一种制备色谱去除辅酶Q10中Q11杂质的方法

技术领域

本发明属于高效制备色谱与精制技术领域，具体涉及一种用色谱分离手段高效去除辅酶Q10中Q11杂质的方法。

背景技术

辅酶Q类化合物是一种广泛存在自然界的脂溶性醌类化合物，人体内存在的是辅酶Q10，其标准命名为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基-苯醌。

辅酶Q10在细胞能量的产生和清除人体自由基方面有着非常重要的作用，近来的研究表明，辅酶Q10在人体内的含量随着年龄的增长明显减少，这与许多伴随衰老出现的疾病如帕金森病等密切相关；随着对辅酶Q10功能的深入研究，其在医药品、化妆品和食品添加剂领域都将有更为广泛的应用。作为抗氧化剂在人体内可去除自由基，具有抗衰老和提高心血管免疫力的保健作用，因此对其制备过程的研究具有较高的工业价值。

目前得到辅酶Q10粗品的方法主要有化学合成法、动植物提取法和微生物发酵法，然而提升辅酶Q10纯度是目前的难点。

随着国家对药品质量标准的提升，辅酶Q10的杂质限量也随之提高，欧洲药典对辅酶Q10中Q11杂质的限量控制提出了明确要求，因此去除辅酶Q10中Q11杂质的工艺需求迫在眉睫。

辅酶Q10的结构式如下：

而大部分辅酶Q10样品中含有杂质辅酶Q11，其结构式如下：

这两种物质的结构式非常类似，辅酶Q10和辅酶Q11同为辅酶Q类化合物，分子结构上仅在侧链相差一个异戊烯单元，因而分离困难，实现两者高效分离的关键在于寻找合适的分离介质和分离技术。

公开号为CN108084007A的专利申请公开了一种模拟移动床色谱分离辅酶Q10和辅酶Q11的方法。由于模拟移动床模型复杂，性能指标众多，色谱分离过程工艺机理的复杂性和控制变量之间的强耦合性，很难确定它的最佳操作点使得分离效果达到理想要求。在模拟移动床色谱分离中影响分离性能的操作条件有很多，例如切换时间、各区的流量以及色谱柱的大小等。在分离过程过程中，该方法很容易出现不稳定的情况，有较大局限性。

鉴于以上技术背景及发展前景，提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备色谱去除辅酶Q10中Q11杂质的方法，该方法的原理是依靠一种固定相表面吸附作用，在一根色谱柱上，含有Q11杂质的辅酶Q10混合物在固定相中、随着流动相移动的迁移速度不同，从而按一定的次序由固定相中流出，根据色谱图接取目标馏分，即可得到Q11杂质<0.1％，辅酶Q10纯度>99.0％的高纯产品。

为了实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案：

采用色谱的分离机理，使用一种或者多种有机溶剂混合溶液洗脱，收集目标解析液。

含有Q11杂质的辅酶Q10样品(微生物发酵或合成所得产品)，样品浓度为1～80mg/mL，样品溶解的溶剂为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，异丙醇，二氯甲烷，正庚烷，正己烷、石油醚、四氢呋喃，乙酸乙酯等常用溶剂中的一种或多种。

色谱分离模式所用的填料为极性或非极性基团修饰的硅胶，其中极性基团为：通过C1～C30正链烷基与硅胶连接氯原子、溴原子、氰基、磺酸基、羟基、二醇基、羧基、氨基、二氨基、酰胺基、苯基极性基团中的一种或多种，每个C1～C30正链烷基连接链上极性基团的个数为1个以上，极性基团的键合量为0.5～8.0μmol/m

所用流动相为一种有机溶剂或多种有机溶剂混合溶液，其中有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、正庚烷、正己烷、石油醚、四氢呋喃、乙酸乙酯等常用溶剂中的一种或多种。

上柱吸附的载样量是上样样品质量与填料体积之比，载样量可达0.1％～20％。

本发明所述高效制备色谱分离温度为0～60℃。

依据检测仪监控峰形曲线收集目标解析液，获得Q11杂质含量受限的高纯辅酶Q10产品，Q10纯度>99.0％，杂质Q11<0.1％。

本发明所述制备色谱去除辅酶Q10中Q11杂质的纯化方法，具体步骤如下：

1)、称取适量含有杂质Q11的辅酶Q10样品，含有Q11杂质的辅酶Q10样品(微生物发酵或合成所得产品)，样品浓度为1～80mg/mL，样品溶解的溶剂为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，异丙醇，二氯甲烷，正庚烷，正己烷、石油醚、四氢呋喃，乙酸乙酯等常用溶剂中的一种或多种，水浴加热助溶，作为上样溶液；

2)、采用柱系统分离，色谱柱内径4.6～1000mm；采用色谱分离纯化体系，所用填料是硅胶或或使用极性与非极性基团修饰的硅胶。其粒径为5～100μm(优选10～60μm)，孔径为

本发明具有如下优点：

1、高选择性：本发明提出对含有Q11杂质的辅酶Q10样品，使用色谱法在一种填料、单一色谱柱上进行分离纯化，该方法分离选择性好、分离效率高，适合于得到低限量Q11杂质的辅酶Q10高纯产品。

2、载样量大，回收率高，单根色谱柱更易于实现工业化生产。

3、工艺溶剂消耗量少，流程简单，重复性好，操作简单可控，易实现自动化，过程稳定。

附图说明

图1辅酶Q10纯化制备谱图；

图2辅酶Q10纯化后产品分析图：Q10纯度99.34％，Q11杂质0.02％。

具体实施方式

现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，本发明不仅限于此。

实施例1

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取4.2g，溶于420mL丙酮/甲醇(体积比25/75)，配制成浓度10.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的6％。使用硅胶表面键合C8连接羟基修饰(键合量为3.5μmol/m

实施例2

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取7.0g，溶于700mL丙酮/乙醇(体积比20/80)，配制成浓度10.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的10％。使用硅胶表面键合C3连接二醇基修饰(键合量为3.3μmol/m

实施例3

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取7.0g，溶于500mL丙酮/甲醇(体积比25/75)，配制成浓度14.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的10％。使用硅胶表面键合C18连接羧基修饰(键合量为3.9μmol/m

实施例4

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取43.75g，溶于3.125L丙酮/甲醇(体积比30/70)，配制成浓度10.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的10％。使用硅胶表面键合C8连接酰胺基修饰(键合量为4.1μmol/m

实施例5

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取17.5kg，溶于10L丙酮/乙醇(体积比25/75)，配制成浓度10.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的10％。使用硅胶表面键合C30连接酰胺基修饰(键合量为4.1μmol/m

实施例6

将含有Q11杂质的辅酶Q10粗品(Q11质量占比1.54％)称取17.5kg，溶于10L丙酮/乙醇(体积比25/75)，配制成浓度10.0mg/mL的上样液，上样量为填料质量的10％。使用硅胶表面键合C18连接二氨基修饰(键合量为4.1μmol/m

对比例1

与实施例1不同之处在于，以非基团修饰的硅胶(100～200目)为分离材料，其它条件同实施例1，辅酶Q10成品纯度为96.5％，Q11质量占比0.68％，辅酶Q10回收率为66.8％。