一种复合天然植物添加剂及其应用、动物饲料

技术领域

本发明涉及动物饲料技术领域，尤其涉及一种复合天然植物添加剂及其应用、动物饲料。

背景技术

肠道承担食物消化、营养吸收、抵抗疾病以及代谢等多重任务，肠道健康受损会对营养代谢、免疫调控、疾病爆发和氧化还原状态等方面产生诸多不利影响。肠道屏障在维持机体内环境稳定以及营养物质消化、吸收和利用等方面起重要作用，是机体健康的重要保障。肠道屏障一旦损伤，即可引起营养功能障碍、抗体损失、肠道菌群失衡、免疫力下降等，对机体健康产生不利影响。这种改变不仅危害严重而且隐蔽性较强，给畜牧业造成巨大损失。因此促进肠道健康的重要性日益增加。

现有技术中，天然植物添加剂具有低残留、低耐药性、低毒副作用、高安全性等优点，具体可分为中草药、植物提取物、香精油、有机酸等，有研究报道在单一物质基础上的复合天然植物添加剂可能存在更好的使用效果，复合天然植物添加剂已成为当前热点。然而，目前研究更集中在复合精油、复合植物提取物、精油联合有机酸等方向，少有植物精油与中草药联用的报道。因此利用中草药复合植物精油来促进肠道健康的应用具有现实意义。

红景天主要活性成分包括红景天苷、没食子酸、红景天多酚、黄酮类和多糖类化合物等，具有抗炎、抗氧化、抗抑郁、抗衰老等作用。百里香酚是从牛至、百里香等天然植物中提取得到的化合物，具有促进动物生长、抗菌、抗炎、抗氧化和促进肠道健康等功能。至今为止，未有两者结合的相关报道，对于两者联用效果是否优于单独使用的情况也未可知。

故而提出一种复合天然植物添加剂及其应用、动物饲料用以解决或缓解上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种复合天然植物添加剂及其应用、动物饲料。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种复合天然植物添加剂，包括包括红景天和百里香酚。

优选地，所述红景天和百里香酚原料成分配比为4-6、3-5。

优选地，所述红景天和百里香酚原料成分配比为90-110mg/kg、30-50mg/kg。

优选地，所述红景天和百里香酚原料成分配比为100mg/kg、40mg/kg。

优选地，所述红景天和百里香酚均为固体粉末状。

本发明还提供一种复合天然植物添加剂在改善动物肠道健康中的应用。

优选地，所述改善肠道健康具体包括：改善肠道结构的完整性，降低脂多糖的含量，提高MUC-2含量，提高SIgA含量，提高肠道紧密连接基因的相对表达量中的至少一种。

本发明还提供一种动物饲料，包括上述的复合天然植物添加剂。

本发明具有以下有益效果：

红景天联合百里香酚添加后，与HC组(模型组)相比，空肠绒毛的完整性得到显著改善，血浆脂多糖(LPS)含量也呈现显著下降的趋势。此外，黏蛋白2(MUC-2)的分泌量明显增加，而空肠和回肠中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的含量也呈显著增加态势。更为重要的是，空肠紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin和Claudin-1)的基因表达量也呈现出显著上调的趋势。因此，综合上述结果可得出结论：红景天联合百里香酚的添加能够显著增强动物肠道的屏障功能，为进一步研究肠道健康和相关疾病的治疗提供了有益的启示。

附图说明

图1为本发明红景天联合百里香酚对肠道形态的影响的数据图；

图2为本发明红景天联合百里香酚对脂多糖含量的影响的数据图；

图3为本发明红景天联合百里香酚对MUC-2含量的影响的数据图；

图4为本发明红景天联合百里香酚对SIgA含量的影响的数据图；

图5为本发明红景天联合百里香酚对肠道紧密连接基因的相对表达量的影响的数据图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

一种动物饲料，包括复合天然植物添加剂，天然复合添加剂包括红景天和百里香酚，原料成分配比为：红景天100mg/kg，百里香酚40mg/kg。

HC肠道损伤动物模型的建立

实验小鼠为80只I CR雄性小鼠。为了评价红景天联合百里香酚对肠道健康的改善效果，将小鼠随机分为5组，每组16只，分别给药，分为正对照组(Con组)、模型组(HC组)、红景天组(Rho组)、百里香酚组(Thy组)、红景天联合百里香酚组(R-T组)。

(1)Con组(正对照组)：正常饲料喂养，每3天皮下注射生理盐水；

(2)HC组(模型组)：正常饲料喂养，每3天皮下注射氢化可的松HC(60mg/kg)；

(3)Rho组(红景天组)：正常饲料中添加100mg/kg红景天，每3天皮下注射氢化可的松HC(60mg/kg)；

(4)Thy组(百里香酚组)：正常饲料中添加40mg/kg百里香酚，每3天皮下注射氢化可的松HC(60mg/kg)；

(5)R-T组(红景天联合百里香酚组)：正常饲料中添加100mg/kg红景天和40mg/kg百里香酚，每3天皮下注射氢化可的松HC(60mg/kg)。

正常饲粮成分配比表

Rho组(红景天组)饲粮成分配比表

Thy组(百里香酚组)饲粮成分配比表

R-T组(红景天联合百里香酚组)饲粮成分配比表

1、红景天和百里香酚联用改善小鼠肠道结构的完整性

饲养8周，处死后解剖小鼠取肠道组织，将4％多聚甲醛固定的小鼠肠道样本制作成石蜡切片后，通过光学显微镜观察。

实验结果由图1显示：HC组(模型组)肠道的结构完整性缺失，具体表现在绒毛出现畸形，边缘不明显，而Rho组(红景天组)、Thy组(百里香酚组)、R-T组(红景天联合百里香酚组)的肠道结构完整，排列整齐且边缘清晰，且绒毛高度相对于HC组(模型组)有所增高，实验结果表明，三个干预组均能够有效地改善小鼠的肠道结构，使其更加健康和稳定。这种改善的作用不仅体现在肠道形态的改变上，还表现在促进营养物质的吸收和利用方面。因此，我们可以得出结论，这三个干预组均具有营养保健作用，可以为小鼠提供更好的营养支持和健康保障。

2、红景天和百里香酚联用显著降低小鼠肠道LPS含量

饲养8周，处死后解剖小鼠取肠道组织，以1:9比例加入无菌生理盐水以制备10％(W/V)的组织匀浆。使用小脂多糖(LPS)酶联免疫(ELI SA)试剂盒进行相关测定。

实验结果由图2显示：Con组(正对照组)的空肠LPS含量低于1500，而HC组(模型组)的空肠LPS含量高于3000，Rho组(红景天组)的空肠LPS含量介于2000-3000之间，Thy组(百里香酚组)的空肠LPS含量介于2000-3000之间且高于Rho组(红景天组)的空肠LPS含量，而R-T组(红景天联合百里香酚组)的空肠LPS含量介于1500-2000之间。

而Con组(正对照组)的回肠LPS含量低于1000，HC组(模型组)的回肠LPS含量介于2000-2500之间，Rho组(红景天组)的回肠LPS含量趋于2000，Thy组(百里香酚组)的回肠LPS含量大于1500且小于Rho组(红景天组)的回肠LPS含量，R-T组(红景天联合百里香酚组)回肠LPS含量介于1000-2000之间且其小于Thy组(百里香酚组)的回肠LPS含量。

HC组(模型组)的小鼠回肠和空肠中的LPS水平均显著高于Con组(正对照组)，相对于HC组(模型组)，Rho组(红景天组)、Thy组(百里香酚组)、R-T组(红景天联合百里香酚组)均有一定程度的改善，R-T组(红景天联合百里香酚组)小鼠空肠中LPS水平均显著降低且与Con组(正对照组)无明显差异。三个干预组相比于HC组(模型组)，回肠LPS水平有下降趋势但效果不显著。

当肠道受损时，小鼠肠道内的LPS(内毒素)水平会受到明显影响，这一情况得到三个干预组的改善。具体来看，无论是单独应用红景天还是百里香酚，抑或是二者联合应用的R-T组，均对肠道受损情况有着改善作用。在这些干预组中，R-T组(红景天联合百里香酚组)的效果表现得最为显著，显示出了对肠道受损情况更为有效的改善作用。这表明红景天联合百里香酚对肠道受损有着显著的保护作用，为研究肠道健康和相关疾病的治疗提供了有益的启示。

3、红景天和百里香酚联用显著提高小鼠肠道MUC-2含量

饲养小鼠至8周龄的目的在于确保实验对象在生长发育过程中达到特定的生理阶段，使其肠道组织能够更准确地反映特定年龄点的生物学特征。接着，需要在处死小鼠后迅速解剖，取出肠道组织。随后，将肠道组织与无菌生理盐水按照1:9的比例混合，以制备10％(W/V)的组织匀浆。这个匀浆的制备过程十分关键，因为它为后续的实验提供了高质量的组织样本。随后，使用小鼠黏蛋白2(MUC-2)酶联免疫(ELISA)试剂盒进行相关测定，以评估MUC-2在肠道组织中的表达水平。这一系列步骤对于研究肠道黏液屏障功能及相关机制至关重要，而实验过程中严格控制操作，确保实验结果的准确性和可重复性。

实验结果由图3显示：Con组(正对照组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA大于且趋于10，HC组(模型组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA大于且趋于5，Rho组(红景天组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于5-10之间且大于HC组(模型组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA，Thy组(百里香酚组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于5-10之间且小于Rho组(红景天组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA，R-T组(红景天联合百里香酚组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA为10左右且小于Con组(正对照组)的空肠分泌型免疫球蛋白ASIgA。

而，Con组(正对照组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于7和8之间且趋于8，HC组(模型组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于5-6之间，Rho组(红景天组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于6-7之间，Thy组(百里香酚组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于6-7之间且大于Rho组(红景天组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA，R-T组(红景天联合百里香酚组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASIgA介于7和8之间且小于Con组(正对照组)的回肠分泌型免疫球蛋白ASI gA。

HC组(模型组)的小鼠回肠和空肠中的MUC-2水平均显著低于Con组(正对照组)。相对于HC组(模型组)，Rho组(红景天组)、Thy组(百里香酚组)、R-T组(红景天联合百里香酚组)均有一定程度的改善，R-T组(红景天联合百里香酚组)、Thy组(百里香酚组)小鼠回肠MUC-2水平均显著提高且与Con组(正对照组)无明显差异。三个干预组相比于HC组(模型组)，空肠MUC-2水平有上升趋势但效果不显著。由实验结果来说，肠道受损情况下小鼠肠道MUC-2水平会受到显著影响，三个干预组均会对这一情况有所改善，其中R-T组(红景天联合百里香酚组)效果最为明显

在实验中，我们发现当肠道受损时，小鼠肠道的MUC-2水平会受到显著的影响。然而，通过三个不同的干预组进行处理后，这一情况均得到了一定程度的改善。其中，R-T组(红景天联合百里香酚组)的效果最为明显，有效地缓解了肠道受损小鼠的MUC-2水平下降的情况。

MUC-2是一种重要的黏液蛋白，它在肠道中发挥着重要的保护作用。当肠道受损时，MUC-2水平的下降可能会导致肠道黏膜的损伤和炎症反应的加剧。因此，对肠道受损小鼠的MUC-2水平进行干预是一种有效的治疗方法。

在这三个干预组中，R-T组的效果最为显著。红景天和百里香酚的联合作用可以有效地促进肠道黏膜的修复和抗炎因子的释放，从而缓解肠道受损小鼠的MUC-2水平下降的情况。此外，这种联合作用还可以提高肠道免疫功能，进一步保护肠道黏膜免受损伤和炎症的侵袭。

综上所述，实验结果表明，肠道受损情况下小鼠肠道MUC-2水平会受到显著影响，而三个干预组均会对这一情况有所改善，其中R-T组(红景天联合百里香酚组)效果最为明显。这些发现为开发新的治疗肠道损伤的药物提供了有力的实验依据。

4、红景天和百里香酚联用显著提高小鼠肠道SIgA含量

饲养8周后，将小鼠处死，并在解剖后取得其肠道组织样本。随后，将肠道组织样本与无菌生理盐水按照1:9的比例混合，制备成10％(W/V)的组织匀浆，以便进行后续的分析。这一步骤旨在确保样本的均匀性和稳定性，从而提高分析的准确性。最终，使用分泌型免疫球蛋白A(SIgA)酶联免疫(ELISA)试剂盒进行相关测定，以评估样本中SIgA的含量，从而深入了解其在肠道组织中的水平和免疫功能。

实验结果由图4显示：HC组(模型组)的小鼠回肠和空肠中的SIgA含量均显著低于Con组(正对照组)。相对于HC组(模型组)，Rho组(红景天组)、Thy组(百里香酚组)、R-T组(红景天联合百里香酚组)均有一定程度的改善，R-T组(红景天联合百里香酚组)小鼠回肠和空肠SIgA含量均显著提高且与Con组(正对照组)无明显差异。Thy组(百里香酚组)相对于HC组(模型组)，回肠SIgA含量有显著上升，但在空肠中效果不显著；Rho组(红景天组)相比于HC组(模型组)，空肠和回肠SIgA含量有上升趋势但效果不显著。在实验中，我们发现当肠道受损时，小鼠肠道的SIgA含量会受到显著的影响。然而，通过三个不同的干预组进行处理后，这一情况得到了明显的改善。其中，R-T组(红景天联合百里香酚组)的效果最为显著，其改善程度明显高于其他两组。

具体来说，当肠道受损时，小鼠肠道的SIgA含量会下降，这使得肠道的免疫防御能力受到削弱。然而，通过给予小鼠适当的干预处理，例如使用红景天联合百里香酚的R-T组，这种下降趋势得到了明显的逆转。不仅SIgA含量得到提升，而且肠道的免疫防御功能也得到了增强。

值得注意的是，R-T组的改善效果最为显著。与其他两组相比，R-T组能够更有效地提高SIgA含量，增强肠道免疫防御功能。这可能是因为红景天和百里香酚的联合作用具有协同效应，能够更有效地保护肠道免受损伤，促进肠道健康。

综上所述，实验结果表明，通过使用合适的干预措施，可以有效地改善肠道受损对小鼠肠道SIgA含量的影响，并增强肠道的免疫防御功能。其中，R-T组的效果最为显著，为今后的研究提供了有益的参考。

5、红景天和百里香酚联用显著提高小鼠肠道紧密连接基因的相对表达量

饲养8周后，将小鼠处死并进行解剖，以取得其空肠组织样本。随后，取100mg空肠组织样本加入1mL预冷TRizol中，用于进行总RNA的提取。采用TRizol法进行空肠总RNA的提取，这一步骤旨在有效地溶解细胞膜并稳定RNA，以确保后续实验的准确性和可靠性。随后，使用One-drop紫外分光光度计测定提取的RNA的浓度和纯度，以保证所得RNA样本的质量。接着，将提取得到的RNA转录成cDNA，采用实时荧光定量PCR技术，以精确测定mRNA的相对表达水平，从而深入研究空肠组织中的基因表达情况及相关生物学功能，引物序列见表1。

引物序列

实验结果由图5显示：HC组(模型组)的小鼠空肠中的claudin、ZO-1、Occludin的相对表达量均显著低于Con组(正对照组)。相对于HC组(模型组)，Rho组(红景天组)、Thy组(百里香酚组)、R-T组(红景天联合百里香酚组)均有一定程度的改善，R-T组(红景天联合百里香酚组)小鼠空肠中的claudin、ZO-1、Occludin相对表达量均显著提高；Thy组(百里香酚组)、Rho组(红景天组)小鼠空肠中的claudin、ZO-1相对表达量均显著提高，Occludin相对表达量有升高趋势但效果不显著。据实验结果显示，肠道受损情况下小鼠空肠中claudin、ZO-1、Occludin相对表达量会受到显著影响。在这种情况下，三个干预组均对这一状况有所改善，特别是R-T组(红景天联合百里香酚组)的效果最为显著，这表明该组的干预措施在调节claudin、ZO-1、Occludin的表达量方面具有显著的影响。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。