梭菌毒素-透明质酸组合物

技术领域

本公开涉及包括梭菌毒素活性成分和非交联的透明质酸或其盐的药物组合物，其中非交联的透明质酸或其盐的重均分子量为250kDa至2.4MDa或4.6MDa至8MDa。

背景技术

药物组合物是含有至少一种活性成分(如梭菌毒素)以及例如一种或多种赋形剂、缓冲剂、载体、稳定剂、防腐剂和/或填充剂并且适合于向患者施用以实现期望的诊断结果或治疗效果的调配物。本文公开的药物组合物具有诊断、治疗、美容和/或研究效用。

厌氧的革兰氏阳性细菌肉毒梭菌会产生强效的多肽神经毒素(被称为肉毒神经毒素毒素)，所述多肽神经毒素在人和动物中引起被称为肉毒中毒的神经麻痹性疾病。已经表征了七种通常在免疫学上不同的肉毒神经毒素，这些肉毒神经毒素分别是肉毒神经毒素血清型A、B、C1、D、E、F和G，所述肉毒神经毒素血清型中的每种肉毒神经毒素血清型通过用类型特异性抗体中和来区分。肉毒毒素的不同血清型在其所影响的动物物种以及其所引起的麻痹的严重程度和持续时间方面都不同。肉毒毒素显然以高亲和力与胆碱能运动神经元结合，易位进入神经元并阻止乙酰胆碱的释放。

肉毒毒素已用于治疗各种治疗性和美容性病状。A型肉毒毒素(爱力根公司(Allergan,Inc.)，

肉毒毒素复合物的神经毒性组分的分子量为约150kD。肉毒毒素通常由肉毒梭菌以复合物的形式制成，所述复合物包括150kD肉毒毒素蛋白分子和相关的非毒素蛋白。因此，梭菌可以产生900kD、500kD和300kD复合物形式的A型肉毒毒素复合物。

将肉毒毒素注射到面部肌肉中可以通过削弱被注射的肌肉而使麻痹肌肉上的皮肤中的运动过度性皱纹减少(Carruthers,A.等人,《皮肤外科和肿瘤学杂志(J.Dermatol.Surg.Oncol.),1990年一月；16(1):83)。出于减少某些面部皱纹的美容目的，已经将肉毒毒素注射到如眼轮匝肌、皱眉肌和额肌等面部肌肉中。用于评估注射功效的方法是通过肌电图和/或照相技术(Guerrissi,J.等人,《整形手术年报(Ann Plast Surg)》,1997；39(5):447-53)。肌电图也已用于评估将肉毒毒素注射到胸锁乳突肌中以治疗颈部肌张力障碍的效果(Dressler,D.等人,《欧洲神经病学(Eur Neurol)》2000；43:13-16)。在该技术中，将表面电极放置在距注射点固定的距离处，通常距离注射点1cm和3cm。表面电极用于在注射肌肉的最大随意收缩期间测量复合肌肉动作电位(CMAP)的幅度和面积。通常，CMAP随着肌肉麻痹作用的发作而降低并随着麻痹作用的减弱而增加。

如数字图像分析等照相方法也已用于确定肉毒毒素治疗过度运动的面线的功效(Heckmann M.等人,《美国皮肤病学会杂志(J Am Acad Dermatol)》2001；45:508-514)。任何给定肉毒毒素制剂的效力也可以通过使用数字外展评分(Digital Abduction Score，DAS)测定进行常规评估，所述DAS测定测量在注射到小鼠或大鼠后肢肌肉中后肉毒毒素的局部肌肉削弱功效(Broide,R.S.等人,《毒素杂志(J Toxicon)》,2013,71:18-24)。

需要包括如肉毒毒素等梭菌毒素的提供改善的作用和/或作用持续时间的调配物。

发明内容

在一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分和非交联的透明质酸或其盐，其中非交联的透明质酸或其盐的重均分子量为250千道尔顿(kDa)至2.4兆道尔顿(MDa)或4.6MDa至8MDa。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、张度剂、表面活性剂和抗氧化剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、表面活性剂和抗氧化剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、冻干保护剂、表面活性剂和抗氧化剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括非交联的透明质酸或其盐、张度剂、表面活性剂和抗氧化剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括非交联的透明质酸或其盐、表面活性剂和抗氧化剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括非交联的透明质酸或其盐、冻干保护剂、表面活性剂和抗氧化剂。

在一些实施例中，所述药物组合物包括肉毒毒素。在一些实施例中，所述药物组合物包括海藻糖。在一些实施例中，所述药物组合物包括氯化钠。在一些实施例中，所述组合物包括泊洛沙姆和/或聚山梨酯。在一些实施例中，所述组合物包括泊洛沙姆188和/或聚山梨酯20。在一些实施例中，所述抗氧化剂选自由以下组成的组：L-蛋氨酸、N-乙酰-半胱氨酸(NAC)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺四乙酸钠盐(EDTA)、EDTA类似物、乙二醇双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N’-四乙酸(EGTA)、EGTA类似物、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、DTPA类似物、抗坏血酸及其组合。在一些实施例中，所述组合物还包括缓冲剂。在一实施例中，所述缓冲剂包含组氨酸缓冲液。在一些实施例中，所述组合物的pH为5至7。在一些实施例中，所述组合物是液体调配物。在一些实施例中，所述组合物是固体冻干的调配物。

在一些实施例中，所述组合物包括第一部分和第二部分，其中所述第一部分包括梭菌毒素活性成分和一种或多种药学上可接受的赋形剂，并且所述第二部分包括溶解或悬浮在缓冲液中的非交联的透明质酸或其盐，其中所述第一部分和所述第二部分可组合以形成液体组合物。在一个实施例中，所述第一部分是固体冻干的组合物。在另一个实施例中，所述第一部分是液体调配物。

在另一方面，提供了一种液体药物组合物，所述液体药物组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、泊洛沙姆或聚山梨酯以及L-蛋氨酸或NAC。在一些实施例中，所述液体药物组合物包括肉毒毒素。在一些实施例中，所述液体药物组合物还包括EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。在一些实施例中，所述液体药物组合物包括组氨酸缓冲液。在一些实施例中，所述液体药物组合物的pH为5至7。在一些实施例中，L-蛋氨酸的相对重量在约0.1％至约0.3％的范围内。在一些实施例中，NAC的相对重量在约0.1％至约0.5％的范围内。在一些实施例中，EDTA的相对重量在约0.01％至约0.05％的范围内。在一些实施例中，海藻糖的相对重量在约1.0％至约10％的范围内。在一些实施例中，泊洛沙姆188的相对重量在约0.5％至约5％的范围内。在一些实施例中，聚山梨酯的相对重量在约0.02％至约0.06％的范围内。

在另一个实施例中，提供了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的张度剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、抗坏血酸、丁基化羟基甲苯、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白，并且在另一实施例中，当所述抗氧化剂是蛋氨酸时，所述组合物不包含聚山梨酯。在一个实施例中，所述组合物不包含动物蛋白稳定剂。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，所述液体组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆和蛋氨酸，并且任选地包含二糖。在一个实施例中，所述液体组合物不包含二糖。

在另外的实施例中，所述液体组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；以及选自由螯合剂、牺牲性抗氧化剂、链终止剂及其组合组成的组的抗氧化剂。在一个实施例中，所述抗氧化剂包含螯合剂和链终止剂的组合。

在又另一个实施例中，所述液体组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆表面活性剂和蛋氨酸以及任选的二糖。在一个实施例中，所述液体组合物不包含二糖。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖或蔗糖；泊洛沙姆；和蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于1wt％与15wt％之间的海藻糖；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自蛋氨酸、NAC、抗坏血酸、丁基化羟基甲苯、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，所述液体组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自由螯合剂、牺牲性抗氧化剂、链终止剂及其组合组成的组的抗氧化剂。

在另一个实施例中，提供了一种液体组合物，所述液体组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆、螯合剂和链终止剂。

在另一个实施例中，提供了一种液体组合物，所述液体组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；泊洛沙姆；选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂；和NAC。

在另一个实施例中，提供了一种液体组合物，所述液体组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆和蛋氨酸。

在另一个实施例中，提供了一种液体组合物，所述液体组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的张度剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；螯合剂和链终止剂。

在另一个实施例中，提供了一种液体组合物，所述液体组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的张度剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂；和NAC。

在任何前述实施例中，可以设想的是，在一些实施例中，所述组合物不是乳液和/或不包含包括两亲性实体的纳米颗粒。

在另一方面，本公开提供了一种固体药物组合物，所述固体药物组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖；泊洛沙姆或聚山梨酯；NAC；和选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂。在另一个实施例中，所述固体药物组合物包括肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、泊洛沙姆和L-蛋氨酸。在一些实施例中，所述固体药物组合物还包括组氨酸缓冲液。在一些实施例中，L-蛋氨酸的相对重量在约0.1％至约0.3％的范围内。在一些实施例中，NAC的相对重量在约0.01％至约0.5％的范围内。在一些实施例中，EDTA的相对重量在约0.01％至约0.05％的范围内。在一些实施例中，海藻糖的相对重量在约1.0％至约10％的范围内。在一些实施例中，泊洛沙姆的相对重量在约0.5％至约5％的范围内。在一些实施例中，聚山梨酯的相对重量在约0.02％至约0.06％的范围内。

在一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的二糖；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、N-乙酰半胱氨酸、BHT、EDTA、EGTA、DTPA、抗坏血酸、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，所述固体或冻干的组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的二糖；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；以及选自螯合剂、牺牲性抗氧化剂、链终止剂及其组合的抗氧化剂。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖或蔗糖；泊洛沙姆；和蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于1wt％与15wt％之间的海藻糖；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自蛋氨酸、N-乙酰半胱氨酸、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，所述固体或冻干的组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自由螯合剂、牺牲性抗氧化剂、链终止剂及其组合组成的组的抗氧化剂。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；螯合剂；和链终止剂。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂；和NAC。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；泊洛沙姆；和链终止剂。在一实施例中，所述冻干的组合物不包含螯合剂。在一个实施例中，所述链终止剂是NAC。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；泊洛沙姆；和蛋氨酸。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；泊洛沙姆；螯合剂；和链终止剂。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；泊洛沙姆；选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂；和NAC。

在另一个实施例中，所述冻干的组合物是不含动物蛋白的组合物，所述不含动物蛋白的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；泊洛沙姆；和NAC；并且任选地包含EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。在一个实施例中，所述冻干的组合物不包含EDTA、EGTA、DTPA及其类似物。

在另一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，所述冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的冻干保护剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和NAC。

在某些实施例中，所述冻干的组合物用选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂重构。在至少一个实施例中，在向患者施用之前，将所述冻干的组合物用包括NaCl的重构媒剂重构。

在固体或液体组合物的上述实施例中的任何实施例中，可以设想的是，不包含以下这些成分中的一种或多种成分(以任何组合的形式)：聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇和聚乙二醇的二嵌段共聚物和/或多元醇，如肌醇、乳醇、异麦芽酮糖、木糖醇、赤藓糖醇。在固体或液体组合物的上述实施例中的任何实施例中，可以设想的是，所述组合物不含动物蛋白。

在另一方面，设想了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖及其组合的张度剂和/或冻干保护剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、N-乙酰半胱氨酸、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白，并且在实施例中，当所述组合物是液体并且所述抗氧化剂是蛋氨酸时，所述表面活性剂不包含聚山梨酯。所述组合物可以是液体或固体。

在另一方面，设想了一种药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖或蔗糖；泊洛沙姆；和蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。所述组合物可以是液体或固体。

在另一方面，设想了一种药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、量介于1wt％与15wt％之间的海藻糖、量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。所述组合物可以是液体或固体。

在另一方面，设想了一种药物组合物。所述组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。所述组合物可以是液体或固体。

在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、N-乙酰半胱氨酸、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白，并且在实施例中，当所述组合物是液体并且所述抗氧化剂是蛋氨酸时，所述表面活性剂不包含聚山梨酯。所述组合物可以是液体或固体。在一个实施例中，所述组合物还包括张度剂和/或冻干保护剂。在一些实施例中，所述张度剂选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合。在替代实施例中，所述冻干保护剂选自海藻糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合。在一个实施例中，所述张度剂和/或冻干保护剂是二糖。在一实施例中，所述二糖选自海藻糖和蔗糖。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述组合物不包括交联的透明质酸。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述组合物可以通过将包括梭菌毒素活性成分的组合物与包括非交联的透明质酸或其盐和不是非交联的透明质酸或其盐的稀释剂的组合物混合，或者通过将非交联的透明质酸或其盐与包括梭菌毒素活性成分和稀释剂的组合物混合来制备。

在液体组合物的上述方面/实施例中中的任何方面/实施例中，可以设想的是，梭菌毒素活性成分的浓度为0.2至2.0ng/mL或约0.2-10ng/mL。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，梭菌毒素活性成分的浓度为约10U/mL至约200U/mL或约10U/mL至约100U/mL。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述组合物包括每毫克非交联的透明质酸或盐至多10个单位的梭菌毒素活性成分。在固体或液体组合物的另一个实施例中，可以设想的是，所述组合物包括每毫克非交联的透明质酸或其盐至多40个单位的梭菌毒素活性成分。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述梭菌毒素活性成分是A型肉毒毒素或Onabotulinum毒素A。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述组合物可以不包括任何梭菌毒素活性成分。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，非交联的透明质酸的重均分子量为约450kDa至2.0MDa，如450kDa至1.6MDa。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，非交联的透明质酸的重均分子量为约1.58MDa。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，按所述固体或液体组合物的总重量计，非交联的透明质酸的浓度为0.1wt％至50wt％，如约0.2wt％至10wt％或约0.4wt％至5wt％，如约0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、1.0wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％、5.5wt％或6wt％。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，所述药物组合物与不包括非交联的透明质酸或其盐的药物组合物相比，可以使梭菌毒素活性成分的功效和/或持续时间增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％。在此类药物组合物的一些特定实施例中，非交联的透明质酸或其盐的存在量为约1.2wt％并且重均分子量为约1.58Mda。

在固体或液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，当所述组合物包括A型肉毒毒素时、约1.2wt％的重均分子量为约1.58MDa的非交联的透明质酸或其盐时，A型肉毒毒素的功效和/或作用持续时间可以是不包括任何非交联的透明质酸或其盐的组合物的功效和/或作用持续时间的两倍。

在液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述药物组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度为约0.01Pa-S至约0.2Pa-s(约10cps至约200cps)。在一个实施例中，所述组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度介于约5Pa-s与500Pa-s之间。在另一个实施例中，所述组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度介于约50Pa-s与250Pa-s之间。

在另一方面，设想了一种用于治疗抑郁症的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗心律失常的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗眉间纹的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于颈部肌张力障碍的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。在一个实施例中，所述方法有效地减少了异常头部位置和颈部疼痛的严重程度。

在另一方面，设想了一种用于外眦线的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于抬头纹(forehead line)的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗对抗胆碱能药物应答不足或不耐受抗胆碱能药物的成年人的带有急迫性尿失禁、尿急和尿频症状的膀胱过度活动症的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗对抗胆碱能药物应答不足或不耐受抗胆碱能药物的成年人的因逼尿肌过度活动而引起的尿失禁的方法，所述逼尿肌过度活动与神经系统病状(例如脊髓损伤(SCI)、多发性硬化症(MS))相关。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗或预防性治疗患有慢性偏头痛(每月≥15天，每天持续4小时或更长时间的头痛)的成年患者的头痛的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗成年患者和小儿患者(2-17岁)的上肢和/或下肢痉挛的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。

在另一方面，设想了一种用于治疗腋窝多汗症的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。在一个实施例中，所述方法旨在用于其中所述腋窝多汗症很严重和/或不能充分由局部药剂控制的人类受试者。

在另一方面，设想了一种用于治疗斜视的方法。所述方法包括提供根据本文所述的实施例和方面中的任何实施例和方面的组合物以进行施用、指示施用所述组合物或施用所述组合物。在一个实施例中，所述斜视在12岁及以上的人类患者中。

附图说明

图1A是向大鼠注射具有肉毒毒素血清型A(BoNT/A)的组合物后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图；不含非交联的透明质酸(对照)的组合物以4.7U/kg(空心正方形)、9.4U/kg(空心圆圈)和16.4U/kg(空心三角形)的BoNT/A剂量给予，并且具有1.2wt％线性非交联的透明质酸(重均MW为1500kDa)的组合物以4.7U/kg(实心正方形)和9.4U/kg(实心圆圈)的BoNT/A剂量给予；

图1B是在将具有BoNT/A的组合物以2.96U/kg的剂量注射到具有BoNT/A的组合物的大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图，其中一种组合物(实心菱形)包括1.2wt％的线性非交联的透明质酸(重均MW为1500kDa)，并且对照组合物(空心菱形)不具有线性非交联的透明质酸；

图1C是将具有BoNT/A的组合物注射到大鼠后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图；除一种组合物外，所有组合物均以4.7U/kg的BoNT/A剂量给予，并且一种对照比较物组合物以9.4U/kg(空心圆圈)给药；测试组合物包括1.2％的非交联的透明质酸(1500kDa；实心正方形)、2％的非交联的透明质酸(1500kDa，实心菱形)、3％的非交联透明质酸(LMW，实心圆圈)和0.6％的非交联的透明质酸(HHMW，实心倒三角形)；比较物对照组合物缺乏非交联的透明质酸并以4.7U/kg BoNT/A(空心正方形)

或9.4U/kg(空心圆圈)给药；

图2是将具有BoNT/A的组合物注射到大鼠后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图，所述组合物包括1.2wt％的非交联的透明质酸(实心正方形)或不包括交联的透明质酸(空心正方形)；

图3是在将缺乏非交联的透明质酸并以9U/kg(空心圆形)、5.1U/kg(空心正方形)或2.8U/kg(空心三角形)的BoNT/A剂量施用的肉毒毒素对照组合物或包括1.2wt％的非交联透明质酸(1500kDa)的以9U/kg(实心圆圈)、5.1U/kg(实心方形)或2.8U/kg(实心三角形)的BoNT/A剂量施用的组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图；

图4是在将缺乏非交联的透明质酸并以2.85U/kg(空心三角形)或9U/kg(空心圆圈)的BoNT/A剂量施用的肉毒毒素对照组合物或包括1.2wt％非交联的透明质酸(1500kDa)的以2.85U/kg(实心三角形)或9U/kg(实心圆圈)的BoNT/A剂量施用的组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图；

图5是在将缺乏非交联的透明质酸并以2.96U/kg(空心三角形)、4.70U/kg(空心正方形)或9.4U/kg(空心圆圈)的BoNT/A剂量施用的肉毒毒素对照组合物或包括1.2wt％的非交联透明质酸(1500kDa)的以2.96U/kg(实心三角形)、4.70U/kg(实心方形)或9.4U/kg(实心圆圈)的BoNT/A剂量施用的组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图；

图6是在将以9.4U/kg给药的肉毒毒素组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图，所述肉毒毒素组合物具有组氨酸、海藻糖、表面活性剂(泊咯沙姆P188)和蛋氨酸(pH 6)，不具有非交联的透明质酸(对照，空心正方形)或者具有1.2％的平均MW为1500kDa的非交联的透明质酸(实心圆圈)或2.3％的平均MW为700kDa的非交联的透明质酸(实心三角形)；

图7是在将以9.4U/kg给药的肉毒毒素组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图，所述肉毒毒素组合物具有组氨酸、海藻糖、表面活性剂(泊咯沙姆P188)和蛋氨酸(pH 6)，不具有非交联的透明质酸(对照，空心正方形)或者具有0.6wt％(空心圆圈)、1.2wt％(空心三角形)、1.6wt％(实心圆圈)和2.0wt％(实心三角形)的平均MW为1500kDa的非交联的透明质酸；

图8是在将以9.4U/kg给药的肉毒毒素组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图，所述肉毒毒素组合物包括含1.2wt％的平均MW为1500kDa的非交联的透明质酸的下表A中标识的各种媒剂，其中表中指定的调配物编号与以下符号相对应：调配物1(对照，无非交联的透明质酸)，空心正方形；调配物2，空心三角形；调配物3，实心正方形；调配物4，实心圆圈；调配物5，实心三角形；调配物6，倒三角形；调配物7，实心菱形。

具体实施方式

在实施例中，本文所述的组合物涉及梭菌毒素活性成分和/或非交联的透明质酸或其盐的稳定的液体和/或稳定的固体药物组合物。在一些实施例中，所述组合物还包括表面活性剂和抗氧化剂以及任选的张度剂和/或冻干保护剂中的一种或多种。在某些液体组合物中，二糖形式的冻干保护剂是任选的。

同样如以下将描述的，所述组合物可在用于治疗各种疾病、病症和病状的方法中使用，所述各种疾病、病症和病状包含例如抑郁症(例如重度抑郁症)、头痛(例如偏头痛、紧张性头痛等)、疼痛、心房颤动、多汗症、肌肉痉挛、颈部肌张力障碍、睑痉挛、膀胱过度活动症(例如神经性逼尿肌过度活动和特发性膀胱过度活动)、膀胱疼痛(例如间质性膀胱炎和膀胱疼痛综合征)、皮肤病状(例如皱纹、细皱纹、过多的皮脂产生、痤疮和酒渣鼻)、不规则行为以及使用本文提供的组合物的类似疾病、病症和病状。实施例可以包含各种施用技术，包含例如注射(如肌内、皮内、皮下等)、滴注、静脉内、透皮和局部。

定义

如本文所使用的，以下阐述的词语或术语具有以下定义：

本文使用冠词“一个/一种(a/an)”来指代所述冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法宾语。举例来说，“要素”意指一个/种要素或多于一个/种要素。

如本文所使用的术语“约”或“大约”意指在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分地取决于所述值是如何测量或确定的(即，测量系统的局限性)。例如，根据本领域的实践，“约”可以意指在1个或大于1个标准偏差内。当在本申请和权利要求中描述特定值时，除非另外指出，否则术语“约”意指在特定值的可接受误差范围内。当限定陈述的项目、数字、百分比或术语的值时，术语“约”是指陈述的项目、百分比、参数或术语的值的正负百分之十的范围。

“施用”或“以施用”是指将药物组合物给予(即，施用)到受试者或可替代地接受药物组合物的受试者的步骤。本文公开的药物组合物可以通过各种方法局部施用。例如，肌内、皮内、皮下施用、鞘内施用、腹膜内施用、局部(透皮)、滴注和植入(例如，如聚合物植入物或微渗透泵等缓释装置)都可以是合适的施用途径。

“减轻”是指减少疼痛、头痛或病状或病症的任何症状或原因的发生。因此，减轻包含一定程度减少、显著减少、接近完全减少和完全减少。

“不含动物蛋白”是指不存在血液来源、血液汇集和其它动物来源的产物或化合物。“动物”是指哺乳动物(如人类)、鸟类、爬行动物、鱼类、昆虫、蜘蛛或其它动物物种。“动物”不包含微生物，如细菌。因此，无动物蛋白的药物组合物可以包含肉毒神经毒素。例如，“不含动物蛋白”的药物组合物是指基本上不含或本质上不含或完全不含血清来源的白蛋白、明胶和其它动物来源的蛋白质(如免疫球蛋白)的药物组合物。不含动物蛋白的药物组合物的示例是药物组合物，所述药物组合物包括肉毒毒素(作为活性成分)和合适的多糖(作为稳定剂或赋形剂)或由其组成。

“抗氧化剂”是指保护活性成分免于与氧气反应的任何化合物。抗氧化剂可以大致分为三类：(i)牺牲性抗氧化剂，例如抗坏血酸和亚硫酸盐，牺牲性抗氧化剂与特定活性成分相比更容易与氧气反应并且因此可以清除氧气；(ii)链终止剂，例如蛋氨酸、NAC、谷胱甘肽、硫辛酸、丁基化羟基甲苯(BHT)以及半胱氨酸，所述链终止剂是由于与氢原子的弱键而形成稳定的自由基的分子，所述氢原子在自由基链的传播中由于氧的消耗而受到攻击；(iii)螯合剂，例如EDTA、EGTA和DTPA及其类似物，所述螯合剂通过与金属形成复合物而降低过渡金属的催化活性。

“生物活性”描述了药物对生物的有利或不利影响。当药物是复杂化学混合物时，此活性由物质的活性成分赋予，但可以被其它成分改变。可以通过体内LD

“肉毒毒素”是指由肉毒梭菌产生的神经毒素，以及由非梭菌物种重组产生的肉毒毒素(或其轻链或重链)。本文所用的短语“肉毒毒素”涵盖肉毒毒素血清型A、B、C、D、E、F和G及其亚型和其任何其它类型的亚型，或在每种情况下前述物质中的任何物质的任何重新工程化的蛋白质、类似物、衍生物、同源物、部分、子部分、变体或型式。如本文所使用的，“肉毒毒素”还涵盖“经修饰的肉毒毒素”。如本文所使用的，另外的“肉毒毒素”还涵盖肉毒毒素复合物(例如300kDa、600kDa和900kDa复合物)，以及与复合蛋白不相关的肉毒毒素的神经毒性组分(150kDa)。

“梭菌毒素”是指由梭菌毒素菌株产生的任何毒素，所述梭菌毒素菌株可以执行整个细胞机制，从而梭菌毒素使细胞中毒，并涵盖梭菌毒素与低或高亲和力梭菌毒素受体的结合、毒素/受体复合物的内在化、梭菌毒素轻链易位到细胞质中以及梭菌毒素底物的酶促修饰。梭菌毒素的非限制性示例包含肉毒毒素，如BoNT/A(即，肉毒毒素血清型A)、BoNT/B、BoNT/C

“梭菌毒素活性成分”是指含有梭菌毒素的任何部分的分子，所述分子在施用于受试者或患者时或之后产生作用。如本文所使用的，术语“梭菌毒素”涵盖：(i)梭菌毒素复合物，所述梭菌毒素复合物包括大约150kDa的梭菌毒素和其它统称为非毒素相关蛋白(NAP)的蛋白质，(ii)单独的大约150kDa的梭菌毒素(即，没有NAP)，或(iii)经修饰的梭菌毒素，例如重新靶向的梭菌毒素。

“畸形”是指外观、物理或功能上的不规则性、缺陷、异常、瑕疵、变形、凹陷或扭曲。

“稀释剂”是指药物组合物中除梭菌毒素活性成分以外的组分。

应用于生物活性成分的“有效量”是指通常足以在受试者中引起期望变化的成分的量。例如，当期望的作用是减轻自身免疫性病症症状时，所述成分的有效量是至少引起自身免疫性病症症状明显减轻并且不导致明显毒性的量。

当涉及添加到梭菌毒素组合物中的赋形剂或赋形剂的特定组合的量使用时，“有效量”是指达到梭菌毒素活性成分的期望初始恢复效力所必需的每种赋形剂的量。在此实施例的方面中，有效量的赋形剂或赋形剂组合产生的初始恢复效力为例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在此实施例的其它方面，治疗有效浓度的梭菌毒素活性成分使正在治疗的与滋养品相关的症状减少例如至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。

“重链”是指肉毒神经毒素的重链。其分子量为约100kDa并且可以被称为H链或H。

H

H

“轻链”是指梭菌神经毒素的轻链。其具有约50kDa的分子量并且可以被称为肉毒神经毒素的L链、L或蛋白水解结构域(氨基酸序列)。

LH

“植入物”是指受控释放(例如搏动性或连续性)组合物或药物递送系统。植入物可以例如被注射到、插入到或植入人体中。

“液体组合物”、“液体药物组合物”或“液体调配物”是指能够在液体药物赋形剂(如缓冲剂)中长时间储存使得其可以根据需要被临床医生随时使用的药物或生物制品的药物活性制剂。所述液体药物组合物在无冻干过程的情况下制造。

“局部施用”是指在动物体上或动物体内的部位处或其附近例如通过肌肉内或皮内或皮下注射或局部施用来直接施用药物，在所述部位期望药物的生物学作用。局部施用不包含全身施用途径，如静脉内或口服施用。局部施用是将药剂施加于患者皮肤的局部施用类型。

“冻干保护剂(Lyoprotector或lyoprotectant)”是指冻干的调配物中包含的在冷冻干燥过程中保护梭菌毒素活性成分的物质。冻干保护剂包含例如多羟基化合物，如糖(单糖、二糖和多糖)、多元醇及其衍生物。可以与本文公开的冻干的调配物一起使用的示例性冻干保护剂包含蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖、棉子糖、麦芽糖、甘油、乳糖、果糖、半乳糖及其组合。

“冻干的组合物”、“冻干的药物组合物”、“冻干的调配物”或“固体组合物”是指含有梭菌毒素活性成分的调配物，所述调配物已经受冻干、冷冻干燥或真空干燥过程；并且在施用于患者之前，可以用如盐水或水等重构媒剂进行重构。冻干的组合物可以是冷冻干燥的组合物或真空干燥的组合物。

“经修饰的肉毒毒素”是指与天然肉毒毒素相比，其氨基酸中的至少一个氨基酸被缺失、修饰或替换的肉毒毒素。另外，经修饰的肉毒毒素可以是重组产生的神经毒素或重组产生的神经毒素的衍生物或片段。经修饰的肉毒毒素保留天然肉毒毒素的至少一种生物学活性，如结合肉毒毒素受体的能力或抑制神经递质从神经元释放的能力。经修饰的肉毒毒素的一个示例是具有来自一种肉毒毒素血清型(如血清型A)的轻链和具有来自不同的肉毒毒素血清型(如血清型B)的重链的肉毒毒素。经修饰的肉毒毒素的另一个示例是与神经递质(如物质P)偶联的肉毒毒素。

如本文所使用的，“分子量”是重均分子量，其是按本领域已知的方法测量和计算的(例如，Fred Billmeyer,《聚合物科学教材(Textbook of Polymer Science)》,第3版,1984,约翰·威利父子公司(J.Wiley&Sons),第16-19页)。

“突变”是指天然存在的蛋白质或核酸序列的结构修饰。例如，在核酸突变的情况下，突变可以是DNA序列中一个或多个核苷酸的缺失、添加或取代。在蛋白质序列突变的情况下，突变可以是蛋白质序列中一个或多个氨基酸的缺失、添加或取代。例如，包括蛋白质序列的特定氨基酸可以替代另一个氨基酸，例如选自包含以下氨基酸的组的氨基酸：丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸或任何其它天然或非天然存在的氨基酸或化学修饰的氨基酸。蛋白质序列的突变可能是DNA序列突变的结果，所述DNA序列在被转录并且所得mRNA被翻译时产生突变的蛋白质序列。也可以通过将含有所需突变的肽序列与所需蛋白质序列融合来产生蛋白质序列的突变。

“非交联的透明质酸或其盐”是指重均分子量为250kDa至2.4Mda或4.6Mda至8MDa的非交联的透明质酸或其盐。

“患者”是指接受医学或兽医护理的人类或非人类受试者。因此，本文公开的组合物可以用于治疗任何动物，例如哺乳动物等。

“外周施用”是指皮下、皮内、透皮或皮下施用，但不包含肌内施用。“外周”是指在皮下位置，并且不包含内脏部位。

“药物组合物”是指包括活性药物成分(例如梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素)和至少一种另外的成分(例如稳定剂或赋形剂等)的组合物。因此，药物组合物是适合于对受试者(如人类患者)进行诊断或治疗施用的调配物。药物组合物可以是例如在冻干或真空干燥的条件下，在冻干或真空干燥的药物组合物重构后形成的溶液，或呈不需要重构的溶液或固体的形式。

“药理学上可接受的赋形剂”与“药理学上的赋形剂”或“赋形剂”同义，并且是指当施用于哺乳动物时基本上没有长期或永久有害作用的任何赋形剂，并且涵盖化合物，例如，稳定剂、填充剂、冷冻保护剂、冻干保护剂、添加剂、媒剂、载体、稀释剂或助剂。赋形剂通常与活性成分混合，或允许稀释或包封活性成分，并且可以是固体、半固体或液体药剂。还可以预见，包括梭菌毒素活性成分的药物组合物可以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述药学上可接受的赋形剂有助于将活性成分加工成药学上可接受的组合物。只要任何药理学上可接受的赋形剂与梭菌毒素活性成分不会不相容，就可以设想将其用于药学上可接受的组合物中。药理学上可接受的赋形剂的非限制性示例可以见于例如《药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)》(HowardC.Ansel等人编辑,利平科特·威廉姆斯与威尔金斯出版社(Lippincott Williams&Wilkins Publishers),第7版1999)；《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy)》(Alfonso R.Gennaro编辑,利平科特·威廉姆斯与威尔金斯出版社(Lippincott,Williams&Wilkins),第20版2000)；古德曼和吉尔曼的《治疗学的药理基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)》(Joel G.Hardman等人编辑,麦格劳·希尔专业出版社(McGraw-Hill Professional),第10版,2001)；以及《药物赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)》(Raymond C.Rowe等人,APhA出版公司(APhAPublications),第4版,2003)，所述文献中的每个文献通过全文引用特此并入。

药物组合物的组成成分可以包含在单一组合物中(也就是说，除了任何必需的重构流体外，所有组成成分都在药物组合物的初始混配时存在)或作为两组分系统，例如，用重构媒剂重构的真空干燥的组合物，其可以例如含有在药物组合物的初始混配中不存在的成分。两组分系统可以提供若干益处，包含允许掺入不能与两组分系统的第一组分长期充分相容的成分。例如，重构媒剂可以包含防腐剂，所述防腐剂可以在使用期间(例如一周的冷藏储存)提供足够的防止微生物生长的保护，但在两年的冷藏库储存期内不存在，在这段时间内它可能会使毒素降低。可以以这种方式掺入可能与肉毒毒素或其它成分持续长时间不相容的其它成分；也就是说，大约在使用时将其添加到第二媒剂中(例如重构媒剂中)。药物组合物还可以包含防腐剂，如苯甲醇、苯甲酸、苯酚、对羟基苯甲酸酯和山梨酸。药物组合物可以包含例如赋形剂，如表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；制粒剂和崩解剂；粘合剂；润滑剂；防腐剂；生理上可降解的组合物，如明胶；水性媒剂和溶剂；油性媒剂和溶剂；悬浮剂；分散剂或湿润剂；乳化剂、缓和剂；缓冲液；盐；增稠剂；填料；抗氧化剂；稳定剂；和药学上可接受的聚合物或疏水材料以及本领域已知和例如以下中描述的其它成分：Genaro编辑，1985，《雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》，马克出版公司(MackPublishing Co.)，宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.)，所述文献通过引用并入本文。

“多糖”是指多于两个糖分子单体的聚合物。单体可以相同或不同。

“稳定剂(Stabilizing agent、stabilization agent或stabilizer)”是指起到使梭菌毒素活性成分稳定使得药物组合物的效力相对于未稳定的组合物增加的作用的物质。

“稳定剂”可以包含赋形剂，并且可以包含蛋白质和非蛋白质分子。

“表面活性剂”是指天然或合成的两亲化合物。表面活性剂可以是非离子的、两性离子的或离子的。表面活性剂的非限制性示例包含泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合。

“治疗性调配物”是指可以用于治疗并且因此减轻病症或疾病，例如以外周肌肉的活动过度(即，痉挛)为特征的病症或疾病的调配物。

“治疗有效浓度”、“治疗有效量”、“有效量”、“有效剂量”和“治疗有效剂量”是指达到所需治疗效果所必需的梭菌毒素活性成分的最小剂量，并且包含足以减轻正在治疗的与滋养品相关的症状的剂量。

如本文所使用的，“TEM”与“靶向的胞吐调节剂”或“靶向的内肽酶”同义。通常，TEM包括来自梭菌毒素轻链的酶促结构域、来自梭菌毒素重链的易位结构域和靶向结构域。TEM的靶向结构域提供了改变的细胞靶向能力，所述能力将分子靶向除天然存在的梭菌毒素利用的天然梭菌毒素受体以外的受体。通过用具有对非梭菌毒素受体的结合活性的靶向结构域代替梭菌毒素的天然存在的结合结构域来实现这种重新靶向能力。尽管与非梭菌毒素受体结合，但TEM会经历中毒过程的所有其它步骤，包含TEM/受体复合物内在化进入细胞质、在囊膜和双链分子中形成孔、酶结构域易位到细胞质中以及对靶细胞的SNARE复合物的组分施加蛋白水解作用。

“张度剂”是指包含在调配物中以提供等张性的低分子量赋形剂。张度剂的非限制性示例包含二糖，如海藻糖或蔗糖；多元醇，如山梨糖醇或甘露醇；单糖，如葡萄糖；以及盐，如氯化钠、氯化钙和氯化钾。

“局部施用”不包含神经毒素的全身施用。换句话说，与常规的治疗性透皮方法不同，肉毒毒素的局部施用不会导致大量，如大部分的神经毒素进入患者的循环系统。

“治疗”是指临时或永久地缓解(或消除)病状或病症的至少一种症状，例如皱纹、痉挛、抑郁、疼痛(例如头痛)、膀胱过度活动等。

如本文所使用的，术语“单位”或“U”是指LD

“变体”是指如野生型肉毒毒素血清型A、B、C、D、E、F或G等梭菌神经毒素，其已通过相对于野生型肉毒毒素替换、修饰、添加或缺失至少一个氨基酸进行修饰，被靶细胞识别，被靶细胞内在化并催化裂解靶细胞中的SNARE(SNAP(可溶性NSF附着蛋白)受体)蛋白。

变体神经毒素组分的示例可以包括肉毒毒素的变体轻链，其具有被取代、修饰、缺失和/或添加的一个或多个氨基酸。此变体轻链可以具有相同或更好的防止胞吐作用的能力，例如，神经递质囊泡的释放。另外，与亲本化学实体相比，变体的生物学效应可能降低。例如，具有去除的氨基酸序列的A型肉毒毒素的变体轻链可以具有比亲本(或天然)A型肉毒毒素轻链的生物持久性短的生物持久性。

药物组合物

本文公开的药物组合物包括梭菌毒素活性成分和重均分子量小于约2.5MDa或小于约2.4MDa的非交联的透明质酸或其盐。在优选实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量介于约250kDa与约2.5MDa之间。在另一个实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量介于约4.5MDa与约8MDa之间。在其它实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量介于约500kDa与5000kDa之间、约500kDa至小于约2500kDa或约500kDa至约2000kDa。在一个实施例中，药物组合物不含交联的透明质酸，包含其盐。即，药物组合物不包括交联的透明质酸或其盐。

组合物可以通过将包括梭菌毒素活性成分的组合物与包括非交联的透明质酸或其盐和不是非交联的透明质酸或其盐的稀释剂的组合物混合，或者通过将非交联的透明质酸或其盐与包括梭菌毒素活性成分和不是非交联的透明质酸或其盐的稀释剂的组合物混合，或者通过将梭菌毒素活性剂成分、非交联的透明质酸或其盐以及稀释剂一起混合来制备。

在第一方面，描述了一种药物组合物，所述药物组合物包括以下(或由以下组成或基本上由以下组成)：梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、二糖、表面活性剂和抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物可以是固体组合物，如在使用前重构的冻干粉末。在另一个实施例中，所述组合物是液体组合物；也就是说，所述组合物以液体形式制造和储存。进行的研究表明，与缺乏非交联的透明质酸或其盐的组合物相比，所述组合物显示出梭菌毒素活性成分的作用时间延长。

在示例1中描述的第一项研究中，制备了液体组合物，所述液体组合物包括肉毒毒素(作为模型梭菌毒素模型活性成分)、非交联的透明质酸或其盐、二糖、表面活性剂和抗氧化剂。通过将具有不同分子量和固有粘度的透明质酸钠粉末与二糖、表面活性剂和抗氧化剂混合以形成含有透明质酸的组合物，然后将肉毒毒素溶液混合到含有透明质酸的组合物中以制备具有各种浓度的肉毒毒素的肉毒毒素-透明质酸调配物来制备所述组合物。表1总结了每种组合物中透明质酸的分子量或固有粘度以及组合物中的其它成分。

表2总结了具有肉毒毒素的组合物和透明质酸组合物，并且另外总结了几种比较的对照组合物中的成分，所述对照组合物包括肉毒毒素且不具有非交联的透明质酸或其盐(不具有任何透明质酸或其盐)。

表1：透明质酸/透明质酸钠(HA)的组合物

表2：肉毒毒素-HA组合物和不具有HA的对照(比较)组合物

在体内测试了表2的肉毒毒素-透明质酸调配物的作用持续时间。如示例2中所述，将测试和对照调配物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。使用大鼠DAS(数字外展评分)测定评估调配物的功效，其中通过0到4评分的DAS应答评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。结果示出在图1A-1C中。

图1A示出了在注射测试和对照(比较物)组合物后，平均DAS随时间(以天为单位)的变化。缺乏非交联的透明质酸的对照组合物在上表2中指出的稀释剂(20mM组氨酸(pH6)、8％海藻糖、4％泊洛沙姆188和0.2％蛋氨酸)中包括浓度为28.2U/mL、56.4U/mL和98.7U/mL的A型肉毒毒素(BoNT/A)。将这些对照组合物注射到大鼠中以给予分别为4.7U/kg(空心正方形)、9.4U/kg(空心圆圈)和16.4U/kg(空心三角形)的BoNT/A剂量。具有线性非交联的透明质酸的组合物由1.2％HA(重均MW为1500kDa)构成，并且在与对照组合物的稀释剂相同的稀释剂(20mM组氨酸(pH 6)、8％海藻糖、4％泊洛沙姆188和0.2％蛋氨酸)中具有28.2U/mL和56.4U/mL的BoNT/A。将这些组合物注射到大鼠体内以给予分别为4.7U/kg(实心正方形)和9.4U/kg(实心圆圈)的BoNT/A剂量。图1A中的数据显示具有线性非交联的透明质酸的组合物改善了肉毒毒素作用的持续时间，这由用包括线性非交联的透明质酸的组合物治疗的动物中大鼠DAS峰应答和持续时间的增加所证明。当线性非交联的透明质酸被包含在组合物中时，提供了大约两倍的表观剂量增加。

图1B显示了BoNT/A浓度较低的组合物的结果。测试和对照组合物的浓度均为17.9U/mL，并通过注射给药至2.96U/kg。测试组合物(实心菱形)包括1.2wt％的线性非交联的透明质酸(重均MW为1500kDa)，而比较对照组合物(空心菱形)没有线性非交联的透明质酸。与用比较物对照组合物治疗的动物相比，用包括线性非交联的透明质酸的组合物治疗的动物在DAS评分中观察到增加的应答和延长的作用持续时间。与用比较物对照组合物治疗的动物相比，用包括线性非交联的透明质酸的组合物治疗的动物的持续时间增加了大约两倍(定义为恢复到大鼠DAS评分为1的时间)。

图1C显示了体内测试具有不同量和不同分子量的线性非交联的透明质酸的组合物的数据。除了以9.4U/kg(空心圆圈)给药的一种比较物调配物以外，具有BoNT/A的组合物以4.7U/kg给药。测试组合物(上表2)包含具有1.2％非交联的透明质酸(1500kDa；实心正方形)、2％非交联的透明质酸(1500kDa，实心菱形)、3％非交联的透明质酸(LMW，实心圆圈)和0.6％非交联的透明质酸(HHMW，实心倒三角形)的组合物。比较物对照组合物缺乏非交联的透明质酸，并以4.7U/kg BoNT/A(空心正方形)或9.4U/kg(空心圆圈)给药。由相对于对照组合物的较高DAS评分和针对较长时间段的较高DAS评分可以明显看出，包括线性非交联透明质酸的组合物提供了增强的应答和延长的作用持续时间。对于用包括线性非交联的透明质酸的组合物治疗的动物，从DAS评分恢复到评分1所需的较长时间段可以明显看出延长了作用持续时间。

在示例3中描述的另一项研究中，通过用等渗盐水(0.9wt％氯化钠)重构粉状肉毒毒素

制备另外的组合物，并使用DAS测定评估作用的持续时间和作用的程度。现在参考图3-图8描述这些组合物和研究。

设计了一项研究，以比较将非交联的透明质酸添加到以商品名

制备在20mm组氨酸(pH 6)、8wt％海藻糖、4wt％表面活性剂(泊咯沙姆P-188)和0.2wt％蛋氨酸中具有BoNT/A和具有1.2wt％非交联的透明质酸(1500kDa MW)或不具有非交联的透明质酸的组合物。以2.85U/kg和9U/kg的BoNT/A剂量将组合物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。图4示出了在注射组合物后平均DAS随时间(以天为单位)的变化，其中每个N是由6只大鼠/剂量构成的独立研究。包括非交联的透明质酸的肉毒毒素组合物具有改善的作用和更长的作用持续时间。与在相同剂量下不具有非交联的透明质酸的组合物(空心三角形)的峰DAS为约1.6相比，以2.85U/kg(实心三角形)的剂量给药并且具有非交联的透明质酸的组合物的峰DAS为约2.5。在BoNT/A剂量为9U/kg的情况下，包括非交联的透明质酸的组合物(实心圆圈)提供24天的作用(作用持续时间定义为DAS评分返回评分1的天数)，而以9U/kg施用的没有非交联的透明质酸的对照组合物(空心圆圈)提供14.5天的作用。因此，在一个实施例中，当通过相同的施用途径以相同的毒素剂量或效力施用时，具有肉毒毒素和非交联的透明质酸的组合物相对于不具有非交联的透明质酸的肉毒毒素组合物，将作用持续时间提高至少约30％、35％、40％或45％。

另一项研究评估了在2.96U/kg至9.4U/kg范围内的毒素剂量水平下的有效性和作用持续时间。制备BoNT/A、20mm组氨酸(pH 6)、8wt％海藻糖、4wt％表面活性剂(泊咯沙姆P-188)和0.2wt％蛋氨酸和具有1.2wt％非交联的透明质酸(1500kDa MW)或不具有非交联的透明质酸的组合物。以2.96U/kg、4.70U/kg和9.40U/kg的BoNT/A剂量将组合物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。图5是在将缺乏非交联的透明质酸并以2.96U/kg(空心三角形)、4.70U/kg(空心正方形)或9.4U/kg(空心圆圈)的BoNT/A剂量施用的肉毒毒素对照组合物或包括1.2wt％的非交联透明质酸(1500kDa)的以2.96U/kg(实心三角形)、4.70U/kg(实心方形)或9.4U/kg(实心圆圈)的BoNT/A剂量施用的组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)变化的图。除了更大的效果之外，具有非交联的透明质酸的组合物提供了更长作用持续时间。因此，提供了具有肉毒毒素和非交联的透明质酸的组合物，所述组合物提供长1.5倍、1.7倍或2倍的作用持续时间。在其它实施例中，提供了具有肉毒毒素和非交联的透明质酸的组合物，所述组合物提供长1.2倍、1.3倍或1.4倍的作用持续时间。

通过制备具有1.2wt％的平均MW为1500kDa或2.3wt％的平均MW为700kDa的非交联透明质酸的BoNT/A组合物来评估由于非交联的透明质酸的分子量或固有粘度对作用持续时间和作用程度的影响。此研究中的组合物另外包括20mM组氨酸(pH 6)、8wt％海藻糖、4wt％表面活性剂(泊咯沙姆P188)和0.2wt％蛋氨酸。以9.4U/kg的BoNT/A剂量将组合物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。图6示出了在注射到大鼠后，平均DAS随时间(以天为单位)的变化。不具有非交联的透明质酸的组合物(对照，空心正方形)提供了15天的作用时间段(定义为返回到DAS＝1)，而具有1.2wt％的平均MW为1500kDa(实心圆圈)或2.3wt％的平均MW为700kDa(实心三角形)的非交联的透明质酸的组合物分别实现22天和24天的作用持续时间。一致地，相对于不具有非交联的透明质酸的组合物，具有非交联的透明质酸的组合物将肉毒毒素的作用持续时间延长约1.5倍至2倍。

制备具有不同浓度的非交联的透明质酸(平均MW为1500kDa)的组合物。在这项研究中，所述组合物包括BoNT/A、20mM组氨酸，pH 6、8wt％海藻糖、4wt％表面活性剂(泊咯沙姆P188)、0.2wt％蛋氨酸并且不具有非交联的透明质酸(对照，空心正方形)或0.6wt％(空心圆圈)、1.2wt％(空心三角形)、1.6wt％(实心圆圈)或2.0wt％(实心三角形)的非交联透明质酸。以9.4U/kg的BoNT/A剂量将组合物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。图7是在将以9.4U/kg剂量给药的这些肉毒毒素组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)的变化的图。观察到非交联的透明质酸提供的更长的作用持续时间不取决于非交联的透明质酸的百分比，因为具有0.6-2.0wt％非交联的透明质酸的组合物与没有非交联的透明质酸的对照组合物相比，全部提供了更长的作用持续时间。在25℃、0.1/秒的剪切速率下测量组合物的粘度，并且发现其范围为10Pa-s至580Pa-s。因此，在一个实施例中，具有非交联的透明质酸或其盐和肉毒毒素的粘度为约1-1000Pa-s或约1-750Pa-s的组合物提供的作用持续时间与以相同的毒素剂量和相同的施用途径施用的不具有非交联的透明质酸的类似组合物相比大50％、60％、75％、80％或100％。

在另一项研究中，用各种稀释剂制备了具有BoNT/A和1.2wt％非交联的透明质酸(1500kDa MW)的组合物。下表A总结了组合物。

表A：图12中用于研究的BoNT/A组合物

以9.4U/kg的BoNT/A剂量将表A中的组合物肌肉内注射到大鼠的胫骨前部。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。图8是在将肉毒毒素组合物注射到大鼠中后，平均DAS随时间(以天为单位)的变化的图，其中表A中指定的调配物编号对应于符号如下：调配物1(对照，无非交联的透明质酸)，空心正方形；调配物2，空心三角形；调配物3，实心正方形；调配物4，实心圆圈；调配物5，实心三角形；调配物6，倒三角形；调配物7，实心菱形。观察到，对于所有各种媒剂，非交联的透明质酸提供了更长的作用持续时间。将调配物5(实心三角形)调节至pH 5(所有其它调配物均为pH 6)，并提供最长的作用持续时间。因此，在一个实施例中，设想了具有非交联的透明质酸或其盐和肉毒毒素的pH介于约4.70-6.50、4.75-6.50、4.80-6.50、4.85-6.50、4.90-6.50、4.95-6.50、4.98-6.50、4.99-6.50、5.00-6.50、4.70-6.30、4.75-6.30、4.80-6.30、4.85-6.30、4.90-6.30、4.95-6.30、4.98-6.30、4.99-6.30、5.00-6.30、4.70-6.20、4.75-6.20、4.80-6.20、4.85-6.20、4.90-6.20、4.95-6.20、4.98-6.20、4.99-6.20、5.00-6.20、4.70-6.10、4.75-6.10、4.80-6.10、4.85-6.10、4.90-6.10、4.95-6.10、4.98-6.10、4.99-6.10、5.00-6.10或5.00-6.00之间的组合物。这些组合物在选定的pH下提供的作用持续时间比以相同毒素剂量和相同施用途径施用的不具有非交联的透明质酸的类似组合物长50％、60％、75％、80％或100％。

因此，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括梭菌毒素活性成分(如肉毒毒素)、约1.2wt％的重均分子量为约450kDa至2.0MDa(如450kDa至1.6Mda(进一步地，如约1.4-1.6MDa)的非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、泊洛沙姆和蛋氨酸。药物组合物可以不含白蛋白，并且不包括交联的透明质酸或其盐。此类药物组合物与不包括非交联的透明质酸或其盐的药物组合物相比，可以使梭菌毒素活性成分的功效和/或持续时间增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％。

在一个实施例中，本文公开的药物组合物与不包括非交联的透明质酸或其盐的药物组合物相比，使梭菌毒素活性成分的功效和/或持续时间增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％。

在另一个实施例中，本文公开的药物组合物可以通过将包括非交联的透明质酸或其盐的组合物与包括肉毒毒素、二糖、表面活性剂和抗氧化剂的冻干的调配物混合，或者通过将包括肉毒毒素的组合物与包括非交联的透明质酸或其盐、二糖、表面活性剂和抗氧化剂的冻干的调配物混合来制备。在一个实施例中，冻干的组合物可以包括肉毒毒素和/或非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、聚山梨酯或泊洛沙姆以及蛋氨酸或NAC。在另一个实施例中，冻干的组合物可以包括肉毒毒素和/或非交联的透明质酸或其盐、二糖、选自泊洛沙姆和聚山梨酯的表面活性剂以及选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在另一个实施例中，冻干的组合物可以包括肉毒毒素和/或非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、泊洛沙姆表面活性剂(例如

表3：示例性冻干的组合物中的组分

每种调配物另外包括梭菌毒素活性成分和/或非交联的透明质酸或其盐；Treh＝海藻糖；

P 188＝泊洛沙姆P 188；Met＝L-蛋氨酸；NAC＝N-乙酰-L-半胱氨酸。

在另一个实施例中，可以制备包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、张度剂、表面活性剂和抗氧化剂的液体组合物。液体溶液可以通过将非交联的透明质酸或其盐与包括梭菌毒素活性成分的液体溶液混合，使用作为模型的肉毒毒素、二糖张度剂、泊洛沙姆表面活性剂和抗氧化剂，或者使用作为模型的肉毒毒素，将包括梭菌毒素活性成分的组合物与包括非交联的透明质酸或其盐、二糖张度剂、泊洛沙姆表面活性剂和抗氧化剂的液体组合物混合来制备。二糖张度剂可以是海藻糖，并且泊洛沙姆表面活性剂可以是泊洛沙姆P188。表4中示出了三种示例性调配物，每种调配物具有在组氨酸缓冲液中的相同量的肉毒毒素(100单位/mL)和非交联的透明质酸或其盐(0.2至10w/w％)、8w/w％海藻糖和4w/w％泊洛沙姆P188。调配物10不具有抗氧化剂；调配物11含有NAC，并且调配物12含有L-蛋氨酸。

表4

在另一个实施例中，可以用在pH 6.0的组氨酸缓冲液中的100U/mL肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、8w/w％海藻糖和4w/w％泊洛沙姆P188制备液体组合物。每种调配物具有不同的抗氧化剂或抗氧化剂的组合，如下表5所示。测试的抗氧化剂包含NAC、L-蛋氨酸、L-色氨酸、L-谷胱甘肽、亚硫酸钠、没食子酸丙酯和EDTA钠盐。

表5

0.2至10w/w％的非交联的透明质酸或其盐、8w/w％海藻糖和4w/w％泊洛沙

姆P188和指定的抗氧化剂。

谷胱甘肽；NaSul＝亚硫酸钠；PrpGal＝没食子酸丙酯；EDTA＝乙二胺四乙酸

钠盐。

因此，设想了液体或溶液形式的组合物，其包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；二糖；表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在另一个实施例中，所述组合物为液体或溶液形式，其包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；二糖；表面活性剂；选自(i)蛋氨酸和(ii)NAC的抗氧化剂以及选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂。

在另一个实施例中，液体组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；张度剂；表面活性剂；以及选自由牺牲性抗氧化剂、螯合剂抗氧化剂、链终止剂抗氧化剂及其组合组成的组的抗氧化剂。

在另一个实施例中，可以用在pH 6.0的组氨酸缓冲液中的100U/mL肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、4w/w％泊洛沙姆P188、0.2w/w％蛋氨酸和8w/w％海藻糖或蔗糖制备液体组合物，如表6所示。

表6-液体调配物

*每种调配物含有在组氨酸缓冲液中的100U/mL肉毒毒素、0.2至10w/w％非交联的透明质酸或其盐、4w/w％泊洛沙姆P188和0.2w/w％蛋氨酸。

在一个实施例中，设想了一种液体组合物，其包括梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖；泊洛沙姆表面活性剂；和蛋氨酸。

在另一个实施例中，可以制备液体组合物，其包括在pH 6.0的20mM组氨酸缓冲液中的梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆P188(4w/w％)或聚山梨酯(

表7-液体调配物

*每种调配物含有在组氨酸缓冲液中的100U/mL肉毒毒素、0.2-10w/w％非交联的透明质酸或其盐、8w/w％海藻糖和0.2w/w％蛋氨酸。

在一个实施例中，提供了一种液体组合物，其包括梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖；泊洛沙姆表面活性剂；和蛋氨酸。

在另一个实施例中，可以用作为梭菌毒素活性成分模型的肉毒毒素和非交联的透明质酸或其盐来制备液体组合物。可以在有或没有泊洛沙姆表面活性剂、有或没有海藻糖以及有或没有蛋氨酸的情况下制备组合物。表8给出了组合物的细节。

表8-液体调配物

*每种调配物均在pH 6.0的20mM组氨酸缓冲液中，并且非交联的透明质酸或其盐的浓度为0.2至10w/w％。

在一个实施例中，设想了一种液体组合物，其包括梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；泊洛沙姆表面活性剂；和如蛋氨酸等抗氧化剂。在另一个实施例中，还包含二糖。

在另一个实施例中，可以用作为梭菌毒素活性成分模型的肉毒毒素和非交联的透明质酸或其盐来制备液体组合物。可以用泊洛沙姆表面活性剂或聚山梨酯表面活性剂在有或没有二糖的情况下来制备组合物。所有调配物均包括蛋氨酸。表9给出了组合物的细节。

表9-液体调配物

在一个实施例中，设想了一种液体组合物，其包括梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；泊洛沙姆或聚山梨酯表面活性剂；海藻糖或蔗糖；和如蛋氨酸等抗氧化剂。

在另一个实施例中，制备了没有张度剂的液体组合物。肉毒毒素被用作模型梭菌毒素活性成分。用泊洛沙姆表面活性剂或聚山梨酯表面活性剂和作为抗氧化剂的蛋氨酸制备组合物。表10给出了组合物的细节。

表10-液体调配物

*两种调配物均在pH 6.0的20mM组氨酸缓冲液中，并进一步含有0.2至10w/w％非交联的透明质酸或其盐。P-188＝泊洛沙姆P188；蛋氨酸＝L-蛋氨酸

在另一个实施例中，可以制备包括在pH 6.0的20mM组氨酸缓冲液中的梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；泊洛沙姆P188(4％w/w或0.6％w/w)；海藻糖(2％w/w或8％w/w)；和抗氧化剂——(i)EDTA和NAC(分别为0.03％w/w和0.2％w/w)或(ii)蛋氨酸(0.2％w/w)的液体组合物。每种调配物每个小瓶具有30-200U的肉毒毒素。表11示出了组合物的总结。

表11-液体调配物

所有调配物还包括0.2至10w/w％的非交联的透明质酸或其盐。

因此，在一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白，并且在另一实施例中，当所述抗氧化剂是蛋氨酸时，所述组合物不包含聚山梨酯。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。在一实施例中，所述组合物不包含张度剂。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂；泊洛沙姆；和蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于1wt％与15wt％之间的二糖类张度剂；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的抗氧化剂。在另一个实施例中，组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于1wt％与15wt％之间的海藻糖；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。在另一个实施例中，液体药物组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于2wt％与15wt％或1wt％与10wt％之间的海藻糖；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在另一个实施例中，设想了一种液体药物组合物。所述组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂；泊洛沙姆；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白。

在任何前述实施例中，可以设想的是，在一些实施例中，所述组合物不是乳液和/或不包含包括两亲性实体的纳米颗粒。

可以制备冻干的组合物。所制备的组合物包括作为模型梭菌毒素的肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；表面活性剂；和作为抗氧化剂的蛋氨酸。可以将调配物冻干并在-20℃或40℃下储存约两周。固体组合物示出在表12中。

表12-冻干的调配物

*每种调配物均包括200U/小瓶BoNT/A和0.2至10w/w％非交联的透明质酸或其盐，并且在pH 6.0的20mM组氨酸缓冲液中。

在一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，其中所述组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆、蛋氨酸和海藻糖。

在一个实施例中，提供了一种冻干的组合物，其中所述组合物包括梭菌毒素活性成分、非交联的透明质酸或其盐、泊洛沙姆、蛋氨酸和海藻糖。

在一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；选自海藻糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂和/或冻干保护剂；选自泊洛沙姆、聚山梨酯及其组合的表面活性剂；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一些实施例中，固体组合物包括冻干保护剂。在一些实施例中，冻干保护剂包含蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖或其组合。在某些实施例中，所述冻干的组合物用选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂重构。在至少一个实施例中，在向患者施用之前，将所述冻干的组合物用包括NaCl的重构媒剂重构。在至少一个实施例中，重构媒剂中NaCl的存在量为0.9％(w/w)。在其它实施例中，KCl以适合于张力调节的量包含在组合物中。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；海藻糖或蔗糖；泊洛沙姆；和蛋氨酸。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施例中，冻干的药物组合物包括作为梭菌毒素活性成分的肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐、海藻糖、泊洛沙姆和蛋氨酸。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；量介于1wt％与15wt％之间的海藻糖；量介于0.5wt％与8wt％之间的泊洛沙姆；和量介于0.05wt％与5wt％之间的蛋氨酸。在另一个实施例中，所述组合物包括梭菌毒素活性成分，如肉毒毒素；8wt％海藻糖；4wt％泊洛沙姆；和0.2wt％蛋氨酸。在一个实施例中，肉毒毒素的存在量为约200个单位。在另一个实施例中，肉毒毒素的存在量为约50个单位。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，设想了一种固体或冻干的药物组合物。所述组合物包括肉毒毒素；非交联的透明质酸或其盐；二糖；泊洛沙姆；和选自蛋氨酸、NAC、EDTA、EGTA、DTPA、其类似物及其组合的抗氧化剂。在一个实施例中，所述组合物不包含白蛋白、羟烷基淀粉、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、多元醇、甘氨酸和/或聚乙烯吡咯烷酮。

在另一个实施例中，冻干的组合物包括梭菌毒素活性成分；非交联的透明质酸或其盐；张度剂和/或冻干保护剂；表面活性剂；以及选自由牺牲性抗氧化剂、螯合剂抗氧化剂、链终止剂抗氧化剂及其组合组成的组的抗氧化剂。在一些实施例中，冻干的梭菌药物组合物包括冻干保护剂。在一些实施例中，冻干保护剂包含蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖或其组合。

在固体或液体组合物的前述实施例中的任何实施例中，可以设想的是，以任何组合的方式将以下这些成分中的一种或多种成分排除在外：聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇和聚乙二醇的二嵌段共聚物和/或多元醇，如肌醇、乳醇、异麦芽酮糖、木糖醇或赤藓糖醇。

在一个实施例中，如本文所公开的液体组合物可以通过在向患者施用之前用包括NaCl或KCl的重构媒剂重构、非交联的透明质酸钠粉末和不包括非交联的透明质酸或其盐的冻干的调配物如以上公开的但不含非交联的透明质酸或其盐的任何冻干的调配物来制备。在至少一个实施例中，重构媒剂中NaCl或KCl的存在量为0.9％(w/w)。

在固体或液体组合物的前述实施例中的任何实施例中，可以设想的是，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量可以为约450kDa至2.0MDa，如450kDa至1.6MDa、如约1.58MDa。

在固体或液体组合物的前述实施例中的任何实施例中，可以设想的是，非交联的透明质酸或其盐的浓度为约0.2至10wt％、0.2-9wt％、0.2-8wt％、0.2-6wt％、0.3-10wt％、0.3-9wt％、0.3-6wt％、0.3-5wt％、0.4至5wt％、0.5-5wt％、0.5-2.5wt％、0.5-2wt％、0.75-2wt％、1-2wt％。在其它实施例中，非交联的透明质酸或其盐的浓度为约以下中的任一个数字、至少约以下中的任一个数字或介于与以下中的任何数字之间：0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.0wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％、5.5wt％或6wt％。

在液体组合物的前述方面/实施例中的任何方面/实施例中，可以设想的是，所述药物组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度为约0.01Pa-s至约0.2Pa-s(约10cps至约200cps)。在一个实施例中，所述组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度小于约500Pa-s。在其它实施例中，组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度小于约475Pa-s、450Pa-s、400Pa-s、350Pa-s、300Pa-s、250Pa-s、225Pa-s、200Pa-s、175Pa-s、150Pa-s、125Pa-s或110Pa-s。在其它实施例中，组合物在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度为约1-500Pa-s、2-500Pa-s、5-500Pa-s、10-500Pa-s、20-500Pa-s、30-500Pa-s、50-500Pa-s、75-500Pa-s、80-500Pa-s、90-500Pa-s、10-400Pa-s、20-400Pa-s、30-400Pa-s、50-400Pa-s、75-400Pa-s、80-400Pa-s、90-400Pa-s、10-300Pa-s、20-300Pa-s、30-300Pa-s、50-300Pa-s、75-300Pa-s、80-300Pa-s、90-300Pa-s、10-250Pa-s、20-250Pa-s、30-250Pa-s、50-250Pa-s、75-250Pa-s、80-250Pa-s、90-250Pa-s、10-200Pa-s、20-200Pa-s、30-200Pa-s、50-200Pa-s、75-200Pa-s、80-200Pa-s、90-200Pa-s、10-150Pa-s、20-150Pa-s、30-150Pa-s、50-150Pa-s、75-150Pa-s、80-150Pa-s、90-150Pa-s。在其它实施例中，在25℃、0.1/秒的剪切速率下的粘度为以下中的任一个数字、至少约以下中的任一个数字或介于与以下中的任何数字之间：10Pa-s、15Pa-s、20Pa-s、25Pa-s、30Pa-s、40Pa-s、45Pa-s、50Pa-s、55Pa-s、60Pa-s、65Pa-s、70Pa-s、75Pa-s、80Pa-s、85Pa-s、90Pa-s、95Pa-s、100Pa-s、110Pa-s、125Pa-s、150Pa-s、175Pa-s、200Pa-s、225Pa-s、250Pa-s、275Pa-s、300Pa-s、325Pa-s、350Pa-s、375Pa-s、400Pa-s、425Pa-s、450Pa-s、475Pa-s、500Pa-s、550Pa-s、600Pa-s、650Pa-s、700Pa-s、800Pa-s、900Pa-s、1000Pa-s，如示例1中所述进行测量的。

在液体组合物的任何前述方面/实施例中，可以设想的是，所述组合物可以包括每毫克非交联的透明质酸或其盐至多10个单位，如至多6个单位的梭菌毒素。

在液体组合物的任何前述方面/实施例中，可以设想的是，梭菌毒素的浓度可以为约0.2至2.5ng/mL，如约以下中的任一个数字、介于与以下中的任何数字之间或至少约以下中的任一个数字：0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.5、1.6、1.8、2.0.、2.1、2.2、2.4、2.5、3.0、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0.6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5或10、12、或15ng/mL。在另一个实施例中，可以设想的是，本文所述的任何固体或液体组合物中的梭菌毒素的浓度可以为约10U/mL至约200U/mL，如约以下中的任一个数字、介于与以下中的任何数字之间或至少约以下中的任一个数字：10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、75、90、100、110、125、135、150、160、175、190或200U/mL.

在固体或液体组合物的任何前述实施例中，可以设想的是，可以通过将梭菌毒素活性成分与包括非交联的透明质酸或其盐和稀释剂的组合物混合来制备组合物。因此，还提供了包括非交联的透明质酸或其盐的组合物，所述组合物与以上公开的任何固体或液体组合物相同，但是不包括梭菌毒素活性成分。

药物组合物组分

本发明的药物组合物包含梭菌毒素或梭菌毒素活性成分和如约450kDa至2.0MDa、如450kDa至1.6MDa和约1.4-1.6MDa的非交联的透明质酸或其盐。技术人员将理解，本文的描述涉及梭菌毒素活性成分，然而，梭菌毒素也可以用于本文所述的组合物中。因此，将使用术语梭菌毒素活性成分；然而，应当理解，同样设想了梭菌毒素。在一个实施例中，组合物中存在治疗有效浓度的梭菌毒素活性成分。在一个实施例中，梭菌毒素活性成分使正在治疗的与滋养品相关的症状减少例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在此实施例的其它方面，治疗有效浓度的梭菌毒素活性成分使正在治疗的与滋养品相关的症状减少例如至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。

可以设想，在调配本文公开的梭菌毒素活性成分药物组合物中可以添加任何量的梭菌毒素活性成分，条件是可恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分。在此实施例的方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为至少0.1U/ml，至少1.0U/ml、至少10U/ml、至少50U/ml、至少100U/ml、至少200U/ml或至少1000U/ml。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为至多0.1U/ml、至多1.0U/ml、至多10U/ml、至多50U/ml、至多100U/ml、至多200U/ml或至多1000U/ml。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约0.1U/ml至约1000U/ml或约1.0U/ml至约1000U/ml。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约0.001U/ml至约100U/ml、约0.01U/ml至约100U/ml、约0.1U/ml至约100U/ml或约1.0U/ml至约100U/ml。

在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为至少1.0pg、至少10pg、至少100pg、至少1.0ng、至少10ng、至少100ng、至少1.0μg、至少10μg、至少100μg或至少1.0mg。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为至多1.0pg、至多10pg、至多100pg、至多1.0ng、至多10ng、至多100ng、至多1.0μg、至多10μg、至多100μg或至多1.0mg。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约1.0pg至约10μg、约10pg至约10μg、约100pg至约10μg、约1.0ng至约10μg、约10ng至约10μg或约100ng至约10μg。在此实施例的其它方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约1.0pg至约1.0μg、约10pg至约1.0μg、约100pg至约1.0μg、约1.0ng至约1.0μg、约10ng至约1.0μg或约100ng至约1.0μg。在此实施例的另外的方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约1.0pg至约5.0μg、约10pg至约5.0μg、约100pg至约5.0μg、约1.0ng至约5.0μg、约10ng至约5.0μg或约100ng至约5.0μg。在此实施例的另外的方面，添加到调配物中的梭菌毒素活性成分的量为约1.0pg至约10μg、约10pg至约10μg、约100pg至约10μg、约1.0ng至约10μg、约10ng至约10μg或约100ng至约10μg。

在此实施例的方面，梭菌毒素药物组合物包括BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C

本发明药物组合物的方面部分地提供了梭菌毒素复合物作为梭菌毒素活性成分。如本文所使用的，术语“梭菌毒素复合物”是指包括梭菌毒素和相关的NAP的复合物，例如肉毒毒素复合物、破伤风毒素复合物、巴氏毒素复合物和酪酸菌毒素复合物。梭菌毒素复合物的非限制性示例包含由肉毒梭菌产生的那些，例如，900kDa BoNT/A复合物、500kDa BoNT/A复合物、300kDa BoNT/A复合物、500kDa BoNT/B复合物、500kDa BoNT/C

在大多数实施例中，药物组合物包括非交联的透明质酸或其盐。透明质酸(Hyaluronic acid)(也称为透明质酸(hyaluronan))是在关节、结缔组织和眼睛中发现的天然多糖。透明质酸是糖胺聚糖(粘多糖)，其是由葡糖醛酸和N乙酰葡糖胺的重复二聚单元构成的长的无支链的多糖。美国专利第4,636,524号；第4,713,448号；第5,099,013号和第5,143,724号公开了特定的透明质酸及其制备方法。透明质酸的盐形式包含例如透明质酸的钠、钾、钙形式(例如透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙)。

在本文所述的研究中，使用具有以下性质的非交联的透明质酸。

用于本文所述的组合物中的非交联的透明质酸或其盐的重均分子量通常小于约2.5MDa或小于约2.4MDa。在一个实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量介于约250kDa与约2.4MDa之间。在另一个实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量介于约4.6MDa与约8MDa之间。在其它实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量为约300kDa-2.0Mda、300kDa-1.5Mda、300kDa-1.25MDa、300kDa-1.0MDa、300kDa-9000kDa、300kDa-8000kDa、300kDa-7000kDa、300kDa-6000kDa、300kDa-5000kDa、300kDa-4000kDa、300kDa-3000kDa、300kDa-2000kDa、400kDa-2.0MDa、400kDa-1.5MDa、400kDa-1.25MDa、400kDa-1.0MDa、400kDa-9000kDa、400kDa-8000kDa、400kDa-7000kDa、400kDa-6000kDa、400kDa-5000kDa、400kDa-4000kDa、400kDa-3000kDa、400kDa-2000kDa、500kDa-2.0MDa、500kDa-1.5MDa、500kDa-1.25MDa、500kDa-1.0MDa、500kDa-9000kDa、500kDa-8000kDa、500kDa-7000kDa、500kDa-6000kDa、500kDa-5000kDa、500kDa-4000kDa、500kDa-3000kDa、500kDa-2000kDa、650-2000kDa、650-1800kDa、1000-2000kDa、1200-1800kDa、1300-1700kDa、1400-1600kDa。在一个实施例中，非交联的透明质酸或其盐的重均分子量为约1500kDa或1580kDa。

在一些实施例中，用于本文所述的组合物中的非交联的透明质酸或其盐的与重均分子量(MW)相对于数均分子量(Mn)相对应的多分散性指数为1至3、约1-2、约1.05-1.75、1.05-1.60、1.05-1.50、1.05-1.40、1.05-1.35或1.05-1.25。

在一些实施例中，药物组合物包括非蛋白质赋形剂。如本文所使用的，术语“非蛋白质赋形剂”是指不是包括至少十五个氨基酸的多肽的任何赋形剂。可以设想，任何非蛋白质赋形剂可以用于调配本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此非蛋白质赋形剂可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分。

在一些实施例中，药物组合物包括糖。如本文所使用的，术语“糖”是指包括一至10个单糖单元的化合物，例如单糖、二糖、三糖和包括四至十个单糖单元的寡糖。可以设想，任何糖可以用于调配本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此糖可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分。在一些实施例中，例如在冻干的组合物中，糖可以起到冻干保护剂的作用。在一些其它实施例中，例如在冻干的调配物或液体调配物中，糖可以用作张度剂。单糖是具有三个或三个以上碳原子的多羟基醛或多羟基酮，包含醛糖、二糖醛、醛糖酮、酮糖和二酮糖，以及环状形式、脱氧糖和氨基糖及其衍生物，只要母体单糖具有(潜在的)羰基。单糖包含甘油三醛，如甘油醛和二羟基丙酮；四糖，如赤藓糖、赤藻酮糖和苏糖；戊糖，如阿拉伯糖、山梨糖、核糖、核酮糖、木糖、木酮糖；己糖，如阿洛糖、艾特罗斯糖、果糖、岩藻糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、阿胶、鼠李糖、山梨糖、塔格糖、塔洛糖和海藻糖；庚糖，如七庚糖和甘露庚糖；辛糖，如辛酮糖和2-酮-3-脱氧甘露酸辛酸酯；壬糖，如唾液糖；以及癸糖。寡糖是其中至少两个单糖单元通过糖苷键连接的化合物。根据单元的数目，其被称为二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、十糖等。寡糖可以是直链的、支链的或环状的。常见的二糖包含但不限于蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、龙胆二糖、曲二糖、拉米纳二糖、甘露二糖、蜜三糖、黑糖、芸香糖和木二糖。常见的三糖包括但不限于棉子糖、阿卡波糖、麦芽三糖和松三糖。糖赋形剂的具体用途的其它非限制性示例可以在例如Ansel,上述,(1999)；Gennaro,上述,(2000)；Hardman,上述,(2001)和Rowe,上述,(2003)中找到，所述文献中的每个通过全文引用特此并入。

在实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括糖。在此实施例的方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括单糖。在此实施例的其它方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖或十糖。在此实施例的其它方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括包含两个至十个单糖单元的寡糖。

可以设想，任何量的糖可以用于调配本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此糖量可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分量。在此实施例的方面中，添加到调配物中的糖的量为约0.1％(w/w)、约0.5％(w/w)、约1.0％(w/w)、约1.5％(w/w)、约2.0％(w/w)、约2.5％(w/w)、约3.0％(w/w)、约3.5％(w/w)、约4.0％(w/w)、约4.5％(w/w)、约5.0％(w/w)、约5.5％(w/w)、约6.0％(w/w)、约6.5％(w/w)、约7.0％(w/w)、约7.5％(w/w)、约8.0％(w/w)、约8.5％(w/w)、约9.0％(w/w)、约9.5％(w/w)、约10％(w/w)、约15％(w/w)、约20％(w/w)、约25％(w/w)、约30％(w/w)或约35％(w/w)。在此实施例的其它方面中，添加到调配物中的糖的量为至少0.1％(w/w)、至少0.5％(w/w)、至少1.0％(w/w)、至少1.5％(w/w)、至少2.0％(w/w)、至少2.5％(w/w)、至少3.0％(w/w)、至少3.5％(w/w)、至少4.0％(w/w)、至少4.5％(w/w)、至少5.0％(w/w)、至少5.5％(w/w)、至少6.0％(w/w)、至少6.5％(w/w)、至少7.0％(w/w)、至少7.5％(w/w)、至少8.0％(w/w)、至少8.5％(w/w)、至少9.0％(w/w)、至少9.5％(w/w)、至少10％(w/w)、至少15％(w/w)、至少20％(w/w)、至少25％(w/w)、至少30％(w/w)或至少35％(w/w)。在此实施例的其它方面中，添加到调配物中的糖的量为至多0.1％(w/w)、至多0.5％(w/w)、至多1.0％(w/w)、至多1.5％(w/w)、至多2.0％(w/w)、至多2.5％(w/w)、至多3.0％(w/w)、至多3.5％(w/w)、至多4.0％(w/w)、至多4.5％(w/w)、至多5.0％(w/w)、至多5.5％(w/w)、至多6.0％(w/w)、至多6.5％(w/w)、至多7.0％(w/w)、至多7.5％(w/w)、至多8.0％(w/w)、至多8.5％(w/w)、至多9.0％(w/w)、至多9.5％(w/w)、至多10％(w/w)、至多15％(w/w)、至多20％(w/w)、至多25％(w/w)、至多30％(w/w)或至多35％(w/w)。

在一个实施例中、本发明的梭菌毒素活性成分药物组合物包括二糖。常见的二糖包含但不限于蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、龙胆二糖、曲二糖、拉米纳二糖、甘露二糖、蜜三糖、黑糖、芸香糖和木二糖。在此实施例的方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括蔗糖。在一个特定实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括海藻糖。在此实施例的方面中，添加到调配物添加到调配物中的二糖的量为约0.1％(w/w)、约0.5％(w/w)、约1.0％(w/w)、约1.5％(w/w)、约2.0％(w/w)、约2.5％(w/w)、约3.0％(w/w)、约3.5％(w/w)、约4.0％(w/w)、约4.5％(w/w)、约5.0％(w/w)、约5.5％(w/w)、约6.0％(w/w)、约6.5％(w/w)、约7.0％(w/w)、约7.5％(w/w)、约8.0％(w/w)、约8.5％(w/w)、约9.0％(w/w)、约9.5％(w/w)、约10％(w/w)、约15％(w/w)、约20％(w/w)、约25％(w/w)、约30％(w/w)或约35％(w/w)。

本发明药物组合物的方面部分提供了表面活性剂。可以设想，任何表面活性剂可以用于调配本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此表面活性剂可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分量。表面活性剂的非限制性示例包含：聚山梨酯，如聚山梨酯20(

因此，在实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括表面活性剂。在此实施例的方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括聚山梨酯、泊洛沙姆、聚氧乙烯乙二醇十二烷基醚、2-十二烷乙醇、聚氧乙烯辛基苯基醚、十二烷基硫酸钠、3-[(3-氯氨基丙基)二甲基铵]-1-丙烷磺酸盐、3-[(3-氯氨基丙基)二甲基铵]-2-羟基-1-丙烷磺酸盐、蔗糖单月桂酸酯；或胆酸钠。

可以设想，任何量的表面活性剂可以用于调配本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此表面活性剂可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分量。在此实施例的方面中，添加到调配物中的表面活性剂的量为约0.01％(w/w)、约0.02％(w/w)、约0.03％(w/w)、约0.04％(w/w)、约0.05％(w/w)、约0.06％(w/w)、约0.07％(w/w)、约0.08％(w/w)、约0.09％(w/w)、约0.1％(w/w)、约0.5％(w/w)、约1.0％(w/w)、约1.5％(w/w)、约2.0％(w/w)、约2.5％(w/w)、约3.0％(w/w)、约3.5％(w/w)、约4.0％(w/w)、约4.5％(w/w)、约5.0％(w/w)、约5.5％(w/w)、约6.0％(w/w)、约6.5％(w/w)、约7.0％(w/w)、约7.5％(w/w)、约8.0％(w/w)、约8.5％(w/w)、约9.0％(w/w)、约9.5％(w/w)、约10％(w/w)、约15％(w/w)、约20％(w/w)、约25％(w/w)、约30％(w/w)或约35％(w/w)。在此实施例的其它方面中，添加到调配物中的表面活性剂的量为至少0.01％(w/w)、至少0.02％(w/w)、至少0.03％(w/w)、至少0.04％(w/w)、至少0.05％(w/w)、至少0.06％(w/w)、至少0.07％(w/w)、至少0.08％(w/w)、至少0.09％(w/w)、至少0.1％(w/w)、至少0.5％(w/w)、至少1.0％(w/w)、至少1.5％(w/w)、至少2.0％(w/w)、至少2.5％(w/w)、至少3.0％(w/w)、至少3.5％(w/w)、至少4.0％(w/w)、至少4.5％(w/w)、至少5.0％(w/w)、至少5.5％(w/w)、至少6.0％(w/w)、至少6.5％(w/w)、至少7.0％(w/w)、至少7.5％(w/w)、至少8.0％(w/w)、至少8.5％(w/w)、至少9.0％(w/w)、至少9.5％(w/w)、至少10％(w/w)、至少15％(w/w)、至少20％(w/w)、至少25％(w/w)、至少30％(w/w)或至少35％(w/w)。在此实施例的其它方面中，添加到调配物中的表面活性剂的量为至多0.01％(w/w)、至多0.02％(w/w)、至多0.03％(w/w)、至多0.04％(w/w)、至多0.05％(w/w)、至多0.06％(w/w)、至多0.07％(w/w)、至多0.08％(w/w)、至多0.09％(w/w)、至多0.1％(w/w)、至多0.5％(w/w)、至多1.0％(w/w)、至多1.5％(w/w)、至多2.0％(w/w)、至多2.5％(w/w)、至多3.0％(w/w)、至多3.5％(w/w)、至多4.0％(w/w)、至多4.5％(w/w)、至多5.0％(w/w)、至多5.5％(w/w)、至多6.0％(w/w)、至多6.5％(w/w)、至多7.0％(w/w)、至多7.5％(w/w)、至多8.0％(w/w)、至多8.5％(w/w)、至多9.0％(w/w)、至多9.5％(w/w)、至多10％(w/w)、至多15％(w/w)、至多20％(w/w)、至多25％(w/w)、至多30％(w/w)或至多35％(w/w)。

在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括泊洛沙姆。可以与本发明药物组合物一起使用的泊洛沙姆包含泊洛沙姆124(

在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括聚山梨酯。可以与本发明药物组合物一起使用的聚山梨酯包含聚山梨酯20(

本发明药物组合物的方面部分提供至少一种抗氧化剂。抗氧化剂的非限制性示例包含但不限于蛋氨酸、半胱氨酸、NAC、谷胱甘肽、硫辛酸、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、维生素E和类似物(包含Trolox C)；螯合剂，如EDTA(乙二胺四乙酸钠盐)、EGTA(乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸)、DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、其类似物或衍生物；以及其组合。在此实施例的方面中，添加到调配物中的抗氧化剂的量为约0.01％(w/w)至约0.10％(w/w)。

进一步设想，本说明书中公开的梭菌毒素活性成分药物组合物可以任选地包含但不限于其它药学上可接受的组分(或药物组分)，包含但不限于缓冲液、防腐剂、张度调节剂、盐、抗氧化剂、渗透压调节剂、乳化剂、甜味剂或调味剂等。可以使用各种缓冲液和调节pH的手段来制备本说明书中公开的药物组合物，条件是所得制剂是药学上可接受的。此类缓冲液包含但不限于乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、中性缓冲盐水和磷酸盐缓冲盐水。应当理解，可以根据需要使用酸或碱来调节药物组合物的pH。可以设想，任何缓冲的pH水平都可以用于调配梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此有效pH水平可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分。在此实施例的方面中，有效pH水平为至少约pH 5.0、至少约pH 5.5、至少约pH 6.0、至少约pH 6.5、至少约pH 7.0或在约pH7.5。在此实施例的另一方面中，有效pH水平为至多约pH 5.0、至多约pH 5.5、至多约pH6.0、至多约pH 6.5、至多约pH 7.0或至多约pH 7.5。在此实施例的又另一方面中，有效pH水平为约pH 5.0至约pH 8.0，有效pH水平为约pH 5.0至约pH 7.0，有效pH水平为约pH 5.0至约pH 6.0，为约pH 5.5至约pH 8.0，有效pH水平为约pH 5.5至约pH 7.0，有效pH水平为约pH5.5至约pH 5.0、为约pH 5.5至约pH 7.5，有效pH水平为约pH 5.5至约pH 6.5。

在重构时或注射时，本文公开的药物组合物可以具有约5至8的pH。在某些实施例中，组合物的pH将低于8，例如7.9、或7.8、或7.7、或7.6、或7.5、或7.4、或7.3、或7.2、或7.1、或7.0、或6.9、或6.8、或6.7、或6.6、或6.5、或6.4、或6.3、或6.2、或6.1、或6.0、或5.9、或5.8、或5.7、或5.6、或5.5、或5.4、或5.3、或5.2、或5.1等。在一些实施例中，pH的范围为5至7。

可以设想，任何浓度的缓冲液都可以用于调配梭菌毒素活性成分药物组合物，条件是使用此有效浓度的缓冲液可以恢复治疗有效量的梭菌毒素活性成分。在此实施例的方面中，缓冲液的有效浓度为至少0.1mM、至少0.2mM、至少0.3mM、至少0.4mM、至少0.5mM、至少0.6mM、至少0.7mM、至少0.8mM或至少0.9mM。在此实施例的其它方面中，缓冲液的有效浓度为至少1.0mM、至少2.0mM、至少3.0mM、至少4.0mM、至少5.0mM、至少6.0mM、至少7.0mM、至少8.0mM或至少9.0mM。在此实施例的又其它方面中，缓冲液的有效浓度为至少10mM、至少20mM、至少30mM、至少40mM、至少50mM、至少60mM、至少70mM、至少80mM或至少90mM。在此实施例的又其它方面中，缓冲液的有效浓度为至少100mM、至少200mM、至少300mM、至少400mM、至少500mM、至少600mM、至少700mM、至少800mM或至少900mM。在此实施例的另外的方面中，缓冲液的有效浓度为至多0.1mM、至多0.2mM、至多0.3mM、至多0.4mM、至多0.5mM、至多0.6mM、至多0.7mM、至多0.8mM或至多0.9mM。在此实施例的其它方面中，缓冲液的有效浓度为至多1.0mM、至多2.0mM、至多3.0mM、至多4.0mM、至多5.0mM、至多6.0mM、至多7.0mM、至多8.0mM或至多9.0mM。在此实施例的又其它方面中，缓冲液的有效浓度为至多10mM、至多20mM、至多30mM、至多40mM、至多50mM、至多60mM、至多70mM、至多80mM或至多90mM。在此实施例的其它方面中，缓冲液的有效浓度为至多100mM、至多200mM、至多300mM、至多400mM、至多500mM、至多600mM、至多700mM、最大800mM或最大900mM。

在此实施例的另外的方面中，缓冲液的有效浓度为约0.1mM至约900mM、0.1mM至约500mM、0.1mM至约100mM、0.1mM至约90mM、0.1mM至约50mM、1.0mM至约900mM、1.0mM至约500mM、1.0mM至约100mM、1.0mM至约90mM或1.0mM至约50mM。

可以用包括多种肉毒毒素血清型如选自由肉毒毒素血清型A、B、C

在一些实施例中，组合物还可以任选地包含NaCl。NaCl可以特别优选地包含在包括肉毒毒素、海藻糖或蔗糖、泊洛沙姆188和蛋氨酸的组合物中，并且特别优选地包含在包括肉毒毒素、海藻糖或蔗糖、泊洛沙姆188和蛋氨酸的液体组合物中。在某些冻干的调配物中，NaCl可以在重构媒剂中充当张度剂。在一个实施例中，NaCl在重构媒剂中的存在量可以为0.9％(w/w)。

在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物可以调配成冻干的(即冷冻干燥的)或真空干燥的粉末，其可以在施用于患者之前用合适的流体如盐水或水重构。在替代实施例中，药物组合物可以调配成水溶液或悬浮液。

在一些实施例中，固体梭菌毒素活性成分药物组合物包括肉毒毒素、非交联的透明质酸或其盐(如约450kDa至2.0MDa，如450kDa至1.6MDa，约1.4-1.6MDa和约1400-1600kDa)、张度剂和/或冻干保护剂、泊洛沙姆和/或聚山梨酯和抗氧化剂。在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括肉毒毒素。在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括海藻糖。在一些实施例中，梭菌毒素活性成分药物组合物包括泊洛沙姆188或聚山梨酯20。在一些实施例中，组合物包括EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。在替代实施例中，组合物包括蛋氨酸和/或NAC。在这些替代实施例的方面中，组合物还包括EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。在一些实施例中，所述组合物还包括缓冲剂。在一个实施例中，所述组合物包括组氨酸缓冲液。在一些实施例中，二糖、泊洛沙姆和抗氧化剂的相对重量在以下范围内：海藻糖：1％至15％、1％至10％、或2％-15％、或2％-10％；泊洛沙姆：0.5％-8％或0.5％至5％；蛋氨酸：0.01％至5％、0.02％至3％、0.05％至1％、0.05％至0.5％。在一些实施例中，海藻糖、泊洛沙姆和蛋氨酸的相对重量在以下范围内：海藻糖：1％至15％、1％至10％、或2％-15％、或2％-10％；泊洛沙姆：0.5％-8％或0.5％至5％；蛋氨酸：0.01％至5％、0.02％至3％、0.05％至1％、0.05％至0.5％。在一些实施例中，海藻糖、泊洛沙姆和蛋氨酸的相对重量分别在以下范围内：1％至10％；0.5％至5％和0.1％至0.3％。在其它实施例中，海藻糖、聚山梨酯和蛋氨酸的相对重量分别在以下范围内：1％至15％；0.02％至0.06％；和0.1％至0.3％。在其它实施例中，海藻糖、聚山梨酯和蛋氨酸的相对重量分别在以下范围内：1％至10％；0.02％至0.06％；和0.1％至0.3％。在一些实施例中，EDTA或EDTA类似物的相对重量为约0.01％至0.10％。在一些实施例中，NAC的相对重量的范围为0.01％至0.5％。

在这些实施例的方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物被调配成固体(即，冻干或真空干燥的)组合物。在一些实施例中，固体梭菌药物组合物包括冻干保护剂。在一些实施例中，优选的冻干保护剂包含蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖或其组合。在一些实施例中，固体药物组合物包括相对重量为0.01％至0.5％的NAC。在一些实施例中，药物组合物还包括EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。在替代实施例中，固体药物组合物包括蛋氨酸和EDTA、EGTA、DTPA或其类似物。

在一个实施例中，组合物是由A型肉毒毒素、1.2％(w/w)非交联的透明质酸或其盐(重均分子量为约1.58MDa)、8％(w/w)海藻糖、4％(w/w)泊洛沙姆188、0.2％(w/w)蛋氨酸和组氨酸缓冲液组成的固体组合物。在一个实施例中，在向患者施用之前，将固体组合物用包括NaCl的重构媒剂重构。在一个实施例中，NaCl在重构媒剂中的存在量可以为0.9％(w/w)。

在这些实施例的替代方面中，梭菌毒素活性成分药物组合物被调配成液体。在一些实施例中，液体药物组合物包括选自海藻糖、蔗糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖及其组合的张度剂。在一些实施例中，液体药物组合物包括相对重量为0.1％至0.5％的NAC。在一些实施例中，液体药物组合物包括NAC和选自EDTA、EGTA、DTPA及其类似物的螯合剂。在一些实施例中，液体药物组合物包括组氨酸缓冲液。在一些实施例中，液体药物组合物具有5至7的pH。

在一个实施例中，组合物是由A型肉毒毒素、1.2％(w/w)非交联的透明质酸或其盐(重均分子量为约1.58MDa)、8％(w/w)海藻糖、4％(w/w)泊洛沙姆188、0.2％(w/w)蛋氨酸和组氨酸缓冲液(pH 6)组成的液体组合物。

治疗方法

在实施例中，描述了治疗疾病、病症、病状等的方法，所述方法包括以足以产生改善的患者功能的量向有需要的受试者施用本文所述的药物组合物。在某些实施例中，所述疾病是具有神经肌肉性质的疾病，例如影响肌肉及其神经控制的那些疾病，例如膀胱过度活动症等。某些实施例涉及疼痛的治疗，例如头痛或背痛或肌肉痛等的治疗。在某些实施例中，方法涵盖心理障碍(包含例如抑郁症、焦虑症等)的治疗。

本文所述的组合物和方法可以用于治疗、减轻症状和/或预防例如失弛缓症、肛裂、肛门抽动、睑裂、脑瘫、颈部肌张力障碍、颈源性头痛、半面肌痉挛、重症湿疹、吞咽困难、听觉障碍、食管运动障碍、食道肌环、内斜视(小儿)、眼睑提拉、面部肌功能障碍、步态障碍(特发性脚趾行走)、泛发性肌张力障碍、半面痉挛、面部功能亢进(小舌、前额、鱼尾纹、口部的向下弯曲角度)、多汗症、尿失禁(特发性或神经源性)、药物过度使用性头痛、偏头痛、肌阵挛、肌肉肿块或活动减少(例如涉及咬肌等)、肌筋膜疼痛综合征、阻塞性泌尿症状、胰腺胰脏炎、帕金森氏病、耻骨直肠肌综合征、手术疤痕张力降低、唾液分泌过多、唾液膨出、第六神经麻痹、痉挛、言语/语音障碍、斜视、手术辅助(眼科)、迟发性运动障碍、颞下颌关节病症、紧张性头痛、胸廓出口综合征、扭转性肌张力障碍、斜颈、图雷特氏综合症、震颤、鞭打相关的颈痛、疼痛、瘙痒、炎症、过敏、癌症和良性肿瘤、发烧、肥胖症、传染病、病毒和细菌、高血压、心律失常、血管痉挛、动脉粥样硬化、内皮增生、静脉血栓形成、静脉曲张、附质口腔炎、唾液分泌过多、关节痛、颞下颌关节炎丝汗症、痤疮、酒渣鼻、色素沉着、肥厚性疤痕、瘢痕疙瘩、鸡眼和老茧、皮肤起皱、皮脂过多、牛皮癣、皮炎、过敏性鼻炎、鼻充血、鼻液倒流、打喷嚏、耳垢、浆液和化脓性脓肿、扁桃体和腺样体肥大、耳鸣、头晕、眩晕、声音嘶哑、咳嗽、睡眠呼吸暂停、打鼾、青光眼、结膜炎、葡萄膜炎、斜视、格雷夫氏病、头发过度生长、脱发、哮喘、支气管炎、肺气肿、粘液产生、胸膜炎、凝血障碍、骨髓增生异常、涉及嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的病症、免疫耐受和移植、自身免疫性病症、吞咽困难、胃酸反流、食管裂孔疝、胃炎和胃酸过多、腹泻和便秘、痔疮、尿失禁、前列腺肥大、勃起功能障碍、阴茎异常勃起和佩罗尼氏病、附睾炎、避孕、月经来潮、预防早产、类关节炎、骨关节炎、子宫内膜异位症、类风湿、滑囊炎、肌腱炎、腱鞘炎、纤维肌痛、癫痫发作病症、痉挛、头痛和神经痛。

在某些实施例中，在任何90天的时间段内，患者被限于施用最大360U的肉毒毒素。

神经/肌肉病状的治疗

在实施例中，神经肌肉疾病是多汗症。例如，患有多汗症的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受每个腋窝约59U、或每个腋窝约58U、或每个腋窝约57U、或每个腋窝约56U、或每个腋窝约55U、或每个腋窝约54U、或每个腋窝约53U、或每个腋窝约52U、或每个腋窝约51U、或每个腋窝约50U、或每个腋窝约49U、或每个腋窝约48U、或每个腋窝约47U、或每个腋窝约46U、或每个腋窝约45U、或每个腋窝约44U、或每个腋窝约43U、或每个腋窝约42U、或每个腋窝约41U、或每个腋窝约40U、或每个腋窝约39U、或每个腋窝约38U、或每个腋窝约37U、或每个腋窝约36U或更少。在实施例中，将总共50U皮内注射到间隔大约1-2cm的10-15个部位中。

在实施例中，神经肌肉疾病是面肌痉挛。患有面肌痉挛的受试者例如在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约1.5至15U。在另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有面肌痉挛的患者时接受约1.5至3U、1.5至5U、1.5至7U、1.5至10U、1.5至12U、1.5至15U、5至10U、5至15U或10至15U。在仍另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有面肌痉挛的患者时接受约1.5U、约2U、约2.5U、约3U、约3.5U、约4U、约4.5U、约5U、约5.5U、约6U、约6.5U、约7U、约7.5U、约8U、约8.5U、约9U、约9.5U、约10U、约10.5U、约11U、约11.5U、约12U、约12.5U、约13U、约13.5U、约14U、约14.5U或约15U。也可以将每次治疗大于15U的剂量施用于患有面肌痉挛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，神经肌肉疾病是颈部肌张力障碍。例如，患有颈部肌张力障碍的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约15至300U。在另外的示例中，受试者在每次治疗施用于患有颈部肌张力障碍的患者时接受约35至250U、65至200U、85至175U、105至160U或125至145U。在实施例中，对胸锁乳突肌的剂量限制为100U或更少。也可以将每次治疗大于300U的剂量施用于患有颈部肌张力障碍的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，神经肌肉疾病是睑痉挛。例如，患有睑痉挛的受试者接受约1.25至2.5U的本文所述的药物组合物，所述药物组合物被注射到上眼睑的中间和外侧上睑板眼轮匝肌以及下眼睑的外侧上睑板眼轮匝肌中。在另外的示例中，受试者每个注射部位接受约1.5U、约1.6U、约1.7U、约1.8U、约1.9U、约2.0U、约2.1U、约2.2U、约2.3U、约2.4U、约2.5U或更多。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，神经肌肉疾病是斜视。患有斜视的受试者例如在本文所述药物组合物的每个注射部位接受约1.25至2.5U。在另外的示例中，受试者每个注射部位接受约1.5U、约1.6U、约1.7U、约1.8U、约1.9U、约2.0U、约2.1U、约2.2U、约2.3U、约2.4U、约2.5U或更多以实现治疗应答。在实施例中，较低剂量用于小偏差的治疗。在实施例中，小于20个棱柱直径的垂直肌和水平斜视可以以每个注射部位1.25至2.5U进行治疗。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，神经肌肉疾病是肌肉痉挛。例如，患有肌肉痉挛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约20至200U。在另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有肌肉痉挛的患者时接受约20至30U、20至40U、20至60U、20至80U、20至100U、20至125U、20至150U或20至175U。在仍另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有肌肉痉挛的患者时接受约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U、约50U、约55U、约60U、约65U、约70U、约75U、约80U、约85U、约90U、约95U、约100U、约105U、约110U、约115U、约120U、约125U、约130U、约135U、约140U、约145U、约150U、约155U、约160U、约165U、约170U、约175U、约180U、约185U、约190U、约195U或约200U。在实施例中，肱二头肌可以在4个注射部位中注射100U和200U。在实施例中，桡侧腕屈肌可以在1个注射部位中注射12.5U至50U。在实施例中，尺侧腕屈肌可以在1个注射部位中注射12.5U至50U。在实施例中，指深屈肌可以在一个注射部位中注射30U至50U。在实施例中，指浅屈肌可以在单个注射部位中注射30U至50U。也可以将每次治疗大于200U的剂量施用于患有肌肉痉挛症的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

疼痛的治疗

在另一个实施例中，用于治疗疼痛的方法包括以下步骤：以足以减轻疼痛的量向有需要的受试者施用本文所述的药物组合物。在另一个实施例中，患者患有肌筋膜疼痛、偏头痛性头痛、紧张性头痛、神经性疼痛、面部疼痛、下背部疼痛、窦性头痛、与颞下颌关节疾病相关的疼痛、与痉挛性或颈部肌张力障碍相关的疼痛、手术后伤口疼痛或神经痛。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，患者患有面部疼痛。例如，患有面部疼痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约4至40U。在另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有面部疼痛的患者时接受约4至10U、4至15U、4至20U、4至25U、4至30U、4至35U、7至15U、7至20U、7至25U、7至30U、7至35U或7至40U。在仍另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有面部疼痛的患者时接受约4U、约5U、约7.5U、约10U、约12.5U、约15U、约17.5U、约20.0U、约22.5U、约25.0U、约27.5U、30.0U、约32.5U、约35U、约37.5U或约40U。也可以将每次治疗大于40U的剂量施用于患有面部疼痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，患者患有肌筋膜疼痛。例如，患有肌筋膜疼痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约5至100U。在另外的示例中，所述受试者在每次治疗施用于患有肌筋膜疼痛的患者时接受约5至10U、5至20U、5至30U、5至40个单位、5至50个单位、5至60个单位、5至70个单位、5至80个单位、5至90U、10至20U、10至30U、10至50U、或10至60U、或10至70U、或10至80U、10至90U或10至100U。在另外的示例中、受试者每次治疗时接受约5U、约10U、约15U、约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U、约50U、约55U、约60U、约65U、约70U、约75U、约80U、约85U、约90U、约95U或约100U。也可以将每次治疗大于100U的剂量施用于患有肌筋膜疼痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，所述受试者患有下背部疼痛。例如，患有下背部疼痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约15至150U。在另外的示例中，受试者在每次治疗时接受约15至30U、15至50U、15至75U、15至100U、15至125U、15至150U、20至100U、20至150U或100至150U。在仍另外的示例中，受试者在每次治疗时接收约15U、约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U、约50U、约55U、约60U、约65U、约70U、约75U、约80U、约85U、约90U、约95U、约100U、约105U、约110U、约115U、约120U、约125U、约130U、约135U、约140U、约145U或约150U以减轻下背部疼痛。也可以将每次治疗大于150U的剂量施用于患有下背部疼痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，所述患者患有偏头痛性头痛，包含其中所述患者每月遭受4小时或更长时间、15天或更长时间的偏头痛性头痛。例如，患有偏头痛性头痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约0.5至200U。在另外的示例中，受试者在每次治疗时接受约5至190U、15至180U、25至170U、35至160U、45至150U、55至140U、65至130U、75至120U、85至110U或95至105U以减轻偏头痛性头痛。治疗疗程可以包括多种治疗。

例如，每个治疗部位约0.5U、约1.0U、约1.5U、约2.0U、约2.5U、约3.0U、约3.5U、约4.0U、约4.5U、约5.0U、约5.5U、约6.0U、约6.5U、约7.0U、约7.5U、约8.0U、约8.5U、约9.0U、约9.5U、约10.0U、约12U、约15U、约17U、约20U、约22U、约25U、约27U、约30U、约32U、约35U、约37U、约40U、约42U、约45U、约47U或约50U施用于患有偏头痛性头痛的患者。患者可以在多个部位处进行治疗，例如2个部位、3个部位、4个部位、5个部位、6个部位、7个部位、8个部位、9个部位、10个部位、11个部位、12个部位、13个部位、14个部位、15个部位、16个部位、17个部位、18个部位、19个部位、20个部位、21个部位、22个部位、23个部位、24个部位、25个部位、26个部位、27个部位、28个部位、29个部位、30个部位、31个部位、32个部位或更多个部位等。在实施例中，向患有偏头痛的患者跨皱眉肌(注射2次，每次5U)、降眉间肌(1次注射，5U)、前额(4次注射，每次5U)、颞肌(8次注射。每次5U)、枕肌(6次注射，每次5U)、颈椎旁肌(4次注射，每次5U)和斜方肌(6次注射，每次5U)以每0.1mL注射5U注射31次。在某些实施例中，除了可以在中线处注射的降眉间肌之外，所有肌肉都可以在两侧注射，其中注射部位的一半在头颈部的左侧，另一半在头颈部的右侧。也可以将每次治疗大于200U的剂量施用于患有偏头痛性头痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，患者患有窦性头痛。例如，患有窦性头痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约4至40U。在另外的示例中，所述受试者在每次治疗时接受约4至10U、4至15U、4至20U、4至25U、4至30U、4至35U、7至15U、7至20U、7至25U、7至30U、7至35U、或7至40U以减轻窦性头痛。在仍另外的示例中，所述受试者在每次治疗时接受约4U、约5U、约7.5U、约10U、约12.5U、约15U、约17.5U、约20.0U、约22.5U、约25.0U、约27.5U、30.0U、约32.5U、约35U、约37.5U或约40U。也可以将每次治疗大于40U的剂量施用于患有窦性头痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，患者患有紧张性头痛。例如，患有紧张性头痛的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约5至50U。在另外的示例中，每次治疗约5至10U、5至15U、5至20U、5至25U、5至30U、5至35U、5至40U、5至45U、10至20U、10至25U、10至30U、10至35U、10至40U或10至45U施用于患有紧张性头痛的患者。在又另外的示例中，受试者在每次施用治疗时接受约5U、约10U、约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U或约50U以减轻紧张性头痛。在实施例中，向患有紧张性头痛的患者跨皱眉肌(注射2次，每次5U)、降眉间肌(1次注射，5U)、前额(4次注射，每次5U)、颞肌(8次注射。每次5U)、枕肌(6次注射，每次5U)、颈椎旁肌(4次注射，每次5U)和斜方肌(6次注射，每次5U)以每0.1mL注射5U注射31次。在某些实施例中，除了可以在中线处注射的降眉间肌之外，所有肌肉都可以在两侧注射，其中注射部位的一半在头颈部的左侧，另一半在头颈部的右侧。也可以将每次治疗大于200U的剂量施用于患有紧张性头痛的患者以达到治疗应答。治疗疗程可以包括多种治疗。

在实施例中，患者患有与急性或复发性慢性鼻窦炎有关的窦性头痛或面部疼痛。例如，可以将本文所述的药物组合物施用于鼻粘膜或覆盖在鼻窦上的皮下结构，其中所述调配物的施用减轻了与急性复发性或慢性鼻窦炎有关的头痛和/或面部疼痛。在另外的实施例中，可以将本文所述的任何药物调配物施用于鼻粘膜或覆盖在鼻窦上的皮下结构，如，在选自由以下组成的组的鼻窦中的一个或多个上的皮下结构：筛骨；上颌骨；乳突额叶和蝶骨。在另一个实施例中，覆盖在鼻窦上的皮下结构位于选自由以下组成的组的区域中的一个或多个区域内：前额；颧骨；颞；耳廓后和嘴唇。在实施例中，施用每次5U的多次注射以治疗与急性或恢复性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛。

在另一个实施例中，通过将本文所述的任何药物调配物施用于患者的患病区域来治疗患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者。在另一个实施例中，将本文公开的药物调配物施用于支配鼻窦的三叉神经的突起。

患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者通常表现出包含鼻炎、鼻窦过度分泌和/或脓性鼻涕的症状。在一个实施例中，用本文所述的药物组合物治疗的患者在治疗之前表现出窦性过度分泌和化脓性鼻涕的症状。

本文考虑的实施例提供了用于治疗患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者的方法，其中所述受试者患有神经痛。在某些实施例中，神经痛是三叉神经痛。在另一个实施例中，神经痛：与感觉神经上的压力相关；与内在神经损伤、脱髓鞘疾病或遗传性病症相关；与代谢病症相关；与中枢神经血管疾病相关；或与创伤相关。在另一个实施例中，疼痛与拔牙或重建相关。

泌尿科病症的治疗

在实施例中，提供了用于治疗患有例如由于神经系统病状(NOAB)或特发性OAB(IOAB)所致的膀胱过度活动症(OAB)的患者的方法。例如，本文所述的药物调配物可以施用于膀胱或其附近，例如逼尿肌，其中调配物的施用减少了与膀胱过度活动症相关的急迫性尿失禁。在某些实施例中，剂量可以是例如200U或更高或更低等。例如，剂量可以是每次治疗约15U、约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U、约50U、约55U、约60U、约65U、约70U、约75U、约80U、约85U、约90U、约95U、约100U、约105U、约110U、约115U、约120U、约125U、约130U、约135U、约140U、约145U、约150U、约160U、约170U、约180U、约190U、约200U、约210U、约220、约230U、约240U或更多等。患者可以在多个部位处进行注射，例如2个部位、3个部位、4个部位、5个部位、6个部位、7个部位、8个部位、9个部位、10个部位、11个部位、12个部位、13个部位、14个部位、15个部位、16个部位、17个部位、18个部位、19个部位、20个部位、21个部位、22个部位、23个部位、24个部位、25个部位、26个部位、27个部位、28个部位、29个部位、30个部位、31个部位、32个部位、33个部位、34个部位、35个部位、36个部位、37个部位、38个部位或更多个部位等。在实施例中，患有OAB的患者以30次每次注射到逼尿肌中的1mL注射进行治疗，每次注射大约6.7U。

在实施例中，提供了用于治疗患有如由于神经系统病症引起的神经源性逼尿肌过度活动(NDO)的患者的方法。例如，药物调配物可以施用于膀胱或其附近，例如逼尿肌，其中调配物的施用减少了与膀胱过度活动症相关的急迫性尿失禁。在某些实施例中，剂量可以是例如200U或更高或更低等。例如，剂量可以是每次治疗约15U、约20U、约25U、约30U、约35U、约40U、约45U、约50U、约55U、约60U、约65U、约70U、约75U、约80U、约85U、约90U、约95U、约100U、约105U、约110U、约115U、约120U、约125U、约130U、约135U、约140U、约145U、约150U、约160U、约170U、约180U、约190U、约200U、约210U、约220、约230U、约240U或更多等。患者可以在多个部位处进行注射，例如2个部位、3个部位、4个部位、5个部位、6个部位、7个部位、8个部位、9个部位、10个部位、11个部位、12个部位、13个部位、14个部位、15个部位、16个部位、17个部位、18个部位、19个部位、20个部位、21个部位、22个部位、23个部位、24个部位、25个部位、26个部位、27个部位、28个部位、29个部位、30个部位、31个部位、32个部位或更多个部位等。在实施例中，患有NDO的患者以30次每次注射到逼尿肌中的1mL注射进行治疗，每次注射大约6.7U。

美容特征的治疗

在另一个实施例中，提供了用于美容修饰软组织特征的方法，所述方法包括以下步骤：以足以修饰所述特征的量向有需要的受试者施用至少一种本文所述的药物组合物。在另外的实施例中，药物组合物通过经皮或经粘膜注射在单一病灶或多个病灶处施用。

在实施例中，将药物调配物施用于受试者的面部或颈部。在另外的实施例中，将药物调配物以足以减少松弛症的量施用于受试者。例如，可以以足以减少眉毛之间和鼻梁上的垂直线的量在受试者的眉毛之间施用调配物。药物调配物还可以在受试者的一只或两只眼睛附近以足以减少眼睛角部的线条的量施用。在实施例中，可以局部注射组合物以使皮肤光滑。在另一个实施例中，药物调配物还可以足以减少所述前额水平线的量施用于受试者的前额。在又另一个实施例中，将药物调配物以足以减少颈部肌肉带的量施用于受试者的颈部。在实施例中，将药物组合物施加于咬肌以使肌肉松弛和/或使咬肌质量降低。

在另外的实施例中，患者患有面部皱纹。例如，患有面部皱纹的受试者在药物调配物的每次治疗时可以接受约1至100U。在另外的示例中，受试者每次治疗时接受约1至10U、1至20U、1至30U、1至40U、1至50U、1至60U、1至70U、1至80U、1至90U、5至20U、5至30U、5至40U、5至50U、5至60U、5至70U、5至80U、5至90U或5至100U。在仍另外的示例中，受试者每次治疗时接受约1U、约10U、约20U、约30U、约40U、约50U、约60U、约70U、约80U、约90U或约100U。也可以将每次治疗大于100U的剂量施用于患有炎症或炎性病症的患者以达到治疗应答。

炎症的治疗

在另一个实施例中，用于治疗炎症的方法包括以下步骤：以足以减轻炎症的量向有需要的受试者施用本文所述的药物组合物。在某些实施例中，将药物调配物施用于患者而不会产生肌肉无力。在实施例中，将药物调配物施用于患有炎性病状的患者。在某些实施例中，炎性病状是神经源性炎症。在另一个实施例中，所述受试者患有类风湿性关节炎或胃肠炎性疾病。

在另外的实施例中，患者患有炎性病症。例如，患有炎性病症的受试者在本文所述的药物组合物的每次治疗时接受约1至100U。在另外的示例中，受试者每次治疗时接受约1至10U、1至20U、1至30U、1至40U、1至50U、1至60U、1至70U、1至80U、1至90U、5至20U、5至30U、5至40U、5至50U、5至60U、5至70U、5至80U、5至90U或5至100U。在仍另外的示例中，受试者每次治疗时接受约1U、约10U、约20U、约30U、约40U、约50U、约60U、约70U、约80U、约90U或约100U。也可以将每次治疗大于100U的剂量施用于患有炎症或炎性病症的患者以达到治疗应答。

皮肤病状的治疗

用于治疗皮肤病症的方法可以具有将肉毒神经毒素局部施用到患者的皮肤病症的位置，如患者的面部、手或脚的步骤。可以局部施用的神经毒素的量为约10

肉毒毒素的施用可以在皮肤的多个部位进行，其中相邻注射部位分开约0.1至10cm、或约0.5至约5cm，例如约1.5至约3cm。毒素可以是肉毒毒素A、B、C、D、E、F、G或花叶毒素中的任何毒素。施用量可以为0.1至1000U、或约1至约40U、或约5至约10U，这取决于制造规格、毒素的种类和施用方式。这些用于维持所需变化的施用的重复时间范围基本上根据注射位置、要调节的病状和患者的状况而变化。因此，重复时间可以在约1周至约50周之间变化，然而，常见范围是约4至约25周或甚至约12周至约16周。

施用部位(例如注射部位)之间的距离可以在约1mm至约10cm之间变化，合适地约5mm至约5cm，更通常地约1cm至约3cm。因此，例如肉毒杆菌A可以通过约0.1至约10U之间的皮内注射以约0.5至约10cm的间隔适当地施用。

在另一个实施例中，提供了用于治疗皮肤病症的方法，所述方法包括以下步骤：以足以减少皮脂或粘液分泌的量向有需要的受试者施用本文所述的药物组合物。在另外的实施例中，将本文所述的药物组合物施用于患者而不会产生肌肉无力。在某些实施例中，将本文所述的药物组合物注射到眼睑或结膜的一个或多个部位中。在另一个实施例中，将调配物施用于体表。

在另一个实施例中，以足以减少皮肤细菌或真菌生长(包含但不限于葡萄球菌(Staphylococcus)；链球菌(Streptococcus)和莫拉氏菌(Moraxella))的量施用药物调配物。例如，将本文所述的药物组合物施用于选自由以下组成的组的区域：眼睑；头皮；脚；腹股沟和腋下以减少皮肤感染。

抑郁症的治疗

在另一个实施例中，提供了一种用于治疗抑郁症的方法。抑郁症是根据精神病学手册例如由美国华盛顿特区的美国精神病学协会(American Psychiatric Association,Washington,D.C.)(1994)出版的《精神疾病诊断和统计手册(Diagnostic andStatistical Manual of Mental Disorders)》第4版(DSM-IV)中给出的标准进行定义和单独诊断的抑郁症的公认形式的总称。在DSM-IV中，抑郁性病症在情绪性病症下进行分类并且分为三种类型：重度抑郁性病症、精神抑郁性病症和未另外指定的抑郁性病症(或“非典型性”)。一般而言，无论抑郁综合症是忧郁症、非典型性疾病还是二者的混合体，只要持续至少两个星期情绪低落或者对所有活动失去兴趣或愉悦，就可以诊断为重度抑郁症。

抑郁症通常与精神运动异常如运动活动增加或减慢有关。许多沮丧的人也可以通过其“沮丧的表情”来识别，其中面部表情的肌肉呈现出苦恼或悲伤的表情。例如，眉头可以收起，眉毛的内端抬高，并且嘴角降低，使得面部表情可以被识别为是悲伤和/或焦虑的。皱眉涉及四个主要的肌肉群：额、降眉间肌、皱眉肌和眼轮匝肌(Weider等人《皮肤外科(DermSurg.)》24:1172-1174,1998)。皱眉肌也被称为“凝眉”肌肉。

通过施用本文所述的任何药物组合物治疗被诊断患有抑郁症或经历抑郁发作的受试者。在另外的实施例中，本文公开的药物调配物通过皮下注射施用于患者。示例10描述了通过在包括肉毒毒素、海藻糖、泊洛沙姆表面活性剂和蛋氨酸的组合物中施用治疗有效量的肉毒毒素来治疗患有抑郁症形式的人。将所述组合物施用于涉及皱眉或凝眉的面部肌肉。神经毒素影响受试者皱眉和/或凝眉的能力，从而治疗抑郁症。通常，可以将治疗有效量的肉毒毒素A注射入额、降眉间肌、皱眉肌和眼轮匝肌或降口角肌(三角肌)中的一种或多种。

在另一个实施例中，所述方法包括将治疗有效量的如本文所述的组合物中的梭菌毒素活性成分施用于涉及皱眉、凝眉或悲伤表情的面部肌肉。梭菌毒素活性成分引起面部肌肉部分或完全瘫痪，从而影响受试者皱眉和/或凝眉或显得悲伤的能力，从而治疗抑郁症。例如，可以将治疗有效量的包括梭菌毒素活性成分肉毒毒素以及表面活性剂、抗氧化剂和任选的张度调节剂的组合物注射到眼轮匝肌、额、降眉间肌、皱眉肌或降口角肌(三角肌)中的一种或多种。在具体示例中，将包括肉毒毒素A的组合物注射到眉间上方的降眉间肌中。其它施用点和范例公开于例如美国专利第7,758,872号中，所述美国专利通过引用并入本文。

在方法的其它实施例中，考虑患有单发或复发的中度至重度严重抑郁性病症(MDD)的成年受试者，其中MDD诊断基于DSM-IV-TR标准。在一个实施例中，设想了单一治疗，并且在其它实施例中，设想了单一的重复治疗，其中所述治疗以2-6、2-4或3-6个月的间隔重复。梭菌毒素活性成分的剂量为例如30U或50U，其中在一些实施例中，所述剂量分为多次注射。在一个实施例中，多次注射是6次，并且在另一实施例中是8次。在一个实施例中，将30U分成6次注射到前额的眉毛区域(肌腱和皱纹肌)。在一个实施例中，将50U分成8次注射到前额的眉毛区域(肌腱和皱纹肌)。

有效的治疗例如通过本领域已知的主要功效量度来表示，如称为蒙哥马利-阿斯伯格抑郁评定量表(Montgomery-Asberg Depression Rating scale)的临床评估。其它功效量度：临床CGI-S评分(临床整体变化印象评分(Clinical Global Impression ofChange score))、临床HAM-D17总评分(汉密尔顿抑郁评定量表(Hamilton Rating Scalefor Depression))。

心律失常的治疗

在另一个实施例中，提供了一种治疗心律失常的方法。心律失常是由心脏电传导系统正常功能的破坏引起的。通常，心脏的腔(心房和心室)以协调的方式收缩。收缩信号是从窦房结开始的电脉冲，并且脉冲通过心房传导并刺激它们收缩。脉冲穿过房室结，然后行进到心室并刺激它们收缩。问题可能在沿传导系统的任何地方发生，导致各种心律失常。心肌本身也可能出现问题，从而导致心肌对收缩信号的反应不同，还引起心律失常或独立于正常的传导系统使心室收缩。

心律失常包含心动过速、心动过缓和扰乱节律的真正心律失常。如果心律失常导致严重的心脏泵浦功能下降，则其被归类为致命性心律失常。当泵浦功能严重下降超过几秒钟时，血液循环将基本停止，并且器官损害(如脑部损害)可能在几分钟之内发生。致死性心律失常包含室性纤颤，还包含快速持续的室性心动过速或无脉搏动，并且可以包含其它心律失常的持续发作。心律失常的另外的类型包含房颤或扑动、多灶性房性心动过速、阵发性室上性心动过速、Wolff-Parkinson-White综合征、窦性心动过速、窦性心动过缓、与心脏传导阻滞相关的心动过缓、患病窦性综合征和异位心跳。

因此，提供了一种治疗心律失常的方法，所述方法包括以下步骤：施用本文所述的组合物，所述组合物包括治疗有效量的梭菌毒素活性成分，所述组合物局部施用于患有心律失常或有心律失常的风险的患者的心脏。可治疗的特定心律失常包含心动过缓和心动过速。在一个实施例中，所述组合物是局部施用的，这是指直接施用到要治疗的心肌上、之中或附近。局部施用包含所述组合物的心包内、心内心脏导管插入术和直接心肌注射施用途径。

示例4描述了通过在包括肉毒毒素、海藻糖、泊洛沙姆表面活性剂和NAC的组合物中施用治疗有效量的肉毒毒素来治疗经历心脏手术的人。在一个实施例中，通过注射到心脏的一个或多个心外膜脂肪垫中来施用组合物。在一个示例性实施例中，所施用的剂量为每个心外膜脂肪垫25U，总剂量为125U。在另一个示例性实施例中，所施用的剂量为每个心外膜脂肪垫50U，总剂量为250U。

有效的治疗例如由主要功效终点指示，例如，通过ECG在治疗后持续4周或4周时测得的心房颤动(AF)的发生率指示。其它功效终点包含住院时间、在ICU的住院时间、再住院率、抗凝药物的使用、术后房颤的介入程序如消融的需要、起搏器植入、电或药理心脏复律。

示例

以下示例说明了本发明的组合物和方法的实施例和方面，并且不旨在限制其范围。

示例1

含有肉毒毒素成分的透明质酸(HA)的制造和测试

如下制备具有不同分子量和不同浓度的固有粘度透明质酸钠的肉毒毒素-透明质酸调配物。将具有各种分子量和固有粘度的非交联的透明质酸钠粉末溶解在20mM组氨酸(pH 6)、8％海藻糖、4％泊洛沙姆188和0.2％蛋氨酸的溶液中。上表1总结了组合物中的组分和每种组分的量。使用安东·帕尔流变仪在0.01/s至100/s之间变化的剪切速率下测量每种组合物的粘度，其中值在25℃以及0.1/秒的剪切速率下报告。

将包括A型肉毒毒素(BoNT/A)的溶液混合到表1的每种透明质酸组合物中，以形成肉毒毒素和具有各种浓度的肉毒毒素的线性非交联的透明质酸的组合物。上表2总结了所制备的组合物。制备了几种没有非交联的透明质酸的组合物以用于比较对照。将所述组合物在2-8℃下储存约48小时，以使夹带的空气消散，然后再在体内给药。

示例2

包括非交联透明质酸的组合物中肉毒毒素的持续时间延长

使用大鼠DAS(数字外展评分)测定体内测试示例1中制备的肉毒毒素-透明质酸组合物和比较对照组合物，以评估作用的持续时间。使用25G针将测试或对照组合物肌肉注射(50μL)到大鼠的胫骨前部中。通过DAS应答使用0到4的评分来评估大鼠麻痹，其中4代表最大麻痹。结果示出在图1A-1C中。

示例3

在非交联的透明质酸存在下肉毒毒素的持续时间延长

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示例4

用于治疗心律失常的方法

提供了包括在20mM组氨酸缓冲液(pH 5.5)中的A型肉毒毒素(BoNT/A，50U)、1.2wt％HA或其盐(重均分子量为约1.58MDa)、2wt％海藻糖、4wt％泊洛沙姆P188、0.3wt％NAC的调配物。

一名白人男子正在接受心脏手术。作为外科手术的一部分，将提供总剂量为75U肉毒毒素的一定量的重构组合物平均分配，以通过注射到心脏的三个心外膜脂肪垫中进行施用。医务人员在手术期间或手术后均未报告心律失常。

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