美洲大蠊或其提取物在制备IL-23/IL-17信号轴抑制剂中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及美洲大蠊或其提取物在制备IL-23/IL-17信号轴抑制剂中的应用。

背景技术

银屑病(psoriasis)俗称牛皮癣，是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，病理表现为角质细胞异常增殖和分化，伴有大量血管生成和皮肤炎症，主要的临床表现是皮肤增厚、产生红斑，并覆有鳞屑。银屑病病程长，容易复发，难治愈，全球发病率约为2-3％，影响着全世界约1.25亿的人口。银屑病患者往往伴随多种并发症，主要有心血管疾病、高血压、血脂异常、非酒精性脂肪肝、糖尿病、克罗恩病、勃起功能障碍、抑郁症等，严重影响患者的身体健康，因其病变在皮肤表面，还会给患者带来极大的心理负担。

目前，银屑病并没有有效的治疗药物，临床上常用药物主要有甲氨蝶呤、环孢素、维甲酸和富马酸酯，以及外用药物维生素D衍生物和皮质类激素等。这些药物一般用于治疗轻度银屑病，且往往具有抗增殖和免疫抑制的副作用，还会产生肝毒性、肾毒性、淋巴细胞减少和进行性多灶性白细胞脑病等。一些生物制剂也被开发用于治疗银屑病，如白细胞介素(IL)-23抑制剂guselkumab、以及IL-17A抑制剂secukinumab等。生物制剂虽然对银屑病具有相对较好的疗效，但需要注射给药，患者顺应性低，伴随着严重感染的风险，大部分患者停药后复发，并且价格较昂贵。另外，随着银屑病分子机制研究的不断深入，JAK小分子抑制剂也成为一个研究热点。比如JAK3抑制剂tofacitinib，JAK1和JAK2双靶点抑制剂ruxolitinib，这两个药物目前处于临床研究阶段，虽然对银屑病具有一定的治疗作用，但也可能因选择性低或严重抑制机体正常功能等原因而带来很多副作用，如感染、带状疱疹、血脂异常、造血功能障碍等。因此，需要开发一种新的生物制剂来预防和/或治疗银屑病。

由于银屑病的发病机制极为复杂，受多种因素影响，如遗传、免疫异常、感染、内分泌因素等，其中免疫系统异常激活是导致银屑病的重要原因之一。树突状细胞(DCs)是重要的抗原提呈细胞，在人和小鼠银屑病斑块中有大量DCs堆积。IL-23是DCs产生的一个重要细胞因子，在银屑病皮损部位，其表达明显增加。IL-23能促进T细胞分化为Th17，以及Th17相关炎症因子的产生，如IL-17，诱导免疫反应。咪喹莫特(IMQ)作为TLR7/TLR8的配体，是较强的免疫激活剂，能通过IL-23/IL-17信号轴诱导银屑病样皮肤炎症，常被用于建立银屑病动物模型。因此，抑制IL-23/IL-17信号轴是治疗银屑病的重要思路。

发明内容

针对现有技术中存在不足，本发明提供了美洲大蠊或其提取物在制备IL-23/IL-17信号轴抑制剂中的应用；本发明研究发现美洲大蠊或其提取物对IL-23/IL-17信号轴具有抑制作用，其能够制备成IL-23/IL-17信号轴抑制剂，进而用于预防和/或治疗IL-23/IL-17信号轴异常所导致的疾病并制备成相应的药物，所述疾病包括IL-23/IL-17信号轴异常所导致的自身免疫性疾病，尤其是银屑病；所述美洲大蠊或其提取物安全、有效，无明显毒副作用，在抗银屑病药物制备中具有很好的应用。

为了达到上述技术目的，本发明采用以下技术手段。

本发明首先提供美洲大蠊或其提取物在制备IL-23/IL-17信号轴抑制剂中的应用。

本发明还提供了一种IL-23/IL-17信号轴抑制剂，所述抑制剂的活性成分包括美洲大蠊或其提取物。

本发明还提供了美洲大蠊或其提取物在制备预防和/或治疗IL-23/IL-17信号轴异常所致疾病或减轻其症状的药物中的应用。

优选地，所述异常为IL-23/IL-17信号轴异常激活。

优选地，所述IL-23/IL-17信号轴异常所致疾病包括IL-23/IL-17信号轴异常所导致的自身免疫性疾病。

优选地，所述自身免疫性疾病包括银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、干燥综合征、多发性硬化症、斑秃中的一种或多种。

优选地，所述症状包括脾脏肿大、表皮增厚、皮肤发红、产生鳞屑。

本发明还提供了一种用于预防和/或治疗IL-23/IL-17信号轴异常所致疾病或减轻其症状的药物，所述药物的活性成分包括美洲大蠊或其提取物。

优选地，所述IL-23/IL-17信号轴异常所致疾病包括银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、干燥综合征、多发性硬化症、斑秃中的一种或多种。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明中所使用的美洲大蠊(PeriplanetaAmericana L.)为蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，俗称蟑螂，始载于《神农本草经》，被列为中品。美洲大蠊味咸、性寒，入心、肝、脾、肾经，有下气、利血脉、破积聚等功效，主要用于治疗血瘀、症坚、寒热、喉咽痹、内寒无子等病症。美洲大蠊富含多种化学成分，如氨基酸、核苷酸、多肽、多糖、异黄酮等，并具有多种药理作用，包括抗菌、抗肿瘤、伤口愈合、抗炎、保肝等。康复新液是美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物，在临床上广泛用于治疗各种创伤，以及多种消化系统疾病的治疗，被证明安全、有效，无明显副作用。

本发明通过实验验证美洲大蠊提取物能够缓解银屑病导致的皮肤发红、表皮增厚、产生大量鳞屑，具有潜在的抗银屑病作用；本发明还通过实验验证了美洲大蠊提取物能明显改善小鼠脾脏肿大情况。这可能是因为美洲大蠊提取物对IL-23/IL-17信号轴有显著的抑制作用。因此，美洲大蠊及其提取物具有良好的抗银屑病作用。此外，美洲大蠊及其提取物对IL-23/IL-17信号轴相关的其他自身免疫性疾病，如银屑病关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、干燥综合征、多发性硬化症、斑秃等同样具有很好的改善作用。美洲大蠊及其提取物能够用于制备治疗和/或预防上述自身免疫性疾病的药物。

本发明所述美洲大蠊及其提取物安全、有效，无明显毒副作用，具有很好的实用性。

附图说明

图1为洲大蠊提取物对IMQ诱导的银屑病样病变的影响；图中，A为小鼠皮肤病变观察结果；B为PASI评分结果：B1为红斑评分，B2为鳞屑评分，B3为厚度评分，B4为PASI总评分。

图2为美洲大蠊提取物对IMQ诱导的脾脏肿大的影响；图中，A为小鼠脾脏照片；B为脾脏指数；

图3为美洲大蠊提取物对银屑病小鼠皮肤病理改变的影响；图中，A为放大倍数为20x的背部皮肤HE染色结果，B为Baker评分和表皮厚度测量结果；

图4为美洲大蠊提取物对银屑病小鼠炎症因子基因表达的影响；图中，

具体实施方式

下面结合附图以及具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。在以下实施例中，如果没有特殊说明所采用的试剂、方法和设备均为本技术领域常规试剂、方法和设备。

以下实施例中所采用的BALB/c小鼠为SPF级BALB/c小鼠，雌性，体重18-22g，8-10周龄，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，饲养于SPF级动物房，环境温度为25±2℃，相对湿度为55％，12h明暗交替，动物自由进食、饮水。

以下实施例中所采用的美洲大蠊提取物为购买的康复新液，其为美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物。

实施例1：

将BALB/c小鼠适应性喂养后随机分组，每组6只，分别为正常对照组、模型对照组、康复新液外用组(KFX-topical)以及康复新液外用联合口服组(KFX-topical and oral)。将小鼠剔除背部毛发，形成约2x 3cm大小的区域。除正常对照组外，其余各组小鼠背部均涂抹5％IMQ 62.5mg/只/d(四川明欣利迪)，建立银屑病小鼠模型，正常对照组小鼠背部涂抹等量凡士林。

康复新液外用组(KFX-topical)以及康复新液外用联合口服组(KFX-topical andoral)在造模同时给予康复新液治疗，康复新液外用组连续涂抹康复新液6天，每天两次；康复新液外用联合口服组每天上午背部均匀涂抹康复新液，晚上给予康复新液口服治疗(0.1mL/10g)，连续给药6天。

每天拍照观察背部皮肤病变情况，并进行PASI评分来评价病变的严重程度，因病变面积不宜测量，故不对此项进行评分，分别对红斑、鳞屑、厚度进行评分，评分标准为：0——无病变，1——轻度病变，2——中度病变，3——重度病变，4——极重度病变，并计算各项评分的总评分，拍照和评分结果如图1所示。

从图1可以看出，小鼠涂抹IMQ后出现了典型的银屑病样症状，包括皮肤发红、表皮增厚、产生大量鳞屑，美洲大蠊提取物外用以及外用联合口服治疗均能明显改善IMQ诱导的银屑病样皮肤病变(图1A)。对病变进行PASI评分，由图1B可以看出美洲大蠊提取物治疗组红斑、鳞屑、厚度评分明显低于模型组，总评分也明显降低。研究表明，美洲大蠊提取物具有潜在的抗银屑病作用。

实施例2：

脾脏是一个重要的免疫器官，本实施例在实施例1中给药6天后，即实验第7天处死小鼠，分离脾脏，并称量重量，计算脾脏指数，计算结果如图2所示。

从图2中可以看出，IMQ造模后，小鼠脾脏明显肿大，美洲大蠊提取物能明显改善小鼠脾脏肿大情况(图2A)。计算脾脏指数，与control组相比，model组的脾脏指数显著升高(P＜0.001)。与model组相比，美洲大蠊提取物外用以及外用联合口服治疗均能明显降低小鼠脾脏指数(P＜0.05或P＜0.001)(图2B)。这表明，美洲大蠊或其提取物对免疫反应具有一定的抑制作用，这可能是其治疗/预防包括银屑病在内的自身免疫性疾病的重要机制。

本实施例还在给药结束，取小鼠背部皮肤进行HE染色，观察皮肤组织病理学变化，考察结果如图3所示。

由图3A可以看出，小鼠背部涂抹IMQ后，表皮显著增厚、棘层肥厚、乳突上顶、角质细胞异常角化、真皮层有明显淋巴细胞浸润等典型的银屑病病理特征。与model组相比，美洲大蠊提取物外用以及外用联合口服治疗均能明显改善小鼠皮肤病理改变。对病变进行baker评分，model组的评分显著高于control组(P＜0.001)，与model组比较，美洲大蠊提取物能显著降低baker评分(P＜0.001)。测量表皮厚度，与control相比，model组表皮厚度显著增加(P＜0.001)，美洲大蠊提取物还能显著抑制表皮增厚(P＜0.001)(图3B)。这进一步说明美洲大蠊提取物能显著改善银屑病病变。

实施例3：

DCs是重要的抗原提呈细胞，调节T细胞的增殖和分化，在银屑病中发挥着重要作用。DCs可以产生IL-23，促进T细胞分化为Th17。本实施例在实施例1中给药6天后，即实验第7天处死小鼠，剪取小鼠的皮损组织液氮速冻，保存于-80℃冰箱，运用实时荧光定量PCR(QPCR)分析炎症因子基因表达情况。

从图4可以看出，小鼠涂抹IMQ后，IL-23的基因表达显著升高(P＜0.001)。与model相比，美洲大蠊提取物能显著抑制IL-23的基因表达(P＜0.001)。当T细胞激活后，分化为Th17，Th17会产生大量的细胞因子，如IL-17等，参与炎症反应。与control相比，model组小鼠背部皮肤中IL-17基因表达极显著性升高(P＜0.001)，美洲大蠊提取物能极显著性降低小鼠背部皮肤中IL-17的基因表达(P＜0.001)。这说明美洲大蠊提取物对IL-23/IL-17信号轴有效显著的抑制作用，这可能是其发挥抗银屑病作用的重要机制。

由此可以推导出，美洲大蠊及其提取物对IL-23/IL-17信号轴相关的其他自身免疫性疾病，如银屑病关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、干燥综合征、多发性硬化症、斑秃等同样具有很好的治疗作用。因此，美洲大蠊及其提取物能够用于制备治疗和/或预防上述自身免疫性疾病的药物。

综上所述，本发明通过实验验证美洲大蠊提取物能够缓解银屑病导致的皮肤发红、表皮增厚、产生大量鳞屑，具有潜在的抗银屑病作用；本发明还通过实验验证了美洲大蠊提取物能明显改善小鼠脾脏肿大情况，具有一定的免疫抑制作用。这进一步表明美洲大蠊提取物对IL-23/IL-17信号轴有显著的抑制作用。因此，美洲大蠊及其提取物具有良好的抗银屑病作用。

所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。