一种用于防治青枯病的杀菌组合物、杀菌剂及应用

技术领域

本发明属于杀菌组合物领域，具体涉及一种用于防治青枯病的杀菌组合物、杀菌剂及应用。

背景技术

植物细菌性青枯病(Bacterial Wilt)是由青枯劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的毁灭性土传维管束病害，病原菌分布范围广泛，可侵染烟草、番茄、马铃薯等50余科的数百种作物(Middleton and Hayward，1990，Seo et al.，2012)。青枯病菌从植株根部或伤口侵染，侵入木质部维管束并快速通过维管系统进入植物地上部分，对茄科作物危害尤为严重。烟草是我国重要经济作物，近年来随着烟地连作年限的不断增加，烟草青枯病流行和蔓延的速度加快，严重田块发病率达100％，已成为烟草生产的主要病害之一。

烟草青枯病菌具有较高的遗传变异性和环境适应能力，菌系复杂，危害严重又难以防治，是烟草生产中的重要限制因素，其有效的防治措施一直是生产中的重点和难点。目前，生产上对青枯病的防治主要采取农业防治、生物防治和化学防治相结合的综合措施。由于不同的防治方法均存在着局限或制约，且细菌性青枯病与真菌、卵菌病害常混合发生，因此对青枯病的防治仍无十分有效的措施。

化学药剂以其高效、速效的特点在该病害的防治中发挥着不可替代的重要作用，但目前已登记用于青枯病防治的药剂除生防菌外，仅有8个非高效药剂，主要为中生菌素、噻菌铜、氯化苦、噻森铜、氯尿·硫酸铜、三氯异氰尿酸、甲霜·恶霉灵和甲霜·福美双，药剂品种十分有限(中国农药信息网，张幸，2018)。

申请公布号为CN107668048A的中国发明专利申请公开了防治番茄灰霉病的复配杀菌剂，由四霉素和氟啶胺按质量配比3:1组成。目前，尚缺少对青枯病防治效果优异的化学药剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于防治青枯病的杀菌组合物，可有效防治青枯病。

本发明的第二个目的在于提供一种用于防治青枯病的杀菌剂。

本发明的第三个目的在于提供上述杀菌剂在防治植物细菌性青枯病方面的应用。

为实现上述目的，本发明的用于防治青枯病的杀菌组合物的技术方案是：

一种用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和增效杀菌剂组成，所述增效杀菌剂选自春雷霉素、噻霉酮中的一种；氟啶胺和春雷霉素的质量比为1:80；氟啶胺和噻霉酮的质量比为1：(55-80)或4:1。

氟啶胺(fluazinam)是由日本石原株式会社研制的保护性杀菌剂(Anema et al.，1992)，为吡啶胺类化合物中的代表性药剂，高效低毒，防治谱广泛，2008年在我国获得农药登记，对烟草黑胫病菌、根肿菌及无性型真菌类的大部分植物病原菌及螨类都有良好的抑菌活性和防效(Matheron and Porchas，2000，Donald et al.，2001，牟文君等，2018)。

氟啶胺自上世纪80年代投入生产以来，尚未见单独对氟啶胺产生抗性的田间菌株，已有的研究表明，植物病原真菌对氟啶胺的抗药性发展缓慢。且氟啶胺与其它作用机制的杀菌剂无交互抗药性，可以用来治理已有的抗药性风险(Korolev et al.,2011，Ziogaset al.,2006，Kalamarakis et al.,2000)。氟啶胺在我国的登记对象为辣椒疫病、马铃薯晚疫病和大白菜根肿病，近年来其防治对象、使用频次和防治面积在我国及世界范围内得到逐年递增，但仍主要以真菌、卵菌为主，尚未应用于细菌病害的防治中。

本发明的用于防治青枯病的杀菌组合物，氟啶胺具有氧化磷酸化解偶联活性，氟啶胺与春雷霉素、噻霉酮按一定比例复配时，在青枯病防治方面具有增效作用。

本发明的用于防治青枯病的杀菌剂的技术方案是：

一种用于防治青枯病的杀菌剂，有效成分(活性成分)为氟啶胺和增效杀菌剂，所述增效杀菌剂选自春雷霉素、噻霉酮中的一种；氟啶胺和春雷霉素的质量比为1:80；氟啶胺和噻霉酮的质量比为1：(55-80)或4:1。

上述杀菌剂，对烟草青枯病的防治效果好，为农药减量高效使用提供了技术支撑，有利于实现烟草青枯病病害的科学防治。

在以上有效成分的基础上，可根据本领域公知的技术制成农药上允许的剂型。优选的，杀菌剂为水分散颗粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、乳油、水乳剂或微乳剂。

杀菌剂在防治植物细菌性青枯病方面的应用，所述杀菌剂的有效成分为氟啶胺和增效杀菌剂，所述增效杀菌剂选自春雷霉素、噻霉酮中的一种；氟啶胺和春雷霉素的质量比为1:80；氟啶胺和噻霉酮的质量比为1：(4-80)或4:1。

优选的，氟啶胺和噻霉酮的质量比为1：(10-80)、1：(20-80)、1：(30-80)、1：(40-80)、1：(50-80)、1：(55-80)、1：(60-80)、1：(70-80)。

经实验证明，上述杀菌剂对青枯雷尔氏菌引起的烟草青枯病具有增效防治作用，有利于农药的减量高效使用。

在以上杀菌组合物的基础上，可采用常规方法制备成任意一种适于农业使用的剂型，如可湿性粉剂、悬浮剂、水分散颗粒剂、乳油、水乳剂、微乳剂等。制剂中杀菌组合物为有效成分，其质量含量可以为制剂总质量的0.5～90％。

上述剂型中，除了包含上述杀菌组合物，一般还使用一种或多种农药学上可接受的助剂，以及其他有益于有效成分在制剂中稳定发挥药效的物质，这些物质是农药制剂中常用的或允许使用的各种成分。所述助剂包括润湿分散剂、稳定剂、防冻剂、崩解剂、增稠剂、消泡剂、有机溶剂、载体等，助剂的具体选择和用量可根据配方要求通过常规试验确定。以下对助剂的可选择品种进行示例说明。具体地：

所述润湿分散剂可选自十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、木质素磺酸钙、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、拉开粉、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯、羟甲基纤维素等中的任意一种或多种。

所述稳定剂可选自柠檬酸、环氧大豆油、山梨酸钠、丁基缩水甘油醚、苯基缩水甘油醚、二萘酚、一萘酚等中的任意一种或多种。

所述防冻剂可选自甘油、丙二醇、乙二醇、尿素、氯化钠等中的任意一种。

所述崩解剂可选自硫酸铵、氯化钙、膨润土、磷酸二氢胺等中的任意一种或多种。

所述增稠剂可选自黄原胶、阿拉伯胶、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、海藻酸钠、丙烯酸系聚合物、大豆蛋白、糊精、硅酸、硅酸铝镁等中的任意一种或多种。

所述消泡剂可选自硅油类消泡剂、硅酮类消泡剂等中的任意一种。

所述有机溶剂可选自异丙醇、丁醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇、苯甲醇、植物油等中的任意一种或多种。

所述载体可选自硅藻土、滑石、膨润土、高岭土、白炭黑、方解石、凹凸棒土等中的任意一种或多种。

附图说明

图1为本发明实验例中烟草青枯病菌生长曲线；

图2为本发明实验例中烟草青枯病菌对氟啶胺的敏感基线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的实施方式作进一步说明。以下实施例中，氟啶胺(有效成分98％)，购自上海弼众商贸有限公司。纳米铜溶液、纳米银溶液、纳米硫溶液，浓度均为10

氟啶胺用二甲基亚砜配置成10

春雷霉素用灭菌水配置成浓度为10

以下实施例中，不同浓度的氟啶胺溶液、春雷霉素溶液、噻霉酮溶液均由母液和相应的溶剂配制而成。配制春雷霉素溶液使用的溶剂为灭菌水。配制氟啶胺溶液、噻霉酮溶液使用的溶剂为二甲基亚砜。

一、本发明的用于防治青枯病的杀菌剂的具体实施例

实施例1

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，由浓度为5μg/mL的氟啶胺溶液、浓度为5μg/mL的春雷霉素溶液按体积比1:80复配而成。

氟啶胺溶液、春雷霉素溶液的溶液密度可按1g/ml计，进行质量换算后，氟啶胺、春雷霉素质量比为1:80。

实施例2

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，由浓度为0.14μg/mL的氟啶胺溶液、浓度为0.14μg/mL的噻霉酮溶液按体积比4:1复配而成。

在该实施例的基础上，控制氟啶胺溶液、噻霉酮溶液浓度相同，均为0.1、0.18、0.2、0.25、0.3、0.35、0.5、1、5μg/mL，按体积比4:1复配，可形成相应的杀菌剂。

实施例3

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，与实施例2的区别仅在于，氟啶胺溶液、噻霉酮溶液按体积比1:4复配。

实施例4

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，与实施例2的区别仅在于，氟啶胺溶液、噻霉酮溶液按体积比1:20复配。

实施例5

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，与实施例2的区别仅在于，氟啶胺溶液、噻霉酮溶液按体积比1:40复配。

实施例6

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，与实施例2的区别仅在于，氟啶胺溶液、噻霉酮溶液按体积比1:80复配。

实施例7

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，由以下原料制成：氟啶胺1g，春雷霉素80g，十二烷基磺酸钠2g，木质素磺酸钙2g，蔗糖5g，硅藻土10g。

按照质量准确取各原料，混合均匀，得到可湿性粉剂。

实施例8

本实施例的用于防治青枯病的杀菌剂，由以下原料制成：氟啶胺8g，噻霉酮2g，木质素磺酸钠10g，二丁基萘磺酸钠10g，十二烷基苯磺酸钠15g，聚乙烯吡咯烷酮10g，淀粉10g，蔗糖5g，硅藻土30g。

按照质量准确取各原料，混合均匀后超微气流粉碎，造粒，得到水分散颗粒剂。

二、本发明的用于防治青枯病的杀菌组合物的具体实施例

实施例9

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和春雷霉素按质量比1:80组成。

实施例10

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和噻霉酮按质量比4:1组成。

实施例11

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和噻霉酮按质量比1:4组成。

实施例12

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和噻霉酮按质量比1:20组成。

实施例13

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和噻霉酮按质量比1:40组成。

实施例14

本实施例的用于防治青枯病的杀菌组合物，由氟啶胺和噻霉酮按质量比1:80组成。

三、本发明的用于防治青枯病的杀菌剂的应用，请参见实验例部分。

四、实验例

以下实验例中，采集江西省抚州市宜黄、黎川、乐安、广昌、资溪、南丰、崇仁发病烟田的青枯病发病烟株，经分离培养、鉴定，确认为青枯雷尔氏菌。分离的青枯菌地理来源为崇仁县凤岗村2株；黎川县4株，来自德胜乡、湖坊乡、潭溪乡；宜黄县5株，分别来自于黄陂镇和二都镇；广昌县的9株则采自头陂镇、旴江镇和长桥乡；南丰县10株来自于傅坊乡、太和镇、太源乡；资溪县2株来自于高阜镇；乐安县8株来自招携镇和增田镇；具体示于表1中。

表1江西省抚州市分离获得的烟草青枯病菌菌株信息

选取4株青枯病菌，在生长曲线测定仪上连续培养65h，监测烟草青枯病菌的生长动态，绘制青枯菌的生长曲线，如图1所示。

由图1可知，4～19h青枯菌快速生长，处于对数生长期，19～38h青枯菌的生长相对平稳，38h后青枯菌开始逐渐衰亡。在药剂敏感性试验中，选定培养19h左右的菌液，此时菌株生长活力较高，测定菌液OD600值代表青枯病菌的生长量，通过比较OD值来分析药剂处理对青枯病菌生长的影响。

实验例1烟草青枯病菌对氟啶胺的药剂敏感性测定

采用生长曲线测定仪测定烟草青枯雷尔氏菌对氟啶胺的药剂敏感性。

从生长好的青枯病菌划线平板上挑取单菌落加入NA液体培养基中振荡培养19h，备用。将不同浓度的氟啶胺溶液按照1:100(体积比)加NA液体培养基中，使最终体系中氟啶胺的浓度分别为0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml；其中，“0”是以只加二甲基亚砜的NA培养液为对照。

加样板每孔加入不同浓度药液3μL，营养肉汤250μL，青枯菌菌液50μL，每个浓度重复3次。加样板置入生长曲线测定仪，28～30℃、每隔30min测定OD值。药剂对青枯病菌的生长抑制率计算公式为：抑制率＝(OD

从江西省7个地区共分离获得40株烟草青枯病菌，药剂敏感性结果如表2所示。

表2烟草青枯病菌对氟啶胺的敏感性分布

表2的结果表明，氟啶胺对所有供试菌株的EC

根据烟草青枯病菌敏感性的分布情况，建立青枯病菌对5种药剂的敏感基线，如图2所示。

图2中，烟草青枯病菌菌株对氟啶胺的敏感性频率分布呈连续单峰曲线，表明供试菌株对氟啶胺敏感，可用于青枯病的防治。敏感基线均呈正态分布，为连续的单峰曲线，未出现抗药性亚群体，可用于田间抗性菌株监测。

实验例2复配药剂的联合毒力测定

在单剂毒力测定的基础上，按氟啶胺分别与纳米硫、纳米铜、纳米银、春雷霉素、噻霉酮按照体积比为80：1、40：1、20：1、4:1、1:1、1:4、1:20、1:40、1:80共9个配比测定对青枯菌的抑制率，复配药剂的终浓度见表3。

表3复配药剂的终浓度

表3中，氟啶胺与纳米硫按80:1复配比例进行复配时，分别在0、0.12、0.16、0.2、0.4、0.8六个水平下实验，以浓度0.12μg/ml为例，是浓度为0.12μg/ml的氟啶胺溶液和浓度为0.12μg/ml的纳米硫溶液按体积比80:1复配。氟啶胺溶液由氟啶胺母液(10

采用Wadley方法对复配制剂进行联合作用评价，评价公式为：

混剂的理论有效抑制中浓度EC

式中：a、b分别为氟啶胺与纳米农药(或春雷霉素、噻霉酮)的复配比例，％；EC(A)

增效系数SR＝EC

式中：EC

SR≤0.5，表明两种药剂复配具有拮抗作用；SR在0.5～1.5时，表明两种药剂复配具有相加作用；SR≥1.5，表明两种药剂复配具有增效作用。

2.1氟啶胺与纳米硫复配对烟草青枯病菌的联合毒力

分别测定氟啶胺(0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml)、纳米硫溶液单剂(0、2、4、40、60、80μg/ml)、氟啶胺与纳米硫按不同比例复配后的杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的毒力作用，结果如表4所示。

表4氟啶胺与纳米硫复配对烟草青枯病菌的联合毒力

由表4可知，氟啶胺与纳米硫的9个复配配比对烟草青枯病菌均有抑制作用，EC

根据以上单剂和复配药剂对烟草青枯病菌的抑制率，用Wadley法评价氟啶胺与纳米硫复配的联合毒力作用。从表4可见，大部分复配比例均具有相加作用；当氟啶胺与纳米硫按照1:1的体积比复配时，两者具有拮抗作用，增效系数为0.2706，在应用时应避免此复配比例；当氟啶胺与纳米硫按照1:40的体积比进行复配时，增效系数最大，为1.5955，表明在此体积比下复配两者具有增效作用。

2.2氟啶胺与纳米铜复配对烟草青枯病菌的联合毒力

分别测定氟啶胺(0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml)、纳米铜溶液单剂(0、1、2.5、5、10、30μg/ml)、氟啶胺与纳米铜按不同比例复配后的杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的毒力作用，结果如表5所示。

表5氟啶胺与纳米铜复配对烟草青枯病菌的联合毒力

由表5可知，氟啶胺与纳米铜按照9个比例进行复配，不同杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的EC

2.3氟啶胺与纳米银复配对烟草青枯病菌的联合毒力

分别测定氟啶胺(0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml)、纳米银溶液单剂(0、1、2.5、5、10、30μg/ml)、氟啶胺与纳米银按不同比例复配后的杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的毒力作用，结果如表6所示。

表6氟啶胺与纳米银复配对烟草青枯病菌的联合毒力

从表6可以看出，氟啶胺与纳米银在不同复配比例下对青枯病菌均有抑制作用，9种复配杀菌剂混合物对烟草青枯病菌的EC

采用Wadley方法评价氟啶胺与纳米银的联合毒力作用，当氟啶胺与纳米银按照20:1、4:1、1:1、1:4复配时，两者表现为拮抗作用；当氟啶胺与纳米银按照80:1、40:1、1:20、1:40、1:80复配时，两者具有相加作用，且当氟啶胺与纳米银1:20复配时，增效系数最高，为1.4067。

2.4氟啶胺与春雷霉素复配对烟草青枯病菌的联合毒力

分别测定氟啶胺单剂(0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml)、春雷霉素单剂(0、0.5、1、3、6、20μg/ml)、氟啶胺与春雷霉素按不同比例复配后的杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的毒力作用，结果如表7所示。

表7氟啶胺与春雷霉素复配对烟草青枯病菌的联合毒力

从表7可以看出，氟啶胺与春雷霉素在不同复配比例下对青枯病菌均有抑制作用，9种复配杀菌剂混合物对烟草青枯病菌的EC

2.5氟啶胺与噻霉酮复配对烟草青枯病菌的联合毒力

分别测定氟啶胺单剂(0、0.14、0.18、0.25、0.35、0.5μg/ml)、噻霉酮单剂(0、0.3、0.5、0.8、4、8μg/ml)、氟啶胺与噻霉酮按不同比例复配后的杀菌剂组合物对烟草青枯病菌的毒力作用，结果如表8所示。

表8氟啶胺与噻霉酮复配对烟草青枯病菌的联合毒力

从表8可以看出，氟啶胺与噻霉酮在不同复配比例下对青枯病菌均有抑制作用，9种复配杀菌剂混合物对烟草青枯病菌的EC

氟啶胺与5中药剂的复配结果总结于表9中。

表9氟啶胺与5种药剂的最佳复配比例

烟草青枯病菌具有较高的遗传变异和传播繁殖能力，且常与其他真菌、卵菌病害混合发生，在适宜的环境条件下，极易造成病害爆发流行，对烟草生产带来毁灭性灾害。化学防治在烟草青枯病的防治中具有重要作用，目前防治细菌的药剂主要以农用抗生素和铜制剂为主，相比与防治真菌药剂，杀细菌药剂品种匮乏，深度挖掘作用机制独特、防治效果优异的化学药剂，对烟草等作物青枯病的防治和抗性治理尤为重要。

本发明的抗菌剂，为烟草青枯病的防治提供更多备选药剂。氟啶胺在我国已获得农药登记，且前期研究表明氟啶胺对烟草黑胫病也具有良好的抑制作用，将氟啶胺与纳米硫的复配使用，可以扩大药剂防治谱、延缓抗药性产生，达到一次施药兼防多种病害的效果，为农药减量高效使用提供理论依据。