一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂

技术领域

本发明属于食品农药残留检测技术领域，具体涉及一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂。

背景技术

农药残留分析是一项对复杂混合物中痕量组分的分析技术。样品用量少、试剂消耗少、基质干扰小、检测通量高、分析速度快是农药化学污染物残留检测技术的发展趋势。传统的检测方法耗时久，且大多针对单组分检测，在实际应用中会受到一定限制。对农药多残留快速检测技术的开发能够克服目前传统方法的局限性，实现对农药残留快速、灵敏、多组分同时检测。

QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)，是近年来国际上发展起来的一种用于农药多残留检测的快速样品前处理技术，原理是利用吸附剂填料与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。QuEChERS前处理技术操作简便、分析时间短、溶剂使用量少、污染小、成本低，适合于快速检测。但吸附剂的选择及用量配比至关重要，不合适的净化，不仅造成较大的基质效应，对方法的检测限、选择性及测试结果的准确定量也会产生影响，同时还会增加仪器的维护成本。目前使用的吸附剂填料主要包括十八烷基键合硅胶(C

花草茶基质复杂，含有大量的色素、多酚、有机酸、芳香油等杂质，与残留目标化合物的含量相差悬殊，如何在有效去除杂质的同时实现农药多残留分析，保证较好的回收率，是整个前处理过程的难点。传统QuEChERS法对于花草茶等净化做得不是很充分，干扰较大，特别对于色素含量较多的样品在使用GCB的同时也造成了非极性和具有平面结构农药的大量损失，回收率偏低。本发明开发了多孔石墨相氮化碳(g-C

发明内容

本发明的目的在于提供一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种吸附净化组合剂，所述吸附净化组合剂包括石墨相氮化碳、交联聚乙烯吡咯烷酮、十八烷基键合硅胶、N-丙基乙二胺和无水硫酸镁。

优选的技术方案为：所述石墨相氮化碳为多孔石墨相氮化碳，制备方法包括：将尿素和碳酸氢铵，放入研钵中，研磨混合后，放入带封盖的氧化铝坩埚中，以5-8℃min

优选的技术方案为：所述交联聚乙烯吡咯烷酮为多孔交联聚乙烯吡咯烷酮，制备方法包括：在氮气保护的容器中加入50wt％-70wt％的N-乙烯基吡咯烷酮，8wt％-35wt％的水，随后加入0.5wt％-1wt％的氢氧化钠和1wt％-2wt％的二乙烯苯，8wt％-30wt％的正己烷，通氮气并搅拌；升温至80-120℃，恒温反应3-5h后，制得交联聚乙烯吡咯烷酮溶胀粒子；经洗涤过滤，甲醇浸泡抽滤，真空干燥至恒重，研磨得到多孔交联聚乙烯吡咯烷酮。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种花草茶农药多残留检测方法，包括下列步骤：

步骤1：将待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取；之后向所述棕色离心管中加入氯化钠，涡旋振荡，然后在0-6℃条件下离心，取上清液；

步骤2；取步骤1所得上清液放入装有吸附净化组合剂的离心管中，涡旋振荡，然后在0-6℃条件下离心，取上清液；

步骤3、取步骤2所得上清液用纯水稀释1倍，所得稀释液过0.22μm有机系滤膜至棕色样品瓶，经UHPLC-MS/MS分析，从而确定待测样品中多种农药的残留量；

所述吸附净化组合剂采用权利要求1-3任一所述的吸附净化组合剂；

上清液与吸附净化组合剂的用量配比为：1mL的上清液对应50-200mg多孔石墨相氮化碳、50-100mg多孔交联聚乙烯吡咯烷酮、50-100mg十八烷基键合硅胶、50-100mg N-丙基乙二胺和150-200mg无水硫酸镁。农药多残留中含有丙硫菌唑及其代谢物硫酮菌唑时，N-丙基乙二胺的用量小于50mg。

优选的技术方案为：步骤1中，称取1-2g待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入所述待测的花草茶样品2倍质量的浓度为15μg/mL的抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入5-10mL体积浓度为1％的甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取2-3min；之后向所述棕色离心管中加入5g氯化钠，涡旋振荡1min后，以大于或等于4000r/min的转速离心，取上清液。

优选的技术方案为：步骤3中，UHPLC-MS/MS分析的条件设定为：

(1)液相色谱条件：C

(2)质谱条件：离子源为电喷雾电离源，正离子扫描、负离子扫描或正负切换离子扫描，动态多反应监测模式。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：

本发明解决了花草茶复杂基质中农药多残留前处理基质干扰严重的技术难题，可有效去除色素、多酚、有机酸、芳香油等杂质，用于红花、菊花、玫瑰等花草茶中农药多残留的同时快速提取、净化及准确定性定量，方法试剂消耗少、净化效果好、基质效应低、灵敏度高、准确性强，分析速度快，能够满足花草茶中多种农药残留检测需求。

附图说明

图1为本发明中多孔g-C

图2为本发明中多孔g-C

图3为本发明中多孔PVPP试样图。

图4为本发明中红花中53种农药DMRM提取离子色谱图。

图5为本发明中菊花中39种农药DMRM提取离子色谱图。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

请参阅图1-5。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整。提供以下实施例以便更好地理解本发明，而非限制本发明。以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买所得。

以下实施例所述试剂或材料若无说明，均为市售。

实施例1：一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂

红花中53种农药残留同时测定

多孔g-C

多孔PVPP的制备：在氮气保护的容器中加50wt％的N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)，25wt％水，随后加入0.5wt％的氢氧化钠和1.5wt％的二乙烯苯(DVB)，23wt％的正己烷，通氮搅拌。升温至80℃，恒温反应5h后，制得交联聚乙烯吡咯烷酮溶胀粒子。经过滤洗涤，甲醇浸泡抽滤，真空干燥至恒重，研磨最终得到多孔PVPP。

样品检测：

步骤1、提取

称取1g试样，置于具塞棕色离心管中，加入15μg/mL的抗坏血酸水溶液2mL并涡旋混匀，再加入10mL体积浓度为1％的甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取2min；之后向离心管中加入5g氯化钠，涡旋振荡1min后，以不低于4000r/min的转速2℃低温离心，取上清液待净化。

步骤2、净化

将1.0mL步骤2所得上清液放入装有100mg多孔石墨相氮化碳、50mg多孔交联聚乙烯吡咯烷酮、50mg C

步骤3、检测

取0.5mL步骤3所得上清液用纯水稀释1倍，所得稀释液过0.22μm有机系滤膜至棕色样品瓶，经UHPLC-MS/MS分析，从而确定待测样品中种农药残留。具体条件如下：

(1)液相色谱条件：安捷伦ZORBAX SB-C

(2)梯度洗脱程序，按照体积分数计：0min，1％ B；3min，30％ B；6min，40％ B；9min，40％ B；15min，60％ B；19min，90％ B；23min，90％ B；23.01min，1％ B，保持4min。

(3)质谱条件：离子源：电喷雾电离源(ESI)，正离子扫描模式，鞘气温度320℃，鞘气流量12L/min，雾化气压力40psi，干燥气温度320℃，干燥气流速6L/min，毛细管电压正模式3000V，DMRM监测模式，定性离子对、定量离子对、驻留时间、碎裂电压(FP)及碰撞气电压(CE)如表1所示。

表1 53种农药多反应监测模式参数

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为验证上述方法去除色素、多酚、有机酸、芳香油等基质干扰的效果，对基质效应进行考察，如表2所示，53种农药的基质抑制效应均小于10％。为验证上述方法的灵敏度和准确度，对红花样品分别添加10μg/kg、20μg/kg、100μg/kg 3个水平的以上53种农药，进行回收测定，每个水平重复5次，利用本实施例的方法进行提取、净化和检测，结果如表2所示，53种农药的回收率均高于60％，室内精密度均小于10％，满足检测方法学要求。

表2样品平均回收率与精密度(n＝5)

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采用本方法对5份市售红花样品进行检测，结果表明，在2份样品中检测到啶虫脒残留，含量分别为15.3μg/kg、25.6μg/kg；在1份样品中检测到噻虫嗪残留，含量为17.6μg/kg。

实施例2：一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂

菊花中39种农药残留同时测定

多孔g-C

多孔PVPP的制备：在氮气保护的容器中加入60wt％的N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)，20wt％的水，随后加入0.8wt％的氢氧化钠和1.2wt％的二乙烯苯(DVB)，18wt％的正己烷，通氮搅拌。升温至100℃，恒温反应4h后，制得交联聚乙烯吡咯烷酮溶胀粒子。经过滤洗涤，甲醇浸泡抽滤，真空干燥至恒重，研磨最终得到多孔PVPP。

样品检测：

步骤1、提取

称取2g试样，置于具塞棕色离心管中，加入15μg/mL的抗坏血酸水溶液2mL并涡旋混匀，再加入10mL体积浓度为1％的甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取2min；之后向离心管中加入5g氯化钠，涡旋振荡1min后，以不低于4000r/min的转速6℃低温离心，取上清液待净化。

步骤2、净化

将1.0mL步骤2所得上清液放入装有50mg多孔石墨相氮化碳、50mg多孔交联聚乙烯吡咯烷酮、50mg C18、50mg PSA和150mg无水硫酸镁的离心管中，涡旋振荡1min，10000r/min4℃离心5min，取上清液待检测。

步骤3、检测

取0.5mL步骤3所得上清液用纯水稀释1倍，所得稀释液过0.22μm有机系滤膜至棕色样品瓶，经UHPLC-MS/MS分析，从而确定待测样品中种农药残留。具体条件如下：

(1)液相色谱条件：安捷伦ZORBAX SB-C18柱(2.1mm×100mm，3.5μm)；流动相：A相为5mmol/L乙酸铵-0.1％甲酸-水溶液，B相为乙腈；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量10μL；

(2)梯度洗脱程序，按照体积分数计：0min，1％ B；3min，30％ B；6min，40％ B；9min，40％ B；15min，60％ B；19min，99％ B；23min，99％ B；23.01min，1％ B，保持4min。

(3)质谱条件：离子源：电喷雾电离源(ESI)，正离子扫描模式，干燥器气温度：300℃，干燥气流速：10L/min，雾化气压力40psi，毛细管电压正模式4000V，DMRM监测模式，定性离子对、定量离子对、驻留时间、碎裂电压(FP)及碰撞气电压(CE)如表3所示。

表3 39种农药多反应监测模式参数

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为验证上述方法去除色素、多酚、有机酸、芳香油等基质干扰的效果，对基质效应进行考察，如表4所示，39种农药的基质抑制效应均小于10％。为验证上述方法的灵敏度和准确度，对菊花样品分别添加10μg/kg、20μg/kg、100μg/kg 3个水平的以上39种农药，进行回收测定，每个水平重复5次，利用本实施例的方法进行提取、净化和检测，结果如表4所示，39种农药的回收率均高于60％，室内精密度均小于10％，满足检测方法学要求。

表4样品平均回收率与精密度(n＝5)

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采用本方法对6份市售菊花样品进行检测，结果表明，在3份样品中检测到苯醚甲环唑残留,含量在12.3μg/kg～21.6μg/kg；在1份样品中检测到嘧菌酯残留，含量为11.2μg/kg。

实施例3：一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂

一种吸附净化组合剂，所述吸附净化组合剂包括石墨相氮化碳、交联聚乙烯吡咯烷酮、十八烷基键合硅胶、N-丙基乙二胺和无水硫酸镁。

优选的技术方案为：所述石墨相氮化碳为多孔石墨相氮化碳，制备方法包括：将尿素和碳酸氢铵，放入研钵中，研磨混合后，放入带封盖的氧化铝坩埚中，以5℃min

优选的技术方案为：所述交联聚乙烯吡咯烷酮为多孔交联聚乙烯吡咯烷酮，制备方法包括：在氮气保护的容器中加入50wt％wt％的N-乙烯基吡咯烷酮，20wt％的水，随后加入0.5wt％的氢氧化钠和1wt％的二乙烯苯，28.5wt％的正己烷，通氮气并搅拌；升温至80℃，恒温反应3h后，制得交联聚乙烯吡咯烷酮溶胀粒子；经洗涤过滤，甲醇浸泡抽滤，真空干燥至恒重，研磨得到多孔交联聚乙烯吡咯烷酮。

一种花草茶农药多残留检测方法，包括下列步骤：

步骤1：将待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取；之后向所述棕色离心管中加入氯化钠，涡旋振荡，然后在0℃条件下离心，取上清液；

步骤2；取步骤1所得上清液放入装有吸附净化组合剂的离心管中，涡旋振荡，然后在0℃条件下离心，取上清液；

步骤3、取步骤2所得上清液用纯水稀释1倍，所得稀释液过0.22μm有机系滤膜至棕色样品瓶，经UHPLC-MS/MS分析，从而确定待测样品中多种农药的残留量；

上清液与吸附净化组合剂的用量配比为：1mL的上清液对应50mg多孔石墨相氮化碳、50mg多孔交联聚乙烯吡咯烷酮、50mg十八烷基键合硅胶、50mg N-丙基乙二胺和150mg无水硫酸镁，且农药多残留中含有丙硫菌唑及其代谢物硫酮菌唑时，N-丙基乙二胺的用量小于50mg。

优选的实施方式为：步骤1中，称取1g待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入所述待测的花草茶样品2倍质量的浓度为15μg/mL的抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入5mL体积浓度为1％的甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取2min；之后向所述棕色离心管中加入5g氯化钠，涡旋振荡1min后，以大于或等于4000r/min的转速离心，取上清液。

优选的实施方式为：步骤3中，UHPLC-MS/MS分析的条件设定为：

(1)液相色谱条件：C

(2)质谱条件：离子源为电喷雾电离源，正离子扫描、负离子扫描或正负切换离子扫描，动态多反应监测模式。

实施例4：一种花草茶农药多残留检测方法及其使用的吸附净化组合剂

一种吸附净化组合剂，所述吸附净化组合剂包括石墨相氮化碳、交联聚乙烯吡咯烷酮、十八烷基键合硅胶、N-丙基乙二胺和无水硫酸镁。

优选的实施方式为：所述石墨相氮化碳为多孔石墨相氮化碳，制备方法包括：将尿素和碳酸氢铵，放入研钵中，研磨混合后，放入带封盖的氧化铝坩埚中，以8℃min

优选的实施方式为：所述交联聚乙烯吡咯烷酮为多孔交联聚乙烯吡咯烷酮，制备方法包括：在氮气保护的容器中加入70wt％的N-乙烯基吡咯烷酮15wt％的水，随后加入1wt％的氢氧化钠和2wt％的二乙烯苯，12wt％的正己烷，通氮气并搅拌；升温至80-120℃，恒温反应5h后，制得交联聚乙烯吡咯烷酮溶胀粒子；经洗涤过滤，甲醇浸泡抽滤，真空干燥至恒重，研磨得到多孔交联聚乙烯吡咯烷酮。

一种花草茶农药多残留检测方法，包括下列步骤：

步骤1：将待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取；之后向所述棕色离心管中加入氯化钠，涡旋振荡，然后在6℃条件下离心，取上清液；

步骤2；取步骤1所得上清液放入装有吸附净化组合剂的离心管中，涡旋振荡，然后在6℃条件下离心，取上清液；

步骤3、取步骤2所得上清液用纯水稀释1倍，所得稀释液过0.22μm有机系滤膜至棕色样品瓶，经UHPLC-MS/MS分析，从而确定待测样品中多种农药的残留量；

上清液与吸附净化组合剂的用量配比为：1mL的上清液对应200mg多孔石墨相氮化碳、100mg多孔交联聚乙烯吡咯烷酮、100mg十八烷基键合硅胶、100mg N-丙基乙二胺和200mg无水硫酸镁。

优选的实施方式为：步骤1中，称取2g待测的花草茶样品，置于具塞棕色离心管中，加入所述待测的花草茶样品2倍质量的浓度为15μg/mL的抗坏血酸水溶液并涡旋混匀，再加入10mL体积浓度为1％的甲酸乙腈溶液，涡旋振荡提取3min；之后向所述棕色离心管中加入5g氯化钠，涡旋振荡1min后，以大于或等于4000r/min的转速离心，取上清液。

优选的实施方式为：步骤3中，UHPLC-MS/MS分析的条件设定为：

(1)液相色谱条件：C

(2)质谱条件：离子源为电喷雾电离源，正离子扫描、负离子扫描或正负切换离子扫描，动态多反应监测模式。

以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。