一种细菌多联抗原检测试纸条及其应用

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体涉及一种细菌多联抗原检测试纸条及其应用。

背景技术

创面感染是临床上常见的并发症之一，全身症状可表现为发热、寒战，创面局部可表现为红、肿、热、痛，创面渗出、流脓等。创面感染之后的处理措施主要有:根据患者具体病情，全身或(和)局部应用抗生素，控制感染；促进组织愈合。然而，临床上往往遇到一些严重感染，无法确定其感染细菌种类，治疗上难以对症下药。

目前对创面感染的诊断，主要是通过细菌培养方法来确定感染细菌种类，但细菌培养时间长，容易延误病情；没有细菌培养的条件下，通常主要通过医生的经验判断，然而，医生的经验判断存在不客观、也不准确的问题。此外，现有细菌抗原检测大多仅仅能够检测一种细菌，其无法实现多种细菌的同时检测。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细菌多联抗原检测试纸条及其应用，该试纸条能够对多种微生物同时进行检测，检测方法方便快捷。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供一种细菌多联抗原检测试纸条，所述试纸条包括背板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫和胶体金垫，所述硝酸纤维素膜上间隔设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和质检线；所述第一检测线上包被有抗金黄色葡萄球菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第二检测线上包被有抗铜绿假单胞菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第三检测线上包被有抗鲍曼不动杆菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第四检测线上包被有抗肺炎克雷伯氏菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第五检测线上包被有抗大肠埃希氏杆菌表面蛋白的第一单克隆抗体。

优选地，所述胶体金垫包括胶体金标记的抗金黄色葡萄球菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗铜绿假单胞菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗鲍曼不动杆菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗肺炎克雷伯氏菌表面蛋白的第二单克隆抗体和抗大肠埃希氏杆菌表面蛋白的第二单克隆抗体。

优选地，所述质检线上包被有羊抗鼠二抗。

优选地，所述金黄色葡萄球菌表面蛋白包括FnbpA蛋白、CLfA蛋白和Ebps蛋白等。

优选地，所述铜绿假单胞菌表面蛋白包括PpiA蛋白、PtsP蛋白、OprP蛋白、CAZ10蛋白、HmuU_2蛋白、PcaK蛋白、CarAd蛋白、RecG蛋白、YjiR蛋白、LigD蛋白、KinB蛋白、RtcA蛋白和PscF蛋白等。

优选地，所述鲍曼不动杆菌表面蛋白包括SmpA蛋白、Omp22蛋白、NlpA蛋白和A1S_1969蛋白等。

优选地，所述肺炎克雷伯氏菌表面蛋白包括酸性磷酸酶蛋白、K3蛋白、K50蛋白、K54蛋白和K57蛋白等。

优选地，所述大肠埃希氏杆菌表面蛋白包括K88蛋白、K99蛋白和987P蛋白等。

本发明第二方面提供一种上述试纸条在创面感染病原微生物检测中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：

本发明试纸条能够对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、抗鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏杆菌同时进行检测，5分钟左右检测完成，检测方法方便快捷。

本发明检测试纸条不受场地限制，既可以在医院各科室使用，也可以病人居家使用，使用范围广；此外，本发明试纸条适应的检测样本范围广，比如，创面脓液、坏死组织、血液、痰液和尿液等均可作为检测样本；另外，在检测过程中无需特殊的仪器设备，肉眼即可判断，检测成本较低。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。

需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。

本发明实施例提供一种细菌多联抗原检测试纸条，该试纸条包括背板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫和胶体金垫，所述硝酸纤维素膜上间隔设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和质检线；所述第一检测线上包被有抗金黄色葡萄球菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第二检测线上包被有抗铜绿假单胞菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第三检测线上包被有抗鲍曼不动杆菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第四检测线上包被有抗肺炎克雷伯氏菌表面蛋白的第一单克隆抗体；所述第五检测线上包被有抗大肠埃希氏杆菌表面蛋白的第一单克隆抗体。

在本发明试纸条中通过在硝酸纤维素膜上设置5条检测线，在5条检测线上分别包被有不同细菌的结合单克隆抗体，能够实现与抗原的结合，进而当样品中含有对应抗原时，则对应检测线显色；若显色，则代表其对应的抗原阳性，未显色为阴性。

进一步地，所述胶体金垫包括胶体金标记的抗金黄色葡萄球菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗铜绿假单胞菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗鲍曼不动杆菌表面蛋白的第二单克隆抗体、抗肺炎克雷伯氏菌表面蛋白的第二单克隆抗体和抗大肠埃希氏杆菌表面蛋白的第二单克隆抗体。

通过在胶体金垫中吸附胶体金标记的各抗原抗体，能够实现胶体金标记的抗体与抗原结合，当移动到检测线时，形成抗体-抗原-胶体金标记抗体夹心结构并进行显色。此外，本发明中同一微生物对应的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体为同一微生物两种不同表面蛋白的单克隆抗体；使用2种不同抗体的目的是，尽量减少抗原结合位点的占用，当抗原移动到检测线时，就能与检测线上固定的单克隆抗体结合，进而显色。

在一实施方式中，质检线上包被有羊抗鼠二抗，该羊抗鼠二抗能够与5中不同胶体金标记结合，当添加样品后，胶体金标记的抗体在吸水垫的作用下移动，当移动到C线时，能够与羊抗鼠二抗结合，实现C线显色；C线显色说明操作过程正确和检测试纸条正常。

在一实施方式中，金黄色葡萄球菌表面蛋白包括FnbpA蛋白、CLfA蛋白和Ebps蛋白等。

在一实施方式中，铜绿假单胞菌表面蛋白包括PpiA蛋白、PtsP蛋白、OprP蛋白、CAZ10蛋白、HmuU_2蛋白、PcaK蛋白、CarAd蛋白、RecG蛋白、YjiR蛋白、LigD蛋白、KinB蛋白、RtcA蛋白和PscF蛋白等。

在一实施方式中，鲍曼不动杆菌表面蛋白包括SmpA蛋白、Omp22蛋白、NlpA蛋白和A1S_1969蛋白等。

在一实施方式中，肺炎克雷伯氏菌表面蛋白包括酸性磷酸酶蛋白、K3蛋白、K50蛋白、K54蛋白和K57蛋白等。

在一实施方式中，大肠埃希氏杆菌表面蛋白包括K88蛋白、K99蛋白和987P蛋白等。

本发明中第一单克隆抗体和第二单克隆抗体可以为上述菌株对应的任一表面蛋白的单克隆抗体，相当于各菌株表面蛋白为抗原。

上述各细菌表面蛋白的抗体均可以通过市售购买得到，也可让其他机构进行生产制备，也可以通过如下方法制得：

选取小鼠动物，加入弗氏佐剂，在pubmed上检索上述细菌表面蛋白信息，得到其表面蛋白序列，合成上述表面蛋白作为抗原皮下多点注射，抽血进行效价测定，分离并纯化高价抗体，检测每种抗体的特异性、排出交叉反应，得到相应抗体。

本发明另一实施例通过了一种上述试纸条在创面感染病原微生物检测中的应用。

上述试纸条能够对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、抗鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏杆菌同时进行检测，5分钟左右检测完成，检测方法方便快捷。

以下通过具体实施例对本发明技术方案作进一步详细说明。

实施例1

本实施例为一种细菌多联抗原检测试纸条，该试纸条包括背板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫和胶体金垫；

该硝酸纤维素膜上间隔设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和质检线；第一检测线上包被有抗金黄色葡萄球菌表面Protein A蛋白的单克隆抗体；第二检测线上包被有抗铜绿假单胞菌表面PpiA蛋白的单克隆抗体；第三检测线上包被有抗鲍曼不动杆菌表面SmpA蛋白的单克隆抗体；第四检测线上包被有抗肺炎克雷伯氏菌表面酸性磷酸酶蛋白的单克隆抗体；第五检测线上包被有抗大肠埃希氏杆菌表面K88蛋白的单克隆抗体；

该胶体金垫包括胶体金标记的抗金黄色葡萄球菌表面FnbpA蛋白的单克隆抗体、抗铜绿假单胞菌表面PtsP蛋白的单克隆抗体、抗鲍曼不动杆菌表面Omp22蛋白的单克隆抗体、抗肺炎克雷伯氏菌表面K3蛋白的单克隆抗体和抗大肠埃希氏杆菌表面K99蛋白的单克隆抗体；

质检线上包被有羊抗鼠二抗。

实施例2

本实施例为一种细菌多联抗原检测试纸条，该试纸条包括背板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫和胶体金垫；

该硝酸纤维素膜上间隔设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和质检线；第一检测线上包被有抗金黄色葡萄球菌表面Ebps蛋白的单克隆抗体；第二检测线上包被有抗铜绿假单胞菌表面OprP蛋白的单克隆抗体；第三检测线上包被有抗鲍曼不动杆菌表面NlpA蛋白的单克隆抗体；第四检测线上包被有抗肺炎克雷伯氏菌表面K50蛋白的单克隆抗体；第五检测线上包被有抗大肠埃希氏杆菌表面K88蛋白的单克隆抗体；

该胶体金垫包括胶体金标记的抗金黄色葡萄球菌表面CLfA蛋白的单克隆抗体、抗铜绿假单胞菌表面CAZ10蛋白的单克隆抗体、抗鲍曼不动杆菌表面A1S_1969蛋白的单克隆抗体、抗肺炎克雷伯氏菌表面K54蛋白的单克隆抗体和抗大肠埃希氏杆菌表面987P蛋白的单克隆抗体；

质检线上包被有羊抗鼠二抗。

实施例3

本实施例为一种细菌多联抗原检测试纸条，该试纸条包括背板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫和胶体金垫；

该硝酸纤维素膜上间隔设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和质检线；第一检测线上包被有抗金黄色葡萄球菌表面Ebps蛋白的单克隆抗体；第二检测线上包被有抗铜绿假单胞菌表面HmuU_2蛋白的单克隆抗体；第三检测线上包被有抗鲍曼不动杆菌表面NlpA蛋白的单克隆抗体；第四检测线上包被有抗肺炎克雷伯氏菌表面K50蛋白的单克隆抗体；第五检测线上包被有抗大肠埃希氏杆菌表面K88蛋白的单克隆抗体；

该胶体金垫包括胶体金标记的抗金黄色葡萄球菌表面CLfA蛋白的单克隆抗体、抗铜绿假单胞菌表面PcaK蛋白的单克隆抗体、抗鲍曼不动杆菌表面A1S_1969蛋白的单克隆抗体、抗肺炎克雷伯氏菌表面K57蛋白的单克隆抗体和抗大肠埃希氏杆菌表面987P蛋白的单克隆抗体；

质检线上包被有羊抗鼠二抗。

本发明试纸条能够对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、抗鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏杆菌同时进行检测，5分钟左右检测完成，检测方法方便快捷。

本发明检测试纸条不受场地限制，既可以在医院各科室使用，也可以病人居家使用，使用范围广；此外，本发明试纸条适应的检测样本范围广，比如，创面脓液、坏死组织、血液、痰液和尿液等均可作为检测样本；另外，在检测过程中无需特殊的仪器设备，肉眼即可判断，检测成本较低。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。