α水平，分别为48.12，44.78和72.41，与阳性对照组的45.45，39.54和65.07水平接近，与模型对照组相比较，IL-6、IL-8及 TNF-α水平下降显著（P＜0.05）。说明，发酵产物具有显著降低炎症因子水平的作用，与阳性对照组妇炎康效果接近。本研究结果表明，发酵产物可通过抑制小鼠阴道分泌物中IL-6、IL-8 及 TNF-α 合成，继而缓解细菌感染后的阴道炎症反应。

对比例1：

具体实施方式同实施例4，区别在于，将植物乳杆菌OPB15替换为植物乳杆菌JYLP-326（中科嘉亿市售菌株），测定高尿酸血症小鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平。

结果如表6，显示植物乳杆菌JYLP-326对血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）的影响分别为4.35±1.03mg/L、0.99±0.12mg/L和20.66±1.90mg/L，明显高于植物乳杆菌OPB15的2.87±1.09mg/L、0.66±0.53mg/L和15.01±0.14mg/L。以上数据说明植物乳杆菌对高尿酸血症小鼠血清中尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平影响显著，且明显优于植物乳杆菌JYLP-326。

对比例2

具体实施方式同实施例6，区别在于，将植物乳杆菌OPB15替换为植物乳杆菌JYLP-326（中科嘉亿市售菌株），测定阴道病阴道分泌物中IL-6、IL-8和TNF-α水平。

结果如表7，显示植物乳杆菌JYLP-326对阴道分泌物中IL-6、IL-8和TNF-α水平的影响分别为59.12±1.45pg/mL、70.30±1.53pg/mL和100.14±5.87pg/mL，明显高于植物乳杆菌OPB15的48.12 ±4.01pg/mL、44.78 ±2.58pg/mL和72.41±5.41pg/mL。以上数据说明植物乳杆菌OPB15对阴道病小鼠阴道分泌物中IL-6、IL-8和TNF-α水平影响显著，且明显优于植物乳杆菌JYLP-326。植物乳杆菌OPB15具有较好的缓解细菌感染后的阴道炎症反应。

尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。