Rho相关蛋白激酶抑制剂及其制备和应用
文献发布时间：2024-04-18 19:48:15
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体地涉及Rho相关蛋白激酶抑制剂及其制备和应用。
背景技术
Rho相关蛋白激酶(Rho-associated kinases,ROCKs)是AGC激酶家族中的丝氨酸/苏氨酸激酶，包括ROCK1和ROCK2两种亚型。ROCK2(ROCKα)作为一个RhoA的结合蛋白最先被鉴定出来，ROCK1(ROCKβ或p160ROCK)随后被发现是一个与ROCK2高度同源的RhoA结合蛋白。RhoA是GTP酶，其在与GTP结合后活化并促进下游效应因子的激活。ROCKs在过去的二十多年里得以被广泛的研究，其作为RhoA蛋白的主要效应因子，通过磷酸化下游的效应蛋白(MYPT1,MLC,Moesin等)来实现其生物学功能。目前已有30多个ROCKs的底物被鉴定出来，涉及细胞骨架动力学，细胞形态，以及细胞收缩等多个过程的调控。研究和报道最多的一个底物是肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)，它是肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)的肌球蛋白结合亚基。ROCKs介导MYPT1在Thr697和Thr855位点的磷酸化从而抑制MLCP的催化活性，进而调控肌球蛋白调节轻链(myosin light chain,MLC)的磷酸化，影响细胞收缩力的产生。研究表明纤维化、心血管、代谢、神经系统疾病以及癌症等的发生都与ROCKs介导的通路有关，因此ROCKs被认为是这些疾病治疗的重要靶点。
ROCK1和ROCK2的氨基酸序列相似度达64％，在激酶结构域的相似度更是高达92％，这使得两种亚型具有一些共同的效应蛋白。目前已有多种小分子ROCK抑制剂报道，其中大部分的抑制剂都对两种ROCKs亚型具有相当的抑制活性。目前仅有两个ROCK抑制剂获批在临床上局部用药使用，法舒地尔(Fasudil)在日本和中国首先获批用于脑血管痉挛的治疗，Ripasudil则在日本获批用于青光眼的治疗。对两种ROCKs亚型的同时抑制带来血压降低等潜在副作用，所以目前没有适用于全身系统给药的小分子ROCK抑制剂。开发针对特定亚型的小分子抑制剂将是以ROCK为靶点的药物研发中的一个重要方向。
发明内容
本发明的目的在于提供一种式I所示化合物及其制备方法和其作为RHO相关含卷曲螺旋蛋白激酶抑制剂的用途。
本发明的第一方面，提供了一种式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，立体异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，
X选自下组：
R
Y选自下组：无、C(＝O)、O、S(＝O)
R选自下组：H、C
R
环A选自下组：饱和或部分不饱和的C
环C选自下组：饱和或部分不饱和的C
环D为不存在或者选自下组：饱和或部分不饱和的C
环E选自下组：
环G选自下组：饱和或部分不饱和的C
R
R
R
R
R
所述阳离子选自下组：Na
所述烷基、亚烷基、烯基、炔基、环烃基、杂环基、芳基、杂芳基和芳烷基在每次出现时各自任选地被一个或多个独立地选自下组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、氨基、氰基、硝基、C
R
m在每次出现时各自独立地选自下组：0、1、2、3；
n在每次出现时各自独立地选自下组：0、1、2；
i选自下组：1、2；
g选自下组：0、1、2、3、4。
在另一优选例中，
X选自下组：
Y选自下组：NH、NCH
在另一优选例中，
环C为
环E选自下组：
在另一优选例中，
环A选自下组：饱和或部分不饱和的C
环D为不存在或者选自下组：饱和或部分不饱和的C
在另一优选例中，
在另一优选例中，环D为不存在或者选自下组：
在另一优选例中，环G选自下组：
在另一优选例中，R
R
在另一优选例中，R
在另一优选例中，R
R
所述阳离子选自下组：Na
在另一优选例中，R
R
所述阳离子选自下组：Na
在另一优选例中，所述化合物具有任意下式的结构：
其中，各基团如上文所定义。
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，包含一种或多种药学上可接受的载体和预防和/或治疗有效量的一种或多种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，立体异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药。
本发明的第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，立体异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药的用途，用于制备药物，所述药物用于预防和/或治疗Rho相关蛋白激酶介导的疾病。
在另一优选例中，所述Rho相关蛋白激酶为ROCK1和/或ROCK2。
在另一优选例中，所述药物为选择性ROCK2抑制剂。
在另一优选例中，所述Rho相关蛋白激酶介导的疾病选自下组：自身免疫性疾病、心血管病症、炎症、中枢神经系统病症、动脉血栓性病症、纤维化病症、瘤性疾病、代谢综合征、胰岛素抗性、高胰岛素血症、2型糖尿病、葡萄糖耐受不良、骨质疏松症、眼部疾病。
在另一优选例中，所述自身免疫性疾病选自下组：类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE，狼疮)银屑病、克罗恩病、特应性皮炎、湿疹或植物抗宿主病(GVHD)。
在另一优选例中，所述心血管病症选自下组：高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、脑缺血、脑血管痉挛、勃起功能障碍。
在另一优选例中，所述炎症选自下组：哮喘、心血管炎症、溃疡性结肠炎、肾脏炎症。
在另一优选例中，所述中枢神经系统病症选自下组：神经元变性、脊髓损伤。
在另一优选例中，所述中枢神经系统病症选自下组：亨廷顿病、帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、多发性硬化症。
在另一优选例中，所述动脉血栓性病症选自下组：血小板聚集、白细胞聚集。
在另一优选例中，所述纤维化病症选自下组：肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化。
在另一优选例中，所述瘤性疾病选自下组：淋巴瘤、癌、白血病、星形细胞瘤、软组织肉瘤、肉瘤、母细胞瘤。
在另一优选例中，所述癌选自下组：鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、脑癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤、头颈部癌症。
在另一优选例中，所述眼部疾病选自下组：高眼压、年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新生血管形成、葡萄膜炎、青光眼、早产儿视网膜病变(ROP)。
在另一优选例中，所述青光眼选自下组：原发性开角型青光眼、急性闭角型青光眼、色素性青光眼、先天性青光眼、正常张力青光眼、继发青光眼、新生血管青光眼。
在另一优选例中，所述Rho相关蛋白激酶介导的疾病选自下组：狼疮肾炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤、肺纤维化、肝纤维化、银屑病、角膜移植排斥、胰岛素依赖性糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、异体排异、过敏性炎症、接触性皮炎、迟发性超敏反应、炎症性肠病、感染性休克、骨质疏松、骨关节炎、神经元炎症、Osler-Weber综合症、再狭窄、真菌感染、寄生虫感染、病毒感染。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，通过结构优化，意外地制备了一类新型的具有优异的ROCK2抑制活性的化合物(式I所示化合物)，该类化合物具有优秀的ROCK2抑制活性、更好的对ROCK2的选择性、更加优秀的药代动力学(如体内暴露量、组织靶向性、半衰期、代谢稳定性等)、更好的体内药效和安全性。在此基础上，发明人完成了本发明。
术语
在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。
在本发明中，术语“卤素”指F、Cl、Br或I。
在本发明中，“C
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“杂环基”为含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环基，包括(但并不限于)如下基团：
在本发明中，术语“芳环”或“芳基”具有相同的含义，优选为“C
在本发明中，术语“芳香杂环”或“杂芳基”具有相同的含义，指包含一个到多个杂原子的杂芳族基团。例如“5-14元杂芳基”是指含有1～3个选自氧、硫和氮中的杂原子以及2-13个碳原子的芳香杂环。非限制性例子包括：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡唑基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以是任选取代的或未取代的。
在本发明中，术语“C
在本发明中，术语“氘代”是指被氘取代。
在本发明中，术语“取代”指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：卤素、羟基、羧基(-COOH)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3-至12元杂环基、芳基、杂芳基、C1-C8醛基、C2-C10酰基、C2-C10酯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C10磺酰基等。
在本发明中，术语1-6指1、2、3、4、5或6。其他类似术语各自独立地具有类似含义。术语“多个”指2-6个，如2、3、4、5或6个。
应理解，当某一基团同时存在于化合物的多个不同位置时，其在各位置的定义是相互独立的，可以相同也可以不同。亦即，术语“选自下组：”与术语“各独立地选自下组：”具有相同含义。
化合物及其制法
本发明提供了一种式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，立体异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，
其中，各基团如上文定义。
在另一优选例中，所述的化合物中，X、Y、环A、环C、环D、环E、R
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。
另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
下面所述本发明式I结构化合物的制备方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
应理解，本发明化合物的制备工艺中所用原料和试剂如无特殊说明，均可通过商业途径购买。
药物组合物和施用方法
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-1000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如
所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的其他化合物联合给药。
本发明治疗方法可以单独施用，或者与其它治疗手段或者治疗药物联用。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
与现有技术相比，本发明具有以下主要优点：
(1)所述化合物具有更优的药代动力学性能，如体内暴露量、组织靶向性、半衰期、代谢稳定性等；
(2)所述化合物具有更好的ROCK2抑制活性、更好的对ROCK2的选择性、更好的对其他人体激酶的选择性；
(3)所述化合物具有更优的安全性、更优的体内药效；
(4)所述化合物有望用于预防和/或治疗与调节Rho相关蛋白激酶(ROCK1和/或ROCK2)的相关疾病。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实施例1-1化合物A1的制备
步骤一、化合物3
向无水二氯甲烷(60mL)中依次加入化合物1(2.0g,9.8mmol,1.0eq)、化合物2(1.5g,11.8mmol,1.2eq)、HATU(5.6g,14.7mmol,1.5eq)和二异丙基乙基胺(6.3g,49.0mmol,5.0eq)，反应液在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，残余物经硅胶柱层析(正己烷/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到化合物3(1.6g,产率58％)为无色油状物。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物5
向三乙胺(10mL)中依次加入化合物3(1.0g,3.58mmol,1.0eq)、化合物4(7.0g,71.60mmol,20.0eq)、Pd(PPh
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物6
将化合物5(1.0g,3.38mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)，加入四丁基氟化铵(0.9g,3.38mmol,1.0eq)，得到的溶液在室温搅拌0.5小时。将反应液浓缩后得到的残余物用硅胶柱层析(正己烷/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到化合物6(0.65g,87％)。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A1
将化合物7(50mg,0.184mmol,1.0eq)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入双(三苯基膦)二氯化钯(13mg,0.0184mmol,0.1eq)、碘化亚铜(4mg,0.0184mmol,0.1eq)和三乙胺(372mg,3.68mmol,20.0eq)，反应体系用氮气置换三次。反应液在氮气氛围下升温至100℃，将化合物6(103mg,0.460mmol,2.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液缓慢滴加至反应液，滴加结束后在100℃继续搅拌2小时。将反应液冷却至室温并浓缩,残余物经Pre-HPLC纯化后得到化合物A1(8mg)。
LCMS:[M+H]
实施例1-2化合物A2的制备
步骤一、化合物A2
将化合物8(100mg,0.408mmol,1.0eq)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入双(三苯基膦)二氯化钯(29mg,0.0408mmol,0.1eq)、碘化亚铜(8mg,0.0408mmol,0.1eq)和三乙胺(826mg,8.16mmol,20.0eq)，反应体系用氮气置换三次。。反应液在氮气氛围下升温至100℃，将化合物6(228mg,1.02mmol,2.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液缓慢滴加至反应液，滴加结束后在100℃继续搅拌2小时。将反应液冷却至室温并浓缩,残余物经Pre-HPLC纯化后得到化合物A2(20.2mg)。
LCMS:[M+H]
实施例1-3化合物A4的制备
步骤一、化合物11
将化合物9(370mg,2.27mmol,1.2eq)与化合物10(301mg,1.89mmol,1.0eq)溶于正丁醇(10mL)中，加入二异丙基乙基胺(733mg,5.67mmol,3.0eq)。反应混合液在95℃搅拌反应20小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，减压浓缩。残留物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物得化合物11(250mg,39％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A4
将化合物11(250mg,0.875mmol,1.0eq)与化合物6(196mg,0.875mmol,1.0eq)溶于二氧六环(30mL)中，加入磷酸钾一水合物(705mg,3.06mmol,3.5eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物13
将化合物12(370mg,2.27mmol,1.2eq)与化合物10(301mg,1.89mmol,1.0eq)溶于异丙醇(5mL)中，加入二异丙基乙基胺(733mg,5.67mmol,3.0eq)。反应混合液在95℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，减压浓缩。残留物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物得化合物13(150mg,23％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A5
将化合物13(150mg,0.525mmol,1.0eq)与化合物6(117mg,0.875mmol,1.0eq)溶于二氧六环(15mL)中，加入磷酸钾一水合物(423mg,3.06mmol,3.5eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-5化合物A6的制备
步骤一、化合物15
将化合物14(1.3g,7.34mmol,2.4eq)与化合物10(487mg,3.06mmol,1.0eq)溶于正丁醇(25mL)中，加入二异丙基乙基胺(1.19g,9.18mmol,3.0eq)。反应混合液在120℃搅拌反应48小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，减压浓缩。残留物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物得化合物15(300mg,32％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A6
将化合物3(300mg,1.0mmol,1.0eq)与化合物4(224mg,1.0mmol,1.0eq)溶于二氧六环(30mL)中，加入磷酸钾一水合物(807mg,3.5mmol,3.5eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-6化合物A7的制备
步骤一、化合物17
将化合物16(370mg,2.22mmol,1.2eq)与化合物10(294mg,1.85mmol,1.0eq)溶于异丙醇(30mL)中，加入二异丙基乙基胺(716mg,5.54mmol,2.5eq)。反应混合液在50℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，减压浓缩。残留物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物得化合物17(500mg,93％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A7
将化合物17(250mg,0.86mmol,1.0eq)与化合物6(193mg,1.0mmol,1.0eq)溶于二氧六环(20mL)中，加入磷酸钾一水合物(695mg,3.02mmol,3.5eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-7化合物A8的制备
步骤一、化合物19
将化合物18(323mg,1.86mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(8mL)中，然后加入二异丙基乙基胺(600mg,4.65mmol,3.0eq),再在冰浴条件下加入10(400mg,1.55mmol,1.0eq)。加料完毕后反应液在冰浴条件下搅拌1.5小时。反应结束后将反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。浓缩后的粗品用硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得到化合物19(280mg,46％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A8
将化合物19(202mg,0.68mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，然后依次加入化合物6(183mg,0.82mmol,1.2eq)，一水合磷酸钾(548mg,2.38mmol,3.5eq)，X-Phos(65mg,0.14mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-8化合物A9的制备
步骤一、化合物22
将化合物20(150mg,1.0mmol,1.0eq)溶于二氧六环(3mL)中，然后加入化合物21(159mg,1.0mmol,1.0eq)，再加入二异丙基乙基胺(142mg,1.1mmol,1.1eq)，反应液在25℃搅拌1小时，反应物缓慢加入到水中，用乙酸乙酯萃取2次，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物22(350mg,94％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物23
将化合物22(50mg,0.13mmol,1.0eq)溶于二氧六环(3mL)中，然后加入化合物6(30mg,0.13mmol,1.0eq)，磷酸钾一水合物(90mg,0.39mmol,3.0eq),X-Phos(12mg,0.026mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A9
将化合物23(140mg,0.25mmol,1.0eq)溶于二氧六环和水(3mL/1mL)的混合溶剂中，然后在0℃加入碳酸钾(103.5mg,0.75mmol,3.0eq)，110℃反应2小时。反应完成后，浓缩得到粗品，粗品使用prep-HPLC(流动相0.1％FA/乙腈/水)制备纯化得到化合物A9(9.6mg,8％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-9化合物A10的制备
步骤一、化合物25
将化合物24(500mg,2.62mmol,1.0eq)与化合物10(420mg,2.62mmol,1.0eq)溶于异丙醇(24mL)中，加入二异丙基乙基胺(3380mg,26.20mmol,10.0eq)，反应混合液在80℃搅拌反应18小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，减压浓缩到10mL，反应悬浊液过滤，并用异丙醇淋洗滤饼，得到的湿品干燥得化合物25(800mg,97％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A10
将化合物25(300mg,0.956mmol,1.0eq)与化合物6(214mg,0.956mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，加入磷酸钾一水合物(660mg,2.868mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-10化合物A11的制备
步骤一、化合物27
将化合物26(600mg,2.068mmol,1.0eq)和化合物21(536mg,2.068mmol,1.0eq)溶于正丁醇(20mL)中，向反应液中加入二异丙基乙基胺(1.3g,10.340mmol,5.0eq),反应液在氮气氛围下，100℃搅拌16小时，反应结束后，冷却，浓缩，残留物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝15：1)纯化得到化合物27(600mg,70％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物28
将化合物27(300mg,0.727mmol,1.0eq)和4-二甲氨基吡啶(9mg,0.073mmol,0.1eq)溶于四氢呋喃(15mL)中，向反应液中加入二碳酸二叔丁酯(158mg,0.727mmol,1.0eq)，室温搅拌反应16小时，反应结束后，浓缩，残留物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1：1)纯化得到化合物28(350mg,94％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物29
将化合物28(350mg,0.682mmol,1.0eq)，化合物5(152mg,0.682mmol,1.0eq)和磷酸钾一水合物(470mg,2.046mmol,3.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，接着向反应液中加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物30
将化合物29(360mg,0.513mmol,1.0eq)溶于乙腈(10mL)中，向反应液中加入对甲苯磺酸一水合物(975mg,5.130mmol,10.0eq)，反应液在0℃条搅拌8小时，反应结束后，向体系中加入N-甲基咪唑中和多余的对甲苯磺酸，得到的反应混合液浓缩，得到粗品，粗品使用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物30(100mg)为黄色固体，剩余粗品直接用于下一步反应。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A11
将化合物30(100mg)溶于乙腈和二氯甲烷(8mL/6mL)中，向反应液中加入37％的甲醛水溶液(72mg,0.891mmol)，反应混合液在室温搅拌5分钟，接着向反应液中加入氰基硼氢化钠(126mg,0.594mmol,2.0eq),反应液在室温搅拌半小时，反应结束后，反应液直接减压浓缩，残留物使用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A11(53.5mg,)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-11化合物A12的制备
步骤一、化合物33
将化合物31(1.0g,5.37mmol,1.1eq)溶于二氧六环/水(10/1,20mL/2mL)的混合溶剂中，然后快速加入化合物32(1.4g,4.89mmol,1.0eq)，碳酸钾(2.0g,14.49mmol,3.0eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物35
将化合物33(690mg,2.69mmol,1.0eq)溶于异丙醇(10mL)然后加入化合物34(1.2g,8.06mmol,3.0eq)和二异丙基乙基胺(1.4g,10.74mmol,4.0eq)。反应液在80℃搅拌6小时。冷却至室温，将反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，然后依次用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化得到化合物35(800mg,81％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物36
将化合物35(750mg,2.03mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(30mL)中，然后加入TFA(30mL)。反应液在25℃搅拌1小时。将反应液旋干，残留物用乙酸乙酯溶解，碳酸钠水溶液调节pH值至7，水相用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物36(750mg,100％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物37
将化合物36(400mg,1.4mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物38
将化合物37(200mg,0.45mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)，然后快速加入化合物8(101mg,0.45mmol,1.0eq)，磷酸钾一水合物(363mg,1.58mmol,3.5eq)，X-Phos(86mg,0.18mmol,0.4eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A12
将化合物38(90mg,0.16mmol,1.0eq)溶于二氧六环/水(10/1,20mL/2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(331mg.2.4mmol,15.0eq)。反应液在110℃搅拌6小时。将反应液浓缩，残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物A12(25.5mg,21％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-12化合物A14的制备
步骤一、化合物41
将化合物39(830mg,3.74mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，然后依次加入化合物40(707mg,4.11mmol,1.1eq)，碳酸钾(2.58g,18.6mmol,5.0eq)和Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物42
将粗品化合物41溶于DCM(50mL)中，然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物43
将化合物42(160mg,0.56mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(3mL)反应液在25℃搅拌2小时。将反应液直接旋干后得到粗品化合物43。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物44
将粗品化合物44溶于异丙醇(3mL)中，并依次加入化合物34(83mg,0.56mmol,1.0eq)，二异丙基乙基胺(1.45g,11.2mmol,20.0eq),反应液在80℃搅拌16小时。将反应液经由乙酸乙酯/水萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝1:1)纯化后得到化合物44(98mg,两步58％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A14
将化合物44(88mg,0.29mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10ml)中，然后依次加入化合物6(66mg,0.29mmol,1.0eq)，磷酸钾(369mg,1.74mmol,6.0eq)和Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-13化合物A15的制备
步骤一、化合物47
将化合物45(100mg,0.606mmol,1.0eq)和对甲苯磺酸一水合物(17mg,0.091mmol,0.15eq)溶于二氯甲烷中(4mL)，随后加入化合物46(152mg,1.818mmol,3.0eq)。加料完毕后，反应液在氮气氛围下25℃反应3小时。LC-MS监测反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残留物用硅胶柱层析(石油醚/二氯甲烷＝10/1)纯化得到化合物47(140mg,93％)为黄色油状液体。
LCMS:[M+Na]
步骤二、化合物49
将化合物47(130mg,0.522mmol,1.0eq)，化合物48(265mg,1.044mmol,2.0eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+Na]
步骤三、化合物50
将上一步的粗品化合物49用二氧六环/水(4mL/1mL)溶解，然后加入化合物6(179mg,1.044mmol,2.0eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+Na]
步骤四、化合物51
将化合物50(100mg,0.383mmol,1.0eq)和化合物16(96mg,0.575mmol,1.5eq)溶于异丙醇(4mL)，随后加入二异丙基乙基胺(247mg,1.915mmol,5.0eq)。加料完毕后，反应液在氮气氛围下50℃反应8小时。LC-MS监测反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残留物用硅胶柱层析(石油醚/二氯甲烷＝1/1)洗脱得到化合物51(90mg,40％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物52
将化合物51(250mg,0.638mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷中(3mL)，随后向溶液中加入三氟乙酸(3mL)。加料完毕后，反应液在25℃反应2小时。减压蒸馏除去溶剂，残留物用饱和碳酸钠溶液调节pH(9-10)，过滤溶液，收集固体，得到化合物52(130mg,66％)为类白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A15
将化合物52(100mg,0.325mmol,1.0eq)，化合物6(73mg,0.325mmol,1.0eq)，Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-14化合物A16的制备
步骤一、化合物54
将化合物53(1.08g,3.69mmol,1.2eq)和化合物40(524mg,3.07mmol,1.0eq)溶于1，4二氧六环(12mL)中，然后加入碳酸钾(1.27g,9.21mmol,3.0eq)与Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物55
将化合物54(330mg,1.28mmol,1.0eq)和化合物16(638mg,3.84mmol,3.0eq)溶于异丙醇(8mL)中，然后加入二异丙基乙基胺(495mg,3.84mmol,3.0eq)。氮气气氛下反应液在60℃搅拌4小时。LC-MS监测反应完全后，将反应液浓缩除去溶剂得残留物，残留物用硅胶快速过柱柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝65/35)纯化得到化合物55(350mg,70％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物56
将化合物55(730mg,1.88mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(4mL)中，然后加入三氟乙酸(22mL)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液浓缩得残留物，残留物用乙酸乙酯稀释。然后用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩得到粗品化合物56(569mg,100％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物57
将化合物56(569mg,1.87mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(5mL)中，然后依次加入DMAP(45mg,0.37mmol,0.2eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物58
将化合物57(200mg,0.49mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后加入化合物6(163mg,0.73mmol,1.5eq)，磷酸钾(338mg,1.47mmol,3.0eq)，X-Phos(42mg,0.09mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A16
将粗品化合物58(110mg,0.18mmol,1.0eq)溶于二氧六环(4mL)和水(4mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(248mg,1.8mmol,10.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A16(77.5mg,87％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-15化合物A17的制备
步骤一、化合物61
将化合物59(500mg,2.45mmol,1.0eq)，化合物60(476mg,3.68mmol,1.5eq)，HATU(1.68g,4.41mmol,1.8eq)和二异丙基乙基胺(1.26g,9.8mmol,4.0eq)溶于DMF(20mL)中，在室温搅拌2小时。反应完成后，反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取三次。有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。得到的残留物通过柱层析纯化后(PE:EA＝83:17)得到化合物61(664mg,90％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物63
将化合物61(600mg,2.15mmol,1.0eq)，化合物62(632mg,6.45mmol,3.0eq)，CuI(123mg,0.645mmol,0.3eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物64
将化合物63(1.05g,2.15mmol,1.0eq)和四丁基氟化铵三水合物(845mg,3.22mmol,1.5eq)溶于四氢呋喃(10mL)中。反应液在室温搅拌半小时。反应完成后，反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取三次。有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过柱层析纯化后(PE:EA＝90：10)得到化合物64(220mg,50％两步)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物66
将化合物64(220mg,0.978mmol,1.0eq)，化合物65(365mg,0.978mmol,1.0eq)，Pd
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A17
将碳酸钾(195mg,1.41mmol,3.0eq)和水(1mL)直接加入上一步粗品化合物66的反应液中，在110℃搅拌2小时。反应完成后，反应液过滤，滤液浓缩。残留物通过prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物A17(70mg,20％两步)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-16化合物A18的制备
步骤一、化合物68
将化合物67(2.9g,14.21mmol,1.0eq)溶于DMF(30mL)中，加入HATU(6.49g,17.06mmol,1.2eq)搅拌10分钟后，加入化合物60(1.84g,14.21mmol,1.0eq)与二异丙基乙基胺(5.51g,42.64mmol,3.0eq)，反应混合物在室温继续搅拌2小时。LCMS确定反应完全后，反应液用乙酸乙酯稀释，用水洗，食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(EA：PE＝1：10)纯化得化合物68(2.8g,70％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物69
将化合物68(2.7g,9.67mmol,1.0eq)溶于三乙胺(30mL)中，加入碘化亚铜(553mg,2.9mmol,0.3eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]+＝297.1
步骤二、化合物70
将上一步粗品化合物69(2.2g,7.65mmol,1.0eq)溶于THF(10mL)中，加入三水合四丁基氟化铵(4.8g,15.3mmol,2.0eq)。混合物在室温搅拌反应1小时。LCMS监控反应完全后，在反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(150mL)萃取三次。合并的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物使用硅胶柱层析(EA：PE＝1：9)纯化得化合物70(1.2g,两步收率70％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A18
将化合物70(150mg,0.67mmol,1.0eq)与化合物65(250mg,0.67mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，加入X-Phos(47mg,0.1mmol,0.15eq)与一水合磷酸钾(462mg,2.01mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物72
将化合物71(2.0g,9.0mmol,1.0eq)溶于THF(16mL)中，加入氢氧化锂一水合物(2.1g,90.0mmol,10.0eq)和水(10mL)，反应混合液在25℃搅拌1小时。通过LCMS监控反应完全后，在反应液中加入水(80mL)，然后用乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，收集水相，往水相中加入盐酸二氧六环溶液(5mL)调节pH至酸性＝3，加入乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得粗品化合物72(1.6g,86％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]+＝206.9
步骤二、化合物73
将化合物72(800mg,3.8mmol,1.0eq)室温溶于DMF(10mL)中，加入HATU(2.88g,7.6mmol,2.0eq)搅拌10分钟后，加入化合物3(600mg,4.6mmol,1.2eq)与二异丙基乙基胺(2.4g,19.0mmol,5.0eq)，反应混合物在25℃继续搅拌2小时。LCMS监控反应完全后，在反应液中加入水(60mL)，然后用乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物，残留物使用硅胶柱层析(0-10％PE/EA)纯化得化合物73(700mg,65％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物74
将化合物73(700mg,2.49mmol,1.0eq)溶于三乙胺(15mL)中，加入碘化亚铜(93mg,0.49mmol,0.2eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物75
将粗品化合物74(595mg,1.98mmol,1.0eq)溶于THF(8mL)中，加入四丁基氟化铵三水合物(1.2g,3.96mmol,2.0eq)，混合物在25℃搅拌反应1小时。LCMS确定反应完全后，在反应液中加入水(50mL)，然后用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物，得到的残留物使用硅胶柱层析(0-30％PE/EA)纯化得化合物75(300mg,66％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物76
将化合物75(107mg,0.47mmol,1.0eq)与化合物65(170mg,0.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，加入X-Phos(33mg,0.07mmol,0.15eq)与一水合磷酸钾(324mg,1.41mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤七、化合物A19
将化合物76(110mg,0.19mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，反应混合液在室温搅拌反应1小时。LCMS监控反应结束后，减压浓缩反应混合液得残留物，残留物用DMF(4mL)溶解并过滤，将滤液通过prep-HPLC(流动相：0.1％ HCOOH/乙腈/水)纯化得化合物A19(3.5mg,4％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-18化合物A20的制备
步骤一、化合物78
将化合物77(3.7g,13.4mmol,1.0eq)溶于三乙胺(30mL)中，加入碘化亚铜(508mg,2.68mmol,0.2eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物79
将化合物78(1.97g,6.69mmol,1.0eq)溶于THF(10mL)中，加入四丁基氟化铵三水合物(4.22g,13.38mmol,2.0eq)，混合物在室温搅拌反应1小时。LCMS监控反应完全后，在反应液中加入水(60mL),然后用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，有机相合并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物，得到的残留物使用硅胶柱层析(0-12％EA/PE)纯化得化合物79(900mg,60％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物80
将化合物79(165mg,0.8mmol,1.0eq)与化合物65(300mg,0.8mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，加入X-Phos(57mg,0.12mmol,0.15eq)与一水合磷酸钾(552mg,2.4mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A20
将化合物80(95.0mg,0.17mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，加入碳酸钾(187.0mg,1.36mmol,8.0eq)与水(4mL)，反应混合液在110℃搅拌反应2小时。LCMS监控反应结束后，减压浓缩反应混合液得残留物，残留物用DMF(4mL)溶解并过滤，将滤液通过prep-HPLC(流动相：0.1％ HCOOH/乙腈/水)纯化得化合物A20(23.5mg,30％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-19化合物A21的制备
步骤一、化合物82
将化合物81(2.0g,9.9mmol,1.0eq)溶于DMF(20mL)中，加入HATU(5.65g,14.9mmol,1.5eq)搅拌10分钟后，加入化合物60(1.28g,9.9mmol,1.0eq)与二异丙基乙基胺(5.12g,39.60mmol,4.0eq)。反应混合物在室温继续搅拌5小时。LCMS监控反应完全后，在反应液中加入水(60mL)淬灭反应，然后用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝4/1)纯化得化合物82(1.7g,62％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物83
将化合物82(1.0g,3.6mmol,1.0eq)溶于三乙胺(10mL)中，加入碘化亚铜(137mg,0.72mmol,0.2eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物84
将化合物83(0.9g,3.06mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入四丁基氟化铵三水合物(1.1g,3.67mmol,1.2eq)。混合物在25℃搅拌反应0.5小时。LCMS确定反应完全后，反应液浓缩，残留物硅胶柱层析(EA/PE＝1/2)纯化得化合物84(300mg,44％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物85
将化合物84(200 mg,0.45 mmol,1.0 eq)与化合物65(150 mg,0.41 mmol,0.9eq)溶于二氧六环(5 mL)中，加入X-Phos(43 mg,0.09 mmol,0.2 eq)与一水合磷酸钾(311mg,1.35 mmol,3.0 eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A21
将化合物85(190.0 mg,0.34 mmol,1.0 eq)溶于二氧六环(2 mL)中，加入碳酸钾(141.0 mg,1.02 mmol,3.0 eq)与水(0.4 mL)。反应混合液在110℃搅拌反应6小时。LCMS显示反应结束后，反应混合液减压浓缩得残留物。残留物用DMF(4 mL)溶解并过滤，将滤液通过prep-HPLC(流动相：0.1％HCOOH/乙腈/水)纯化得化合物A21(5.5 mg,4％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-20化合物A22的制备
步骤一、化合物87
将化合物34(500 mg,3.356 mmol,1.0 eq)与化合物86(468 mg,3.188mmol,1.0eq)溶于异丙醇(10 mL)中，加入二异丙基乙基胺(2.2 mg,16.780mmol,5.0eq)，反应混合液在80℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，反应液减压浓缩得残留物，残留物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化得到化合物87(520mg,60％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A22
将化合物87(150mg,0.578mmol,1.0eq)与化合物6(116mg,0.520mmol,0.9eq)溶于二氧六环(10mL)中，加入磷酸钾一水合物(399mg,1.734mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-21化合物A27的制备
步骤一、化合物89
将化合物16(193.15mg,1.15mmol,1.2eq),化合物88(280mg,0.97mmol,1.0eq)和二异丙基乙基胺(373.5mg,2.89mmol,3.0eq)加入到异丙醇(5mL)中。反应液在80℃反应16小时。将反应液降温,减压除去溶剂。残留物通过硅胶柱层析(PE/EA＝2/1)纯化得到化合物89(280mg,69％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物90
将化合物89(230mg,0.546mmol,1.0eq)，溶于二氧六环(30mL)中，然后加入化合物6(124.7mg,0.546mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(440.36mg,1.912mmol,3.5eq),X-Phos(109.3mg,0.109mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]+＝609.2
步骤三、化合物A27
将化合物90(190mg,0.312mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(15mL)，然后加入四丁基氟化铵三水合物(820mg,3.125mmol,10.0eq)。反应液于90℃条件下反应18小时。反应完成后，反应液浓缩除去四氢呋喃。残留物用乙酸乙酯稀释，并用水洗3次，无水硫酸钠干燥，浓缩得倒粗品。粗品使用prep-HPLC(流动相：0.1％ FA/乙腈/水)制备纯化得到化合物A27(46mg,30.8％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-22化合物A28的制备
步骤一、化合物92
将化合物91(1.0g,4.975mmol,1.0eq)溶于DMF(10mL)中，加入HATU(2.27g,5.97mmol,1.2eq)搅拌10分钟后，加入化合物60(963mg,7.462mmol,1.5eq)与二异丙基乙基胺(1.9g,14.925mmol,3.0eq)，反应混合物在25℃继续搅拌1小时。LCMS确定反应完全后，在反应液中加入水(30mL)，悬浊液过滤，干燥得化合物92(1.1g,80％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物93
将化合物92(1.0g,3.610mmol,1.0eq)溶于三乙胺(20mL)中，加入碘化亚铜(137mg,0.722mmol,0.2eq)和Pd(PPh3)
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物94
将化合物93(850mg,2.897mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入四丁基氟化铵三水合物(970mg,3.476mmol,1.2eq)，混合物在室温搅拌反应2小时。LCMS监控反应后，在反应液中加入水(30mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物，得到的残留物使用硅胶柱层析(硅胶,0-30％EA/PE)纯化得化合物94(380mg,60％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A28
将化合物94(300mg,1.357mmol,1.0eq)与化合物7(441mg,1.629mmol,1.2eq)溶于正丁醇(20mL)中，加入X-Phos(97mg,0.203mmol,0.15eq)与磷酸钾一水合物(863mg,4.071mmol,3.0eq)，最后加入Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-23化合物A29的制备
步骤一、化合物96
将化合物95(200mg,0.93mmol,1.0eq)溶于甲醇/水(2mL/1mL)中，然后加入氢氧化锂(158mg,3.74mmol,4.0eq)，反应液在室温反应1小时。反应液旋干得到化合物96(190mg,99％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物97
将化合物96(200mg,1.0mmol,1.0eq)溶于DMF(3mL)中，然后加入化合物60(154mg,1.2mmol,1.2eq)和HATU(575mg,1.5mmol,1.5eq)，反应液在室温搅拌0.5小时，然后加入二异丙基乙基胺(387mg,3.0mmol,3.0eq)，反应液在室温搅拌1.5小时，反应物缓慢加入到水中，用乙酸乙酯萃取2次，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)纯化得到化合物97(240mg,87％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物98
将化合物97(150mg,0.55mmol,1.0eq)溶于三乙胺(3mL)中，然后依次加入化合物5(640mg,6.5mmol,12eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物99
将化合物98(150mg,0.51mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后加入四丁基氟化铵三水合物(200mg,0.77mmol,1.5eq)，反应液在室温反应2小时。反应液旋干，残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝15/1)纯化后得到化合物99(100mg,89％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物100
将化合物99(320mg,0.90mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，然后加入化合物8(200mg,0.90mmol,1.0eq)，磷酸钾(621mg,2.7mmol,3.0eq),X-phos(86mg,0.18mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A29
将化合物100(100mg,0.18mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后在0℃加入三氟乙酸(3mL)，室温反应2小时。反应完成后，将反应液缓慢加入到饱和碳酸氢钠水溶液中，混合物用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相后用水洗，有机相浓缩，残留物加入乙酸乙酯(4mL)，甲醇(1mL)和二氯甲烷(1mL)，混合物在室温条件下搅拌0.5h，过滤得到化合物A29(80.3mg,79％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-24化合物A30的制备
步骤一，化合物103
将化合物100(5.0g,24.51mmol,1.0eq)，化合物102(4.21g,49.01mmol,2.0eq)和碳酸钠(4.07g,49.01mmol,2.0eq)溶于1,2-二氯乙烷(130mL)中，然后加入2,2'-联吡啶(3.83g,24.51mmol,1.0eq)和无水醋酸铜(4.45g,24.51mmol,1.0eq)。反应液置换氧气三次后，在氧气氛围下，70℃搅拌8小时。将反应液冷却至室温。反应液用1,2-二氯乙烷稀释，依次用氨水洗，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用快速硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝16/1)纯化得到化合物103(5.54g,92％)为黄色油状物。
LCMS:[M+H]
步骤二，化合物104
将化合物103(5.54g,27.70mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃/甲醇/水(1/1/2，60mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂(2.72g,113.48mmol,5.0eq)。反应液在40℃反应1小时。反应结束后,将反应液减压蒸馏去除大部分甲醇和四氢呋喃。向残留溶液中滴加饱和柠檬酸钠水溶液调节pH至5.0，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物104(5.05g,96％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三，化合物105
将化合物104(5.05g,24.08mmol,1.0eq)，化合物60(3.74g,28.90mmol,1.2eq)和HATU(10.99g,28.90mmol,1.2eq)溶于DMF(80mL)中，反应液降温至0℃，缓慢加入二异丙基乙基胺(12.45g,96.32mmol,4.0eq)。反应液在室温反应2小时。反应完毕后，向反应液中加水(200mL)，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)纯化得到化合物105(6.34g,94％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四，化合物106
将化合物105(1.0g,3.28mmol,1.0eq)溶于三乙胺(14.5mL)中，然后加入化合物62(966mg,9.83mmol,3.0eq)，双三苯基磷二氯化钯(230mg,0.328mmol,0.1eq)和碘化亚铜(187mg,0.983mmol,0.3eq),置换氮气三次。反应液在氮气氛围下在90℃搅拌2小时。反应液合并后用乙酸乙酯稀释，过滤。滤液依次用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用快速硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝13/1)纯化得到化合物106(625mg,59％)为棕褐色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五，化合物107
将化合物106(330mg,1.02mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(8mL)中，然后加入四丁基氟化铵三水合物(484mg,1.54mmol,1.5eq)。反应液在25℃搅拌30分钟反应物浓缩。残留物用快速硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝19/1)纯化得到化合物107(240mg,93％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤六，化合物108
将化合物107(200mg,0.799mmol,1.0eq)，化合物65(357mg,0.959mmol,1.2eq)和磷酸钾一水合物(552mg,2.400mmol,3.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，然后快速加入X-phos(76mg,0.160mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤七，化合物A30
将化合物108(188mg,0.321mmol,1.0eq)和碳酸钾(133mg,0.963mmol,3.0eq)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝5/1，3.6mL)中，反应液在110℃搅拌2.5小时。冷却至室温，将反应液浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A30(83.0mg,53％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-25化合物A32的制备
步骤一，化合物111
将化合物109(1.0g,7.99mmol,1.0eq)溶于DMF(20mL)中，然后冰浴条件下加入NaH(480mg,60％含量在矿物油中,11.99mmol,1.5eq)，反应液在25℃搅拌20分钟后加入化合物110(2.49g,15.98mmol,2.0eq)。加料完毕后反应液在室温搅拌1小时。反应结束后将反应液倒入冰水中，然后用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝20/1)纯化得到化合物111(1.0g,81％)为棕色油状液体。
LCMS:[M+H]
步骤二，化合物112
将化合物111(9.80g,63.98mmol,1.0eq)溶于DCM(10mL)中，置换氮气，降温到0℃后加入NBS(3.64g,63.89mmol,1.0eq)。加料完毕后反应液在冰浴条件下搅拌0.5小时。反应结束后将反应液倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品化合物112(11.0g，74％)为棕色油状液体。
LCMS:[M+H]
步骤三，化合物113
将粗品化合物112(11.0g，47.6mmol，1.0eq)溶于甲醇(50mL)中，然后加入氢氧化钠(5.7g,142.2mmol,3.0eq)配置成的1.0M氢氧化钠水溶液。加料完毕后反应液在40℃下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，浓缩。得到的水溶液用1.0M盐酸溶液调pH到4-5左右，用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝30/1)纯化得到化合物113(2.6g,25％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四，化合物114
将化合物113(850mg,3.86mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，然后加入HATU(1.93g,5.07mmol,1.3eq)，反应液在室温下搅拌10分钟。向反应液中依次加入二异丙基乙基胺(1.51g,11.69mmol,3.0eq)和化合物60(505mg,3.90mmol,1.0eq)。反应液在室温搅拌1小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝30/1)纯化得到化合物114(1.0g,88％)为黄色油状液体。
LCMS:[M+H]
步骤五，化合物115
将化合物114(600mg,2.04mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，然后室温条件依次加入CuI(78mg,0.41mmol,0.2eq)，Pd(PPh
LCMS:[M+H]
步骤六，化合物116
将化合物115(400mg,1.68mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入四丁基氟化铵三水合物(936mg,2.52mmol,1.5eq)。加料完毕后25℃搅拌0.5小时。反应液用乙酸乙酯稀释，再用水和饱和食盐水洗。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝20/1)纯化得到化合物116(270mg,68％)为红色固体。
LCMS:[M+H]
步骤七，化合物A32
将化合物116(280mg,0.75mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，然后依次加入化合物10(197mg,0.83mmol,1.1eq)，一水合磷酸钾(607mg,2.64mmol,3.5eq)，X-Phos(72mg,0.15mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤一，化合物118
将化合物117(400mg,2.01mmol,1.2eq),化合物21(434.28mg,1.67mmol,1.0eq)和二异丙基乙基胺(649.37mg,5.01mmol,3.0eq)加入到异丙醇(20mL)中。反应液在50℃反应搅拌16小时。将反应液降温,减压除去溶液。通过硅胶柱层析(PE/EA＝2/1)纯化得到化合物118(538mg,76％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二，化合物119
将化合物117(200mg,0.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(6mL)中，然后加入化合物21(106mg,0.47mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(382mg,1.7mmol,3.5eq),X-Phos(45mg,0.094mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤三，化合物A37
将粗品化合物119(289mg,474mmol,1.0eq)溶于二氧六环/水(5mL/1mL)的混合溶剂中，然后在25℃加入碳酸钾(654mg,4.74mmol,10.0eq)，反应液于110℃反应2小时。反应完成后，浓缩得到粗品，粗品使用prep-HPLC(流动相：0.1％ FA/乙腈/水)制备纯化得到化合物A37(58mg,24％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-27化合物A38的制备
步骤一，化合物120
将化合物109(20.0g,159.84mmol,1.0eq)溶于无水DMF(100mL)中，然后冰浴条件下加入NaH(9.59g,60％含量在矿物油中,239.76mmol,1.5eq)。反应液在冰浴下搅拌30分钟，然后加入化合物溴乙腈(38.34g,319.68mmol,2.0eq)。反应液在25℃搅拌过夜。反应结束后，将反应液加入到饱和氯化铵水溶液淬灭，再加加水(200mL)得到混合液。混合液用乙酸乙酯萃取(300mL x 3)。有机相合并并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化得到化合物120(20.3g,77％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二，化合物121
将化合物120(20.3g，123.66mmol,1.0eq)溶于甲醇(250mL)中，加入二氯化钴(9.63g,74.19mmol,0.6eq)。反应液用冰浴降温10分钟后，保持冰浴条件下向反应液中慢慢加入硼氢化钠(28.07g,741.94mmol,6.0eq)。反应液在25℃搅拌16小时。LCMS监控反应结束后，粗品化合物121的反应液直接用于下一步反应。
LCMS:[M+H]
步骤三，化合物122
粗品化合物121(123.66mmol，1.0eq)的反应液加入甲醇钠(10.02g,185.50mmol,1.5eq)。反应液在80℃搅拌过夜。反应液冷却到室温，过滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液真空浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-3/1，乙酸乙酯)纯化得到化合物122(13.5g,80％，两步)为淡粉色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四，化合物124
将化合物122(3.0g,22.03mmol,1.0eq)溶于无水DMF(40mL)中，然后冰浴条件下加入NaH(1.76g,60％含量在矿物油中,44.07mmol,2.0eq)。反应液在冰浴下搅拌30分钟，然后加入化合物123(7.67g,33.05mmol,1.5eq)。反应液在25℃搅拌30分钟。反应结束后，反应液用饱和氯化铵水溶液淬灭，再加水(60mL)得到混合液。混合液用乙酸乙酯萃取(90mL×3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-2/1)纯化得到化合物124(989mg,20％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五，化合物125
将化合物124(950mg，4.35mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后降温到0℃，保持0℃加入NBS(697mg,3.92mmol,0.9eq)。反应液在0℃反应30分钟。反应结束后，反应液旋蒸至干，残留物经快速硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到化合物125(956mg,73％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤六，化合物126
将化合物125(920mg,3.10mmol,1.0eq)溶于混合溶剂(三乙胺/四氢呋喃＝1/1/，12mL)中，然后加入化合物62(3.04g,31.0mmol,10.0eq)，双三苯基磷二氯化钯(217mg,0.310mmol,0.1eq)和碘化亚铜(118mg,0.620mmol,0.2eq)。置换氮气三次后，反应液在氮气氛围下，于90℃搅拌3小时。反应液冷却后，用乙酸乙酯稀释，过滤。滤液依次用氨水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品126(4.5g)。粗品126直接用于下一步反应。
LCMS:[M+H]
步骤七，化合物127
将上一步得到的粗品126(4.5g，3.10mmol，1.0eq)溶于乙酸乙酯(20mL)中，然后加入四丁基氟化铵三水合物(1.40g,4.43mmol,1.4eq)。反应液在室温下搅拌30min。反应物浓缩，残留物用快速硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化得到化合物127(711mg,92％，两步)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤八，化合物128
将化合物127(100mg,0.413mmol,1.0eq)，化合物65(161mg,0.413mmol,1.0eq)和磷酸钾一水合物(285mg,1.239mmol,3.0eq)加入到二氧六环(5mL)中，然后快速加入X-phos(39mg,0.083mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤九，化合物A38
将化合物128(160mg,0.269mmol,1.0eq)和碳酸钾(111mg,0.807mmol,3.0eq)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝5/1，6mL)中。反应液在110℃搅拌3小时。冷却至室温，反应液浓缩。残留物用pre-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A38(62.5mg,46％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-28化合物A40的制备
步骤一，化合物131
将化合物129(4.0g,14.38mmol,1.5eq),化合物130(2.0g,9.58mmol,1.0eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二，化合物132
将化合物16(1.2g,7.2mmol,5.0eq)溶于异丙醇(6mL),然后加入化合物131(400mg,1.44mmol,1.0eq)和二异丙基乙基胺(743mg,5.8mmol,4.0eq)。反应液在90℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温后浓缩。残留物通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化得到化合物132(430mg,73％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三，化合物133
将化合物132(430mg,1.05mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(5mL)。反应液在室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，用碳酸钠水溶液调节pH值至7,然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物133(340mg,100％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四，化合物134
将化合物133(340mg,1.04mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(6mL)中,然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤五，化合物A40
将化合物134(125mg,0.29mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)然后加入化合物6(70mg,0.29mmol,1.0eq),磷酸钾一水合物(237mg,1.02mmol,3.5eq),X-Phos(28mg,0.058mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-29化合物A41的制备
步骤一、化合物136
将化合物135(2.0g,10.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(40mL)和水(6mL)的混合溶剂中，然后依次加入化合物129(3.5g,12.57mmol,1.2eq)，碳酸钾(4.3g,31.41mmol,3.0eq)和Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物137
将化合物16(1.1g,6.7mmol,5.0eq)和化合物136(350mg,1.3mmol,1.0eq)溶于异丙醇(10mL)中，然后加入二异丙基乙基胺(503mg,3.9mmol,3.0eq)。反应液在80℃搅拌36小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝1/1)纯化得到化合物137(400mg,78％)为白色固体。
LCMS:[M+H]+＝393.1
步骤三、化合物138
将化合物137(400mg,1.0mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(5mL)。反应液在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，残留物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性。所得反应混合物过滤，收集固体。固体冻干得到化合物138(300mg,95％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物139
将化合物138(300mg,0.97mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后依次加入DMAP(24mg,0.19mmol,0.2eq)和Boc
LCMS:[M-55]
步骤五、化合物140
将化合物139(120mg,0..29mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物6(70mg,0.29mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(200mg,0.87mmol,3.0eq)，X-Phos(29mg,0.06mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A41
将粗品化合物140溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(120mg,0.87mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A41(22.6mg,两步收率：15％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-30化合物A42的制备
步骤一、化合物142
将化合物141(2.0g,9.58mmol,1.0eq),化合物129(4.39g,14.38mmol,1.5eq)和Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物143
将化合物142(300mg,1.15mmol,1.0eq)，化合物16(958mg,5.75mmol,5.0eq)和二异丙基乙基胺(445mg,3.45mmol,3.0eq)溶于异丙醇(15mL)中。反应液在80℃搅拌过夜。反应液冷却至室温,减压除去溶剂。残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EA＝18/7)纯化得到化合物143(388mg,86％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物144
将化合物143(384mg,0.980mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(8mL)。反应液在25℃搅拌30分钟。反应液真空浓缩，加入水(10mL)，加饱和碳酸钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物144(302mg，100％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物145
将化合物144(302mg，0.980mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入4-二甲氨基吡啶(12mg,0.098mmol,0.1eq)和二碳酸二叔丁酯(214mg,0.980mmol,1.0eq)，反应液在室温搅拌1小时。反应完毕后，反应液浓缩，残留物经快速硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得到化合物145(362mg,90％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物146
将化合物145(120mg,0.294mmol,1.0eq)，化合物6(70mg,0.294mmol,1.0eq)和磷酸钾一水合物(203mg,0.882mmol,3.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，然后快速加入X-phos(28mg,0.059mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A42
将化合物146(120mg,0.197mmol,1.0eq)和碳酸钾(136mg,0.985mmol,5.0eq)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝2/1，4.5mL)中。反应液在110℃搅拌3小时。冷却至室温，反应液浓缩。残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A42(25.0mg,24％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-31化合物A43的制备
步骤一、化合物149
将化合物147(400mg,1.92mmol,1.0eq),化合物148(660mg,2.30mmol,1.2eq)和Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]+＝294.1
步骤二、化合物150
将化合物149(500mg,1.70mmol,1.0eq)和化合物16(370mg,2.22mmol,1.3eq)溶于异丙醇中(10mL)，随后加入二异丙基乙基胺(659.12mg,5.1mmol,3.0eq)。加料完毕后，置换氮气，氮气氛围下,反应液在在90℃反应16小时。将反应液冷却至室温,减压蒸馏除去溶剂。残留物用硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝2/1)纯化得到化合物150(400mg,55.4％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物151
将化合物150(280mg,0.662mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷中(5mL)，随后向溶液中加入三氟乙酸(5mL)。加料完毕后，反应液在25℃反应2小时。将反应液减压蒸馏除去溶剂。残留物用少量二氯甲烷溶解，用饱和碳酸钠溶液调节pH到9-10。所得反应混合物过滤，收集固体。固体在旋蒸上干燥得到化合物151(200mg,86.3％)为白色固体，直接用于下一步。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物152
将化合物151(150mg,0.442mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃中(25mL)，随后向溶液中加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物153
将化合物152(70mg,0.159mmol,1.0eq)，化合物6(37.92mg,0.159mmol,1.0eq)，Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A43
将化合物153(80mg,0.125mmol,1.0eq)和碳酸钾(51.70mg,0.374mmol,3.0eq)加入到1,4-二氧六环(4mL)和水(2mL)的混合溶液中。加料完毕后，反应液在110℃反应1小时。减压蒸馏除去溶剂，用DMF(4mL)溶解残留物并过滤，将滤液通过prep-HPLC(流动相：0.1％HCOOH/乙腈/水)纯化得化合物A43(18mg,26.6％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-32化合物A44的制备
步骤一、化合物155
将化合物154(3.4g,19.8mmol,0.9eq)和化合物148(6.1g,20.8mmol,1.0eq)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，然后加入碳酸钾(8.6g,62.4mmol,3.0eq)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(456mg,0.62mmol,0.03eq)。置换氮气,氮气氛围下，反应液在90℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，过硅藻土，浓缩滤液得残留物。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝4/1)纯化得到化合物155(3.3g,64％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物156
将化合物155(3.3g,12.8mmol,1.0eq)溶于异丙醇(30mL)，加入化合物16(4.2g,25.6mmol,2.0eq)与二异丙基乙基胺(8.2g,64mmol,5.0eq)，反应混合物在45℃搅拌3小时。LC-MS监测反应完全后，浓缩反应混合液得残留物，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到化合物156(2.8g,56％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物157
将化合物156(2.8g,7.23mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(20mL)中，然后加入三氟乙酸(120mL)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液浓缩得残留物，残留物用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，有大量固体析出，过滤收集并干燥固体得到粗品化合物157(1.7g)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物158
将化合物157(1.7g,5.6mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(25mL)中，然后依次加入DMAP(136mg,1.12mmol,0.2eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物159
将化合物158(510mg,1.26mmol,1.0eq)溶于二氧六环(15mL)中，然后加入化合物6(300mg,1.26mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(870mg,3.78mmol,3.0eq)，X-Phos(119mg,0.25mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A44
将粗品化合物159(200mg,0.33mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)和水(3mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(182mg,1.32mmol,4.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物。残留物用pre-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A44(104.5mg,62％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-33化合物A45的制备
步骤一、化合物161
将化合物142(350mg,1.34mmol,1.0eq)，化合物160(242mg,1.34mmol,1.0eq)和二异丙基乙基胺(519mg,4.02mmol,3.0eq)溶于异丙醇(10mL)中。反应液在80℃搅拌过夜。反应液冷却至室温,减压除去溶剂。残留物化合物161粗品直接用于下一步反应。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物162
将上述所得化合物161粗品溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(10mL)。反应液在25℃搅拌30分钟。反应液真空浓缩后，向残留物中加入水(15mL)，加饱和碳酸钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩的残留物经快速硅胶柱层析(PE/EA＝3/7)纯化得到化合物162(200mg,46％，两步)为棕色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物163
将化合物162(200mg，0.621mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入4-二甲氨基吡啶(7mg,0.062mmol,0.1eq)和二碳酸二叔丁酯(135mg,0.621mmol,1.0eq)，反应液在25℃搅拌1小时。反应完毕后，反应液浓缩，残留物经快速硅胶柱层析(PE/EA＝7/3)纯化得到化合物163(166mg,63％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物164
将化合物163(155mg,0.296mmol,1.0eq)，化合物6(71mg,0.296mmol,1.0eq)和磷酸钾水合物(204mg,0.888mmol,3.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，然后快速加入X-phos(28mg,0.0296mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A45
将化合物164(160mg,0.256mmol,1.0eq)和碳酸钾(213mg,1.536mmol,6.0eq)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝2/1，6mL)中。反应液在110℃搅拌5小时。冷却至室温，反应液浓缩。残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A45(29.7mg,21％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物166
将化合物129(2.01g,7.3mmol,1.5eq)，化合物165(1g,4.8mmol,1eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物167
将化合物166(600mg,2.15mmol,1.0eq)和化合物16(3.59mg,21.48mmol,10eq)溶于正丁醇(10mL)，随后加入二异丙基乙基胺(2.78mg,21.48mmol,10.0eq)。加料完毕后，反应液在氮气氛围下110℃反应16小时。将反应液减压蒸馏除去溶剂，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到化合物167(280mg,32％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物168
将化合物167(278mg,0.682mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷中(4mL)，随后向溶液中加入三氟乙酸(3mL)。加料完毕后，反应液在25℃反应2小时。将反应液减压蒸馏浓缩。残留物用二氯甲烷溶解，用饱和碳酸钠溶液调节pH(8-9)，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)。有机相合并，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏浓缩，真空干燥得到粗品化合物168(222mg)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物169
将粗品化合物168溶于四氢呋喃中(4mL),随后加入二碳酸二叔丁酯(118mg,0.541mmol,0.8eq)和4-二甲氨基吡啶(8mg,0.068mmol,0.1eq)。加料完毕后，反应也在室温反应两小时。LC-MS监测反应完全后，将反应液减压蒸馏除去溶剂，残留物使用快速柱层析(硅胶,石油醚/乙酸乙酯0-10％)纯化得到化合物169(180mg,62％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A46
将化合物169(270mg,0.634mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)，然后快速加入化合物79(142mg,0.634mmol,1.0eq),磷酸钾一水合物(511mg,2.22mmol,3.5eq),X-Phos(60mg,0.127mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
实施例1-35化合物A47的制备
步骤一、化合物170
将化合物165(5.0g,24.04mmol,1.0eq)和化合物148(8.4g,28.85mmol,1.2eq)溶于1,4-二氧六环(80mL)和水(8mL)的混合溶液中，然后加入碳酸钾(9.9g,72.12mmol,3.0eq)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(2.63g,3.60mmol,0.15eq)。置换氮气,氮气氛围，反应液在90℃搅拌8小时。LCMS监控反应完毕，将反应液冷却至室温，过硅藻土，浓缩滤液得残留物。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝12/1)纯化得到化合物170(6.4g,90％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物171
将化合物170(6.0g,20.4mmol,1.0eq)加入到二氧六环(150mL)中，然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物172
将化合物171(330mg,0.83mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)，加入NaH(60％含量在矿物油中，79mg,3.32mmol,4.0eq),混合物在0℃搅拌15分钟，然后加入化合物16(413mg,2.49mmol,3.0eq)，反应混合物接着在室温搅拌2小时。LC-MS监测反应完全后，往反应混合液中加入氯化铵水溶液调节pH至弱酸性，用水稀释，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥浓缩得残留物，残留物用硅胶快速过柱柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝80/20)纯化得到化合物172(400mg,90％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物173
将化合物172(400mg,0.76mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(16mL)。反应液在25℃搅拌0.5小时。将反应液浓缩得残留物，残留物用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，有大量固体析出，过滤收集并干燥固体得到粗品化合物173(227mg)为黄色固体。
LCMS:[M+H]+＝340.0
步骤五、化合物174
将化合物173(227mg,0.67mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(5mL)中，然后依次加入DMAP(15mg,0.13mmol,0.2eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物175
将化合物174(200mg,0.45mmol,1.0eq)溶于二氧六环中(6mL)，然后加入化合物6(128mg,0.54mmol,1.2eq)，一水合磷酸钾(310mg,1.35mmol,3.0eq)，X-Phos(42mg,0.09mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤七、化合物A47
将化合物175(120mg,0.18mmol,1.0eq)溶于二氧六环(4mL)和水(4mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(248mg,1.8mmol,10.0eq)。反应液在110℃搅拌1小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A47(43.2mg,44％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-36化合物A48的制备
步骤一、化合物177
将化合物176(2.50g,10.93mmol,1.0eq)和1,2-亚乙基二胺(3.05g,26.24mmol,2.4eq)溶于乙醚(70mL)中。置换氮气，在氮气保护下将溶液降温到-65℃，然后保持-50℃到-65℃之间缓慢滴加正丁基锂的正己烷溶液(2.4M,15mL,36.0mmol,3.29eq),滴加用时半小时左右。在氮气保护下反应液继续在-60℃搅拌十分钟后，将反应液缓慢升温至-15℃，然后保持在-10℃到-25℃下搅拌2小时。在氮气保护下将反应液降温至-60℃，然后保持在-50℃到-65℃之间缓慢滴加NFSI(11.72g,37.17mmol,3.4eq)的四氢呋喃溶液(20mL)。加料完毕后,在氮气保护下反应液慢慢升温至0℃，并在0℃搅拌1小时。反应完成后，反应液中加入到饱和氯化铵水溶液中淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝1/1)纯化得到化合物177(1.2g,44％)为浅黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物178
将化合物177(350mg,1.42mmol,1.0eq)和化合物148(456mg,1.56mmol,1.1eq)溶于1,4-二氧六环(15mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入碳酸钾(686mg,4.97mmol,3.5eq)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(103mg,0.14mmol,0.1eq)。置换氮气,反应液在氮气氛围下100℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得到化合物178(370mg,69％)为红棕色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物179
在氮气保护下将化合物178(370mg,0.98mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，降温到0℃，保持0℃加入NaH(118mg,60％含量在矿物油中，2.95mmol,3.0eq)。反应液在25℃搅拌15分钟。然后向反应液中加入化合物148(985mg,5.90mmol,6.0eq)。反应液在25℃搅拌两小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品用硅胶柱层析(PE/EA＝1/1)纯化得到化合物179(400mg,80％)为红棕色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物180
将化合物179(390mg,0.77mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(3mL)。反应液在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，残留物用乙酸乙酯稀释。然后用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，用乙酸乙酯萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物180(220mg,87％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物181
将化合物180(220mg,0.68mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(8mL)中，然后依次加入DMAP(8mg,0.07mmol,0.1eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物182
将化合物181(200mg,0.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，然后依次加入化合物6(113mg,0.47mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(327mg,1.42mmol,3.0eq)，X-Phos(45mg,0.09mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]+＝625.2
步骤七、化合物A48
将化合物182(140mg,0.22mmol,1.0eq)溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(155mg,1.12mmol,5.0eq)。反应液在110℃搅拌3小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A48(13.3mg,11％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-37化合物A49的制备
步骤一、化合物183
将化合物129(2.01g,7.3mmol,1.5eq)，化合物165(1g,4.8mmol,1eq)，Pd(dppf)Cl
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物184
将化合物183(600mg,2.15mmol,1.0eq)和化合物16(3.59mg,21.48mmol,10eq)溶于正丁醇(10mL)，随后加入二异丙基乙基胺(2.78mg,21.48mmol,10.0eq)。加料完毕后，反应液在氮气氛围下110℃反应16小时。将反应液减压蒸馏除去溶剂，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到化合物184(280mg,32％)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物185
将化合物184(278mg,0.682mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷中(4mL)，随后向溶液中加入三氟乙酸(3mL)。加料完毕后，反应液在室温反应2小时。将反应液减压蒸馏浓缩。残留物用二氯甲烷溶解，用饱和碳酸钠溶液调节pH(8-9)，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)。有机相合并，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏浓缩，真空干燥得到粗品化合物185(222mg)为淡黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物186
将粗品化合物185溶于四氢呋喃中(4mL),随后加入二碳酸二叔丁酯(118mg,0.541mmol,0.8eq)和4-二甲氨基吡啶(8mg,0.068mmol,0.1eq)。加料完毕后，反应也在室温反应两小时。LC-MS监测反应完全后，将反应液减压蒸馏除去溶剂，残留物使用快速过柱机(硅胶,石油醚/乙酸乙酯0-10％)纯化得到化合物186(180mg,62％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物187
将化合物186(200mg,0..47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物6(112mg,0.47mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(324mg,1.41mmol,3.0eq)，X-Phos(45mg,0.09mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A49
将粗品化合物187溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(195mg,1.41mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌3小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A49(41.5mg,两步收率：16％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-38化合物A50的制备
步骤一、化合物188
将化合物131(400mg,1.43mmol,1.0eq)，化合物24(383mg,2.01mmol,1.4eq)和二异丙基乙基胺(740mg,5.73mmol,4.0eq)溶于异丙醇(8mL)中。反应液在80℃搅拌72h。反应液冷却至室温，减压除去溶剂。残留物经快速硅胶柱层析(PE/EA＝1/1)纯化得到化合物188(443mg,71％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]+＝434.1
步骤二、化合物189
将化合物188(440mg,1.01mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(10mL)。反应液在25℃搅拌30分钟。反应液真空浓缩后，向残留物中加入水(15mL)，用饱和碳酸钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物189(350mg，98％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物190
将化合物189(350mg，1.00mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入4-二甲氨基吡啶(12mg,0.100mmol,0.1eq)和二碳酸二叔丁酯(218mg,1.00mmol,1.0eq)。反应液在25℃搅拌2小时。反应完毕后，反应液浓缩。残留物经快速硅胶柱层析(PE/EA＝3/2)纯化得到化合物190(315mg,69％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]+＝450.1
步骤四、化合物191
将化合物190(300mg,0.689mmol,1.0eq)，化合物6(164mg,0.689mmol,1.0eq)和磷酸钾一水合物(476mg,2.07mmol,3.0eq)溶于二氧六环(5mL)中，然后快速加入X-phos(66mg,0.138mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A50
将化合物191(200mg,0.307mmol,1.0eq)和碳酸钾(127mg,0.921mmol,3.0eq)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝2/1，12mL)中。反应液在110℃搅拌3小时。反应液冷却至室温，浓缩。残留物用pre-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A50(16.4mg,9％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-39化合物A51的制备
步骤一、化合物194
将化合物192(4.6g,24.21mmol,1.0eq)和化合物193(8.4g,29.05mmol,1.2eq)溶于1,4-二氧六环(40mL)和水(8mL)的混合溶液中，然后加入碳酸钾(10.0g,72.63mmol,3.0eq)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(526mg,0.72mmol,0.03eq)。置换氮气,反应液在氮气氛围下,于90℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，过硅藻土，浓缩滤液得残留物。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝4/1)纯化得到化合物194(5.69g,85％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物195
将化合物194(1.6g,5.81mmol,1.0eq)溶于异丙醇(20mL)，加入化合物16(1.46mg,8.72mmol,1.5eq)与二异丙基乙基胺(3.74g,29.05mmol,5.0eq)，反应混合物在90℃搅拌14小时。LC-MS监测反应完全后，浓缩反应混合液得残留物，残留物用硅胶快速过柱柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝80/20)纯化得到化合物195(2.27g,96％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物196
将化合物195(2.2g,5.43mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(18mL)中，然后加入三氟乙酸(30mL)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液浓缩得残留物，残留物用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，有大量固体析出，过滤收集并干燥固体得到粗品化合物196(1.34g)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物197
将化合物196(1.34g,4.2mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(10mL)中，然后依次加入DMAP(102mg,0.84mmol,0.2eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物198
将化合物197(500mg,1.18mmol,1.0eq)溶于溶剂dioxane(12mL)中，然后加入化合物6(338mg,1.42mmol,1.2eq)，一水合磷酸钾(819mg,3.56mmol,3.0eq)，X-Phos(109mg,0.23mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A51
将粗品化合物198(150mg,0.24mmol,1.0eq)溶于二氧六环(6mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(331mg,2.4mmol,10.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得残留物。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到化合物得到粗品，将粗品用混合溶剂(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)打浆纯化得化合物A51(100.5mg,80％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-40化合物A52的制备
步骤一、化合物200
将化合物199(500mg,1.82mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)中，然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物201
将化合物200(650mg,1.58mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)中，溶液在N
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物202
将化合物201(850mg,1.68mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(5mL)。反应液在室温下搅拌2小时。将反应液浓缩，残留物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性。所得反应混合物过滤，收集固体。固体冻干得到化合物202(440mg,81％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物203
将化合物202(440mg,1.37mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(10mL)中，然后依次加入DMAP(8mg,0.07mmol,0.05eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物204
将化合物203(500mg,1.18mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物7(282mg,1.18mmol,1.0eq)，磷酸钾(750mg,3.54mmol,3.0eq)，X-Phos(115mg,0.24mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤六、化合物A52
将粗品化合物204溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(489mg,3.54mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌3小时。将反应液冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，水相用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得到粗品。将粗品溶于乙酸乙酯(30mL)中并搅拌14小时，过滤，收集滤饼。滤饼溶于乙腈/水(150mL/350mL)，冻干得到化合物A52(237.5mg,两步收率：38％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物206
将化合物205(500mg,1.69mmol,1.0eq)溶于二氧六环(10mL)，然后快速加入化合物16(565mg,3.38mmol,2.0eq),碳酸铯(1.9g,3.38mmol,2.0eq)，Xant-Phos(196mg,0.338mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物207
将化合物206(300mg,0.66mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中,然后加入TFA(5mL)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液浓缩,残留物用乙酸乙酯溶解，所得溶液用碳酸钠水溶液调节pH值至7，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物207(230mg,95％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物208
将化合物207(230mg,0.67mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)中,然后加入Boc
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物209
将化合物208(200mg,0.45mmol,1.0eq)和化合物6(107mg,0.45mmol,1.0eq)溶于二氧六环(15mL)中，然后依次加入一水合磷酸钾(364mg,1.6mmol,3.5eq),X-Phos(43mg,0.09mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A53
将粗品化合物209溶于二氧六环(15mL)和水(3mL)的混合溶剂中,然后加入碳酸钾(187mg,1.4mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温,浓缩。残留物通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/5)纯化得到粗品。粗品用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A53(10.1mg,两步收率：4％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-42化合物A54的制备
步骤一、化合物211
将化合物186(200mg,0.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物210(124mg,0.47mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(379mg,1.64mmol,3.5eq)，X-Phos(45mg,0.094mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物A54
将粗品化合物211溶于二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(195mg,1.4mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌1小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A54(56.2mg,两步收率：22％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-43化合物A55的制备
步骤一、化合物213
将化合物186(200mg,0.47mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物212(156mg,0.47mmol,1.0eq)，磷酸钾一水合物(299mg,1.41mmol,3.0eq)，X-Phos(48mg,0.1mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]+＝656.2
步骤二、化合物A55
将粗品化合物213溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)的混合溶剂中，然后加入碳酸钾(195mg,1.41mmol,3.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A55(104.4mg,两步收率：40％)为白色固体。
LCMS:[M+H]+＝556.2
实施例1-44化合物A56的制备
步骤一、化合物215
将化合物186(1.0g,2.35mmol,1.0eq)，化合物214(384mg,2.35mmol,1.0eq)和磷酸钾(1.49g,7.1mmol,3.0eq)加入到二氧六环(15mL)中，然后快速加入X-phos(42mg,0.24mmol,0.1eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物216
将化合物215(900mg,1.55mmol,1.0eq)溶于混合溶剂(四氢呋喃/甲醇/水＝1/1/2，20mL)中，然后加入氢氧化锂(372mg,15.5mmol,10.0eq)。反应液在40℃反应30分钟。反应完毕后，反应液用饱和柠檬酸水溶液调节pH至3，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品化合物216(520mg,74％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A56
将化合物216(150mg,0.33mmol,1.0eq),化合物218(44mg,0.40mmol,1.2eq)和HATU(152mg,0.40mmol,1.2eq)溶于无水DMF(10mL)中，然后在0摄氏度下加入二异丙基乙基胺(170mg,1.32mmol,4.0eq)。反应液在室温下搅拌20分钟。反应液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，水相用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A56(63.8mg,38％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-45化合物A57的制备
步骤一、化合物A57
将化合物216(150mg,0.33mmol,1.0eq),化合物219(49mg,0.40mmol,1.2eq)和HATU(152mg,0.40mmol,1.2eq)溶于无水DMF(10mL)中，然后在0摄氏度下加入二异丙基乙基胺(170mg,1.32mmol,4.0eq)。反应液在25℃搅拌20分钟。反应液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，水相用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到A57(50.1mg,29％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物221
将化合物220(350mg,1.06mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后在氮气保护下降温到0℃，并在0℃加入NaH(255mg,60％含量在矿物油中，6.38mmol,6.0eq)。反应液升温到室温并在室温下搅拌15分钟。再将化合物2(1.77g,10.63mmol,10.0eq)加入到反应液中。反应液在室温条件下搅拌48小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品用硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得到化合物221(300mg,61％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物222
将化合物221(300mg,0.65mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(5mL)。反应液在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，残留物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸钠水溶液调pH呈碱性后，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物222(230mg,94％)为红棕色固体。
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物223
将化合物222(230mg,0.61mmol,1.0eq)加入到四氢呋喃(5mL)中，然后依次加入DMAP(7mg,0.06mmol,0.1eq)和Boc
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物224
将化合物223(200mg,0.42mmol,1.0eq)溶于二氧六环(8mL)中，然后依次加入化合物6(100mg,0.42mmol,1.0eq)，一水合磷酸钾(290mg,1.26mmol,3.0eq)，X-Phos(40mg,0.08mmol,0.2eq)和Pd
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A58
向上一步的224的反应液中加入水(2.5mL)，然后加入碳酸钾(580mg,4.2mmol,10.0eq)。反应液在110℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，浓缩。残留物用硅胶柱层析(PE/EA＝1/1)初步纯化得到粗品(110mg)。粗品再用(PE/EA＝1/1，10mL)的混合溶剂打浆16小时。将混合溶液过滤得到化合物A58(62mg,26％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-47化合物A59的制备
步骤一、化合物A59
将化合物A42(250mg,0.508mmol,1.0eq)和化合物225(210mg,0.814mmol,1.6eq)溶于DMF(6mL)中，然后加入碳酸铯(496mg,1.524mmol,3.0eq)，随后反应液在氮气氛围下,25℃搅拌24小时。LC-MS确认反应完全后，反应混合液用水稀释，并用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得到化合物粗品，粗品经过pre-HPLC(流动相：0.1％ NH
LCMS:[M+H]
实施例1-48化合物A60的制备
步骤一、化合物A60
将化合物A49(300mg,0.568mmol,1.0eq)和化合物225(235mg,0.909mmol,1.6eq)溶于DMF(7mL)中，然后加入碳酸铯(554mg,1.704mmol,3.0eq)，随后反应液在氮气氛围下,25℃搅拌16小时。LC-MS确认反应完全后，反应混合液用水稀释，并用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得到化合物粗品，粗品经过pre-HPLC(流动相：0.1％ NH
LCMS:[M+H]
实施例1-49化合物A61和化合物A62的制备
步骤一、化合物227
将化合物226(5.0g,22.916mmol,1.0eq)溶于30％氢氧化钠溶液(25mL)中，置换氮气,反应液在氮气氛围，下100℃搅拌半小时。将反应液冷却至室温，用浓盐酸中和反应液，使之pH＝2左右，混合液使用乙醚萃取三次，合并的有机相使用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物227(3.8g,93％)为黄色油状。
步骤二、化合物229
将化合物227(2.0g,11.236mmol,1.0eq)，碳酸氢钠(3.8g,44.944mmol,1.0eq)和四丁基硫酸氢铵(381mg,1.124mmol,0.1eq)溶于二氯甲烷/水(30mL/30mL)中，将反应混合液降温至0℃，搅拌10分钟，然后加入化合物228(2.78g,16.854mmol,1.5eq)。反应液在25℃搅拌16小时。将反应液用饱和食盐水洗，分出的有机相使用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物229(900mg,36％)为淡黄色油状物。
步骤三、化合物230
将化合物A42(900mg,01.765mmol,1.0eq)溶于DMF(10mL)中，然后向反应液加入化合物229(800mg,3.530mmol,2.0eq)和碳酸铯(1.7g,5.295mmol,3.0eq)。反应液在25℃搅拌4小时。将反应液用大量乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品用硅胶柱层析(DCM/MeOH＝15/1)纯化得到化合物230(1.2g,100％，含少量DMF)为棕色油状物。
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A61
将化合物230(1.2g,1.714mmol,1.0eq)溶于DCM(60mL)中，然后依次加入吗啡啉(1.49g,17.143mmol,10.0eq)和Pd(PPh
LCMS:[M+H]
步骤五、化合物A62
将化合物A61(31.0mg,0.05mmol,1.0eq)加入到蒸馏水(4mL)中，然后加入碳酸氢钠(8.4mg,0.10mmol,2.0eq)。反应液25℃搅拌15分钟，待反应液完全澄清后，反应液直接冻干得到化合物A62(31mg,94％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-50化合物A64的制备
步骤一、化合物232
将化合物231(2.0g,9.21mmol,1.0eq)溶于DCM/H
LCMS:[M+Na]
步骤二、化合物233
将化合物A42(1.0g,1.96mmol,1.0eq)和化合物232(1.04g,3.92mmol,2.0eq)溶于无水DMF(10mL)中，加入Cs
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A64
将化合物233(500mg,0.676mmol,1.0eq)溶于EA(15mL)中，加入HCl(2.0M in EA,15mL)。反应液在室温下搅拌5分钟同时有固体析出。向反应混合物中快速加入石油醚(1L)稀释后过滤，用石油醚洗涤固体。残留固体用pre-HPLC(流动相：0.1％三氟乙酸/乙腈/水)纯化后得到A64(111.3mg,24％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物236
将化合物234(5.0g,38.12mmol,1.0eq)和化合物235(8.0g,38.12mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(50mL)，将溶液降至-70℃，然后逐滴加入溶有三乙胺(4.2g,41.93mmol,1.1eq)的二氯甲烷溶液(30mL)。加料完毕后，反应液在-70℃反应2小时。LC-MS监测反应完全后，反应液升温至室温，粗品236直接进行下一步反应。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物237
在上述含有化合物236的反应液中加入溶有Na
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物238
将粗品化合物237(3.6g,12.53mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷/水(70mL/70mL)中，加入碳酸氢钠(4.2g,50.13mmol,4.0eq)和Bu
LCMS:[M+H]
步骤四、化合物A65
将化合物A42(400mg,0.79mmol,1.0eq)溶于DMF(10mL)中，然后加入化合物238(527mg,1.57mmol,2.0eq)。反应液在25℃搅拌16小时。反应结束后，反应液用乙酸乙酯稀释，分液，水相用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。乙酸乙酯相合并，减压浓缩除去溶剂。残留物用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物A65(61.5mg,10％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物240
将化合物239(2.0g,8.1mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(30mL)和水(30mL)的混合溶剂中。在0℃加入四丁基硫酸氢铵(275mg,0.8mmol,0.1eq)，然后加入碳酸氢钠(2.72g,32.4mmol,4.0eq)。反应液在0℃搅拌20分钟。向反应液中缓慢加入化合物228(2.67g,16.2mmol,2.0eq)。加料完毕后反应液在25℃反应16小时。将反应液用二氯甲烷(50mL)稀释，用水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)纯化得到化合物240(2.1g,88％)为白色固体。
LCMS：[M+H]
步骤二、化合物241
将化合物A42(400mg,0.79mmol,1.0eq)和Cs
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A68
将化合物241(300mg,0.39mmol,1.0eq)溶于乙酸乙酯(5mL)中，然后加入盐酸(4.0M in EA)溶液(5mL)。反应液在25℃搅拌5分钟。反应液中有大量黄色固体析出，向反应液中加入30mL石油醚稀释反应液并析出更多黄色固体。混合液过滤并用石油醚(10mL×3)洗涤黄色固体。黄色固体用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A68(43.8mg,17％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-53化合物A69的制备
步骤一、化合物243
将化合物242(150mg,0.648mmol,1.0eq)溶于DCM/H
LCMS:[M+Na]+＝302.1
步骤二、化合物244
将化合物A42(150mg,0.294mmol,1.0eq)和化合物243(165mg,0.588mmol,2.0eq)溶于无水DMF(4mL)中，加入Cs
LCMS:[M+H]+＝753.2
步骤三、化合物A69
将化合物244(200mg,0.265mmol,1.0eq)溶于乙酸乙酯(3mL)中，加入HCl(2.0M乙酸乙酯溶液,3mL)。反应液在25℃搅拌5分钟，有固体析出。向反应混合物中快速加入石油醚(100mL)以析出更多固体。反应混合物过滤，用大量石油醚洗涤固体。固体用pre-HPLC(流动相：0.1％三氟乙酸/乙腈/水)纯化后得到A69(73.2mg,42％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-54化合物A70的制备
步骤一、化合物246
将化合物245(2.0g,9.8mmol,1.0eq)溶于DCM/H
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物247
将化合物A42(304mg,0.597mmol,1.0eq)和化合物246(600mg,2.4mmol,4.0eq)溶于DMF(10mL)中，加入Cs
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A70
将化合物247(260mg,0.36mmol,1.0eq)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入HCl(2.0M乙酸乙酯溶液,3mL)。反应液在25℃搅拌5分钟，有固体析出。向反应混合物中加入石油醚(50mL)以析出更多固体。反应混合物过滤，石油醚洗涤固体。固体用pre-HPLC(流动相：0.1％三氟乙酸/乙腈/水)纯化后得到A70(95.8mg,35％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-55化合物A71的制备
步骤一、化合物249
将化合物248(2.0g,11.42mmol,1.0eq)溶于DCM/H
步骤二、化合物250
将化合物A42(300mg,0.58mmol,1.0eq)和Cs
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A71
将化合物250(200mg,0.23mmol,1.0eq)溶于乙酸乙酯(3mL)中，将盐酸乙酸乙酯(3mL,4M)加入到反应液中，反应混合液在25℃搅拌反应5分钟。LCMS监测反应完全后，将反应液过滤获得固体，固体用石油醚洗涤。所得固体通过prep-HPLC(流动相：0.1％ CF
LCMS:[M+H]
步骤一、化合物252
将化合物251(1.0g,3.76mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(15mL)和水(15mL)的混合溶剂中，在0℃向反应液中加入四丁基硫酸氢铵(1.29g,34.05mmol,3.0eq)和碳酸氢钠(1.89g,22.56mmol,6.0eq)。反应液在0℃搅拌20分钟。向反应液缓慢加入化合物2(1.24g,7.52mmol,2.0eq)，反应液随后转移至室温反应18小时。LC-MS监测反应完全后，向反应液用二氯甲烷(25mL)稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20:1-15:1)纯化得到化合物252(960mg,81％)。
LCMS:[M-Boc+H]
步骤二、化合物253
将化合物A42(330mg,0.64mmol,1.0eq)和化合物252(502mg,1.6mmol,2.5eq)溶于DMF(14mL)中，然后加入Cs
LCMS:[M+H]
步骤三、化合物A72
将化合物253(280mg,0.35mmol,1.0eq)溶于乙酸乙酯(8mL)中，然后加入盐酸乙酸乙酯溶液(4M,2mL)。反应液在25℃搅拌5分钟。反应液中有大量黄色固体析出，过滤并用石油醚(30mL×3)洗涤黄色固体。所得黄色固体用prep-HPLC(流动相：0.1％甲酸/乙腈/水)制备纯化得到化合物A72(38.7mg,15％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
实施例1-57化合物A73的制备
步骤一、化合物254
将化合物A49(500mg,0.948mmol,1.0eq)溶于DMF(30mL)中，然后向反应液加入化合物2(537mg,2.370mmol,2.0eq)和碳酸铯(772mg,2.370mmol,2.5eq)。反应液在25℃搅拌16小时。将反应液用大量乙酸乙酯稀释，然后依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品用硅胶柱层析(DCM/MeOH＝19/1)纯化得到化合物254(497mg,73％)为黄色固体。
LCMS:[M+H]
步骤二、化合物255
将化合物254(300mg,0.418mmol,1.0eq)溶于DCM(5mL)中，然后依次加入吗啡啉(109mg,1.254mmol,3.0eq)和Pd(PPh
LCMS:[M+H]+＝638.2
步骤三、化合物A73
将化合物255(50.6mg,0.079mmol,1.0eq)加入到蒸馏水(20mL)中，然后加入碳酸氢钠(13.4mg,0.158mmol,2.0eq)。反应液25℃搅拌20分钟，待反应液完全澄清后，反应液直接冻干得到化合物A73(51.6mg,95％)为白色固体。
LCMS:[M+H]
实施例2-1体外激酶活性评价
采用激酶检测试剂盒HTRF kinEASE STK S2 kit(Cat#62ST2PEC,Cisbio)进行激酶IC
按照激酶检测试剂盒说明书所述，用相应试剂配制检测所需的工作液：
表A ROCK的反应体系各组分及浓度表
1X激酶缓冲液
1mL 1X激酶缓冲液中含有200μL 5X Enzyme buffer,5μL 1MMgCl
2.5X Substrate和ATP工作液
STK-biotin substrate和ATP的具体浓度见表A。用1X激酶缓冲液稀释STK-biotinsubstrate和ATP至反应浓度的2.5倍。
5X ROCK1/ROCK2激酶工作液
ROCK1/ROCK2的浓度见表A。用1X激酶缓冲液配制5X ROCK1/
ROCK2激酶工作液。
2X Streptavidin-XL665和STK Antibody-Cryptate工作液
Streptavidin-XL665和STK Antibody-Cryptate在反应中的浓度参见表A。在激酶反应结束前5分钟用试剂盒中的Detection Buffer配制2X Streptavidin-XL665和STKAntibody-Cryptate工作液。
使用含2.5％ DMSO的1X激酶缓冲液配制得100μM的化合物母液，用上述含DMSO的激酶缓冲液对母液进行4倍逐级稀释，得到9个不同浓度的待测化合物溶液。除测试化合物孔外，设置阳性对照孔(含有除化合物之外的所有试剂)和阴性对照孔(含有除化合物和激酶之外的所有试剂)。除对照孔之外，向所有反应孔中加入4μL的待测化合物溶液，向对照孔中加入4μL 2.5％的DMSO溶液。再向所有孔中加入4μL先前配制好的substrate和ATP工作液，充分混匀。然后，向除阴性对照孔外的所有反应孔中加入2μL/孔的5X ROCK1/ROCK2激酶工作液(含2.5ng ROCK1/ROCK2激酶)，阴性对照孔用2μL的1X激酶缓冲液补足体积。充分混匀，用塑料膜封好后室温孵育2小时。在激酶反应结束前5分钟开始配制检测液。待激酶反应结束后，向所有反应孔中加入10μL配制好的Streptavidin-XL665和STK Antibody-Cryptate工作液，封板混匀后室温孵育1小时，最后用SpectraMax i3x Multi-Mode Reader(Molecular Devices)仪器检测荧光信号(激发波长为320nm，发射波长为665nm和615nm)。
通过各孔荧光强度值，计算出每个孔中的抑制率：
抑制率＝(ER
ER(Emission Ratio，发射光比率)＝665nm处荧光强度/615nm处荧光强度；
ER
用软件GraphPad Prism 6.0绘制曲线图，同时用Prism 6.0拟合得到各待测化合物的半数抑制浓度(IC
依据以上测试方法，本发明化合物对ROCK2和ROCK1的抑制活性如下表所示：
从以上结果可以看出，本发明化合物对ROCK2激酶均具有较好的抑制活性；另外，本发明化合物对ROCK2和ROCK1的抑制具有较好的选择性。
实施例3-1：药代动力学研究
1)研究目的：获得本发明化合物在雄性SD大鼠体内的药代动力学特征
2)实验内容
每个化合物取6只健康雄性SD大鼠(体重范围为200～250克)，分成2组，每组3只；组1单次静脉给药(剂量见表2)，组2单次灌胃口服给药(剂量见表2，给药前禁食过夜)。分别于给药后0.083(仅组1)、0.25、0.5、1、2、4、6(仅组2)、8和24h经颈静脉或心脏穿刺采血，每个样品采集至少0.2mL全血至EDTA-K2抗凝管，样品采集后混匀并置湿冰上，于1h时内离心分离血浆(6800g，6min，2-8℃)，血浆样品在分析前存放于超低温冰箱内。
实验结果：根据LC-MS/MS检测所得血药浓度数据，采用
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。