一种喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物及其制备方法和用途

技术领域

本申请涉及药物化学领域，更具体地说涉及喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物，及其制备方法和它们在抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

喹唑啉是一种重要的杂环化合物母体，其衍生物可通过不同的机制发挥抗肿瘤作用。在喹唑啉的C5、C6位进行修饰，所得化合物可能通过抑制叶酸依赖性酶的活性来发挥抗肿瘤活性，例如胸苷酸合酶(thymidylate synthase,TS)抑制剂雷替曲塞(Raltitrexed)等，目前已经广泛应用于癌症的临床治疗。本发明人合成了一系列2,4-二氨基喹唑啉的哌嗪二硫代甲酸酯衍生物I，其中化合物Ia-c对五种人类癌细胞系A549、MCF-7、HeLa、HT29和HCT-116的IC

另一方面，肼二硫代甲酸酯衍生物具有良好的抗肿瘤活性，还能够与多种过渡和非过渡金属离子配位，所得金属配合物的抗肿瘤活性比配体更高(Low,M.L.；Maigre,L.；Dorlet,P.；Guillot,R.；Pages,J.M.；Crouse,K.A.；Policar,C.；Delsuc,N.Conjugationof a new series of dithiocarbazate Schiff base Copper(II)complexes withvectors selected to enhance antibacterial activity.Bioconjugate chemistry2014,25,2269-84；Low,M.L.；Paulus,G.；Dorlet,P.；Guillot,R.；Rosli,R.；Delsuc,N.；Crouse,K.A.；Policar,C.Synthesis,characterization and biological activity ofCu(II),Zn(II)and Re(I)complexes derived from S-benzyldithiocarbazate and 3-acetylcoumarin.Biometals:an international journal on the role of metal ionsin biology,biochemistry,and medicine 2015,28,553-66)。例如，Nanjan等合成了两种肼二硫代烯丙基酯席夫碱的镍(II)配合物IIIa,b，发现其对Vero和HeLa细胞显示出细胞毒活性。IIIa,b对Vero细胞的IC

发明内容

以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制本申请的保护范围。

本发明人开发了一种喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物，该化合物对人肺癌和人结肠癌细胞具有优异的抗增殖作用。

本申请提供了一种喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物，所述铂配合物如式(I)所示：

其异构体、药学上可接受的盐或溶剂化物。

在本申请的实施方案中，所述的异构体包括互变异构体、几何异构体和对映体。

在本申请的实施方案中，所述的药学上可接受的盐为酸盐，包括但不限于无机酸盐和有机酸盐，所述无机酸盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、或磷酸盐；所述有机酸盐为甲酸盐、乙酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

在本申请的实施方案中，所述溶剂化物包括水合物。

另一方面，本申请提供了上述喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

式(II)化合物与1,5-环辛二烯二氯化铂反应，得到式(I)化合物:

在本申请的一些实施方案中，本申请提供的一种2,4-二氨基喹唑啉肼二硫代甲酸酯铂配合物式(I)的制备方法，所述的反应在低级烷醇中进行，所述的低级烷醇为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、正丁醇或异丁醇，优选地，为乙醇。

在本申请的一种实施方案中，本申请提供了一种2,4-二氨基喹唑啉肼二硫代甲酸酯铂配合物式(I)的制备方法，如路线1所示：

将4-乙酰基苯胺与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溶于二氯甲烷，冰浴冷却下反应5min，生成4-乙酰基-2-溴苯胺(1)；

将4-乙酰基-2-溴苯胺(1)与氰化锌、四(三苯基膦)钯与N-甲基吡咯烷酮(NMP)混合，在微波合成仪中反应3h，制备了2-氰基-4-乙酰基苯胺(2)；

将2-氰基-4-乙酰基苯胺(2)与盐酸氯甲脒、二甲基砜的混合物加热至125℃，反应2h，制备了2,4-二氨基-6-乙酰基喹唑啉(3)；

在催化量甲酸存在下，2,4-二氨基-6-乙酰基喹唑啉(3)与肼二硫代甲酸苄酯在无水甲醇中加热回流10h，转变为2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)亚乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯(4)；

以无水甲醇为溶剂，化合物4与硼氢化钠室温反应3h，生成2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯即式(II)；

式(II)化合物与(1,5-环辛二烯)二氯化铂在乙醇中回流反应1h，生成目标式(I)化合物。

路线1

路线1.合成式(II)化合物的试剂和条件：(a)N-溴代丁二酰亚胺，二氯甲烷，0-5℃反应5分钟，收率85％；(b)氰化锌，四(三苯基膦)钯，N-甲基吡咯烷酮，微波条件下(功率90w，温度90℃)反应3小时，收率46％；(c)氯甲脒盐酸盐，二甲基砜，125℃反应2小时，收率31％；(d)肼二硫代甲酸甲酯，甲醇，无水甲酸，回流反应12小时，收率44％；(e)硼氢化钠，甲醇，室温反应3小时，收率34％；(f)(1,5-环辛二烯)二氯化铂，乙醇，回流反应1小时，收率36％。

第三方面，本申请提供了一种包含上述喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物的药用组合物。该药用组合物包括药理学上有效量的式(I)化合物、其异构体、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的辅料。对于本领域技术人员而言，这些辅料都是已知的，例如，生理盐水，明胶，阿拉伯树胶，乳糖，微晶纤维素，淀粉，改性淀粉，纤维素，改性纤维素，羟乙酸钠，磷酸氢钙，硬脂酸镁，滑石，胶体二氧化硅等。此外，所述组合物还可进一步地包含：稳定剂，润湿剂，乳化剂，甜味剂，香味剂，缓冲剂等。

本申请提供的包含上述喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物的药用组合物，根据需要，能够配制成用于口服给药的固体或液体形式，如片剂、丸剂、口服液等；用于非肠道给药的冻干注射剂、无菌溶液、悬浮液或乳液形式，喷雾剂等。

第四方面，本申请提供了上述喹唑啉肼二硫代甲酸酯的铂配合物或包含其的药用组合物作为抗肿瘤药物或在制备抗肿瘤药物中的用途。

具体地，本申请的吲哚啉-2-酮的肼基二硫代甲酸甲酯衍生物的铂配合物或包含其的药用组合物可用于治疗肺癌、或结肠癌等。

实验证明，本申请的吲哚啉-2-酮的肼基二硫代甲酸甲酯衍生物的铂配合物或包含其的药用组合物具有抗肿瘤活性，对人肺癌(A549)和人结肠癌(HCT-116)细胞的增殖具有抑制作用，可作为抗肿瘤药物或作为抗肿瘤活性成分用于抗肿瘤药物组合物。用药的剂量为0.1-10mg/kg体重，给药方法为口服或静脉注射。

本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的其他优点可通过在说明书中所描述的方案来实现和获得。

具体实施方式

为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。

实施例中使用的化合物原料的来源是：1,5-环辛二烯二氯化铂购买于Sigma公司，其它试剂和原料为国产分析纯或化学纯试剂。

人肺癌细胞株A549、人结肠癌细胞株HCT-116均由DNA损伤应答北京市重点实验室提供。DMEM培养基、胎牛血清及0.25％胰酶(Trypsin-EDTA)均购自Hyclone公司。双抗(青霉素-链霉素)购自Gemini公司。体外抗肿瘤活性实验所使用的

熔点由北京福凯仪器有限公司的X-4型精密显微熔点仪(控温型)测定，温度未校正。电子轰击质谱(MS(EI))用岛津公司GCMS-QP2010 Plus气相色谱质谱联用仪测定，高分辨电喷雾质谱(HRMS(ESI))用Agilent LC/SMD TOF质谱仪测定。高效液相(HPLC)用AgilentSeries 1200(色谱柱:C

1,4-二氧六环的无水处理：金属钠切成薄片投入1,4-二氧六环中，加入二苯甲酮作为指示剂，加热回流至蓝色。常压蒸馏，置干燥器内备用。

N,N-二甲基甲酰胺的无水处理：加入适量无水硫酸钠干燥，置于干燥器内备用。

三乙胺的无水处理：加入固体氢氧化钾充分干燥，置于干燥器内备用。

实施例1

1-(4-氨基-3-溴苯基)-1-乙酮(1)的制备

将4-乙酰基苯胺(0.14g,1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴冷却下，分批加入NBS(0.16g,0.9mmol)，控制在5min内加完，然后室温搅拌5min。向反应液中加入冰水(10mL)，混匀，静置分层，分出有机相，用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水硫酸钠干燥过夜。旋转蒸发除去溶剂，得到黄色油状液体，硅胶柱色谱法提纯(石油醚/乙酸乙酯＝9:1)，得白色固体0.18g，收率85％，mp 56-58℃。

1-(4-氨基-3-氰基苯基)-1-乙酮(2)的制备

将1-(4-氨基-3-溴苯基)-1-乙酮(1)(0.98g,5mmol)、碘化钾(0.50g,3.0mmol)、氰化亚铜(1.58g,17.5mmol)和无水NMP(20mL)混合，加热回流2h。冷却后加入25％氨水(50mL)，室温搅拌过夜，滤除固体，滤液用乙酸乙酯萃取(20mL×5)，合并萃取液，用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水硫酸钠干燥。旋转蒸发除去溶剂，得深黄色油状液体，硅胶柱色谱法提纯(洗脱液：二氯甲烷)，得白色固体0.32g，收率46％，mp 152-153℃。

2,4-二氨基-6-乙酰基喹唑啉(3)的制备

将1-(4-氨基-3-氰基苯基)-1-乙酮(2)(1.6g,10.0mmol)、盐酸氯甲脒(3.45g,30.0mmol)和二甲基砜(12g)混合，加热至120℃，反应2h，TLC检测(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝8:2)。原料消失。冷却至室温，加入水(60mL)，搅拌片刻，用浓氨水调节pH值至9。滤集析出的固体，晾干。粗品用硅胶柱色谱法提纯(二氯甲烷/甲醇＝98:2)，得黄色固体0.62g，收率31％，mp＞300℃。

2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)亚乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯(4)的制备

在2,4-二氨基-6-乙酰基喹唑啉(3)(0.20g,1mmol)、肼二硫代甲酸甲酯(0.18g,1.5mmol)与甲醇(40mL)的混合液中滴入2-3滴冰醋酸，加热回流，溶液逐渐变澄清。回流反应10h，TLC监测(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝8:2)，原料基本反应完全。冷却，滤集析出的固体，晾干。粗品用异丙醇重结晶，得黄色固体0.13g，收率44％，mp＞300℃。

2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯(式(II))的制备

将2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)亚乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯(4)(0.38g,1mmol)、硼氢化钠(78mg,2mmol)与无水甲醇(20mL)的混合物室温反应3h。向反应混合物中加入1mL水，室温搅拌0.5h。旋转蒸发除去大部分溶剂，残余物用硅胶柱色谱法提纯(洗脱剂：二氯甲烷)，得白色固体0.14g，收率36％，mp 237-265℃。

2,4-二氨基-6-乙酰基喹唑啉的肼二硫代甲酸苄酯铂配合物(式(I))的合成

2-(1-(2,4-二氨基喹唑啉-6-基)乙基)肼-1-二硫代甲酸苄酯(式(II))(96mg,0.25mmol)、1,5-环辛二烯二氯化铂(II)(46mg,0.125mmol)与无水乙醇(20mL)混合，加热回流1h，TLC监测(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝8:2,v/v)。旋转蒸发除去大部分溶剂，残余物用硅胶柱色谱法提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝98:2)，得得白色固体0.14g，收率36％，mp 177-180℃.

试验例

细胞及其培养条件

人肺癌细胞株A549、人结肠癌细胞株HCT-116均由DNA损伤应答北京市重点实验室提供。所有肿瘤细胞均在37℃ 5％CO

细胞增殖抑制实验

参照文献(Cao,S.L.；Han,Y.；Yuan,C.Z.；Wang,Y.；Xiahou,Z.K.；Liao,J.；Gao,R.T.；Mao,B.B.；Zhao,B.L.；Li,Z.F.；Xu,X.Synthesis and antiproliferative activityof 4-substituted-piperazine-1-carbodithioate derivatives of 2,4-diaminoquinazoline.European journal of medicinal chemistry 2013,64,401-409)的方法，使用CellTiter

按上述细胞传代方法制得细胞悬液，5×10

细胞增殖抑制率(％)＝[1-(OD

其中OD

表1.化合物4、式(II)和式(I)对A549和HCT-116细胞的IC

从表中可见，本发明配合物式(I)对HCT-116、A549细胞的IC

本申请描述了多个实施例，但是该描述是示例性的，而不是限制性的，并且对于本领域的普通技术人员来说显而易见的是，在本申请所描述的实施例包含的范围内可以有更多的实施例和实现方案。