基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用

技术领域

本发明涉及生物物种鉴定和PCR检测技术领域，具体涉及一种基因

背景技术

鸡枞（

目前鸡枞产品种类丰富，尤其随着深加工产品的开发，各种产品层出不穷，随之而来各种掺伪造假现象逐年增多。由于产品的深加工使得依赖传统的形态学检验无法应用，随着分子生物学技术的快速发展，分子方法快速、准确、特异性强的优点在鸡枞及其深加工产品检验具有良好的应用前景。

内标准基因作为一种表达稳定、物种特异性强的基因，在食品掺假的检测中得到了广泛应用。目前，对于内标准基因的开发与研究主要集中在农作物上，比如小麦、油菜、大豆、棉花、玉米、水稻等，其内标准基因已被广泛应用于成分来源的鉴别和分析中。而鸡枞的内标准基因尚未见到相关报道，为了建立一种能够快速、准确鉴定鸡枞的方法，有必要对鸡枞的内标准基因进行开发。

发明内容

本发明目的是提供一种基因

本发明还提供一种用于检测鸡枞源性成分的试剂盒，以基因

本发明确定的用于检测鸡枞源性成分的基因

附图说明

图1为

图2为鸡枞

图3为鸡枞

图4为鸡枞

图5为鸡枞

图6为引物

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

黄牛肝，北风菌，黑牛肝，奶浆菌，青头菌，干巴菌，鸡油菌，松茸，红见手，白牛肝，大红菇，黄赖头，鸡枞，老人头，珊瑚菌，香菇，茶树菇，杏鲍菇，口蘑购买于云南当地野生菌市场。

实施例1：鸡枞源通用内标基因

在NCBI的Nucleotide数据库中，搜索鸡枞的基因信息，通过BLAST比对分析，最终筛选出用于编码糖苷酶的

实施例2 ：鸡枞源性成分通用内标基因的验证

1、针对实施例1筛选的内部基因

表1

2、鸡枞内标准基因引物物种特异性的定性验证

以黄牛肝、北风菌、黑牛肝、奶浆菌、青头菌、干巴菌、鸡油菌、松茸、红见手、白牛肝菌、大红菇菌、黄赖头、鸡枞、老人头、珊瑚菌、香菇、茶树菇、杏鲍菇、口蘑的基因组DNA作为模板，使用引物

结果表明，鸡枞基因组DNA扩增产物位于334bp，成功扩增

表2 定性PCR反应体系

3、鸡枞内标准基因定性检测体系灵敏度验证

为了检测鸡枞

结果表明，鸡枞DNA模板浓度为128ng/μL、12.8ng/μL和1.28ng/μL时，电泳图上出现清晰特异性条带，且亮度逐渐减弱，而当模板浓度降至0.128ng/μL时，未检测到扩增产物，因此，定性PCR的检出限为1.28ng/μL，如图3所示。

4、鸡枞内标准基因定量检测体系灵敏度验证

为了检测鸡枞

表3 特异性引物验证的SYBR Green I 实时荧光定量PCR反应体系

定量PCR扩增曲线及标准曲线见图4、5，由图4可知，当模板浓度为200pg/μL时，仍能发生特异性扩增，Ct值明显高于阴性对照，这说明SYBR Green I定量PCR的最低检出限在200pg/μL。根据图5，可获得标准曲线公式：y=- 2.949x+ 28.762，相关系数R

5、对鸡枞深加工样品的PCR检测

为验证内标准基因以及建立的定量PCR检测技术在实际样品检测过程中的准确性，对市场销售的2种鸡枞与非鸡枞深加工制品（鸡枞油豆豉、香菇酱）进行检测，由图6中可以看出经过特异性引物

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 昆明理工大学

<120> 基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 778

<212> DNA

<213> 鸡枞(Collybiaalbuminosa)

<400> 1

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<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 2

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<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 3

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