一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法

技术领域

本发明属于脸部美容技术领域，具体为一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法。

背景技术

面部是人的第一块招牌，关系到面子的问题都是大问题，很多人用各种化妆品来修饰面部，达到一个面部美容的目的。面部美容包括脸颊美容、眼部美容、唇部美容。

作为人体中含量最多，分布最广的胶原蛋白，具有良好的生物相容性和生物活性。市场上的化妆品所宣称的胶原蛋白，都只是说到胶原蛋白可以补水，能锁住肌肤的水分，补充胶原蛋白可以增强皮肤弹性，防止皮肤衰老，所以现在大多数的人喜欢利用胶原蛋白进行脸部美容，但是并不是所有胶原蛋白都可以具有理论上说的全部功效。市面上护肤品所添加的胶原蛋白，并不是纯正的胶原蛋白，而是胶原蛋白的衍生物，如明胶或明胶的水解产物，由于提取胶原蛋白的时候，因萃取技术不足或制造高温破坏，导致胶原蛋白的三螺旋结构被破坏，使得分子呈现不规则键结，未能完全保留胶原蛋白的活性结构，所以导致它的功效也并不完整，可免强用于皮肤，起到一定的营养和保湿的作用。因此需要对脸部美容的方法加以改进，同时提出一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法，便于更好的解决上述提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决上述提出的问题，提供一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法，所述的一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法包括以下原材料：自体胶原蛋白、烟酰胺、细胞生长因子、透明质酸、保湿剂、去离子水、左旋维生素C，所述原材料的配比为：自体胶原蛋白35％-40％、烟酰胺10％-20％、细胞生长因子5％-10％、透明质酸10％-15％、保湿剂5％-10％、去离子水20％-30％、左旋维生素C20％-25％。

在一优选的实施方式中，所述自体胶原蛋白的制备步骤为：

步骤一：首先通过采血针对人体进行采血，并将血液进行首次离心；

步骤二：将首次离心后的血液倒入全血分离器，并进行二次离心；

步骤三：在经过二次离心后，血液在全血分离器中分为三层，分别为血浆层、白膜层和红细胞层，并通过导管将血浆层、白膜层和红细胞层的液体分别导流进入不同的试管；

步骤四：取出适量的血浆层以及白膜层液体按比例混合；

步骤五：将混合后的液体进行初步纯化，并通过血透滤过技术进行进一步的纯化从而得到自体胶原蛋白。

在一优选的实施方式中，所述细胞生长因子即为白细胞介素-2，又叫做IL2，所述细胞生长因子是由多细胞来源(主要由活化T细胞产生)，又具有多向性作用的细胞因子(主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化)，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖；能活化T细胞，促进细胞因子产生，刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产生细胞因子，诱导LAK细胞产生，促进B细胞增殖和分泌抗体，激活巨噬细胞。

在一优选的实施方式中，所述IL2的制备方法为：

①用RPMI1640按1∶1将血液稀释，然后重层于菲可液面上，以1500r/min离心30min，取白细胞层，用RPMI1640洗2次，按1～3×10细胞/ml浓度加入10％胎牛血清RPMI1640，注入一装有磁棒的大瓶中，置37℃搅拌培养4天；

②取出，分装于50ml离心管中，1500r/min离心20min，弃上清液，将细胞悬浮于1％胎牛血清RPMI1640培养液中，使细胞浓度为106细胞/ml，同时加入纯质PHA1～2μg/ml以及多种B淋巴母细胞株，使其浓度为106细胞/ml，37℃搅拌培养18～24h后，取出以1500r/min离心30min，取上清，用045μg滤膜过滤除菌，滤液即为粗制IL2；

③在4℃下将硫酸铵粉末按50％饱和量加入上述粗制IL2中，搅拌2h，12000g离心30min，取上清液，再加入80％饱和硫酸铵，4℃过夜，次日以12000g离心30min，弃上清液，将沉淀溶于01％PEG6000的1∶2PBS溶液(pH值73)中，置真空负压浓缩透析器中透析浓缩至所需容量；

④用2×180cm的过滤柱及PBS(同上)，以80ml/h流速过滤。将各管洗脱液用紫外分光光度计280nm检测其OD值，同时将几种不同分子量的标准蛋白也用相同条件过滤及检测其OD值，绘出IL2及标准蛋白OD值的曲线，将各管洗脱液过滤除菌后，作白细胞生物活性试验，按试验结果绘出曲线，找出具有最高IL2活性的几管洗脱液，混合后，作下一步精制；

⑤将上述混合后的洗脱液加入BlueSepharose柱中，流速约15ml/h，按每管10ml收集流出液，当样品全部流出柱中以后，用上述PBS洗涤样品柱，再用梯度NaCl溶液(从0075mol/L至06mol/LNaCl的PBS溶液)洗脱，按2ml/管收集洗脱液，NaCl溶液梯度及流速均由梯度混合器调节控制，洗脱完毕后，作各管OD值及NaCl浓度的测定，各管洗脱液过滤除菌后，作出生物活性测定，将峰值前后的数管洗脱液混合，即为精制的IL2，置-20℃冰箱保存。

在一优选的实施方式中，所述左旋维生素C是唯一可直接被人体肌肤所吸收的维生素C形式，它具有促进胶原蛋白增生，修复紫外线对肌肤的伤害，淡化黑色素等功能。

在一优选的实施方式中，所述烟酰胺是维生素B3的一种衍生物，可以修复受损的角质层脂质屏障，提高皮肤抵抗力，衰老的皮肤NADH和NADPH的含量日渐衰减，两者控制着细胞内合成和分解的全过程，烟酰胺作为NADH和NADPH的前体，可通过调节两者体内水平的平衡发挥作用，高水平的NADPH发挥强大抗氧化作用，阻止蛋白质和糖发生自发性糖基化反应，进而减少衰老皮肤的发黄，减轻面部菜色，改善肤质。

在一优选的实施方式中，所述透明质酸是D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位玻尿酸，分子式是(C

在一优选的实施方式中，所述保湿剂主要成分为糖类同分异构体，所述糖类同分异构体是由小麦D-葡萄糖制取的糖类同分异构体的复合物，它的组成相似于在角质层内发现的NMF中的内源碳水化合物的复合物，糖类同分异构体与角化细胞的角蛋白中赖氨酸的ε-氨基结合，其独特的结合机理确保活性物不会被洗掉，继续保持改善皮肤水合作用，直至脱皮作用将角化细胞除去，因而，糖类同分异构体支持角质层水合作用，改善中期至长期脱皮作用。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是:

1、本发明中，左旋维生素C能抑制酪胺酸酶及还原黑色素，并淡化已形成的斑点，抑制黑色素形成，且左旋维生素C是制造胶原蛋白必须成分,而胶原蛋白是构成真皮的主要成分，若缺乏会影响胶原蛋白的形成,造成皮肤松弛老化，并产生皱纹，愈老化的皮肤所含左旋维生素C的含量愈少，故须随时补充，同时皮肤受到外界环境影响，会形成游离自由基，自由基会破坏正常组织内的胶原蛋白、弹力素，造成老化、产生细纹、皱纹，左旋维生素C能有效中和自由基，改善肌肤纹路，还原受损肌肤，让皮肤紧实有弹性。

2、本发明中，烟酰胺是维生素B3的一种衍生物，可以修复受损的角质层脂质屏障，提高皮肤抵抗力，衰老的皮肤NADH和NADPH的含量日渐衰减，两者控制着细胞内合成和分解的全过程，烟酰胺作为NADH和NADPH的前体，可通过调节两者体内水平的平衡发挥作用，高水平的NADPH发挥强大抗氧化作用，阻止蛋白质和糖发生自发性糖基化反应，进而减少衰老皮肤的发黄，减轻面部菜色，改善肤质。

附图说明

图1为本发明中自体胶原蛋白的制作流程图；

图2为本发明中全血分离器中血液分层图；

图3为本发明中细胞生长因子制备流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

参照图1-3，一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法，一种自体胶原蛋白再生修复技术及祛皱的方法包括以下原材料：自体胶原蛋白、烟酰胺、细胞生长因子、透明质酸、保湿剂、去离子水、左旋维生素C，所述原材料的配比为：自体胶原蛋白35％-40％、烟酰胺10％-20％、细胞生长因子5％-10％、透明质酸10％-15％、保湿剂5％-10％、去离子水20％-30％、左旋维生素C20％-25％。

自体胶原蛋白的制备步骤为：

步骤一：首先通过采血针对人体进行采血，并将血液进行首次离心；

步骤二：将首次离心后的血液倒入全血分离器，并进行二次离心；

步骤三：在经过二次离心后，血液在全血分离器中分为三层，分别为血浆层、白膜层和红细胞层，并通过导管将血浆层、白膜层和红细胞层的液体分别导流进入不同的试管；

步骤四：取出适量的血浆层以及白膜层液体按比例混合；

步骤五：将混合后的液体进行初步纯化，并通过血透滤过技术进行进一步的纯化从而得到自体胶原蛋白。

细胞生长因子即为白细胞介素-2，又叫做IL2，所述细胞生长因子是由多细胞来源(主要由活化T细胞产生)，又具有多向性作用的细胞因子(主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化)，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖；能活化T细胞，促进细胞因子产生，刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产生细胞因子，诱导LAK细胞产生，促进B细胞增殖和分泌抗体，激活巨噬细胞。

IL2的制备方法为：

①用RPMI1640按1∶1将血液稀释，然后重层于菲可液面上，以1500r/min离心30min，取白细胞层，用RPMI1640洗2次，按1～3×10细胞/ml浓度加入10％胎牛血清RPMI1640，注入一装有磁棒的大瓶中，置37℃搅拌培养4天；

②取出，分装于50ml离心管中，1500r/min离心20min，弃上清液，将细胞悬浮于1％胎牛血清RPMI1640培养液中，使细胞浓度为106细胞/ml，同时加入纯质PHA1～2μg/ml以及多种B淋巴母细胞株，使其浓度为106细胞/ml，37℃搅拌培养18～24h后，取出以1500r/min离心30min，取上清，用045μg滤膜过滤除菌，滤液即为粗制IL2；

③在4℃下将硫酸铵粉末按50％饱和量加入上述粗制IL2中，搅拌2h，12000g离心30min，取上清液，再加入80％饱和硫酸铵，4℃过夜，次日以12000g离心30min，弃上清液，将沉淀溶于01％PEG6000的1∶2PBS溶液(pH值73)中，置真空负压浓缩透析器中透析浓缩至所需容量；

④用2×180cm的过滤柱及PBS(同上)，以80ml/h流速过滤。将各管洗脱液用紫外分光光度计280nm检测其OD值，同时将几种不同分子量的标准蛋白也用相同条件过滤及检测其OD值，绘出IL2及标准蛋白OD值的曲线，将各管洗脱液过滤除菌后，作白细胞生物活性试验，按试验结果绘出曲线，找出具有最高IL2活性的几管洗脱液，混合后，作下一步精制；

⑤将上述混合后的洗脱液加入BlueSepharose柱中，流速约15ml/h，按每管10ml收集流出液，当样品全部流出柱中以后，用上述PBS洗涤样品柱，再用梯度NaCl溶液(从0075mol/L至06mol/LNaCl的PBS溶液)洗脱，按2ml/管收集洗脱液，NaCl溶液梯度及流速均由梯度混合器调节控制，洗脱完毕后，作各管OD值及NaCl浓度的测定，各管洗脱液过滤除菌后，作出生物活性测定，将峰值前后的数管洗脱液混合，即为精制的IL2，置-20℃冰箱保存。

左旋维生素C是唯一可直接被人体肌肤所吸收的维生素C形式，它具有促进胶原蛋白增生，修复紫外线对肌肤的伤害，淡化黑色素等功能。

烟酰胺是维生素B3的一种衍生物，可以修复受损的角质层脂质屏障，提高皮肤抵抗力，衰老的皮肤NADH和NADPH的含量日渐衰减，两者控制着细胞内合成和分解的全过程，烟酰胺作为NADH和NADPH的前体，可通过调节两者体内水平的平衡发挥作用，高水平的NADPH发挥强大抗氧化作用，阻止蛋白质和糖发生自发性糖基化反应，进而减少衰老皮肤的发黄，减轻面部菜色，改善肤质。

透明质酸是D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位玻尿酸，分子式是(C

保湿剂主要成分为糖类同分异构体，所述糖类同分异构体是由小麦D-葡萄糖制取的糖类同分异构体的复合物，它的组成相似于在角质层内发现的NMF中的内源碳水化合物的复合物，糖类同分异构体与角化细胞的角蛋白中赖氨酸的ε-氨基结合，其独特的结合机理确保活性物不会被洗掉，继续保持改善皮肤水合作用，直至脱皮作用将角化细胞除去，因而，糖类同分异构体支持角质层水合作用，改善中期至长期脱皮作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。