一种免疫细胞培养方法
文献发布时间:2023-06-19 10:57:17
技术领域
本发明涉及免疫细胞培养技术领域,具体为一种免疫细胞培养方法。
背景技术
自然杀伤细胞是机体重要的免疫细胞,不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生,能够识别靶细胞、杀伤介质,免疫细胞在医学上有着重要的作用,因此需要对免疫细胞进行培养。
现有免疫细胞培养中需要对培养液体进行人工吹打混合,并在操作过程中需要多次离心处理,处理中人工操作过程复杂,培养成本较高,且现有免疫细胞培养中一次性培养的细胞较少,培养效率较为低下,为此,我们提出一种免疫细胞培养方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种免疫细胞培养方法,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种免疫细胞培养方法,包括如下步骤:
S1:准备工作,培养液及淋巴细胞分离液复温至室温;
S2:样品稀释,将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释,通过吹打混合机构充分吹打混匀,转移至50ml离心管中;
S3:梯度离心,于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液,20℃,800g条件下通过第一离心机构离心20min;
S4:收集白膜层,离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中,每管加生理盐水至50ml,转速1500rpm通过第二离心机构离心6min;
S5:清洗,倾弃上清,用手指适度弹敲离心管底部,直至细胞沉淀松散,加生理盐水重悬,将各离心管中的细胞悬液合并混匀,总体积30ml;
S6:清洗,将所需体积的细胞悬液再次离心,转速1500rpm,离心6min,倾弃剩余上清,手指适度弹敲离心管底部,直至细胞沉淀松散;
S7:接种,用15ml完全培养基重悬,接种至培养瓶中;
S8:加滋养细胞,复苏滋养细胞,加生理盐水至40ml重悬,取样计细胞活率,转速1500rpm离心5min,用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中;
S9:起始培养,加入1.5ml浓度5%的自体血浆、30mlNK完全培养基、1.5ml自体血浆、滋养细胞,设置温度37℃在CO2培养箱中开始培养;
S10:观察记录,肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录。
S11:冻存;
所述步骤S2中的吹打混合机构的底部设置有底板,且吹打混合机构固定安装在底板的顶部中心,所述吹打混合机构包括处理箱、箱盖、进料口、空心管、缓冲板和吹打管,所述底板的顶部中心固定安装有固定架,且底板顶部位于固定架内部固定安装有处理箱,所述处理箱的顶部安装有箱盖,且箱盖顶部的一端设置有进料口,所述箱盖的顶部中心固定安装有空心管,且空心管的端部伸入处理箱内部,所述空心管位于处理箱内部的一端固定连接有缓冲板,且缓冲板整体成圆形结构,所述缓冲板内设置有空腔,所述空心管与缓冲板内部连通,所述缓冲板的底部等距固定连接有吹打管,且吹打管均与缓冲板内部连通,所述吹打管的端部成锥形结构,且吹打管的外侧安装有单向气阀;
所述步骤S3中的第一离心机构和步骤四中的第二离心机构均固定安装在底板顶部,所述第一离心机构位于吹打混合机构和第二离心机构之间,所述步骤四中的移液机构固定安装在底板顶部,且移液机构位于第一离心机构和第二离心机构之间。
优选的,所述空心管位于箱盖外部的一端固定连接有固定盒,且固定盒的整体成圆板形结构,所述空心管与固定盒内部连通,所述固定盒侧壁固定连接有安装盒,且安装盒外侧等距开设有三个弧形槽,所述安装盒内部通过弧形槽与外部连通,所述固定盒远离固定盒的一侧内部固定连接有支撑弹簧,且支撑弹簧的端部固定连接有封堵板,所述封堵板配合滑动连接在安装盒内部,所述固定盒位于安装盒的一侧开设有连通口,且固定盒通过连通口与安装盒内部连通,所述封堵板位于连通口的一侧固定连接有滑动杆,且滑动杆的端部穿过固定盒,所述箱盖的顶部滑动连接有立板,所述滑动杆的端部与立板固定连接,所述滑动杆外侧位于立板和固定盒之间套设有伸缩弹簧。
优选的,所述箱盖的顶部开设有水平方向的滑槽,所述立板的底部设置有限位块,且限位块配合滑动连接在滑槽内部,所述立板通过设置在其上的限位块滑动连接在箱盖顶部,所述箱盖顶部位于立板的侧边对称固定连接有固定板,且两个固定板之间的顶端通过转轴转动连接有偏心轮,所述偏心轮与立板接触,所述固定板顶端固定安装有转动电机,且转动电机的输出轴端部穿过固定板与偏心轮固定连接。
优选的,所述第一离心机构和第二离心机构均包括固定座、转台、固定槽、放置架和离心管,所述底板顶部位于固定架外部等距固定安装有四个固定座,且固定座内转动连接有转台,所述转台的顶部等距开设有四个固定槽,且四个固定槽内转动连接有放置架,所述放置架内卡接有离心管,所述固定架的顶部固定安装有水泵,且水泵的进液端安装有连接管,且连接管的端部与处理箱的底端连接,所述水泵的出水端固定安装有排料管,且排料管位于离心管的正上方。
优选的,所述转台的底部转动连接有外齿圈,所述放置架的底部均转动连接有传动齿轮,且四个传动齿轮均与外齿圈啮合连接,所述转台底部固定安装有伺服电机,且伺服电机的输出轴端部固定安装有驱动齿轮,所述驱动齿轮与外齿圈啮合连接。
优选的,所述封堵板位于固定盒的一侧设置有密封垫,且密封垫与固定盒紧密接触,所述封堵板表面位于滑动杆外侧对称固定有限位杆,且限位杆的端部滑动穿过固定盒与立板固定连接。
优选的,所述固定座内壁的底部通过轴承转动连接有传动杆,且传动杆外侧固定安装有从动齿轮,所述传动杆的顶部与转台固定,所述固定座内壁的底部固定安装有驱动电机,且驱动电机的输出轴端部固定安装有主动齿轮,所述主动齿轮与从动齿轮啮合连接。
优选的,所述移液机构包括安装架、固定杆、支撑杆、丝杠、滑块、移液电机、电动推杆和移液管,所述底板顶部位于第一离心机构和第二离心机构之间固定安装有安装架,所述安装架的顶端固定连接有固定杆,且固定杆的端部固定连接有支撑杆,所述固定杆的表面设置有长度刻度线,所述固定杆的顶部开设有水平方向的凹槽,且凹槽内转动连接有丝杠,所述丝杠外侧螺纹连接有滑块,且滑块配合滑动连接在固定杆内部,所述固定杆端部固定安装有移液电机,且移液电机的输出轴端部伸入固定杆内部与丝杠固定连接,所述滑块的端部固定安装有电动推杆,且电动推杆的端部固定安装有移液管,所述移液管位于离心管的正上方。
优选的,所述放置架内壁的顶端设置有密封圈,所述放置架的顶端与固定槽内壁密封连接,且放置架内部与固定槽内部连通。
优选的,所述转台的顶部中心开设有圆柱槽,且圆柱槽内固定安装有加热板,所述转台上的圆柱槽内设置有水箱,且水箱的顶部中心设置有把手,所述水箱的顶部安装有气泵,所述气泵的进气端与外界连通,且气泵的出气端安装有通气管,且通气管的端部伸入水箱内部,所述通气管位于水箱内部的一段成螺旋状设置。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明通过吹打混合机构上的转动电机工作使偏心轮转动,偏心轮转动过程中不断地推动立板在箱盖上滑动,立板向固定和处滑动推动滑动杆滑动,滑动杆推动封堵板在安装盒内部滑动,封堵板向支撑弹簧处滑动过程中,支撑弹簧和伸缩弹簧压缩,此时连通口处于打开状态,外部的气体通过弧形槽和连通口进入固定和内,当偏心轮的端部远离立板时看,立板在伸缩弹簧和支撑弹簧的作用下恢复位置,此时封堵板将连通口封堵住,气体通过吹打管向处理箱内部吹打,转动电机工作中吹打管不断地向处理箱内部吹打,避免了以往人工手动操作对细胞培养液吹打费时费力且吹打效果差的情况,提高了吹打效率,通过设置了第一离心机构和第二离心机构能够实现对细胞培养液的离心处理,通过控制转台的间歇式转动,使转台上的每个离心管中置入原料,接着控制加热板工作将水箱内部的水加热,然后气泵工作,气体经过水箱内部的热水进行一定程度的加热,使热气进入固定槽内部,对离心管进行加热,同时控制系统控制伺服电机工作使驱动齿轮转动,通过驱动齿轮与外齿圈的啮合连接使四个传动齿轮转动,进而使放置架转动,从而实现离心管的转动,能够对离心管内部的液体进行离心处理,过程操作连续,节省了时间,提高了离心效率,装置通过一次性在吹打混合机构外部设置四个第一离心机构和四个第二离心机构,多工位操作,能够一次性进行大量免疫细胞的培养,效率高,便于推广。
附图说明
图1为本发明的培养方法工艺流程示意图;
图2为本发明的培养方法采用装置的整体连接结构示意图之一;
图3为本发明的培养方法采用装置的整体连接结构示意图之二;
图4为本发明的吹打混合机构连接结构示意图;
图5为本发明转台与固定座连接结构示意图;
图6为本发明的转台与固定座内部连接结构示意图;
图7为本发明的固定座内部连接结构示意图;
图8为本发明的吹打混合机构连接结构示意图;
图9为本发明的吹打混合机构内部连接结构示意图;
图10为本发明吹打管结构示意图。
图中:1、底板;2、吹打混合机构;3、第一离心机构;4、第二离心机构;5、移液机构;6、处理箱;7、箱盖;8、进料口;9、空心管;10、缓冲板;11、吹打管;12、滑槽;13、固定盒;14、立板;15、滑动杆;16、连通口;17、封堵板;18、安装盒;19、弧形槽;20、支撑弹簧;21、密封垫;22、伸缩弹簧;23、限位杆;24、偏心轮;25、转动电机;26、固定板;27、固定架;28、固定座;29、转台;30、固定槽;31、放置架;32、离心管;33、密封圈;34、从动齿轮;35、主动齿轮;36、传动杆;37、驱动电机;38、传动齿轮;39、外齿圈;40、伺服电机;41、驱动齿轮;42、水泵;43、连接管;44、排料管;45、安装架;46、固定杆;47、支撑杆;48、丝杠;49、滑块;50、移液电机;51、电动推杆;52、移液管;53、长度刻度线;54、水箱;55、气泵;56、通气管;57、加热板;58、把手。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
如图1所示,本发明提一种免疫细胞培养方法,包括如下步骤:
步骤S1:准备工作:培养液(37℃内恒温箱)及淋巴细胞分离液复温(室温)。
步骤S1:样品稀释:将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释,通过吹打混合机构充分吹打混匀,转移至50ml离心管中。
步骤S3:梯度离心:于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液20℃,800g(约2000rpm)通过第一离心机构离心20min(加速1,刹车0)。
步骤S4:收集白膜层:离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中,每管加生理盐水至50ml,1500rpm通过第二离心机构离心6min(加速9,刹车9)。
步骤S5:清洗:倾弃上清,用手指适度弹敲离心管底部,直至细胞沉淀松散,加生理盐水重悬,将各离心管中的细胞悬液合并混匀,总体积30ml。
步骤S6:清洗:将所需体积的细胞悬液再次离心,1500rpm,6min(加速为9,刹车为9),倾弃剩余上清,手指适度弹敲离心管底部,直至细胞沉淀松散。
步骤S7:接种:用15ml完全培养基重悬,接种至培养瓶中。
步骤S8:加滋养细胞:复苏滋养细胞,加生理盐水至40ml重悬,取样计细胞活率。1500rpm离心5min,用15ml完全培养基重悬加入上述培养瓶中。
步骤S9:起始培养:加入1.5ml自体血浆(浓度5%)即PBMC(20*10^6cells)+NK完全培养基(30ml)+自体血浆(1.5ml)+滋养细胞,37℃,5%CO2培养箱中开始培养。
步骤S10:第1天和第2天肉眼及显微镜观察,第3天肉眼及显微镜观察,开始换液(不换瓶):轻轻吹打3-4下,将培养液转移至50ml离心管中,1500rpm,离心5min,弃上清,用30ml NK完全培养基重悬后加入原来的培养瓶中,并加入1.5ml自体血浆。第4天到第6天每天肉眼及显微镜观察,观察细胞是否抱团明显,根据观察情况添加培养液和自体血浆。第6天转至瓶中培养。第7天肉眼及显微镜观察,加A2及加培养液:复苏A2(滋养细胞),添加培养基,自体血浆,转移至2个T175瓶中培养(第7天为过渡时期,血浆浓度最好为2-3%,后续培养浓度为1%)第8天到第9天每天肉眼及显微镜观察,添加培养基,自体血浆,一般第8-9天入袋培养,总体积至少250ml以上。第10天到第12天每天肉眼及显微镜观察,添加培养基,自体血浆。第13天肉眼及显微镜观察,当第12天体积达到1800ml时一般不再加液,第13天不再进行任何操作,若第12天体积未达到1800ml,可根据情况适当加液,第14天不再进行任何操作。吹打均匀,取样检测细胞浓度及活率。第14天以后肉眼及显微镜观察至细胞状态,并收获:将培养袋中液体充分混匀,取样Pre计细胞浓度和活率及流式检测,将培养液转移至50ml离心管中,1400rpm离心5min,弃上清,将培养液再次转移至此50ml离心管中离心(最多重复利用1次),弃上清,将细胞沉淀用生理盐水重悬至40ml,取样Post计细胞浓度和活率,将细胞悬液1400rpm,离心5min,取上清液进行无菌检测及支原体和内毒素检测,配制冻存液:ml(90%FBS+10%DMSO),根据计数结果(以Pre为标准,Post为参考)冻存NK细胞:4ml/管。
步骤S11:冻存:将封口好的冻存管放入程序降温盒中,并且在4℃冰箱中暂存时间不超过1h,将程序降温盒放入-80℃超低温冰箱中降温(4-24h),并且用低温温度记录仪检测降温过程,将细胞转移至液氮罐中长期保存,并打印程序降温曲线;
请参阅图2,所述步骤二中的吹打混合机构2的底部设置有底板1,且吹打混合机构2固定安装在底板1的顶部中心,所述吹打混合机构2包括处理箱6、箱盖7、进料口8、空心管9、缓冲板10和吹打管11,所述底板1的顶部中心固定安装有固定架27,且底板1顶部位于固定架27内部固定安装有处理箱6,通过固定架27起到对处理箱6的固定支撑作用;
请参阅图2,所述处理箱6的顶部安装有箱盖7,且箱盖7顶部的一端设置有进料口8,所述箱盖7的顶部中心固定安装有空心管9,且空心管9的端部伸入处理箱6内部,所述空心管9位于处理箱6内部的一端固定连接有缓冲板10,且缓冲板10整体成圆形结构,所述缓冲板10内设置有空腔,所述空心管9与缓冲板10内部连通,所述缓冲板10的底部等距固定连接有吹打管11,且吹打管11均与缓冲板10内部连通,所述吹打管11的端部成锥形结构,且吹打管11的外侧安装有单向气阀;
请参阅图2、图3和图4,所述步骤三中的第一离心机构3和步骤四中的第二离心机构4均固定安装在底板1顶部,所述第一离心机构3位于吹打混合机构2和第二离心机构4之间,所述步骤四中的移液机构5固定安装在底板1顶部,且移液机构5位于第一离心机构3和第二离心机构4之间,通过第一离心机构3和第二离心机构4能够进行离心处理,通过移液机构5的设置能够将第一离心机构3上的离心管32内的液体转移至第二离心机构4上的离心管32内部。
请参阅图4和图8,所述空心管9位于箱盖7外部的一端固定连接有固定盒13,且固定盒13的整体成圆板形结构,所述空心管9与固定盒13内部连通,所述固定盒13侧壁固定连接有安装盒18,且安装盒18外侧等距开设有三个弧形槽19,所述安装盒18内部通过弧形槽19与外部连通,所述固定盒13远离固定盒13的一侧内部固定连接有支撑弹簧20,且支撑弹簧20的端部固定连接有封堵板17,通过封堵板17的设置能够对连通口16进行封堵;
请参阅图8,所述封堵板17配合滑动连接在安装盒18内部,所述固定盒13位于安装盒18的一侧开设有连通口16,且固定盒13通过连通口16与安装盒18内部连通,所述封堵板17位于连通口16的一侧固定连接有滑动杆15,且滑动杆15的端部穿过固定盒13,所述箱盖7的顶部滑动连接有立板14,所述滑动杆15的端部与立板14固定连接,所述滑动杆15外侧位于立板14和固定盒13之间套设有伸缩弹簧22,通过装置预设的电力控制系统控制转动电机25工作使偏心轮24转动,偏心轮24转动过程中不断地推动立板14在箱盖7上滑动,立板14向固定和13处滑动推动滑动杆15滑动,滑动杆15推动封堵板17在安装盒18内部滑动,封堵板18向支撑弹簧20处滑动过程中,支撑弹簧20和伸缩弹簧22压缩,此时连通口16处于打开状态,外部的气体通过弧形槽19和连通口16进入固定和13内,当偏心轮13的端部远离立板14时看,立板14在伸缩弹簧22和支撑弹簧20的作用下恢复位置,此时封堵板17将连通口16封堵住,气体通过吹打管11向处理箱6内部吹打。
请参阅图8,所述箱盖7的顶部开设有水平方向的滑槽12,所述立板14的底部设置有限位块,且限位块配合滑动连接在滑槽12内部,所述立板14通过设置在其上的限位块滑动连接在箱盖7顶部,所述箱盖7顶部位于立板14的侧边对称固定连接有固定板26,且两个固定板26之间的顶端通过转轴转动连接有偏心轮24,所述偏心轮24与立板14接触,所述固定板26顶端固定安装有转动电机25,且转动电机25的输出轴端部穿过固定板26与偏心轮24固定连接。
请参阅图3、图5、图6和图9,所述第一离心机构3和第二离心机构4均包括固定座28、转台29、固定槽30、放置架31和离心管32,所述底板1顶部位于固定架27外部等距固定安装有四个固定座28,且固定座28内转动连接有转台29,所述转台29的顶部等距开设有四个固定槽30,且四个固定槽30内转动连接有放置架31,所述放置架31内卡接有离心管32,所述固定架27的顶部固定安装有水泵42,且水泵42的进液端安装有连接管43,且连接管43的端部与处理箱6的底端连接,所述水泵42的出水端固定安装有排料管44,且排料管44位于离心管32的正上方;
离心时,通过控制加热板57工作将水箱54内部的水加热,然后气泵55工作,气体经过水箱54内部的热水进行一定程度的加热,使热气进入固定槽30内部,对离心管32进行加热,同时控制系统控制伺服电机40工作使驱动齿轮41转动,通过驱动齿轮41与外齿圈39的啮合连接使四个传动齿轮38转动,进而使放置架31转动,从而实现离心管32的转动,能够对离心管32内部的液体进行离心处理。
请参阅图6和图7,所述转台29的底部转动连接有外齿圈39,所述放置架31的底部均转动连接有传动齿轮38,且四个传动齿轮38均与外齿圈39啮合连接,所述转台29底部固定安装有伺服电机40,且伺服电机40的输出轴端部固定安装有驱动齿轮41,所述驱动齿轮41与外齿圈39啮合连接,通过伺服电机40巩固走使驱动齿轮41转动,通过驱动齿轮41与外齿圈39的啮合连接使外齿圈39转动,通过外齿圈39与四个传动齿轮38的啮合连接实现放置架31的转动,进而实现离心管32的转动,从而实现对离心管32内细胞的离心处理。
请参阅图8,所述封堵板17位于固定盒13的一侧设置有密封垫21,且密封垫21与固定盒13紧密接触,所述封堵板17表面位于滑动杆15外侧对称固定有限位杆23,且限位杆23的端部滑动穿过固定盒13与立板14固定连接,通过密封垫21能够进行更好的密封,使封堵板17和固定和13之间紧密接触,能够将连通口16密封住,避免气体进入固定盒13内部。
请参阅图6,所述固定座28内壁的底部通过轴承转动连接有传动杆36,且传动杆36外侧固定安装有从动齿轮34,所述传动杆36的顶部与转台29固定,所述固定座28内壁的底部固定安装有驱动电机37,且驱动电机37的输出轴端部固定安装有主动齿轮35,所述主动齿轮35与从动齿轮34啮合连接,通过控制驱动电机37工作使主动齿轮35转动,通过主动齿轮35与从动齿轮34的啮合连接实现传动杆36的转动,传动杆36带动转台29转动,从而实现转台29的转动,通过装置设置的控制系统控制驱动电机37工作,进而控制转台29的间歇式转动,能够控制离心管32的转动位置。
请参阅图4和图10,所述移液机构5包括安装架45、固定杆46、支撑杆47、丝杠48、滑块49、移液电机50、电动推杆51和移液管52,所述底板1顶部位于第一离心机构3和第二离心机构4之间固定安装有安装架45,安装架45起到较好的固定支撑作用;
请参阅图4,所述安装架45的顶端固定连接有固定杆46,且固定杆46的端部固定连接有支撑杆47,所述固定杆46的表面设置有长度刻度线53,通过长度刻度线53便于观察滑块49移动的位置,所述固定杆46的顶部开设有水平方向的凹槽,且凹槽内转动连接有丝杠48,所述丝杠48外侧螺纹连接有滑块49,且滑块49配合滑动连接在固定杆46内部,所述固定杆46端部固定安装有移液电机50,且移液电机50的输出轴端部伸入固定杆46内部与丝杠48固定连接,通过控制移液电机50工作,使螺纹杆48转动,通过螺纹杆48与滑块49的螺纹连接实现滑块49的移动,进而带动移液管52移动;
请参阅图4,所述滑块49的端部固定安装有电动推杆51,且电动推杆51的端部固定安装有移液管52,所述移液管52位于离心管32的正上方,通过电动推杆51配合移液管52使第一离心机构3上离心管32内的中间白膜层于50ml第二离心机构4上的离心管32中。
请参阅图6,所述放置架31内壁的顶端设置有密封圈33,所述放置架31的顶端与固定槽30内壁密封连接,且放置架31内部与固定槽30内部连通,通过密封圈33的设置一方面起到较好的密封效果,另一方面能够进行一定的防滑,防止离心管32发生晃动。
请参阅图5和图6,所述转台29的顶部中心开设有圆柱槽,且圆柱槽内固定安装有加热板57,所述转台29上的圆柱槽内设置有水箱54,且水箱54的顶部中心设置有把手58,通过把手58的设置便于提拉出水箱54,通过圆柱槽便于安装水箱54,通过圆柱槽内部安装的加热板57便于对水箱54内部的水进行加热;
请参阅图10,所述水箱54的顶部安装有气泵55,所述气泵55的进气端与外界连通,且气泵55的出气端安装有通气管56,且通气管56的端部伸入水箱54内部,所述通气管56位于水箱54内部的一段成螺旋状设置,通过控制气泵55工作能够对固定槽30内部的离心管32进行加热,气泵55工作将外部的气体置于通气管56内部,通过水箱54内部的热水对通气管56进行加热,使热气体进入固定槽30内部,实现对离心管32的加热。
结合本发明的工艺方法,本发明所采用的装置工作原理为:使用时,将第一离心机构3和第二离心机构4上固定槽30内的放置架31内放置离心管32,处理箱6内部装有分离血浆后的下层红细胞,通过进料口8向处理箱6内部加入等体积生理盐水稀释,通过装置预设的电力控制系统控制转动电机25工作使偏心轮24转动,偏心轮24转动过程中不断地推动立板14在箱盖7上滑动,立板14向固定和13处滑动推动滑动杆15滑动,滑动杆15推动封堵板17在安装盒18内部滑动,封堵板18向支撑弹簧20处滑动过程中,支撑弹簧20和伸缩弹簧22压缩,此时连通口16处于打开状态,外部的气体通过弧形槽19和连通口16进入固定和13内,当偏心轮13的端部远离立板14时看,立板14在伸缩弹簧22和支撑弹簧20的作用下恢复位置,此时封堵板17将连通口16封堵住,气体通过吹打管11向处理箱6内部吹打,转动电机25工作中吹打管11不断地向处理箱6内部吹打,使处理箱6内部被稀释的液体充分吹打混匀,然后水泵42工作将液体抽至离心管32转移至50ml第一离心机构3上的离心管32中,转移过程中控制驱动电机37工作使主动齿轮35转动,通过主动齿轮35与从动齿轮34的啮合连接使传动杆36转动,进而使转台29转动,控制系统控制转台29间歇式转动,使转台29上的每个离心管32中置入原料,接着控制加热板57工作将水箱54内部的水加热,然后气泵55工作,气体经过水箱54内部的热水进行一定程度的加热,使热气进入固定槽30内部,对离心管32进行加热,同时控制系统控制伺服电机40工作使驱动齿轮41转动,通过驱动齿轮41与外齿圈39的啮合连接使四个传动齿轮38转动,进而使放置架31转动,从而实现离心管32的转动,能够对离心管32内部的液体进行离心处理,离心完成后,控制移液电机50工作,使螺纹杆48转动,通过螺纹杆48与滑块49的螺纹连接实现滑块49的移动,进而带动移液管52移动,电动推杆51配合移液管52使第一离心机构3上离心管32内的中间白膜层于50ml第二离心机构4上的离心管32中,每管加生理盐水至50ml,1500rpm离心6min(加速9,刹车9)。
表-、表二、表三是我们取样本编号NK2001-NK2006所获得的免疫细胞培养检测数据:
表一:NK细胞流式检测结果
表二、NK细胞存活率
表三、NK细胞计数
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
- 免疫细胞无血清培养用培养基添加试剂盒、使用该试剂盒的免疫细胞培养方法、通过该试剂盒或培养方法获得的免疫细胞无血清培养液以及包含该培养液的化妆材料组合物
- 一种用于免疫细胞培养的添加剂、培养基及免疫细胞的培养方法