抑瘤素M在制备促进角膜上皮损伤修复的药物中的应用

技术领域

本发明属于眼部药品制备技术领域，具体涉及抑瘤素M在制备促进角膜上皮损伤修复的药物中的应用。

背景技术

抑瘤素M(Oncostatin M,OSM)是一种细胞因子，属于白介素-6家族，在炎症反应、组织损伤与再生、器官发育及免疫调控等方面中都发挥重要作用。免疫细胞作为角膜缘干细胞微环境里必不可少的一部分，在调控角膜缘干细胞功能、参与角膜上皮损伤修复方面起着不可忽视的作用。抑瘤素M主要由微环境中的免疫细胞分泌，例如单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞等，通过和抑瘤素M受体(OMSR)结合，进而激活JAK/STAT信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路，这两条通路在细胞增殖、生长和分化等方面都有重要的调节作用。

角膜作为眼球表面的独特的透明组织，是视觉系统的重要组成部分，约占光折射的70％。其中，角膜上皮位于角膜最外层，在保持眼表湿润、抵抗感染、保持角膜透明度和光学功能方面发挥着关键作用。角膜上皮结构和屏障功能的完整性对于维持清晰稳定的视力至关重要，但由于其暴露在外部环境中，最有可能因各种刺激而受损。

目前临床上的药物和手术治疗手段根据角膜上皮损伤程度的不同，主要为使用抗菌消炎或促进伤口愈合的含有氨基酸、低分子肽、寡糖等物质的药物点眼、使用治疗性角膜接触镜、羊膜覆盖、睑裂缝合、自体血清和角膜缘干细胞移植等方式。然而这些治疗手段仍具有一定的局限性，单纯外用药物治疗效果不够，而手术治疗的操作难度较大，费用较高。因此，基于大分子靶标特异性的特点，开发有效且操作便捷的大分子药物来加速和改善角膜上皮伤口愈合，具有紧迫的现实意义。

发明内容

针对角膜上皮损伤，采用单纯外用药物治疗效果不够，而手术治疗的操作难度较大，费用较高的上述问题，本发明提供抑瘤素M在制备促进角膜上皮损伤修复的药物中的应用，通过负载抑瘤素M的药物能够明显促进小鼠角膜上皮细胞修复，成本较低，并且没有发现并发症。

本发明是通过以下技术方案实现的：

抑瘤素M在制备促进角膜上皮损伤修复的药物中的应用。

进一步的，所述抑瘤素M为OSM重组蛋白。

进一步的，所述角膜上皮损伤是机械损伤引起的角膜上皮缺损。

进一步的，所述抑瘤素M在药物中的浓度为0.05-5μg/mL，优选所述抑瘤素M在药物中的浓度为，0.1-3μg/mL，更优选0.1-1μg/mL。

进一步的，所述促进角膜上皮损伤修复的药物为眼部注射剂或眼部外用药。

进一步的，所述的眼部外用药的剂型为眼用液体或眼用半固体制剂。

进一步的，所述眼用液体为滴眼剂或洗眼液，所述眼用半固体制剂为眼膏剂、眼用乳膏剂或眼用凝胶剂。

进一步的，所述滴眼剂为氧化海藻酸钠滴眼剂。

进一步的，所述氧化海藻酸钠滴眼剂的制备方法包括如下步骤：将氧化海藻酸钠与抑瘤素M混合均匀制成水溶液，28-40℃温度范围内振荡3-8h，即得负载抑瘤素M的缓释材料；

进一步的，30-38℃度范围内振荡，优选37℃恒温振荡。

进一步的，采用摇床振荡。

进一步的，振荡4-7h，优选6h。

进一步的，所述氧化海藻酸钠与抑瘤素M混合均匀制成的水溶液中，氧化海藻酸钠的浓度为15-40mg/mL，抑瘤素M的浓度为0.05-5μg/mL。

进一步的，所述氧化海藻酸钠的浓度为20-30mg/mL，优选25mg/mL。

本发明的有益效果：

抑瘤素M受体在人和小鼠的角膜缘干细胞表达富集。因此，OSM会对角膜缘干细胞产生调控作用从而促进角膜上皮损伤修复。本发明能够有效促进角膜上皮损伤修复，缩短治疗时间，且未发现并发症；本发明以抑瘤素M应用于制备促进角膜上皮损伤修复的药物，操作简单，具有广阔的开发与应用前景。

附图说明

图1为动物实验1小鼠的角膜修复情况及角膜上皮缺损面积百分比；

图2为动物实验2小鼠的角膜修复情况及角膜上皮缺损面积百分比；

图3为动物实验3小鼠的角膜修复情况及角膜上皮缺损面积百分比。

具体实施方式

下面结合具体实施例及附图对本发明做进一步详细说明。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。抑瘤素M(OSM)重组蛋白的来源为：通过商业途径购入的武汉云克隆科技股份有限公司的RPA110Mu01，产品为粉末状。

实施例1

将抑瘤素M重组蛋白粉末用生理盐水溶解，制得浓度分别为0.05μg/mL、0.1μg/mL、1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL的OSM重组蛋白溶液，作为促进角膜上皮损伤修复的眼部注射剂。

动物实验1

(1)角膜上皮缺损动物模型建立：采用腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉8周龄C57bl/6雄性小鼠(50mg/kg)，利多卡因局部应用于眼表。使用直径2.5mm环钻标记小鼠中央角膜上皮并用上皮刮刀进行刮除。

(2)给药组：在小鼠刮除角膜上皮前24小时、0小时、后24小时，通过结膜下注射5μL每眼0.1μg/mL OSM重组蛋白溶液，刮除上皮后在0小时、24小时，36小时观察损伤面积。

对照组：在小鼠刮除角膜上皮前24小时、0小时、后24小时，通过结膜下注射5μL每眼生理盐水，刮除上皮后在0小时、24小时，36小时观察损伤面积。

结果如图1所示。给药组(0.1μg/mL OSM)损伤修复速度较快，36小时角膜上皮损伤面积减小至0。

实施例2

(1)向离心管中加入25mg氧化海藻酸钠和1mL生理盐水；

(2)向步骤(1)的离心管中加入用生理盐水预先制备的浓度为100μg/mL的10μLOSM重组蛋白溶液；

(3)将盛放上述混合溶液的离心管37℃摇床放置6h，即得负载1μg/mL OSM重组蛋白的缓释材料。所得缓释材料常温下为流动性较好的、透明的、无粘性的液体。

实施例3

参照实施例2的方法，制备负载0.1μg/mL OSM重组蛋白的缓释材料。

动物实验2

(1)角膜上皮缺损动物模型建立：采用腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉8周龄C57bl/6雄性小鼠(50mg/kg)，利多卡因局部应用于眼表。使用直径2.5mm环钻标记小鼠中央角膜上皮并用上皮刮刀进行刮除。

(2)给药组1：使用负载1μg/mL OSM重组蛋白的缓释材料每隔6h点眼，连续点眼6次；给药组2：使用负载0.1μg/mL OSM重组蛋白的缓释材料每隔6h点眼，连续点眼6次；对照组：使用25mg/mL氧化海藻酸钠点眼，连续点眼6次。分别于建模0h、12h、24h使用荧光素钠染色观察每组小鼠上皮损伤修复情况。

结果如图2所示，0.1μg/mL和1μg/mL两个浓度的负载OSM重组蛋白的缓释材料均能够有效促进角膜上皮的损伤修复。

动物实验3

(1)角膜上皮缺损动物模型建立：采用腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉8周龄C57bl/6雄性小鼠(50mg/kg)，利多卡因局部应用于眼表。使用直径2.5mm环钻标记小鼠中央角膜上皮并用上皮刮刀进行刮除。

(2)给药组：使用1μg/mL负载OSM重组蛋白的缓释材料每隔6h点眼，连续点眼6次。海藻酸钠组：使用25mg/mL氧化海藻酸钠每隔6h点眼，连续点眼6次。对照组：使用生理盐水点眼，连续点眼6次。分别于建模0h、12h、24h和36h使用荧光素钠染色观察各组小鼠上皮损伤修复情况。

结果如图3所示，负载抑瘤素M的缓释材料能够有效促进角膜上皮的损伤修复。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。