一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质及检测方法

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质，同时还涉及采用该基质对含小分子化合物的样本进行检测的方法。

背景技术

在质谱检测领域，特别是临床质谱领域，基质辅助激光解吸离子化质谱(MALDI-MS)是一种高通量、自动化的质谱方法，具有灵敏度高、稳定性好、实验周期短、操作简单、样品和人力消耗少的优点，对于临床指标的检测具有极高潜在价值。

用MALDI-MS进行分析时，需要将高浓度的基质分子与检测样本进行混合，使得被检测分子包裹在基质分子的结晶中，才能使得结构完整的被检测分子在激光能量的轰击下飞出并发生稳定的离子化，继而在质谱仪的质量分析器中完成检测。基质分子的作用是在离子化过程中作为介质传递激光能量、使得被测分子的能量能够较为温和的提升并解吸附、同时结合上一定的电荷，以辅助完成被测分子离子化和后续质谱分析。目前，常用的MALDI-MS正离子基质多为含有共轭大π键结构的小分子有机酸类物质，最常见比如2,5-二羟基苯甲酸(DHB)，芥子酸(SA)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)等，这些分子均能够有效地作为介质完成能量传递和向被测物质转移离子，使得许多不同种类的被检测物质的离子化效率大大提升，是理想的MALDI-MS基质，已经被商品化并在实际工作中广泛应用。

但是，在激光的激发下，目前常用的这些有机小分子基质本身也极易被离子化，共轭有机酸还容易形成一系列的分子簇离子，这些基质离子和基质分子簇离子的分子量大都在500Da以下，从而在质谱m/z<500的范围内产生大量的基质相关信号；同时，由于在检测中采用的基质浓度一般远远大于被测目标物的浓度(往往比被测分子浓度高几百到上万倍)，因此造成在质谱的小分子量范围内(m/z<500，特别是m/z<300)，往往只能检测到高强度的基质相关信号，而被测目标分子的信号被严重压制，无法实现正常的检出，或即使能够检出，灵敏度也极差。

由于上述原因，目前MALDI-MS主要用于分子量大于600Da以上的大分子物质的分析与检测，如蛋白质、多肽、核酸及大分子脂类等，基本无法用于小分子物质，特别是分子量在300Da以下的小分子代谢物的检测。

为解决小分子物质的MALDI-MS检测问题，许多研究者尝试开发适用于小分子量物质检测的MALDI-MS基质材料。例如采用能够传递激光能量和转移离子的大分子量物质作基质，理论上，这些大分子物质在辅助被测分子解吸附和离子化的同时，基质本身产生的信号则位于高分子量范围内，不会影响小分子量范围的目标分子的检测。还有采用不会产生小分子量的离子信号的材料作为基质，如各种碳基纳米材料、多孔硅材料、金属纳米颗粒等等。虽然数据显示这些不同种类的基质材料能够用于小分子的MALDI-MS检测，但是在实际操作中，多数情况下，在m/z<300的小分子范围内仍存在许多分子碎片信号，对小分子分析物检测的干扰依然在一定程度上存在。分析认为这些分子碎片一般来自这些大分子基质材料被激光轰击后的产物以及不够纯净的材料中本身就存在的聚合物单体等物质。同时，这些新的基质材料辅助分析物解吸附和离子化的效率往往低于传统的DHB、CHCA等小分子有机酸基质。

因此，小分子物质的MALDI-MS检测仍是目前的研究难点，开发能适用于小分子物质的高效MALDI-MS检测基质材料是一个重要的研究课题。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质，采用该基质的MALDI-MS检测方法可以用于分子量在300Da以下的有机小分子的定性和定量检测，特异性高、方法准确、操作简便，且灵敏度高。

本发明还提供了一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质组合物。

本发明另一方面还提供了一种小分子化合物的检测方法。

为解决上述技术问题，第一方面，本发明提供了一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质，所述基质为2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸(简称DDDa)，其结构式为：

研究发现，DDDa具有多个苯环的共轭大π键结构以及芳香环上的羧基，其具备作为MALDI-MS基质来传递激光能量和使分析物离子化的潜力。DDDa具有较大的分子质量，其分子量在400Da以上，在不产生分子碎片的情况下，能够在质谱检测中有效避免产生m/z300以下的质谱信号和干扰，从而有效避免抑制被分析物的出峰。因此，DDDa可作为300Da以下的小分子物质的MALDI-MS分析基质。

第二方面，本发明提供了一种用于小分子化合物检测的MALDI-MS基质组合物，所述基质组合物中包括2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸。

作为本发明一种优选的实施方案，所述基质组合物中2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸的含量为1.0～20.0mg/mL。

优选地，所述基质组合物中2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸的含量为1.0～15.0mg/mL。

更优选地，所述基质组合物中2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸的含量为2.0～10.0mg/mL。

作为本发明一种优选的实施方案，所述基质组合物中包括有机溶剂，优选所述有机溶剂为甲醇。

作为本发明一种优选的实施方案，所述基质组合物中包括三氟乙酸，优选三氟乙酸与所述有机溶剂的体积比为(1～50)：1000，进一步优选为(1～25)：1000，更优选为(1～15)：1000。在基质组合物中添加适量的三氟乙酸可以提高离子化效率。

作为本发明一种优选的实施方案，所述基质组合物中还包括异丙醇，优选异丙醇与所述有机溶剂的体积比为(300～1000)：1000，进一步优选为(400～600)：1000，更优选为(450～550)：1000。在基质组合物中添加适量的异丙醇可以促进基质组合物的溶解性能，与检测的小分子化合物互溶性好。

第三方面，本发明提供了一种所述的MALDI-MS基质或者所述的基质组合物在小分子化合物检测中的应用。

优选地，所述的MALDI-MS基质或者所述的基质组合物用于对分子量在300Da以下的小分子化合物进行MALDI-MS分析检测。

进一步优选地，所述分子量在300Da以下的小分子化合物为肉碱、精氨酸、多巴胺或亮氨酸等。

第四方面，本发明提供了一种小分子化合物的检测方法，采用2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸为MALDI-MS基质，检测方法包括步骤：

(1)将所述MALDI-MS基质配制成MALDI-MS基质组合物；

(2)将含有小分子化合物的检测样本点样在MALDI-MS靶板上，再将所述MALDI-MS基质组合物混合在样品点上，之后使用MALDI-MS进行检测。

优选地，步骤(1)中，将所述MALDI-MS基质配制成MALDI-MS基质组合物包括：将所述MALDI-MS基质与甲醇、三氟乙酸混合，制得MALDI-MS基质组合物。

进一步优选地，所述MALDI-MS基质在MALDI-MS基质组合物中的含量为1.0～20.0mg/mL；三氟乙酸与甲醇的体积比为(1～50)：1000。

更进一步优选地，所述MALDI-MS基质组合物中还添加有异丙醇，优选异丙醇与甲醇的体积比为(300～1000)：1000。

优选地，所述含有小分子化合物的检测样本中添加有酸化试剂，以使检测样品保存酸性。

更进一步优选地，所述酸化试剂为三氟乙酸。

优选地，所述含有小分子化合物的检测样本的点样量与所述MALDI-MS基质组合物的点样量体积相同。

进一步优选地，先将被分析溶液即检测样本点样在MALDI-MS靶板上，再将同样体积的DDDa溶液即MALDI-MS基质组合物混合在样品点上，充分混合均匀并在空气中干燥后再进行质谱分析。

本发明提供的小分子化合物的检测方法，通过将高浓度的DDDa溶液与样本溶液混合点样在MALDI-MS靶板上，用于样本中小分子物质的质谱分析，特别是用于分析分子量小于300Da的小分子物质，主要检测m/z<300的质谱范围内的信号。

使用MALDI-MS进行分析检测时，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析。可以使用SHIMADZU AXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定。MALDI质谱是在激光强度为100～120的阳离子模式下累积并平均化400次射击(shots)得到。使用Shimadzu Biotech Launchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理，也可使用其它市售的MALDI-MS质谱仪，本公开对此不作限制。

检测过程中，首先根据被检测标准品的质谱信号强度和所添加标准品的浓度，绘制得到标准曲线，然后根据对检测样本的检测结果，计算得出检测样本中所述被检测物的浓度。

在一些实施方式中，本发明的所述检测为定性检测，用于鉴定被分析物即小分子化合物的分子量和种类。

在一些实施方式中，本发明的所述检测为定量检测，用于对小分子化合物的含量进行检测。

经试验表明，利用DDDa作为MALDI-MS基质，能够有效检测不同种类的小分子量被分析物，实现在较低浓度下目标物的灵敏检测，同时在这个分子量范围几乎不产生强的来自DDDa基质的干扰信号。

本发明的有益效果为：

(1)本发明提供了一种全新的可用于小分子MALDI质谱分析的基质分子，在m/z<300的范围内几乎不产生强的来自基质的分子离子峰或碎片峰，有助于提高小分子MALDI分析的灵敏度，避免基质信号对被分析物信号的抑制或干扰；

(2)与传统的MALDI基质相比，本发明的DDDa基质由于避免了基质信号的干扰和对被分析物信号的抑制，显示出更强的信噪比和灵敏度。

本发明基于DDDa为基质的MALDI-MS检测方法首次用于分子量在300Da以下的有机小分子的定性和定量检测，特异性高、方法准确、操作简便，且灵敏度高。

附图说明

图1是本发明实施例1中得到的DDDa的MALDI质谱谱图；

图2是本发明实施例2中分别采用三种不同组成的DDDa溶液作为基质对精氨酸样品分析得到的MALDI质谱谱图；

图3是本发明实施例3中分别采用四种不同浓度的DDDa溶液作为基质对精氨酸样品分析得到的MALDI质谱谱图；

图4是本发明实施例4中对不同类型的小分子化合物标准品溶液进行MALDI质谱分析的谱图；

图5是本发明实施例5中分别以DDDa、DHB、CHCA为基质对精氨酸、肉碱和多巴胺进行MALDI MS分析的质谱谱图；

图6是本发明实施例6中得到的精氨酸和肉碱的标准浓度曲线图。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

因此，旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本发明更广阔的方面。

本发明在以下实施例中，以2,7-二叔丁基-9,9-二甲基氧杂蒽-4,5-二羧酸(简称DDDa)为MALDI-MS基质，对含小分子化合物的样本进行了检测。

检测步骤包括：

首先配制DDDa溶液，将DDDa溶于甲醇/异丙醇混合溶液中，DDDa浓度为1.0～20.0mg/mL，再加入一定量的三氟乙酸，涡旋震荡混合均匀，得到DDDa溶液；

向制备好的被分析样品溶液中加入三氟乙酸使样品溶液酸化；

将1uL的被分析样品点在MALDI-MS靶板上；

将1uL的DDDa溶液混合加在要分析的MALDI-MS靶板的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀，之后将靶板置于空气中自然干燥；

待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析。

优选地，配制DDDa溶液时，甲醇/异丙醇混合溶液中，异丙醇与甲醇的体积比为(300～1000)：1000；加入的三氟乙酸与甲醇的体积比为(1～50)：1000。

下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

本实施例是对DDDa分子的MALDI-MS质谱分析，步骤如下：

1)配制DDDa溶液，将DDDa溶于甲醇/异丙醇(体积比1:1)混合溶液中，其浓度为2.5mg/mL，再加入0.5％的三氟乙酸(0.5％是相对于混合溶液的体积百分比)，涡旋震荡混合均匀；

2)将1uL的DDDa溶液加在要分析的MALDI-MS靶板的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，之后将靶板置于空气中自然干燥；

3)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析；使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定；MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。

得到的DDDa的MALDI质谱谱图见图1所示，图1结果表明：DDDa的MALDI-MS质谱信号主要出现在m/z 350-420的范围内；在m/z 300以下的范围内基本没有强的质谱信号出现。该结果说明DDDa在小分子量范围内所产生的干扰信号极为有限，有利于小分子被分析物的信号检出。

实施例2

本实施例采用不同组成的DDDa溶液对精氨酸样品进行了MALDI-MS分析，并进行了效果对比，步骤如下：

1)配制三种不同组成的DDDa溶液，分别如下：

溶液(a)：DDDa的甲醇/三氟乙酸溶液，其中甲醇/三氟乙酸的体积比为1000:1；

溶液(b)：DDDa的甲醇/异丙醇/三氟乙酸溶液，其中甲醇/异丙醇/三氟乙酸的体积比为1000:500:1.5；

溶液(c)：DDDa的甲醇/异丙醇/三氟乙酸溶液，其中甲醇/异丙醇/三氟乙酸的体积比为1000:500:15；

以上三种溶液中，DDDa的浓度均为2.5mg/mL；涡旋震荡混合均匀；

2)配制20uM的精氨酸水溶液，加入0.1％(相对于精氨酸水溶液的体积百分比)的三氟乙酸使其酸化；其中精氨酸为精氨酸标准品；

3)将1uL的精氨酸样品点在MALDI MS靶板上；

4)分别取不同组成的DDDa溶液1uL，分别混合加在要分析的精氨酸的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀，之后将靶板置于空气中自然干燥；

5)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析；使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定；MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。

分别采用以上三种不同组成的DDDa溶液作为基质对精氨酸样品分析得到的MALDI质谱谱图见图2所示，其中(a)、(b)、(c)分别对应DDDa溶液的溶液(a)、溶液(b)和溶液(c)。

图2结果表明：(a)与(b)相比，(b)中的精氨酸信号信噪比更高，检测的灵敏度更好，说明在DDDa的溶剂体系中加入异丙醇有助于提升和优化被检出分析物的信号，异丙醇有助于分析混合物的更好结晶，从而使得被分析物在激光轰击下更好的离子化。(b)与(c)相比，(c)中精氨酸的信号显著增强，检测灵敏度进一步提高，说明提升基质体系中三氟乙酸的浓度有助于提升被分析物的信号强度。以上说明，在DDDa的溶剂中，加入一定量的异丙醇、以及较高浓度的三氟乙酸，可以优化被分析物的信噪比。

实施例3

本实施例采用不同浓度的DDDa溶液对精氨酸样品进行了MALDI-MS分析，并进行了效果对比，步骤如下：

1)配制了四种不同浓度的DDDa溶液，溶剂组成均为甲醇/异丙醇/三氟乙酸，其中甲醇/异丙醇/三氟乙酸的体积比为1000:500:15；四种DDDa溶液中DDDa的浓度分别为1mg/mL(a)，2.5mg/mL(b)，10mg/mL(c)，20mg/mL(d)，涡旋震荡混合均匀；

2)配制20uM的精氨酸水溶液，加入0.1％(相对于精氨酸水溶液的体积百分比)的三氟乙酸使其酸化；其中精氨酸为精氨酸标准品；

3)将1uL的精氨酸样品点在MALDI-MS靶板上；

4)分别取不同浓度的DDDa溶液1uL，分别混合加在要分析的精氨酸的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀，之后将靶板置于空气中自然干燥；

5)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析；使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定；MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。

分别采用以上四种不同浓度的DDDa溶液作为基质对精氨酸样品分析得到的MALDI质谱谱图见图3所示，其中(a)、(b)、(c)、(d)分别对应DDDa溶液的浓度为1mg/mL、2.5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL。

图3结果表明：不同浓度的DDDa溶液基质对被分析物的信号强度有较为明显的影响；在DDDa浓度为2.5mg/mL的条件下，能够获得较好的被分析物信号信噪比。

实施例4

本实施例是以DDDa溶液作为基质，对不同类型的小分子化合物标准品溶液进行MALDI质谱分析的试验，被检测的小分子包括：亮氨酸(a)、肉碱(b)、和多巴胺(c)、精氨酸(d)，进行MALDI-MS分析步骤如下：

1)配制DDDa溶液，溶剂组成为甲醇/异丙醇/三氟乙酸(体积比1000:500:15)，其中DDDa浓度为2.5mg/mL，涡旋震荡混合均匀；

2)分别配制5uM的亮氨酸和20uM精氨酸、肉碱、多巴胺水溶液，并分别加入0.1％(相对于样品水溶液的体积百分比)的三氟乙酸使其酸化；

3)分别取步骤2)制得的标准品溶液1uL，分别点在MALDI-MS靶板上；

4)分别取1uL的DDDa溶液，分别混合加在要分析的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀，之后将靶板置于空气中自然干燥；

5)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析，使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定；MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。

以DDDa溶液作为基质，对不同类型的小分子化合物标准品溶液进行MALDI质谱分析的谱图见图4所示。其中(a)、(b)、(c)、(d)分别对应亮氨酸、肉碱、多巴胺和精氨酸的检测结果。

图4结果表明：不同类型的小分子量物质(分子量200Da以下)均能够以DDDa为基质获得稳定的MALDI-MS信号。其中亮氨酸可获得+H和+Na的分子离子峰(m/z 132和154)，精氨酸可获得+H分子离子峰(m/z 175)，肉碱可获得+H分子离子峰(m/z 162)，多巴胺可获得+H分子离子峰(m/z 154)。以上结果说明，DDDa可作为一种较为广泛的适用于小分子MALDI-MS检测的基质物质。同时，在小分子量范围内，DDDa不产生其他有影响的来自基质的干扰信号，有助于提升对被分析物的检出灵敏度。

实施例5

本实施例分别采用DDDa与传统的MALDI-MS基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)对不同的小分子化合物进行了MALDI质谱分析，并进行了分析结果的对比，步骤如下：

1)配制三种不同的基质溶液：

DDDa溶液，溶剂组成为甲醇/异丙醇/三氟乙酸(体积比1000:500:15)，DDDa浓度为2.5mg/mL；

配制DHB、CHCA溶液，溶剂均为水/乙腈/三氟乙酸(体积比500:500:0.1)，浓度均为10mg/mL；

2)分别配制20uM的精氨酸、多巴胺和肉碱的水溶液，分别加入0.1％(相对于样品水溶液的体积百分比)的三氟乙酸使其酸化；

3)分别取步骤2)制得的样品溶液1uL，分别点样在MALDI-MS靶板上；

4)分别取步骤1)制得的不同基质溶液1uL，分别混合加在要分析的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀，之后将靶板置于空气中自然干燥；

5)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析，使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定；MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。

分别以DDDa、DHB、CHCA为基质对精氨酸、肉碱和多巴胺进行MALDI MS分析的质谱谱图见图5所示。图中(a)、(b)、(c)分别为三种不同基质分析精氨酸、肉碱和多巴胺的质谱图。

图5结果表明：传统基质DHB和CHCA在小分子量范围(m/z<200)内产生了极强的基质信号，抑制了目标分析物的出峰，被分析物精氨酸、多巴胺和肉碱在检测中基本不出峰或仅能检出被基质峰严重抑制的信号。相反，以DDDa为基质，则能获得稳定的被分析小分子化合物的MALDI-MS信号。同时，在小分子量范围内，DDDa不产生较强的来自基质的干扰信号，有助于提升被分析物的检出灵敏度。这说明，DDDa比传统基质更适合小分子化合物的MALDIMS分析。

实施例6

本实施例以DDDa溶液为基质，对不同浓度的精氨酸与肉碱进行定量分析，并绘制了标准浓度曲线，步骤如下：

1)配制DDDa溶液，溶剂组成为甲醇/异丙醇/三氟乙酸(体积比1000:500:15)，DDDa浓度为2.5mg/mL，涡旋震荡混合均匀；

2)分别配制40、20、10、5、2uM的精氨酸和肉碱水溶液，分别加入0.1％(相对于样品水溶液的体积百分比)的三氟乙酸使其酸化；

3)将1uL的标准品样品点在MALDI-MS靶板上；

4)将1uL的DDDa溶液分别混合加在要分析的样品点上，用移液枪反复吸打混合溶液几次，使得样品与基质溶液混合均匀。之后将靶板置于空气中自然干燥；

5)待样品完全干燥后，将靶板载入MALDI-MS质谱仪进行质谱分析，使用SHIMADZUAXIMA RESONANCE MALDI-IT-TOF质谱仪，在反射模式下进行鉴定，MALDI质谱是在激光强度为100-120的阳离子模式下累积并平均化400次shots得到的，使用Shimadzu BiotechLaunchpad软件(2.9版本)进行谱图采集和处理。之后，以精氨酸和肉碱的浓度为横坐标，以各个浓度的质谱信号强度为纵坐标，绘制精氨酸和肉碱的标准浓度曲线。

得到的精氨酸和肉碱的标准浓度曲线图见图6所示，其中(a)为精氨酸的标准曲线图，(b)为肉碱的标准曲线图。

图6结果表明：以DDDa为MALDI-MS基质，被分析小分子的质谱信号强度在一定浓度范围内与其浓度呈线性相关性，线性相关系数均在0.99以上，说明DDDa为基质进行小分子分析的MALDI-MS方法能够用于样品中小分子的定量分析；这是采用大多数传统的MALDI-MS基质所无法获得的分析效果，充分说明了DDDa可以作为小分子化合物MALDI-MS检测的基质使用。

由以上实施例可知，本发明提供的DDDa可以作为MALDI-MS检测的基质使用，用于分子量在300Da以下的有机小分子的定性和定量检测，特异性高、方法准确、操作简便，且灵敏度高。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。