一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法

技术领域

本发明涉及生物肥料加工技术领域，尤其涉及一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法。

背景技术

农业获得高产的手段是提高化肥使用率，可以为农业带来巨大的经济效益，然而化肥过多的投入造成环境污染问题不断加重，带来土壤次生盐渍化、土壤酸化、板结、肥力下降等以致作物质量下降、水体富营养化、环境恶化等严重问题。研发合理使用绿色环保的微生物菌肥，不仅能使作物优质高产，还能提高土壤肥力，微生物菌肥主要通过微生物的生命活动达到作物增产和抗病的效果，能在作物根际周围形成微生态的环境，抑制土传病菌的生长。虽然，目前有解淀粉芽孢杆菌发酵成生物有机肥的报道，但经过研究发现，不同的解淀粉芽孢杆菌的发酵产物的有效成分非常复杂，不同的解淀粉芽孢杆菌菌株能发挥不同的作用，现有利用解淀粉芽孢杆菌发酵的有机肥要么只有抑菌作用，要么只有促进生长的作用。

比如公开号为CN115322928A的一种解淀粉芽孢杆菌ZLP-01及其应用，是针对该菌株菌株具有防病、杀虫功效；公开号为CN115247141A解淀粉芽孢杆菌菌株A9及其应用，主要是针对细菌的抑制作用，应用于医疗、食品加工等领域；公开号为CN113213986A一种含解淀粉芽孢杆菌的生物有机肥及其制备方法和应用，是针对由灰葡萄孢引起的灰霉病具有良好的防治效果，且对人参生长具有促进作用。

而对于解淀粉芽孢杆菌ck-05制备的微生物有机肥，既具有广谱性抑菌活性，又有促进生长作用，尤其经过研究能显著提高槟榔叶片的叶绿素含量。

发明内容

有鉴于此，本发明采用的技术手段如下：一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法，包括以下步骤：

S1菌株活化：将甘油保存的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于LB斜面培养基上培养；

S2种子液制备：再将活化的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于液体LB培养基中震荡培养，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液；

S3发酵液制备：将解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，进行发酵培养，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液；

所述发酵培养液包括以下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液10～30份、豆粕20～30份、油茶枯饼20～30份、水860～935份、氯化钠10～20份、酵母膏5～10份、蛋白胨10～20份；

S4发酵液稀释：将解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液进行稀释100倍，稀释后的发酵液中含解淀粉芽孢杆菌10

进一步的，其中所述发酵培养液包括以下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液20份、豆粕20份、油茶枯饼30份、水890份、氯化钠10份、酵母膏10份、蛋白胨20份。

进一步的，发酵培养温度为35～40℃，180～200r/min条件下发酵培养50～72h。

进一步的，所述发酵培养液的pH值为7.2～7.4。

进一步的，每株槟榔苗每次使用100～200ml的稀释发酵液。

进一步的，斜面培养温度为35～40℃，培养时间为50～72h。

进一步的，震荡培养温度为35～40℃，180～200r/min条件下震荡培养50～72h。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

在制备发酵液时，本发明选用的是10～20份单一的解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液进行发酵，降解能力强，其接种量决定了发酵产物的有效成分含量不同，合理搭配组合豆粕、油茶枯饼等营养物料，能使其物料完全腐熟，使发酵液中营养物质达到最大化；与葡萄糖等碳源不同的是，本发明选用了一定比例的豆饼和油茶枯饼，不仅可以作为菌种生长所需的氮源和碳源，同时还提供了磷钾钙镁等其他微量元素和蛋白质，使得发酵产物的成分有效含量提高，对于发酵系统，发酵工艺等参数影响着微生物的活动，在进行制备有机肥料时制备工艺简便，具有微生物肥料的功效，又有有机肥料的作用，对植物的生长具有良好的效果，在槟榔种植上促进其生长，叶绿素是槟榔生长的关键物质，其含量的增加是合成有机物的重要衡量指标，该有机肥料增加了叶片中叶绿素的含量，使槟榔自身能产生营养物质供生长。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法，包括以下步骤：

S1菌株活化：将甘油保存的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于LB斜面培养基上培养，培养温度为35℃，培养时间为72h。

S2种子液制备：再将活化的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于液体LB培养基中震荡培养，培养温度为35℃，180r/min条件下震荡培养72h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液。

S3发酵液制备：将解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，进行发酵培养，发酵培养温度为35℃，180r/min条件下发酵培养72h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液，所述发酵培养液的pH值为7.2。

所述发酵培养液包括以下重量的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液10g、豆粕20g、油茶枯饼20g、水925g、氯化钠10g、酵母膏5g、蛋白胨10g。

S4发酵液稀释：将解淀粉芽孢杆菌发酵液进行稀释，将解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液进行稀释100倍，稀释后的发酵液中含解淀粉芽孢杆菌10

实施例2

一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法，包括以下步骤：

S1菌株活化：将甘油保存的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于LB斜面培养基上培养，培养温度为38℃，培养时间为60h。

S2种子液制备：再将活化的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于液体LB培养基中震荡培养，培养温度为38℃，190r/min条件下震荡培养60h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液。

S3发酵液制备：将解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，进行发酵培养，发酵培养温度为38℃，190r/min条件下发酵培养60h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液，所述发酵培养液的pH值为7.3。

所述发酵培养液包括以下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液20份、豆粕25份、油茶枯饼25份、水892份、氯化钠15份、酵母膏8份、蛋白胨15份。

S4发酵液稀释：将解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液进行稀释100倍，稀释后的发酵液中含解淀粉芽孢杆菌10

实施例3

一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法，包括以下步骤：

S1菌株活化：将甘油保存的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于LB斜面培养基上培养，培养温度为40℃，培养时间为50h。

S2种子液制备：再将活化的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于液体LB培养基中震荡培养，培养温度为40℃，200r/min条件下震荡培养50h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液。

S3发酵液制备：将解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，进行发酵培养，发酵培养温度为40℃，200r/min条件下发酵培养50h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液，所述发酵培养液的pH值为7.4。

所述发酵培养液包括以下重量的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液30g、豆粕30g、油茶枯饼30g、水860g、氯化钠20g、酵母膏10g、蛋白胨20g。

S4发酵液稀释：将解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液进行稀释100倍，稀释后的发酵液中含解淀粉芽孢杆菌10

实施例4

一种含解淀粉芽孢杆菌ck-05的生物有机肥制备方法，包括以下步骤：

S1菌株活化：将甘油保存的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于LB斜面培养基上培养，培养温度为40℃，培养时间为60h。

S2种子液制备：再将活化的解淀粉芽孢杆菌ck-05接种于液体LB培养基中震荡培养，培养温度为40℃，190r/min条件下震荡培养60h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液。

S3发酵液制备：将解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，进行发酵培养，发酵培养温度为40℃，190r/min条件下发酵培养60h，获得解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液，所述发酵培养液的pH值为7.3。

所述发酵培养液包括以下重量的组分：解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液20g、豆粕20g、油茶枯饼30g、水890g、氯化钠10g、酵母膏10g、蛋白胨20g。

S4发酵液稀释：将解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液进行稀释100倍，稀释后的发酵液中含解淀粉芽孢杆菌10

其中，上述实施例中的解淀粉芽孢杆菌ck-05菌株于2020年4月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No：19565。

LB培养基：5g酵母粉、10g NaCl、10g蛋白胨、20g琼脂、1L水，pH值为7.2。

一、设置不同处理，探究微生物菌肥对槟榔幼苗生长的促进作用，同时测定其对槟榔农艺性状、以及对槟榔植株养分的影响。

材料：试验于2021年1月在海南省文昌市中国热带农业科学院椰子研究所槟榔示范园进行，供试槟榔苗为一年生的“热研1号”槟榔苗。

试验方法：本实施例采用随机区组设置小区试验，共设置5个不同处理，每处理设10个重复，每盆种植1株槟榔幼苗，用盆装好槟榔苗后埋在大田中，常规水肥管理。每隔15d用200ml相应的发酵液灌根处理1次，连续处理3个月，1年后测量株高、茎粗、叶绿素SPAD、鲜重等槟榔农艺性状，采集槟榔叶片检测叶片中的氮、磷、钾，钙、镁、铁、锰、铜、锌、钠等元素含量。具体处理见表1。

表1试验处理情况

二、试验结果

1、解淀粉芽孢杆菌ck-05对槟榔农艺性状的影响

从表2可以看出，与对照相比，采用本发明中的微生物菌肥对槟榔植株株高、茎粗、叶绿素SPAD及鲜重等农艺性状均有不同程度的促进作用，其中处理T4的促进作用最佳。

表2解淀粉芽孢杆菌ck-05对槟榔农艺性状的影响

由上表可知，处理组的株高、茎粗、叶绿素SPAD、鲜重等槟榔农艺性状均优于对照组，其种子发酵液对提高农艺形状具有良好的效果，且处理组T4的槟榔农艺性状最优，其叶绿素的含量远高于对照组。本发明制备的微生物有机肥为槟榔植株提供了适宜的营养物质，防止过少的营养物质会造成长势弱，发生病害等情况，过多的营养物质会造成根系浓度过大，影响根部水分的吸收和矿物质元素的吸收，也不利于作物的生长。

2、解淀粉芽孢杆菌ck-05对槟榔植株养分的影响

由表3可以得知，与对照相比，采用本发明中的微生物菌肥对槟榔植株主要养分含量均有不同程度的促进作用，其中处理T4的促进作用最佳。

表3解淀粉芽孢杆菌ck-05对槟榔植株主要养分的影响

本发明制备的含解淀粉芽孢杆菌ck-05微生物有机肥不仅含有作物所需的氮磷镁钾锌等大量的矿物质元素，还含有油茶枯饼特有的丰富的微量元素等物质，为作物生长提供了全面的营养，还能刺激槟榔根部的生长酶活力和细胞分裂，达到促进生长的作用，使有机肥具有抑菌和促进生长的双重作用。

三、探究不同组份变量的发酵培养液在制备微生物菌肥时对槟榔幼苗生长作用的验证性试验，其它条件均和本发明实施例4相同。

表4试验处理情况

表5对槟榔农艺性状的影响

由上表可知，通过研究对照组1选择的是油茶枯饼和水比值为1:10的变量，对照组2和对照组3选择的是菌株种子液、豆粕、油茶枯饼和水的变量，对照组4选择了不同的菌株种子液。通过上表5可知，在改变发酵成分含量情况下，设置的对照组制备的有机化肥对槟榔的株高和叶绿素性状较差。本发明选用的是10～20份单一的解淀粉芽孢杆菌ck-05种子液进行发酵，降解能力强，合理搭配组合一定比例的豆粕、油茶枯饼等营养成分，加入适宜的水量能使其物料完全腐熟；不仅可以作为菌种生长所需的氮源和碳源，同时还提供了磷钾钙镁等其他微量元素和蛋白质，使得发酵产物的成分有效含量也不同，对槟榔植物的生长具有良好的效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。