一种抗G+性菌兼抗氧化的复方清热剂碳量子点纳米酶及其制备方法及用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种抗G

背景技术

五味消毒饮出自《医宗金鉴》，具有清热解毒、消散疔疮的功效。基本组方为金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子。主治疔疮初起，发热恶寒，疮形如粟，坚硬根深，状如铁钉，以及痈疡疖肿，红肿热痛，舌红苔黄等。

纳米酶领域研究入选IUPAC 2022年十大化学新兴技术之一，其具有结合天然和人工催化的力量，是一种能模拟天然酶特性的纳米材料。与仅在特定温度和pH范围内保持有效的天然酶不同，纳米酶可以承受广泛的不同环境条件，并进行持久、安全和稳定的储存。由于纳米酶可以在实验室中按需设计，在稳定性、可回收性和成本等多个方面具有显著优势。纳米酶普遍具有氧化物酶(OXD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的性质，从而可对生命活动中产生的活性氧(ROS)水平进行调节，在生物医学领域具有广阔的应用前景。但是，目前研究热点的纳米酶多为金属基纳米材料，其潜在的生物毒性较高，限制了这一领域的发展和应用。

碳量子点是零维纳米材料、具有良好的生物医学应用潜能，其来源广泛。其中，将中药通过水热法制备成碳量子点能具备其碳源固有性质的基础上，同时也具备良好的水溶性和低毒性，这可以解决难溶的有效中药成分生物利用度低及生物毒性较大的难题，这种绿色的合成方法在传统的中药煎煮法的基础上，应用现代先进工科技术，有望开发中药的新应用方式。近年，有文献报道碳量子点还具有良好的活性氧清除的类生物酶活性，作为生物材料纳米酶应用于医药领域。但是，中药来源的碳量子点作为纳米酶的应用研究较少。同时，目前国内外研究多研究单味中药衍生的碳量子点，关于中药复方研究的碳量子点研究较少。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗G

本发明提供了一种抗G

将金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子药材粉末与水混合，得到混合液；

将所述混合液水热反应，得到抗G

本发明将金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子药材粉末经水热反应，制得抗G

在本发明中，金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁和紫背天葵子药材粉末的质量比为(3～9):(1～2):(1～2):(1～2):(1～2)；所述金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子药材粉末的总质量和水的质量比为1:(5～20)。具体实施例中，金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁和紫背天葵子药材粉末的质量比为5:2:2:2:2,药材粉末总质量和水的质量比为1:15。所述原料优选为粉末状的。

在本发明中，混合的方式为超声分散；超声分散的时间为10～60min。

本发明中所述水热反应的温度为120～260℃，水热反应时间为2～18h。具体实施例中，水热反应的温度为200℃，反应的时间为6h。

本发明优选在水热反应结束后，将反应产物离心，收集上清液；所述上清液采用0.22μm滤膜抽滤，去除未反应的残渣。离心的转速为8000rpm，时间为10min。

本发明将抽滤后的产物经超纯水透析；透析采用分子量1000Da的透析袋。透析的时间为20～26h；具体实施例中，透析的时间为24h。

本发明提供了一种抗G

在本发明中，所述抗G

本发明提供了一种药物组合物，包括上述技术方案所述抗G

所述药物组合物的剂型为注射剂、注射用粉针、口服液体制剂、硬胶囊、软胶囊、片剂、栓剂、水丸、蜜丸、浓缩丸、膏剂、散剂、乳剂、糊剂、凝胶制剂或涂抹剂。

本发明还提供了抗G

所述产品具备以下功效中的至少一种：抗菌，抗氧化，抗炎、止血、镇痛、镇静、抗过敏、解热、解痉、降糖、降压、抗肿瘤、对抗肿瘤化疗药物的副反应。

本发明提供了一种抗G

附图说明

图1为本发明的抗G

图2为本发明的抗G

图3为本发明的抗G

图4为本发明的抗G

图5为本发明的抗G

图6为本发明的抗G

图7为本发明的抗G

图8为本发明的抗G

图9为本发明的抗G

具体实施方式

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种抗G

实施例1抗G

使用水热法合成五味消毒饮碳量子点，将金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子五种干药材通过微型研磨机粉碎成粉末，然后将所述五种药材粉末质量比按照5：2：2：2：2,药材粉末总质量和水的质量比为1：15，然后将水溶液并充分搅拌超声分散，将超声后的溶液转移到聚四氟乙烯衬里的反应釜中，在烘箱中200℃下加热6小时。随后，将反应釜冷却至室温，所得混合物离心(8000r/min，10分钟)，收集上清液，通过0.22μm滤膜过滤除去大颗粒，得到深黄色溶液。将溶液在1000Da透析袋中用去离子水透析24小时，以去除未反应的试剂以及其他小副产物，最终得到纯化后的抗G

将纯化后的产物利用JEM-2100F场发射透射电子显微镜，在200kV的加速电压下拍摄透射电子显微镜(TEM)照片，结果如图1所示，抗G

将纯化后的产物用UV-2600紫外可见分光光度计进行紫外可见吸收光谱的检测，结果如图2所示，抗G

将纯化后的产物用Nicolet 6700红外光谱仪检测，见图3。

将纯化后的产物用EscaLab 250Xi光电子谱仪进行检测，见图4。

实施例2 CCK-8检测与复方清热剂碳量子点纳米酶共培养的细胞的活性

取对数生长期人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，计数细胞浓度为 4×10

结果如图5所示，CCK-8测定表明，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)可以在高浓度复方清热剂碳量子点纳米酶(800μg/mL)溶液中维持生长，复方清热剂碳量子点纳米酶在浓度0-800μg/mL时对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞增殖几乎没有明显毒性。

实施例3体外抑菌圈抗菌实验

采用抑菌圈实验法评价复方清热剂碳量子点纳米酶对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性。

首先，将金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的菌液密度调整为10

如图6中a和b所示，抗G

实施例4类过氧化氢酶活性检测实验

使用过氧化氢酶CAT酶活性检测试剂盒(比色法)进行检测复方清热剂碳量子点纳米酶类过氧化氢酶活性，计算其对过氧化氢的清除能力。过氧化氢酶检测试剂盒(CatalaseAssay Kit)是一种特异灵敏的检测过氧化氢酶(Catalase)酶活力的试剂盒。Catalase是一种广泛存在于需氧细胞内的抗氧化酶，通过催化过氧化氢(H

在1.5ml离心管中，加入870μl过氧化氢酶分析缓冲液，取10μL的0.88M浓度H

如图7所示，不同浓度的复方清热剂碳量子点纳米酶均有清除过氧化氢的能力，并且随着浓度的增大，对过氧化氢的清除率也随之升高，呈一定的浓度依赖性。在复方清热剂碳量子点纳米酶浓度为200μg/mL时，可以清除81.93％的过氧化氢。

这些结果表明复方清热剂碳量子点纳米酶具有良好的类过氧化氢酶活性。

实施例5类超氧化物歧化酶活性检测实验

使用超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒进行检测复方清热剂碳量子点纳米酶类超氧化物歧化酶活性，计算其对超氧阴离子的清除能力。超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛存在于生物体内的金属酶，作为重要的氧自由基清除剂，能够催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H

首先将紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。试验前将试剂盒中的试剂一(缓冲液)、试剂三(氮蓝四唑溶液)和试剂五(黄嘌呤溶液)于25℃预热5min以上，在1.5mL离心管中按照不同分组依次加入下列试剂：粗酶液，试剂一，试剂二(黄嘌呤氧化酶溶液)，蒸馏水，试剂三和试剂五，充分混匀，25℃准确反应30min。将反应液置于1mL玻璃比色皿中，测定560nm处吸光值，记为A测定、A对照、A空1、A空2；计算ΔA测定＝A测定-A对照，ΔA空白＝A空1-A空2。需测定1-2次，每个样本均需设一个对照管。抑制百分率＝(ΔA空白-ΔA测定)/ΔA空白×100％。

如图8所示，不同浓度的复方清热剂碳量子点纳米酶均有清除超氧阴离子的能力，并且随着浓度的增大，对超氧阴离子的清除率也随之升高，呈一定的浓度依赖性。在复方清热剂碳量子点纳米酶浓度为80μg/mL时，可以清除76.50％的超氧阴离子。这些结果表明复方清热剂碳量子点纳米酶具有良好的类超氧化物歧化酶活性。

实施例6总抗氧化活性检测实验

使用ABTS·+自由基清除实验来验证复方清热剂碳量子点纳米酶的总抗氧化能力。取0.2mLABTS二铵盐储备液和0.2mLK

734nm处吸光值测A值。ABTS·+清除率(抑制率)的计算：

清除率％＝(A

如图9所示，不同浓度的复方清热剂碳量子点纳米酶均有清除ABTS·+自由基的能力，并且随着浓度的增大，对ABTS·+自由基的清除率也随之升高，呈一定的浓度依赖性。在复方清热剂碳量子点纳米酶浓度为12μg/mL时，可以清除90.07％的ABTS·+自由基。这些结果表明复方清热剂碳量子点纳米酶具有良好的清除自由基的抗氧化能力。

由以上实施例可知，本发明提供了一种复方清热剂碳量子点纳米酶的制备方法，包括以下步骤：将金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵子药材粉末与水混合，得到混合液；将所述混合液水热反应，得到抗G

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。