保护免受环境污染导致的损害的基于透明质酸的眼科组合物

本发明涉及一种眼科组合物的用途，所述眼科组合物由透明质酸或其生理学上可接受的盐(优选钠盐)组成，与眼科用赋形剂混合，以保护眼睛免受由环境污染，特别是由过度暴露在蓝光下导致的损害。

眼睛是娇弱器官。其湿润表面广泛暴露于周围环境，因此它比身体的其他部分更易受到环境污染的影响。眼睛对环境污染的反应可以为从轻度刺激到可能导致慢性疼痛的重度刺激。此外，隐形眼镜的使用使眼睛对此类影响更加敏感。

空气污染(室外污染)主要是来自汽车及其他车辆的废气造成的。常见于大都市中的空气污染物包括一氧化碳、二氧化氮、二氧化硫、砷、石棉、苯、铅、氯氟烃、颗粒物和二恶英。眼睛暴露于此类污染物中超过4个小时将可能引起强烈刺激。

更多暴露于这些眼部刺激的受试者是那些室外工作人员(例如，交警、建筑工人、收费员等)

光污染(室内污染)是另一种形式的环境污染。

太阳光(白光)被分为若干种成分——红光、橙光、黄光、绿光、蓝光、靛青光和紫光——其各自以不同的能量和波长进行表征。红光射线具有较长波长和较少能量，而蓝光射线具有较短波长和较多能量。

蓝光的最大来源是太阳光。其他来源包括荧光灯、紧凑型荧光(CFL)灯泡、LED灯、平面屏幕LED电视、电脑显示器、智能手机和平板电脑屏幕。

角膜暴露于其中的几乎所有蓝光均能到达视网膜。这种光影响视力并可能使眼睛过早衰老。来自电脑屏幕和数字设备的蓝光可能导致眼疲劳、眼部干涩、刺激和聚焦困难。在电脑、智能手机和平板电脑显示器前花费太长时间可能会导致眼睛问题。

更多暴露于由光污染导致的损害的人群是那些连续数小时待在具有来自人造光的光污染的密闭环境中和/或使用发射蓝光的电子设备和显示屏幕的人。

根据光的波长，眼部损害是不同的。

紫外线以及IR光主要由眼睛的角膜和前房吸附。大量暴露于UV或IR光导致对角膜细胞的损害。

相反，蓝光更深入地穿透到眼睛中，并导致对视网膜的不可逆的氧依赖性损害。

因此，存在保护有需要的受试者免受由环境污染(即大气以及光污染)导致的对眼睛的损害的需求。

由于其基于透明质酸的组成，

申请人现已发现透明质酸及其盐对由环境污染导致的损害也具有保护作用。

透明质酸及其盐，主要是钠盐，广泛用于眼科用制剂中。

在其已知用途中，也可以引用其在抗紫外线的保护作用。Pauloin等人(《分子视觉(Molecular Vision)》，2009，15：577-583)公开了高分子量透明质酸(1500kDa)能够保护角膜上皮细胞免受由紫外线B(UVB)光诱导的细胞毒性作用。随后Li等人(《环境与分子诱变(Environmental and Molecular Mutagenesis)》，2013，54：429-449)证实，与低分子量透明质酸(100kDa)相比，该保护作用对于高分子量透明质酸(1000kDa)有效，而低分子量透明质酸结果为无效。

据申请人所知，透明质酸或其盐用于保护免受环境污染，特别是过度暴露在蓝光下导致的损害的用途是未知的。

一直以来，以商品名

因此，本发明的对象是一种由透明质酸钠或其生理学上可接受的盐(优选钠盐)，组成的眼科用组合物，其与眼科用赋形剂混合以用于保护眼睛免受由环境污染，特别是免受由过度暴露在蓝光下导致的损害。

该眼科用组合物可以是适于施用于眼睛上的任何制剂。优选地，眼科用组合物是液体形式，例如是滴眼液的形式。

透明质酸优选为高分子量透明质酸，特别是具有700kDa至1500kDa分子量的透明质酸。

分子量为900kDa至1000kDa的透明质酸是特别优选的。

透明质酸盐，特别是透明质酸钠的使用是更优选的。

透明质酸或其生理学上可接受的盐的量(以浓度表示)通常为0.1％w/v至0.5％w/v，更优选为0.2％w/v至0.4％w/v，仍更优选为0.4％w/v。

通常，眼科组合物含有一种或多种适于制备眼科用品的赋形剂。

溶剂(如水)、等渗剂(如氯化钠)、缓冲剂(如硼酸/硼酸钠，用于将pH保持在生理值(pH约7.2))以及可选地防腐剂和/或螯合剂是特别适合的。

所有可用的赋形剂常用于眼科制剂中，并且为本领域技术人员所熟知。

赋形剂的选择取决于所选的眼科组合物的类型，并且在本领域技术人员的常识范围内。

由本申请人以商品名

本测试的目的是评估对经蓝光辐照后的测试产品的体外保护活性。为此，对其在重建的眼部上皮细胞上预防自由基活性氧(ROS)的形成的功效进行了测试。

使用以下材料和方法。

组织

重建的角膜上皮细胞立体组织(RhCE)是从正常人角质细胞获得的非角质化上皮细胞。它表示具有逐渐分层但未角质化的细胞的角膜上皮细胞模型。

辐照条件

使用辐照度为4.7mW/cm

样品和DCFDA的制备

阴性对照为未处理的组织。阳性对照为具有已知抗氧化作用的物质。样品如下进行测试：将2′，7′-二氯荧光素乙酰乙酸(DCFDA)溶解在浓度为50mM的二甲基亚砜(DMSO)中，然后在合适的缓冲液中稀释至最终浓度为250μM。

ROS测定

将RhCE组织在室温下平衡约15分钟，然后转移至生长培养基中并孵育(37℃，5％CO

图1描绘了对蓝光辐照后ROS产生的评估。

BL＝用不同剂量蓝光辐照的组织

TS＝用测试产品处理的组织

PC＝用阳性对照处理的组织

荧光与组织产生的ROS的量成正比。百分比是基于测得的荧光值计算的，并且它们表示与阴性对照(未处理组织)相比的ROS的百分比。该值表示为平均值±标准偏差。用学生t检验(Student’s t-test)进行统计数据处理。p＜0.05的值被认为是有意义的。

在用测试产品处理的组织中，辐照蓝光后，与未处理组织相比，观察到ROS量的显著减少。因此，测试产品显示出对抗蓝光的体外保护活性。

两组受试者，每组50名，男女均有，并且年龄为18至50岁之间：

-50名工作在室外环境的受试者(交警、建筑工人、收费员等)

-50名连续数小时待在室内环境中并遭受来自人造光的光污染和使用发射蓝光的电子设备和显示屏幕的受试者。

眼部不适的评估由接受OSDI(眼表疾病指数)问卷调查的受试者的回答进行量化。该问卷调查使用0至100的分数对眼睛干涩情况进行评估，并将其分类为正常、中度或重度。

该问卷调查由12个问题组成，研究的受试者被要求用0至4的分数对每个问题进行回答。

问题

在过去的一周里，您是否经历了以下情况：

1.眼睛对光敏感

2.眼睛有砂砾感

3.眼睛感到疼痛或酸痛

4.视力模糊

5.视力低下

在过去的一周里，您的眼睛是否限制了您进行以下行为：

6.阅读

7.夜间行驶

8.用电脑工作

9.看电视

在过去的一周里，您的眼睛在以下情况下是否感到不适：

10.有风的环境

11.待在非常干燥的地方

12.待在空调区

评分系统

对于每个问题的回答可以是：从不、偶尔、一半时间、大多数时间、一直。

每一种回答分配有如下分数：

0＝从不

1＝偶尔

2＝一半时间

3＝大多数时间

4＝一直

根据下式计算总分：

OSDI值

0-12＝正常眼表

13-22＝轻度干眼症

23-32＝中度干眼症

33-100＝重度干眼症

临床监测研究

受试者向每只眼睛中滴入1滴或2滴

研究的每名受试者在T0(开始治疗之前)和治疗7天之后(T7)填写OSDI问卷调查表。

每名受试者对OSDI问卷调查表的回答在图2(受试者1-50——室外组)和图3(受试者51-100——室内组)中报告。

结果的统计分析和统计方法

对变量的描述性分析通过中位数进行，并且验证目标的操作由非参数检验，特别是用于配对数据的威尔科克森(Wilconox)检验和用于独立数据的曼-惠特尼(Mann-Whitney)检验，通过设置0.05的显著性水平来进行。

前三个图表(如图4中所示)示出OSDI指数的变化对于研究中的所有三组(所有受试者、室内受试者以及室外受试者)均具有统计学意义。这意味着室内受试者和室外受试者均表现出眼部不适的改善。

第四和第五图表(如图5中所示)示出通过OSDI问卷调查表的评估，眼部不适的改善在两组中是相同的。