一种马齿苋配方颗粒及其制备与检测方法

技术领域

本发明涉及中药配方颗粒技术领域，具体涉及一种马齿苋配方颗粒及其制备与检测方法。

背景技术

本品为马齿苋科植物马齿苋的干燥地上部分。夏、秋二季采收，除去残根和杂质，洗净，略蒸或烫后晒干。分布于中国南北各地。马齿苋分布于中国南北各地，不同产地马齿苋的品质差异以总黄酮的含量为指标，较低的为1.1%左右，较高的为3.8%左右，不同批次，产区的马齿苋药材中总黄酮含量有较大差异，所含咖啡酸的差异不大。

马齿苋配方颗粒是由马齿苋中药材经过水提取、浓缩、减压干燥、干法制粒等工艺制成，可以替代马齿苋中药材供临床调配使用。具有清热解毒、凉血止血、止痢。用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血。

《中华人民共和国药典》(2020年版)没有公布马齿苋的含量的检测方法，因此，对马齿苋配方颗粒质量控制难以达到量化的标准。马齿苋配方颗粒药物中总黄酮等含量对马齿苋配方颗粒的含量检测非常重要，本发明公布的马齿苋配方颗粒含量检测方法使中药的安全性和质量控制得到保障。

发明内容

本发明提供一种马齿苋配方颗粒及其制备与检测方法，以实现对马齿苋配方颗粒的制备及含量检测。具体包括以下步骤：

一种马齿苋配方颗粒制备方法：

步骤一、提取：取马齿苋饮片，加水煎煮二次，第一次加14倍量水，提取20min；第二次加12倍量水，提取20min，过滤后得滤液，合并两次滤液；

步骤二、浓缩：

液浓缩至相对密度1.10-1.30（50℃-55℃）；

步骤三、干燥：

减压干燥（50-55℃, 真空度0.090-0.01MPa），粉碎过80目筛网；

步骤四、混合：

干膏细粉与可溶性淀粉（1:0.15），0.1%硬脂酸镁混匀；

步骤五、干法制粒：

干法制粒，过16目筛整粒，即得。

优选的，所述步骤一第一次煎煮加14倍量的水煎煮20min。

优选的，所述步骤一第二次煎煮加12倍量的水加水煎煮20min。

优选的，所述步骤三干燥是采用减压干燥进行干燥。

一种马齿苋配方颗粒含量检测方法：

步骤一、对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5 mg于50 ml容量瓶中加入无水乙醇10ml溶解，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.1mg/ml的对照品溶液。

步骤二、标准曲线的制备：吸取上述对照品液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，分别加30%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加30%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，置比色皿中，在510 nm波长处测定吸光度。用0ml作为空白，以芦丁含量的浓度为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。

步骤三、供试品溶液的制备：精密称取研细的马齿苋配方颗粒1.0 g于50ml容量瓶中加60%-80%乙醇25ml，超声提取30-60min，放凉，再用60%-80%乙醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液1.0ml，置于10mL量瓶中，分别加60%-80%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加60%-80%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，即得。

步骤四、测定：照紫外-可见分光光度法（中国药典2020年版四部通则0401）测定。

优选的，在供试品溶液的制备过程中为了充分释放供试品，可以使用研磨或机械处理的方法对马齿苋配方颗粒进行处理 ；更优选的，可以对马齿苋配方颗粒进行研磨处理。

优选的，在供试品溶液的制备过程中采用乙醇进行提取 ；更优选的，使用70％乙醇进行提取。

优选的，在供试品溶液的制备过程中提取时间为30-60min；更优选的提取时间为45min。

附图说明

图1是工艺流程图。

图2是本发明对照品波长扫描图谱。

图3是本发明空白辅料扫描图谱。

具体实施方式

本发明的马齿苋配方颗粒制备方法和含量测定方法采用的色谱条件、样品处理方法均为新方法。下面通过实施例进一步阐述本发明的实质性特点和显著作用。

实施例1

1、提取工艺研究

马齿苋配方颗粒是由马齿苋饮片经水提 、浓缩、干燥、制粒再干燥而成的颗粒，研究中以标准汤剂为参照物，重点考察含量测定和特征峰等，明确从中药饮片、中间体、到成品的特征图谱传递规律，保证制成品中药配方颗粒与标准汤剂质量一致。

传统中药汤剂多用水煎煮,目前国内已生产的配方颗粒的提取溶剂一般为水,因此选用水作为提取溶剂。

1.1 正交实验设计

为确切反映制备工艺条件,选择最佳提取工艺条件对马齿苋配方颗粒剂的提取工艺进行正交试验如下表。以清膏中的总黄酮含量为指标,计算提取转移率和出膏率结果及方差分析。

因素水平表

一般采用3因素3水平试验，若不考虑交互作用，可利用正交表

1.2 正交试验样品的制备

取马齿苋饮片100g，采用三口烧瓶为容器，以电加热套为加热设备，加水煎煮2次，正交试验设计表进行，每煎均为武火加热煮沸后开始计时，并转文火保持微沸至规定时间，煎液滤过，合并滤液，50℃减压浓缩至相对密度1.2-1.3，即得。

1.3 正交试验结果（出膏率和含量测定转移率）

正交实验L

方差分析

结论：根据试验结果，以含量测定为主要考察指标，提取率为此要考察指标，同时结合成本，能耗，效率综合考虑选出提取条件为：加水煎煮二次，第一次加14倍量水，提取20min；第二次加12倍量水，提取20min，煎液滤过，合并滤液。

1.4 提取工艺稳定性考察

三批提取汇总

2、成型工艺研究

2.1 浓缩、干燥方法的确定

⑴浓缩

由于药材水提液直接水浴浓缩时间较长，而且易对有些成分造成影响，故浓缩工艺选择减压浓缩。

仪器：旋转蒸发器 RE-52AA（上海亚荣生化仪器厂）

选择浓缩温度和真空度作为考察因素，浓缩条件为50-55℃，真空度为0.090-0.095MPa。

⑵干燥

选择减压干燥(50-55℃, 0.090-0.01MPa)与常压干燥(50-55℃),以干燥效率、粉末外观为指标，进行考察，见下表。

仪器：DZ-2BCII 真空干燥箱。

减压真空干燥，常压干燥两种方式进行比较，结果见下表。

结论：试验结果显示常压干燥干燥时间过长，干燥效率低。相比之下真空减压干燥方法优于常压干燥。

3、辅料及制粒方式研究

3.1湿法制粒

我们选择糊精、可溶性淀粉，采用湿法制粒，考察粘合剂，辅料的种类和用量，并与标准汤剂对比进行考察。

3.1.1润湿剂的选择

拟定干膏粉与糊精的比例为1：0.15，使用不同浓度的乙醇制粒，根据所制颗粒成型性的情况，选择合适的润湿剂。

根据成型性的情况，暂定75%乙醇作为润湿剂。

3.1.2辅料的种类

辅料选择比较常用糊精和可溶性淀粉，拟定干膏粉与辅料的比例为1：0.15，分别使用75%乙醇制粒，根据所制颗粒的情况，选择合适的辅料。

暂定辅料为可溶性淀粉。

3.1.3辅料量

辅料选择可溶性淀粉，拟定不同的干膏粉与辅料的比例，分别使用75%乙醇制粒，根据所制颗粒的情况，选择合适的辅料用量。

结果：根据颗粒成形性，溶化性比较，颗粒松散，粉末较多。湿法制粒不适用于马齿苋配方颗粒。

3.2 干法制粒

选用可溶性淀粉与硬脂酸镁为辅料，干膏粉与可溶性淀粉的比例为1:0.15，加1‰硬脂酸镁，干法制粒。

结论：根据颗粒成形性、溶化性比较，颗粒成形性较好,粉末较少。选用制粒方法为：可溶性淀粉与硬脂酸镁为辅料，干膏粉与可溶性淀粉的比例为1:0.15，加1‰硬脂酸镁，干法制粒（压力：1.5-2.0MPa；转速：15rpm；Gk40型干式造粒机）。

通过对马齿苋配方颗粒制备工艺中关于提取、干燥方式、制粒方式、辅料用量等关键参数的实验统计与分析，确定马齿苋配方颗粒的制备工艺为：取马齿苋饮片，加水煎煮二次，第一次加14倍量水，提取20min；第二次加12倍量水，提取20min，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度1.10-1.30（50℃-55℃），减压干燥（50-55℃, 真空度0.090-0.01MPa），粉碎，干膏细粉与可溶性淀粉（1:0.15），0.1%硬脂酸镁混匀，干法制粒，过16目筛制粒，整粒，即得。

实施例2

1、仪器设备与试剂

仪器：UV-2102 pc分光光度计。

检测波长：510nm。

试剂：亚硝酸钠：天津市河东区红岩试剂厂，分析纯。

硝酸铝：天津市河北区海晶精细化工厂，分析纯。

氢氧化钠：天津市恒兴化学试剂制造有限公司，分析纯。

芦丁对照品：中国食品药品检定研究所 批号100080-201811。

无水乙醇：天津市天力化学试剂有限公司，分析纯。

2 、波长扫描

精密称取芦丁对照品适量，加30%乙醇溶液溶解制成每1ml中约含0.5mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录Ⅳ A）在200～800nm波长处进行紫外扫描，在510nm波长处有最大吸收。

3 、专属性

精密量取适量空白辅料，照供试品溶液配制方法配置，在200～800nm波长范围内扫描,结果空白辅料对测定无干扰。

4、提取考察

精密称取同一供试品三份各0.5g于50ml容量瓶中分别加入（95%，80%，70%，60%，30%）乙醇25ml，超声提取80min，放凉，再分别用（95%，80%，70%，60%，30%）乙醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液1.0ml，置于10mL量瓶中，分别加（95%，80%，70%，60%，30%）乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加（95%，80%，70%，60%，30%）乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，即得。结果见下表。

结果：依据试验结果提取溶剂定为70%乙醇。

精密称取同一供试品三份各0.8g于50ml容量瓶中分别加入70%乙醇25ml，分别超声提取,30、45、60、80、100min，放凉，再分别用70%乙醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液1.0ml，置于10mL量瓶中，分别加70%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加70%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，即得。结果见下表。

结果：依据试验结果超声提取时间定为45 min。从上述试验结果可知，以70%乙醇为溶剂，超声提取45min，基本提取完全。

5、溶液制备方法

对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5 mg于50 ml容量瓶中加入无水乙醇10ml溶解，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.1mg/ml的对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取本品0.8 g于50ml容量瓶中加70%乙醇25ml，超声提取45min，放凉，再用70%乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，备用。

6 、标准曲线的绘制

吸取上述对照品液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，分别加30%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加30%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，置比色皿中，在510 nm波长处测定吸光度。用0ml作为空白，以芦丁含量的浓度为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。

7、重复性

标准曲线

精密量取供试品溶液1.00mL，共6份，分别置于10mL量瓶中，分别加70%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加70%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，置比色皿中，在510 nm波长处测定吸光度。用70%乙醇作为空白，计算芦丁的含量，考察方法的重复性，结果见下表。

重复性试验结果

试验结果表明，本方法重复性较好。

8、中间精密度（由不同工作人员操作）

标准曲线

精密量取供试品溶液1.00mL，共6份，分别置于10mL量瓶中，分别加70%乙醇至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加70%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min，置比色皿中，在510 nm波长处测定吸光度。用70%乙醇作为空白，计算芦丁的含量，考察方法的中间精密度，结果见下表。

中间精密度性试验结果

试验结果表明，本方法中间精密度较好。

9、回收率试验

A：精密称取本品0.4 g于50ml容量瓶中加70%乙醇25ml，超声提取45min，放凉，再用70%乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，备用。

B：准确度样品：精密量取A溶液1.00mL与0.1mg/ml的对照品溶液3ml，置于10mL量瓶中，加70%乙醇至5mL，加5％亚硝酸钠溶液0.5mL，振摇放置5min。加10％硝酸铝溶液0.5mL，振摇放置6 min。再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL，摇匀，并加70%乙醇定容至刻度。摇匀，放置15 min。配置上述溶液6份，置比色皿中，在510 nm波长处测定吸光度。用70%乙醇作为空白，计回收率。结果见下表。

标准曲线

回收率试验测定结果

结论：结果表明，本法准确度良好。

10 、稳定性试验

标准曲线

取重复性项下一个样品，于不同时间进行测定，考察溶液的稳定性，结果见下表。

结论： 0-30min时的RSD%为1.73；0-40min时的RSD%为2.33；本方法溶液在30 min内溶液基本稳定。

15批饮片信息

15批配方颗粒与15批标准汤剂对比研究

按照药典委发布的《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》推荐的方法，制备“标准汤剂”与配方颗粒进行对比研究，可见配方颗粒与标准汤转移率比值均符合《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》的范围70%-130%。经方法学验证的含量检测方法重现性良好，测定结果准确可靠，使马齿苋配方颗粒质量控制达到量化的标准，对马齿苋配方颗粒的安全性和质量控制得到保障。