重组碱性磷酸酶用于治疗脓毒症相关的急性肾损伤的用途

背景技术

在动物体中，肾执行若干功能，如废物的排泄、酸-碱稳态、渗透压调控、血压调控和激素分泌。为了使肾能够执行这些任务，尽管肾尺寸相对较小，但是肾接收大约20％的心脏输出。因此，破坏到达肾的血流(肾血流，RBF)对肾的许多功能具有直接影响。例如，然后可发生含氮废物的排泄减少以及流体和电解质平衡的紊乱。从长期看，RBF减少，还有其他毒性事件，如局部缺血(再灌注损伤)、使用造影剂或(其他)肾毒性药物(例如抗生素)，可对肾有很大压力，以至于它导致急性肾损伤(AKI)。

在重症监护病房(ICU)中的多达60％的患者中观察到急性肾损伤(AKI)，并且其发生率正在提高(Hoste等人Intensive Care Med 2015；41:1411-23；Hoste等人CriticalCare；10；Nisula等人Intensive Care Med 2013；39:420-8；Vincent等人Critical CareMedicine 2006；34:344-53)。脓毒症患者中AKI的发展与提高的死亡率相关(Kellum等人Critical Care Medicine 2016；193:281-7)，而存活者处于发展慢性肾病的风险(Chawla等人Kidney Int 2011；79:1361-9；Oppert等人Nephrol Dial Transplant 2008；23:904-9；Vaara等人Crit Care 2012；16:R197)，导致对于患者和社会而言的巨大负担。

预防和/或充分治疗AKI是非常重要的，因为第一，AKI伴随着高成本、发病率和死亡率，和第二，延长的AKI可导致慢性肾损伤(CKI)，可能导致不可逆的肾功能丧失。另外，已经获得CKI的个体更倾向于(再次)获得AKI，其然后被称为“慢性肾病基础上伴发急性肾损伤(acute on chronic kidney injury)”。因为CKI患者中的肾功能已经降低，所以慢性肾病基础上伴发急性肾损伤可使肾功能降低至临界阈值以下。

发明内容

本公开提供了用于治疗有需要的受试者的脓毒症相关的急性肾病损伤(SA-AKI)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的碱性磷酸酶(AP)，其中(i)所述受试者在用AP治疗之前具有≤60ml/min的ECC(内生肌酸酐清除)率或在用AP治疗之前具有≤60ml/min的eGFR(估算的肾小球滤过率)，(ii)所述AP以至少一个500U/kg至2,000U/kg的剂量施用，并且(iii)所述AP的施用导致肾功能提高。

在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前具有中度肾损伤(15ml/min-60ml/min的ECC)。在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前具有重度肾损伤(<15ml/min的ECC)。在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前不具有轻度肾损伤(>60ml/min的ECC)。在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前具有15ml/min-60ml/min的eGFR。在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前具有<15ml/min的eGFR。在一些方面，所述受试者在用AP治疗之前不具有>60ml/min的eGFR。在一些方面，所述AP是人AP。在一些方面，所述AP是重组AP。在一些方面，所述重组AP是嵌合AP。在一些方面，所述嵌合AP与RecAP(SEQ ID NO:1)具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。

在一些方面，肾功能提高包括相对于没有治疗情况下的ECC，ECC的提高；或相对于没有治疗情况下的eGFR，eGFR的提高。在一些方面，在AP施用之前少于96小时检测到脓毒症。在一些方面，在SA-AKI检测之前少于72小时检测到脓毒症。

在一些方面，在检测到脓毒症之后的24小时内开始治疗。在一些方面，在检测到SA-AKI之后的24小时内开始治疗。在一些方面，每日施用一次AP。在一些方面，静脉内施用AP。在一些方面，以每日三个剂量施用AP。在一些方面，所述AP剂量是0.8mg/kg或1.6mg/kg的RecAP，例如在本公开中使用的临床级RecAP。在一些方面，所述AP剂量是500U/kg或1000U/kg的RecAP，例如，在本公开中使用的临床级RecAP。

在一些方面，至少一个剂量的AP的施用导致肾替代疗法(RRT)在经历RRT的受试者中的持续时间缩短或停止。在一些方面，至少一个剂量的AP的施用导致所述受试者中的肾小球滤过率(GFR)或eGFR保持或提高。

附图说明

图1是示出建议的RecAP剂量组的表。

图2示出RecAP氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。

图3示出STOP-AKI研究的时间线，包括剂量方案和计划表，以确定AUC

图4是示出试验中患者的招募、随机化和随访的流程图。缩写：AKI(急性肾损伤)、AUC(曲线下时间校正面积)、ECC(内生肌酸酐清除)、ICF(知情同意书)、ITT(意向性治疗)、IV(静脉内)、MAKE(主要不良肾事件)、NS(未指定)、RecAP(具有SEQ ID NO:1的序列的人重组碱性磷酸酶)、RRT(肾替代疗法)、SA-AKI(脓毒症相关的急性肾损伤)、SCr(血清肌酸酐)。

图5是呈现试验中所有组的人口统计学和基线特征的表，显示组之间没有任何基线特征的显著差异。对于具有缺失数据的变量，总结数据是基于调整的数量。身体质量指数(BMI)是体重(千克)除以身高(米)的平方。关于急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)的评分在0-71的范围内，更高的评分指示更高的疾病严重程度。关于序贯器官衰竭评估(SOFA)的评分在0-24的范围内，更高的评分指示更严重的功能障碍。关于简化急性生理学评分(SAPS)的评分在0-163的范围内，更高的评分指示更高的疾病严重程度。根据CKD-EPI(慢性肾病流行病学合作)公式：141*min(Scr/κ,1)α*max(Scr/κ,1)-1.209*0.993年龄*1.018[在女性的情况下]*1.159[在黑人的情况下]，计算估算的肾小球滤过率(eGFR)。Scr是血清肌酸酐(mg/dL)，κ是0.7(对于女性)和0.9(对于男性)，α是-0.329(对于女性)和-0.411(对于男性)，min指示Scr/κ或1的最小值，并且max指示Scr/κ或1的最大值。(www.kidney.org/content/ckd-epi-creatinine-equation-2009)。根据AKI网络定义(www.akinet.org/akinstudies.php)，将急性肾损伤(AKI)阶段分层。描绘了中值和四分位值，或数量和百分数。

图6是示出RecAP浓度的线性提高的AUC相比于剂量曲线图。与健康受试者相比，STOP-AKI临床试验中患者的暴露稍微更高。在剂量范围(0.4mg/kg-1.6mg/kg)内观察到剂量线性和比例性。

图7是示出对应于安慰剂以及0.4mg/kg、0.8mg/kg和1.6mg/kg的RecAP剂量的肌酸酐清除AUC

图8是示出主要终点和次要终点的表(安慰剂和RecAP 0.6mg/kg组)。AUC

§RRT发生率指示随机分组之后需要RRT的患者的百分比。

‖末次观测值结转。

*MAKE 28：在第28天之前或在第28天接受RRT或在第28天之前或在第28天死亡。满足至少一个标准的比例。

§§表示绝对差异(对于连续变量)。

图9A示出RecAP对内生肌酸酐清除(ECC)的效果。与安慰剂相比，RecAP对ECC的治疗效果总曲线：P＝0.036。对于缺失值，应用末次观测值结转(LOCF)和插值法。*描绘P<0.05，#描绘P＝0.06。

图9B示出RecAP对血尿素氮(BUN)清除的效果。与安慰剂相比，RecAP对BUN清除的治疗效果总曲线：P＝0.033。对于缺失值，应用末次观测值结转(LOCF)和插值法。*描绘P<0.05，#描绘P＝0.06。

图10示出到第90天，来自随机分组的SA-AKI受试者(安慰剂组和RecAP 1.6mg/kg组)的存活曲线的Kaplan-Meier概率。与安慰剂相比，RecAP对第28天死亡率的效果：P＝0.02。与安慰剂相比，RecAP对第90天死亡率的效果：P＝0.03。

图11示出在施用0.4mg/kg、0.8mg/kg或1.6mg/kg剂量的RecAP或安慰剂之后90天内，SA-AKI受试者的存活概率。

图12示出所有治疗组(0.4mg/kg、0.8mg/kg或1.6mg/kg剂量的RecAP，或安慰剂)的主要终点和次要终点。

图13A示出在ICU(左图)和第90天(右图)，通过EuroQoL(EQ5D)评分测量的生活质量(QoL)评估。

图13B示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的肺功能参数(P/F比率、潮气量和PEEP)。数值显示在图表下面。

图13C示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的肝功能参数(丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶活性)。数值显示在图表下面。

图13D示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的肝功能参数(γ-谷氨酰基转移酶活性和胆红素水平)。数值显示在图表下面。

图13E示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的LDH活性。数值显示在图表下面。

图14示出事后多变量分析的结果。

图15A示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的C-反应蛋白(CRP)浓度(mg/L)。数值显示在图表的右侧。

图15B示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的白细胞介素6(IL-6)浓度(pg/ml)。数值显示在图表的右侧。

图15C示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的白细胞介素18(IL-18)浓度(pg/ml)。数值显示在图表的右侧。

图15D示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的脂多糖结合蛋白(LBP)浓度(μg/ml)。数值显示在图表的右侧。

图15E示出对于1.6mg/kg RecAP剂量和安慰剂组，描绘为中值的肾损伤分子1(KIM-1)浓度(pg/ml)。数值显示在图表的右侧。

图15F示出在AKI的首次诊断与开始研究药物输注之间的持续时间(小时)对主要终点ECC的影响。

图15G示出通过APACHE II评分的基线疾病严重程度对主要终点ECC的影响。

图15H示出通过基线C-反应蛋白(CRP)浓度(mg/L)测量的炎症对主要终点ECC的影响。

图15I示出通过基线白细胞介素6(IL-6)浓度(pg/ml)测量的炎症对主要终点ECC的影响。

图15J示出基线处钠排泄分数(FeNa的％)对主要终点ECC的影响。

图15K示出基线肾损伤分子1(KIM-1)浓度(pg/ml)对主要终点ECC的影响。

图15L示出基线肾功能在主要终点ECC上的差异，描绘为中值。

图16示出在STOP-AKI研究期间观察到的治疗中出现的不良事件。

图17示出STOP-AKI研究中根据肾损伤的严重程度分层的受试者的亚组分析。阈值或截断值基于ECC。

图18示出两种不同的Cox平行风险模型(CoxPH)的系数和模型拟合统计数据。(模型1)作为基线ECC(其中将基线处和第1天的测量值求平均(MeanBaseECC；在此计算中忽略缺失值))的连续函数的预测STOP-AKI研究中的总体存活(OS)的CoxPH模型。(模型2)基于MeanBaseECC，预测如下的3个不同组中的OS的CoxPH模型；<15作为参考组，>＝15但<60作为重度-轻度组，并且>＝60作为正常组。

图19示出根据作为平均基线ECC(其中将基线和第1天的测量值求平均)的函数的连续CoxPH模型(参见图18中的模型1)的总体存活的风险比(HR)。根据在不同基线水平(直线)下的模型与标准误差(虚线)一起计算相对于群体中的平均ECC(46ml/min)的HR，并与参考水平(HR为1)(虚线水平参考线)进行比较。

图20示出根据在平均基线ECC的不同值(ml/min)(其中将基线和第1天的测量值求平均)下的连续CoxPH模型(参见图18中的模型1)的总体存活的风险比(HR)。对于根据CKD标准的每个组，将平均基线ECC的中值，以及每组中的患者数量，和根据CoxPH模型，相对于平均基线ECC平均值(46ml/min)的OS的HR及其标准误差(seHR)制表。另外，将CKD标准界限(即“肾衰竭”(重度肾损伤)与“重度-轻度”(中度至重度肾损伤)之间为15ml/min，随后“正常”(轻度损伤或正常)的界限为60ml/min)与相应的模型HR和标准误差一起制表。

图21示出Kaplan Meier死亡时间曲线(每个基线eGFR亚组)。基线eGFR用CKD-EPI(慢性肾病流行病学合作)公式进行测量。

图22示出Kaplan Meier死亡时间曲线(亚组中recAP相比于安慰剂，其中基线eGFR高于60mL/min(右图)和低于60mL/min(左图))。基线eGFR用CKD-EPI(慢性肾病流行病学合作)公式进行测量。

具体实施方式

脓毒症相关的AKI(SA-AKI)是与其他病理生理应答同时发生、迅速导致肾损害的具有炎性、肾毒性和缺血性损伤的多因子综合征(Bonventre等人J Clin Invest2011；121:4210-21；Gomez等人Shock 2014；41:3-11)。目前，尚无批准的药物干预可用于预防或治疗AKI(Joannidis等人Intensive Care Medicine 2017；43:730-49)。碱性磷酸酶(AP)最初通常被认为是脓毒症的新型治疗(Poelstra等人American Journal of Pathology 1997；151:1163-69.；Verweij等人Shock 2004；22:174-9)。在两项小型临床试验中，牛AP施用改善了脓毒症患者的肾功能(Heemskerk等人Crit Care Med2009；37:417-23、e1；Pickkers等人Crit Care 2012；16:R14)。

STOP-AKI临床试验是在具有脓毒症相关的急性肾损伤的危重成年人中进行的国际性的随机、双盲、安慰剂对照的四组平行组剂量探索的适应性IIa/IIb期多中心研究。在这项研究中，在欧盟和北美11个国家的53个站点招募总计301名患者。研究的四组由接受0.4mg/kg、0.8mg/kg、1.6mg/kg的RecAP或安慰剂的患者组成。中期分析之后，研究以1.6mg/kg的RecAP作为治疗继续进行。

RecAP是组合两种人同工酶(肠和胎盘AP)的性质的嵌合AP(Kiffer-Moreira等人PLoS One 2014；9:e89374)。用胎盘AP(其具有最长半衰期)的冠状结构域替代肠AP(最具生物活性的同工酶)的冠状结构域，产生高度稳定的生物活性酶(Kiffer-Moreira等人PLoSOne 2014；9:e89374)。参见例如，美国专利号US8586032和US8557545，以及美国专利申请公开号US20170009216和US20160250299，其公开内容以引用的方式整体并入本文。

与安慰剂相比，RecAP 1.6mg/kg未影响第一周的肌酸酐清除率或肾替代治疗率。然而，在接受RecAP的患者中，第21天(P＝0.02)和第28天(P＝0.01)的内生肌酸酐清除的改善更为显著，并且第60天(P＝0.045)和第90天(P＝0.03)的主要不良肾事件的发生率较低。在RecAP治疗的患者中全因第28天死亡率为14.4％，相比于安慰剂治疗的患者中26.7％(P＝0.02)。未在组之间观察到(严重)不良事件的显著差异。RecAP似乎安全并且耐受良好。

研究的主要观察结果是，尽管短期肾功能未受影响，但是观察到了RecAP治疗带来的出人意料的长期有益作用。这些出人意料的观察结果表明，与安慰剂相比，用RecAP治疗产生增强的和持续的肾功能恢复以及更好的存活。

长期作用取决于肾功能损害的严重程度而变化，即受试者的一些特定亚组对AP疗法的反应特别好。因此，根据例如肾功能的特定标志物和/或生物标志物(例如，ECC或eGFR)对患者进行分层允许鉴定AP施用对特定亚组的特定作用。定义这些亚组中的每个亚组的一个或多个参数(例如，一系列阈值，如ECC或eGFR阈值)可用于例如评价阳性结果的可能性，以选择患者进行治疗或做出与AP治疗有关的决定(例如，调整剂量)。例如，如果受试者具有中度至重度肾损伤(例如，对应于15mg/ml至60ml/min ECC)，则存在RecAP的统计上显著的作用，其导致改善的肾功能(如通过相对于安慰剂改善的肌酸酐清除来证明)。如果受试者具有重度肾损伤(对应于例如<15ml/min的基线ECC)，则存在统计上显著的长期效果，导致改善的存活。如果受试者具有≤60eGFR，也存在统计上显著的长期效果，导致改善的存活。

本公开的目的是提供用于保持或改善受试者的肾功能的方法(尤其是在受试者经历具有降低肾功能的风险的治疗或患有脓毒症或处于脓毒症风险的情况下)。本公开的另一个目的是预防或缩短肾替代疗法(RRT)的持续时间，以提高肾肌酸酐清除和/或提高存活。

因此，本公开涉及碱性磷酸酶(AP)，例如RecAP，在保持或改善具有肾损伤(例如急性肾损伤(AKI))的受试者，并且特别是具有脓毒症相关的AKI(SA-AKI)的受试者的肾功能的用途。本公开提供，例如，用于治疗具有肾损伤(例如，SA-AKI)的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用AP，例如RecAP。在一些方面，施用至受试者的AP的每个剂量包含至少500U/kg(在使用临床级RecAP的情况下为0.8mg/kg)。在一些特定方面，每个AP剂量是至少1,000U/g(在使用临床级RecAP的情况下为1.6mg/kg)。

在一些方面，如果存在肾损伤，例如SA-AKI，并且已经确定肾损伤为中度至重度或重度，则向患者施用AP，例如RecAP。因此，在本公开的一些方面，本文公开的方法包括在用AP治疗之前，例如通过测定肾小球滤过率或诸如ECC或eGFR的替代测量来测量肾损伤的严重程度，以确定受试者是患有中度至重度肾损伤还是重度肾损伤。

在一些方面，如果基线ECC介于约15ml/min和约60ml/min之间，则肾损伤(例如SA-AKI)被分类为中度至重度。在一些方面，如果基线ECC低于约15ml/min，则将肾损伤(例如SA-AKI)分类为重度。在其他方面，可使用其他诊断性测量值(例如eGFR)来确定肾损伤的严重程度。在本公开的一些方面，如果确定肾损伤为轻度损伤(例如，如果>60ml/min基线ECC)或如果>60ml/min基线eGFR，则不向受试者施用AP治疗。在此方面，术语“或”是指ECC或eGFR或两者，在所定义的范围内或低于或超出所定义的阈值。如本领域技术人员可理解的，ECC和eGFR是相关的，并且例如具有<15ml/min的ECC的人也可能(也)具有<15ml/min的eGFR，反之亦然。对于>60ml/min的ECC相对于>60ml/min的eGFR以及介于15ml/min-60ml/min之间的ECC相对于介于15ml/min-60ml/min之间的eGFR，也是这样。然而，ECC与eGFR值之间可能存在一些差异，并且可使用任一个(优选eGFR)来确定患者是否可以从AP的施用中受益。

在一些方面，预防性地施用AP，例如RecAP。在一些方面，本文公开的方法包括向受试者施用至少一个剂量的AP，例如RecAP，其中每个剂量是至少500U/kg(对于所使用的临床级RecAP为0.8mg/kg)或1000U/kg(对于所使用的临床级RecAP为1.6mg/kg)。在一些具体方面，剂量方案包括通过静脉内输注以每日剂量施用0.5mg/kg至2mg/kg的AP(例如RecAP)，持续至少三天。在一些具体方面，剂量方案包括通过静脉内输注以每日剂量施用0.5mg/kg至2mg/kg的AP(例如RecAP)，持续至少三天。

为了能够更容易地理解本公开内容，首先定义某些术语。附加的定义在整个详细说明中列出。

I.定义

在本说明书和随附的权利要求书中，除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物。术语“一(a/an)”以及术语“一个或多个”和“至少一个”可在本文中互换使用。

此外，当在本文中使用时将“和/或”视为对两个指定特征或组分中的每一者(在有或没有另一者的情况下)的特定公开。因此，如本文中诸如“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中所用的术语“和/或”意图涵盖以下方面的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。

无论在什么情况下在本文用语言“包含”描述方面时，还提供了关于“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的其他类似方面。

结合整个说明书和权利要求中的数值使用的术语“约”表示本领域技术人员熟悉且可接受的准确性区间。一般来说，这种准确性区间为±15％。

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语均具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。

单位、前缀和符号以它们的国际单位制(SI)可接受的形式来表示。

数值范围包括限定所述范围的数量。在列举值的范围的情况下，应理解，在所述范围的所列举的上限和下限之间的每个中间整数值及其每个分数连同与此类值之间的每个子范围也一起具体地公开。任何范围的上限和下限都可独立地包括在所述范围中或者从所述范围中排除，并且其中包括任一限值、不包括任一限值或包括两个限值的每个范围也涵盖在本发明内。在明确列举值的情况下，应该理解的是，与所列举的值大致相同的数量或量的值也在本发明的范围内。在公开了组合的情况下，所述组合的要素的每个子组合也具体地公开并且在本发明的范围内。相反，在单独公开不同要素或要素组的情况下，还公开了其组合。在本发明的任何要素被公开为具有多个替代方案的情况下，在此还公开了其中每个替代方案单独地或与其他替代方案组合排除在外的本发明的示例；本发明的多于一个要素可以具有这样的排除，并且在此公开具有这种排除的要素的全部组合。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“……的治疗(treatmentof)”是指(i)降低疾病或病症，例如AKI(例如SA-AKI)的可能性或风险，(ii)降低疾病或病症，例如AKI(例如SA-AKI))的发生；(iii)降低疾病或病症，例如AKI(例如SA-AKI))的严重程度(例如，减轻症状)，或iv)它们的组合。

例如，治疗可指当施用至受试者时疗法用于预防或降低肾损伤(例如SA-AKI)发生的风险(例如，在被诊断具有脓毒症或处于脓毒症风险的受试者中)和/或用于治愈或减轻肾损伤(例如SA-AKI)的症状、病征或病因的能力。与未治疗的(或安慰剂治疗的)组相比，治疗还指缓解或减轻至少一种临床症状和/或抑制或延迟病况的进展和/或预防或延迟疾病或病患的发作。因此，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“……的治疗(treatmentof)”(或语法等同术语)是指预防性治疗方案和治疗性治疗方案两者。在肾疾病的情况下，优选的是，相对于未用所述AP治疗的受试者，用如本文公开的方法用AP治疗后的受试者肾功能改善或肾功能下降较少。

如本文所用，术语“保持”包括预防肾功能的降低、减慢肾功能的降低、停止肾功能的降低和/或至少部分地逆转肾功能的降低。术语“提高”不必限于将所述肾功能提高至等于或高于发生所述治疗之前的值。它包括部分恢复肾功能。

术语“具有降低肾功能的风险的治疗”通常用于指当将至少一个肾相关参数的值与所述参数的公认或平均(实验室)值进行比较时或者通过将所述参数与进行所述治疗之前的值进行比较，通过所述治疗具有降低肾功能的风险的治疗。例如，如果受试者(优选人类)的尿液中蛋白质的量显著高于公认或平均(实验室)值，则认为所述肾功能“降低”。相应的分析既可在实验室中进行，也可在家庭环境中进行。例如，自2006年9月以来，荷兰“Nierstichting”引入了一种简单的检验(称为“肾检查”(“Niercheck”))，其可在家中进行以检验肾是否正常运作。这种检验是例如针对尿液中蛋白质的量。

如本文所用的术语“受试者”或“患者”是指需要肾损伤(例如SA-AKI)的疗法或诊断的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。如本文所用，术语“受试者”或“患者”包括任何人或非人动物。如本文所用，诸如“具有SA-AKI的患者”或“具有脓毒症的患者”的短短语包括将受益于如本文公开的AP疗法的施用的受试者，如哺乳动物受试者。

在本公开的一些方面，受试者是初次接受治疗的

在另一方面，受试者在被诊断为具有肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如脓毒症)之前已经接受了疗法和/或一剂或多剂治疗剂。

在一些方面，如果受试者的基线ECC或eGFR低于预定ECC或eGFR阈值水平，或者如果基线ECC或eGFR高于预定ECC或eGFR阈值水平，或者如果基线ECC或eGFR在预定范围内，则可向受试者施用至少一个治疗有效剂量的AP，例如RecAP。

如本文所用的术语“治疗剂”和“药物”还指向具有疾病或病症，例如肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的受试者施用以产生所需的(通常有益的)效果的任何治疗活性物质。治疗剂也可以是前药，当施用至受试者时，其代谢成所需的治疗活性物质。在一些方面，治疗剂是预防剂。此外，治疗剂可在药学上配制。治疗剂还可以是或包含通过某种其他形式的能量(如光能或超声能)或通过其他可全身性施用的循环分子激活的放射性同位素或试剂。

在本公开的一些方面，用于治疗、预防肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)或改善其症状的治疗剂可包含AP，例如RecAP；单独或与一种或多种通常用于治疗肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的标准治疗剂组合。

如本文所用，“治疗有效”量是向具有疾病或病症，例如肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的受试者提供一些改善或益处的治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是提供疾病或病症，例如肾损伤，例如SA-AKI或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的至少一种临床症状的一定缓解、缓和和/或减轻的量。

可通过本公开的组合物、方法、具体剂量方案治疗的与肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)相关的临床症状是本领域技术人员众所周知的。此外，本领域技术人员将了解，治疗作用不需要为完全的或根治的，只要向受试者提供一些益处即可。在一些方面，术语“治疗有效”是指能够改变有需要的患者中生物标志物水平(例如ECC或eGFR)的治疗剂的量。

如本文所用，“足够量”或“足以在具有疾病或病症，例如肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的患者中实现特定结果的量”是指有效产生所需效果的治疗剂(例如AP，例如RecAP)的量，所述效果任选地是治疗效果(即，通过施用治疗有效量)。在一些方面，这种特定结果是肾功能的改善或存活的提高。

如本文所用，术语“医疗保健提供者”是指直接与活受试者如人类患者相互作用和对其帮助的个体或机构。医疗保健提供者的非限制性实例包括医生、护士、技术人员、治疗学家、药剂师、顾问、可选的医学从业者、医疗机构、医生办公室、医院、急诊室、诊所、紧急护理中心、可选的医学诊所/机构以及任何其它提供以下的实体：一般和/或专门的治疗、评价、维持、疗法、药物治疗和/或涉及所有或任何部分的患者的健康状态的建议，包括但不限于一般医疗、专门医疗、手术和/或任何其它类型的治疗、评价、维持、疗法、药物治疗和/或建议。

如本文所使用，术语“临床实验室”是指用于检验或加工源自活受试者(例如，人类)的材料的机构。加工的非限制性实例包括对源自人体的材料的生物检验、生化检验、血清检验、化学检验、免疫血液检验、血液检验、生物物理检验、细胞检验、病理检验、遗传检验或其它检验，以用于提供信息(例如，用于诊断、预防或治疗活受试者(例如，人类)的任何疾病或损伤或评价活受试者(例如，人类)的健康)的目的。这些检验还可以包括收集或以另外的方式获得样品、制备、确定、测量或以另外的方式描述活受试者(例如，人类)的身体中或从活受试者(例如，人类)的身体获得的样品中的各种物质的存在与否的程序。

如本文所用，术语“医疗保健福利提供者”涵盖提供、呈现、赋予、全部或部分地支付或以其他方式关于使患者获得一项或多项保健福利、福利计划、健康保险和/或保健费用账户计划的个人团体、组织或组。

在一些方面，医疗保健提供者可管理或指示另一医疗保健提供者施用疗法以预防、治疗或改善疾病或病症，例如肾损伤(例如SA-AKI)或可导致肾损伤的疾病或病况(例如，脓毒症)的症状。医疗保健提供者可实施或指示另一医疗保健提供者或患者执行以下行为：获得样品；加工样品；递交样品；接收样品；转移样品；分析或测量样品；定量样品；提供在分析/测量/定量样品之后获得的结果；接收在分析/测量/定量样品之后获得的结果；比较/评分在分析/测量/定量一种或多种样品之后获得的结果；提供来自一种或多种样品的比较/评分；获得来自一种或多种样品的比较/评分；施用疗法(例如，AP，如RecAP)；开始施用疗法；停止施用疗法；继续施用疗法；暂时中断施用疗法；提高施用的治疗剂的量；减少施用的治疗剂的量；继续施用一定量的治疗剂；提高施用治疗剂的频率；减少施用治疗剂的频率；维持治疗剂的相同给药频率；通过至少另一疗法或治疗剂替代一种疗法或治疗剂；将一种疗法或治疗剂与至少另一疗法或额外的治疗剂组合。

在一些方面，医疗保健福利提供者可批准或拒绝例如收集样品；加工样品；递交样品；接收样品；转移样品；分析或测量样品；定量样品；提供分析/测量/定量样品之后所获得的结果；转移分析/测量/定量样品之后所获得的结果；比较/评分分析/测量/定量一个或多个样品之后所获得的结果；转移来自一个或多个样品的比较/评分；施用疗法或治疗剂；开始施用疗法或治疗剂；停止施用疗法或治疗剂；继续施用疗法或治疗剂；暂时中断施用疗法或治疗剂；提高施用的治疗剂的量；减少施用的治疗剂的量；继续施用一定量的治疗剂；提高施用治疗剂的频率；减少施用治疗剂的频率；维持治疗剂的相同给药频率；通过至少另一种疗法或治疗剂替代一种疗法或治疗剂；或将一种疗法或治疗剂与至少另一种疗法或额外的治疗剂组合。

此外，医疗保健福利提供者可例如批准或拒绝疗法的处方、批准或拒绝疗法的覆盖范围、批准或拒绝偿还疗法费用，确定或拒绝疗法的资格等。

在一些方面，临床实验室可例如收集或获得样品；加工样品；递交样品；接收样品；转移样品；分析或测量样品；定量样品；提供在分析/测量/定量样品之后获得的结果；接收在分析/测量/定量样品之后获得的结果；比较/评分在分析/测量/定量一种或多种样品之后获得的结果；提供来自一种或多种样品的比较/评分；获得来自一种或多种样品的比较/评分；或其他相关活动。

II.用AP治疗急性肾损伤

在某些方面，本公开涉及用于保持或改善已被确定对用AP治疗反应特别好的受试者，特别是SA-AKI患者的群体的肾的方法。

STOP-AKI研究已经鉴定了对应于肾损伤的严重程度的阈值与肾功能的改善(如通过相对于安慰剂，改善的肌酸酐清除所证实的肾功能的改善)和长期存活之间的统计上的显著相关性。如上所述，在STOP-AKI临床试验中根据例如肾功能标志物(例如，ECC或eGFR)对患者进行分层已经鉴定了AP施用对特定亚组的特定作用。定义这些亚组中的每个亚组的一个或多个参数(例如，一系列阈值，如ECC或eGFR阈值)可用于例如将AP疗法个性化至特定亚组，以选择患者进行治疗，做出与AP治疗有关的决定(例如，修改给药或剂量计划表)，或评价阳性结果的可能性。

因此，在一些方面，本文公开的方法涉及向确定为具有中度至重度肾损伤或例如由于SA-AKI而具有重度肾损伤的受试者施用AP(例如RecAP)，包括向受试者施用AP，如RecAP。当以至少500U/kg的剂量向具有中度至重度肾损伤或重度肾损伤的受试者施用时，AP的施用特别有效。当以至少1,000U/kg的剂量施用时，AP最有效。

如本文所用，术语“重度肾损伤”是指导致低于15ml/min的肌酸酐清除率的肾损伤或肾功能损害。如本文所用，术语“中度至重度肾损伤”是指导致15ml/min至60ml/min的肌酸酐清除率的肾损伤或肾功能损害。如本文所用，术语“轻度肾损伤”是指导致高于60ml/min的肌酸酐清除率的肾损伤或肾功能损害。如本文所用，术语“基线ECC”是指基线处的内生肌酸酐清除率。如本文所用，术语“基线eGFR”是指基线处估算的肾小球滤过率。ECC和eGFR两者均是作为肾功能的量度的实际肾小球滤过率的估算值。

在一些方面，本公开提供了例如用于治疗有需要的受试者的脓毒症相关的急性肾病损伤(SA-AKI)的方法，或碱性磷酸酶(AP)在治疗有需要的受试者的脓毒症相关的急性肾病损伤(SA-AKI)的方法中的用途，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的碱性磷酸酶(AP)，其中

(i)在用AP(例如，RecAP)治疗之前，受试者具有≤60ml/min的ECC(内生肌酸酐清除)率或≤60ml/min的eGFR；

(ii)以至少一个约500U/kg至约2,000U/kg的剂量施用AP；并且

(iii)所述AP的施用导致肾功能提高。

在一些方面，在用AP治疗之前ECC率≤60ml/min的受试者具有中度肾损伤(15ml/min-60ml/min的基线ECC)。在一些方面，在用AP治疗之前ECC率≤60ml/min的受试者具有重度肾损伤(<15ml/min的基线ECC)。在一些方面，在用AP治疗之前ECC率≤60ml/min的受试者不具有轻度肾损伤(>60ml/min的基线ECC)。在一些方面，在用AP治疗之前eGFR≤60ml/min的受试者具有15ml/min-60ml/min的基线eGFR。在一些方面，在用AP治疗之前eGFR≤60ml/min的受试者具有<15ml/min的基线eGFR。在一些方面，在用AP治疗之前eGFR≤60ml/min的受试者不具有>60ml/min的基线eGFR。

在一些方面，以每剂量至少约500U/kg、至少约600U/kg、至少约700U/kg、至少约800U/kg、至少约900U/kg、至少约1000U/kg、至少约1100U/kg、至少约1200U/kg、至少约1300U/kg、至少约1400U/kg、至少约1500U/kg、至少约1600U/kg、至少约1700U/kg、至少约1800U/kg、至少约1900U/kg或至少约2000U/kg的剂量施用AP(例如，RecAP)。在一些方面，以每剂量高于2000U/kg的剂量施用AP(例如，RecAP)。在一些方面，以每剂量低于500U/kg的剂量施用AP(例如，RecAP)。

在一些方面，以介于约500U/kg与约1500U/kg之间、介于约600U/kg与约1400U/kg之间、介于约700U/kg与约1300U/kg之间、介于约800U/kg与约1200U/kg之间或介于约900U/kg与约1100U/kg之间的剂量施用AP(例如，RecAP)。在一些具体方面，以约1000U/kg的剂量施用AP。

在一些方面，所述AP是人AP。在一些方面，所述AP是重组AP。在一些方面，所述AP是嵌合AP。在特定方面，所述嵌合AP是RecAP(SEQ ID NO:1)。在一些方面，本文公开的AP与SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性。在一些方面，所述AP是功能片段(即，AP的片段，例如，保留相应全长AP的AP活性的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少40％、至少约50％、至少约60％、至少70％、至少约80％或至少约90％的AP。在一些方面，所述AP是本文公开的AP的变体或衍生物。下文详细论述可根据本文公开的方法使用或用于本文公开的方法的其他AP。

在一些方面，所述AP是RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)，并且其以每剂量至少约0.1mg/kg、至少约0.2mg/kg、至少约0.3mg/kg、至少约0.4mg/kg、至少约0.5mg/kg、至少约0.6mg/kg、至少约0.7mg/kg、至少约0.8mg/kg、至少约0.9mg/kg、至少约1mg/kg、至少约1.1mg/kg、至少约1.3mg/kg、至少约1.4mg/kg、至少约1.5mg/kg、至少约1.6mg/kg、至少约1.7mg/kg、至少约1.8mg/kg、至少约1.9mg/kg、至少约2mg/kg、至少约2.1mg/kg、至少约2.2mg/kg、至少约2.3mg/kg或至少约2.4mg/kg的剂量施用。在一些方面，以每剂量高于2.4mg/kg的剂量施用AP。在一些方面，所述AP是RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)，并且其以至少约100U/kg、至少约200U/kg、至少约300U/kg、至少约400U/kg、至少约500U/kg、至少约600U/kg、至少约700U/kg、至少约800U/kg、至少约900U/kg、至少约1000U/kg、至少约1100U/kg、至少约1200U/kg、至少约1300U/kg、至少约1400U/kg、至少约1500U/kg、至少约1600U/kg、至少约1700U/kg、至少约1800U/kg、至少约1900U/kg或至少约2000U/kg的剂量施用。所述AP是RecAP，并且其以低于100U/kg的剂量施用。所述AP是RecAP，并且其以高于2000U/kg的剂量施用。

在一些方面，所述AP是RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)，并且其以介于约0.8mg/kg与约2.4mg/kg之间、介于约0.9mg/kg与约2.3mg/kg之间、介于约1mg/kg与约2.2mg/kg之间、介于约1.1mg/kg与约2.1mg/kg之间、介于约1.2mg/kg与约2mg/kg之间、介于约1.3mg/kg与约1.9mg/kg之间、介于约1.4mg/kg与约1.8mg/kg之间或介于约1.5mg/kg与约1.7mg/kg之间的剂量施用。在一些具体方面，以约1.6mg/kg的剂量施用AP。

在一些方面，所述AP是RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)，并且其具有至少约100U/mg、至少约200U/mg、至少约300U/mg、至少约400U/mg、至少约500U/mg、至少约600U/mg、至少约700U/mg、至少约800U/mg、至少约900U/mg、至少约1000U/mg、至少约1100U/mg、至少约1200U/mg、至少约1300U/mg、至少约1400U/mg、至少约1500U/mg、至少约1600U/mg、至少约1700U/mg、至少约1800U/mg、至少约1900U/mg或至少约2000U/mg的比活性。

在一些方面，所述AP是RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)，并且其具有约1000U:1.6mg的比活性。在一些方面，所述AP是RecAP，并且其具有介于约600U/mg与约700U/mg之间、或介于约500U/mg与约800U/mg之间、或介于约400U/mg与约900U/mg之间、或介于约300U/mg与约1000U/mg之间、或介于约200U/mg与约1100U/mg之间、或介于约100U/mg与约1200U/mg之间的比活性。在一些方面，所述AP是RecAP，并且其具有低于100U/mg的比活性。在一些方面，所述AP是RecAP，并且其具有高于1200U/mg的比活性。

在一些方面，每次治疗仅施用一个剂量的AP(例如，RecAP)(例如，每日一个剂量持续1-7天)。在其他方面，施用多于一个剂量的AP。在一些方面，施用2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21个剂量的AP(例如，每日至少两个剂量持续1-7天)。

在一些方面，每日施用AP剂量。在其他方面，每2、3、4、5、6或7天施用AP剂量。

在一些方面，每日施用单个剂量。在一些方面，每日施用2、3或更多个剂量。

在一些方面，用AP治疗少于约4天。在一些方面，用AP治疗少于3天、少于2天或少于1天。

在特定方面，以每日约1000U/kg的剂量施用AP，连续施用3天。在一些特定方面，当AP是RecAP时，以每日1.6mg/kg的剂量施用AP，连续施用3天。在一些方面，每个AP剂量，例如RecAP(例如，本公开中使用的临床级RecAP)剂量介于约0.10mg/kg与约3mg/kg之间、或介于约0.20mg/kg与约2.9mg/kg之间、或介于约0.3mg/kg与约2.8mg/kg之间、或介于约0.4mg/kg与约2.7mg/kg之间、或介于约0.5mg/kg与约2.6mg/kg之间、或介于约0.6mg/kg与约2.5mg/kg之间、或介于约0.7mg/kg与约2.4mg/kg之间、或介于约0.8mg/kg与约2.3mg/kg之间、或介于约0.9mg/kg与约2.2mg/kg之间、或介于约1mg/kg与约2.1mg/kg之间、或介于约1.1mg/kg与约2mg/kg之间、或介于约1.2mg/kg与约1.9mg/kg之间、或介于约1.3mg/kg与约1.8mg/kg之间、或介于约1.4mg/kg与约1.7mg/kg之间。在一些方面，每个AP剂量(例如，RecAP)剂量包含至少约0.1mg AP/kg、至少约0.2mg AP/kg、至少约0.3mg AP/kg、至少约0.4mg AP/kg、至少约0.5mg AP/kg、至少约0.6mg AP/kg、至少约0.7mg AP/kg、至少约0.8mg AP/kg、至少约0.9mg AP/kg、至少约1mg AP/kg、至少约1.1mg AP/kg、至少约1.2mg AP/kg、至少约1.3mgAP/kg、至少约1.4mg AP/kg、至少约1.5mg AP/kg、至少约1.6mg AP/kg、至少约1.7mg AP/kg、至少约1.8mg AP/kg、至少约1.9mg AP/kg、至少约2mg AP/kg、至少约2.1mg AP/kg、至少约2.2mg AP/kg、至少约2.3mg AP/kg、至少约2.4mg AP/kg、至少约2.5mg AP/kg、至少约2.6mg AP/kg、至少约2.6mg AP/kg、至少约2.7mg AP/kg、至少约2.8mg AP/kg、至少约2.9mgAP/kg或至少约3mg AP/kg。

AP可经由不同的途径施用，例如静脉内、直肠、支气管或口服。在一些具体方面，静脉内施用AP，例如经由静脉内输注施用AP。在一些方面，经由连续输注静脉内施用AP。

尽管肾功能的短期保持可具有立即挽救生命的结果，但优选AP对肾功能的效果持久。

ECC可通过本领域已知的方法来确定。计算ECC的一种方法是收集尿液样品(通常收集24小时)，以确定在给定时间间隔内从血液中除去的肌酸酐的量。例如，如果在24小时内除去1440mg，则其等效于除去1mg/min。如果血液浓度是0.01mg/mL(1mg/dL)，则肌酸酐清除据说是100mL/min。这是因为，为了排出1mg肌酸酐，将需要已清除100mL含有0.01mg/mL的血液。

eGFR可通过本领域已知的方法来确定。可使用肾病饮食的修改(MDRD)研究公式或慢性肾病流行病学合作(CKD-EPI)公式，优选CKD-EPI公式。技术人员知道如何根据任一方法来估算eGFR，例如通过使用例如由国家肾脏基金会提供的网站(kidney.org)来计算eGFR。

在一些方面，根据本文公开的方法向受试者施用AP能够改善受试者的许多肾功能相关参数，如BUN、ECC、eGFR和血清肌酸酐水平。

在一些方面，向受试者施用AP(例如，RecAP)导致肾功能提高，包括ECC或eGFR分别相对于没有治疗情况下的ECC或eGFR提高。在一些方面，ECC或eGFR相对于没有治疗情况下的ECC或eGFR提高至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40ml/min。

在一些方面，向受试者施用AP(例如，RecAP)导致肾功能提高，包括分别相对于基线ECC或eGFR的ECC或eGFR的提高。在一些方面，ECC或eGFR分别相对于基线ECC或eGFR提高至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80ml/min。

在一些方面，在AP施用后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天观察到肾功能提高。

ECC可用作肾小球滤过率(GFR)的近似值。然而，也可评估其他参数以确定肾功能，例如，GFR、eGFR、血清肌酸酐水平、电解质紊乱、产生的尿液的量、BUN、钙水平、磷水平、白蛋白水平和/或尿液中的红细胞和白细胞。可执行以确定肾功能的另一项检验是，例如，全血细胞差别计数。还有可能在存在或不存在RNA分子的情况下分析尿液样品。尿液中的RNA可从分泌尿液的肾细胞中获得。在一些方面，RNA是mRNA分子，如iNOS mRNA。

在一些方面，与没有AP治疗情况下的存活率相比，向受试者施用AP(例如RecAP)导致存活率提高至少5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。

相反，与没有AP治疗情况下的死亡率相比，向受试者施用AP(例如RecAP)导致死亡率降低至少5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。

在本文公开的方法的一些方面，仅在决定开始治疗之前少于96小时检测到了脓毒症的情况下才向受试者施用AP(例如，RecAP)。在其他方面，仅在SA-AKI检测之前少于72小时检测到脓毒症的情况下才施用AP。

在本公开的一些方面，在检测到脓毒症后的24小时内开始用AP治疗。可检测到脓毒症的存在，例如，如本申请的实施例部分中所公开的。在本公开的一些方面，将用AP治疗施用至处于脓毒症风险的受试者，以防止肾功能降低。

在一些方面，在检测到SA-AKI之后的24小时内开始治疗。

在本文公开的方法的一些方面，至少一个剂量的AP的施用导致肾替代疗法(RRT)在经历RRT的受试者中的持续时间缩短或停止。

在本文公开的方法的一些方面，至少一个剂量的AP的施用导致受试者中的肾小球滤过率(GFR)保持或提高。可以若干方式来评估GFR，例如通过菊糖或铬EDTA清除，或者可例如通过计算ECC得出GFR的近似值。这是根据测量的24小时尿液体积、尿液肌酸酐水平和血清肌酸酐水平计算的。还可基于血清肌酸酐估算GFR(eGFR)。

在本文公开的方法的一些方面，AP的施用导致肾功能提高或防止肾功能降低至临界阈值以下，这将排除某种治疗的施用，例如施用抗生素以治疗脓毒症。因此，在一些方面，AP施用能够防止肾功能降低到临界阈值以下，并且因此使这样的人能够接受所述治疗。因此，在一些方面，在施用用于保持肾功能的AP之前确定肾功能的指标(例如，ECC或eGFR)，以确定所述人的肾功能降低至一定阈值水平以下的风险。

在一些方面，本文公开的方法包括单独或与检测一种、两种、三种或更多种生物标志物水平的变化组合，检测肾功能标志物(例如ECC、eGFR或BUN清除)的变化。

在一些方面，本文公开的方法包括基于检测到的肾功能参数(例如，基线ECC或基线eGFR)，预测对用AP(例如RecAP)的疗法的提高的临床反应。在一些方面，本公开的方法包括评价肾功能参数(例如，基线ECC或基线eGFR)是否落在特定范围内，或者其是高于还是低于特定阈值(例如，针对肾损伤的严重程度的ECC或eGFR阈值)。因此，如果例如肾功能参数(例如，基线ECC或基线eGFR)，单独或与其他生物标志物组合，指示患者将从用AP的疗法中受益，则可开始或维持疗法或修改疗法(例如，提高或减少剂量，或提高或减少剂量的频率)。

相反，如果例如肾功能参数(例如，基线ECC或基线eGFR)，单独或与其他生物标志物组合，指示患者将不从用AP的疗法中受益，则可停止、暂时暂停疗法，修改疗法(例如，提高或减少剂量，或提高或减少剂量的频率)等。

换言之，特定水平的肾功能参数(例如，基线ECC或基线eGFR)，单独或与其他分子或临床生物标志物组合，与AP疗法的临床功效相关，并且可用于预测患有脓毒症和/或SA-AKI的特定患者群体的临床结果。

对于一些管辖区，本发明提供了碱性磷酸酶(AP)在治疗脓毒症相关的急性肾病损伤(SA-AKI)的方法中的用途，所述方法包括向所述受试者施用有效量的碱性磷酸酶(AP)，其中

(i)在用AP治疗之前，受试者具有≤60ml/min的ECC(内生肌酸酐清除)率或≤60ml/min的eGFR(估算的肾小球滤过率)，并且

(ii)AP将以至少一个300U/kg至2,000U/kg的剂量施用。在优选的实施方式中，在用AP治疗之前，受试者具有中度肾损伤(15ml/min-60ml/min的ECC)。在另一个优选的实施方式中，在用AP治疗之前，受试者具有重度肾损伤(<15ml/min的ECC)。在优选的实施方式中，在用AP治疗之前，受试者具有15ml/min-60ml/min的eGFR。在另一个优选的实施方式中，在用AP治疗之前，受试者具有<15ml/min的eGFR。

还提供了根据本发明的AP的用途，其中在用AP治疗之前，受试者不具有轻度肾损伤(＞60ml/min的ECC)。还提供了根据本发明的AP的用途，其中在用AP治疗之前，受试者不具有>60ml/min的eGFR。

在一个优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中，所述AP是人AP。

在一个优选的实施方式中，AP是重组AP，优选地是嵌合AP，更优选地与RecAP的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性。

在优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中AP的施用导致肾功能提高，并且其中肾功能提高包括相对于没有治疗情况下的ECC，ECC的提高和相对于没有治疗情况下的eGFR，eGFR的提高。

在一个优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中在AP施用之前少于96小时检测到脓毒症。

在一个优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中在SA-AKI检测之前少于72小时检测到脓毒症。

优选地，在检测到脓毒症后和/或在检测到SA-AKI后的24小时内开始治疗。

在优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中每日施用一次AP。在优选的实施方式中，静脉内施用AP。在优选的实施方式中，以每日三个剂量施用AP。

在优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中所述AP是RecAP，并且剂量是介于0.06mg/kg(和/或375U/kg)或3.2mg/kg(和/或2,000U/kg)之间的RecAP，优选介于0.08mg/kg(和/或500U/kg)之间。

在一个优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中至少一个剂量的AP的施用导致肾替代疗法(RRT)在经历RRT的受试者中的持续时间缩短或停止。

在一个优选的实施方式中，提供了根据本发明的AP的用途，其中至少一个剂量的AP的施用导致受试者中肾小球滤过率(GFR)保持或提高。

如本文所用，术语“生物标志物”是指作为生物过程、生物事件和/或病理状况的独特指标的因子，例如，对用AP(例如RecAP)治疗的临床反应的预测因子。如本文所用，术语生物标志物涵盖临床标志物和分子生物标志物(生物学标志物)两者。因此，在本公开的上下文中，术语“生物标志物”涵盖例如“生物学生物标志物”或“分子生物标志物”。在一些方面，用于评价肾功能的生物学或分子生物标志物包括肝功能的标志物(例如，丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、γ-谷氨酰基转移酶、胆红素或LDH)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)、脂多糖结合蛋白、肾损伤分子1(KIM-1)或它们的组合。

如上文所公开，术语“生物标志物”还涵盖可预测对生物疗法的应答的“临床生物标志物”(也称为“临床状态标志物”)，例如性别、年龄、伴随药物、吸烟状况、身体质量指数(BMI)等。

如上所论述，应用基于基线ECC值的截断方法以将AKI分类为“重度肾损伤”、“中度至重度肾损伤”或“轻度肾损伤”。当用AP(例如，RecAP)治疗患者时，例如在“重度肾损伤”、“中度至重度肾损伤”或“轻度肾损伤”受试者中观察到的ECC水平的差异可应用于预测临床结果。类似地，eGFR可用于并且优选用于截断方法。因此，如果受试者在基线处的ECC率或eGFR低于某个阈值(例如，60ml/min或15ml/min)，则受试者将成为用某种AP疗法(例如用包含一个或多个剂量的RecAP的某种AP方案的疗法)的候选者。

在一些方面，仅确定ECC率或eGFR低于预定阈值水平就足以将受试者鉴定为用某种AP疗法(例如用RecAP疗法)治疗的候选者。因此，在本文公开的方法的一些方面，可单独使用ECC率或eGFR。然而，在其他方面，ECC率或eGFR可彼此组合或与肾功能的其他量度(例如，BUN清除)和/或分子或临床生物标志物(如KIM-1水平)组合。

这些发现可应用于(例如)设计确定治疗(例如，通过选择患者作为某种AP疗法的候选者)的新方法；治疗肾功能下降、预防肾功能下降、提高肾功能或保持肾功能(例如治疗SA-AKI)的方法；监测AP治疗的功效的方法；或调整制剂、剂量方案或施用途径的方法。

本文公开的方法包括至少部分地基于单独或与一种或多种另外的生物标志物组合的受试者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，开处方、开始和/或改变例如用于SA-AKI的预防和/或治疗。

本公开提供了一种确定是否用包括施用AP的治疗方案来治疗具有SA-AKI的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与每个或多个生物标志物的预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的每个或多个生物标志物水平相比更高或更低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则用包括施用AP(例如RecAP)的治疗方案治疗或指导医疗保健提供者用包括施用AP(例如RecAP)的治疗方案治疗所述患者或暂停治疗、不开始治疗、拒绝治疗，或指导医疗保健提供者暂停、不开始或拒绝用包括施用AP(例如RecAP)的治疗方案治疗。还提供了一种确定具有SA-AKI的患者是否可能对包括施用AP的治疗方案有反应的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与每个或多个生物标志物的预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的每个或多个生物标志物水平相比更高或更低的ECC(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则确定所述患者可能对用包括施用AP(例如RecAP)的治疗方案的治疗有反应，或不太可能对用包括施用AP(例如RecAP)的治疗方案的治疗有反应。在一个优选的方面，测量ECC。在另一个优选的方面，测量eGFR。

在一方面，本公开提供了一种确定是否用包括施用AP的治疗方案来治疗具有SA-AKI的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定生物标志物阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更高或提高的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则用包括施用AP的治疗方案治疗或指导医疗保健提供者来用包括施用AP的治疗方案治疗所述患者。还提供了一种确定具有SA-AKI的患者是否可能对包括施用AP的治疗方案有反应的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定生物标志物阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更高或提高的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则确定所述患者可能对包括施用AP的治疗方案有反应。

在一方面，本公开提供了一种确定是否用包括施用AP的治疗方案来治疗具有SA-AKI的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定生物标志物阈值水平或相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更低或降低的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则暂停治疗、不开始治疗、拒绝治疗，或指导医疗保健提供者暂停、不开始或拒绝用包括向所述患者施用AP(例如RecAP)的治疗方案治疗所述患者。还提供了一种确定是否用包括施用AP的治疗方案来治疗具有SA-AKI的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定生物标志物阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更低或降低的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则确定所述患者不太可能对包括向所述患者施用AP(例如，RecAP)的治疗方案有反应。

还提供了一种选择被诊断为具有SA-AKI的患者作为用AP治疗的候选者的方法，所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更高或提高的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则用AP治疗或指导医疗保健提供者用AP治疗所述患者。还提供了一种选择被诊断为具有SA-AKI的患者作为用AP治疗的候选者的方法，所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更高或提高的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则确定所述患者可能对用AP治疗有反应。

还提供了一种选择被诊断为具有SA-AKI的患者作为用AP治疗的候选者的方法，所述方法包括(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更低或降低的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则暂停治疗、不开始治疗、拒绝治疗，或指导医疗保健提供者暂停、不开始或拒绝用AP(例如RecAP)治疗所述患者。还提供了一种选择被诊断为具有SA-AKI的患者作为用AP治疗的候选者的方法，所述方法包括：(a)测量或指导临床实验室测量从所述患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，以及(b)如果确定所述患者在所述样品中具有与一个或多个预定阈值水平相比或与一个或多个对照中的一个或多个生物标志物水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)以及更低或降低的至少一种任选的另外的生物标志物(如KIM-1)的水平，则确定所述患者不太可能对用AP(例如，RecAP)治疗有反应

在一些方面，所公开的方法可能需要排序和/或进行一种或多种额外的测定。例如，可重复ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)测定分析，以排除假阴性结果，和/或可进行一个或多个另外的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)测定分析以监测受试者的状态。相反，可能期望重复ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)测定分析，以排除假阳性结果。

在一些方面，预定ECC或eGFR阈值水平是约15ml/min(区分重度肾损伤与中度至重度肾损伤的阈值)或约60ml/min(区分中度至重度肾损伤与轻度肾损伤的阈值)。

在一些方面，在具有SA-AKI的患者中高于或低于预定阈值水平的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的存在可与对脓毒症或对导致脓毒症的特定感染具有特异性的一种或多种临床或分子生物标志物组合使用。

本领域的技术人员将理解，根据本文公开的方法，包括但不限于治疗、诊断和监测方法，ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)可用作阳性选择因子，即如果从患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)值低于或高于预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平，或ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相对于一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)提高或降低，则将采取特定行为(例如，治疗患者)。

本领域的技术人员将理解，根据本文公开的方法，包括但不限于治疗、诊断和监测方法，ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)可用作阴性选择因子，即如果从患者取得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)值低于或高于预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平，或ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相对于一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)提高或降低，则将不采取特定行为(例如，治疗患者)。

在一方面，本公开包括有助于医疗保健提供者、医疗保健利益提供者或临床实验室确定关于患者是否将受益于用AP治疗的方法。

在一方面，本文公开的方法包括至少部分地基于患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)进行诊断，所述诊断可以是鉴别诊断。在一些方面，本文公开的方法包括至少部分地基于ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)向受试者通知ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)测定分析和/或诊断的结果。可以口头、书面和/或以电子方式通知患者。该诊断也可以记录在患者病历中。

术语“病历”或“患者病历”是指对患者的检查和/或治疗的描述，其通常包括以下一项或多项：患者的病史和诉说、医师的身体发现、诊断检验和程序的结果以及患者药物和治疗程序。病历通常由一位或多位医师和/或医师助理记录，并且是需要医疗护理的各种疾病或损伤、和/或接种、和/或过敏、和/或治疗、和/或预后、和/或关于父母、兄弟姐妹和/或职业的频繁健康信息的书面、转录或以其他方式记录的记录和/或历史。所述记录可由医师在诊断病况时查看。

病历可以是纸质形式和/或可以保存在计算机可读介质中。病历可由实验室、医师办公室、医院、保健维护组织、保险公司和/或个人病历网站维护。在一些方面，至少部分地基于测量的ECC或eGFR的诊断被记录在诸如卡片、佩戴制品和/或射频识别(RFID)标签的医疗警报制品上或内。如本文所用，术语“穿戴制品”是指可以穿戴在受试者身体上的任何制品，所述制品包括但不限于标签、手镯、项链、臂带或头带。

如本文所用，术语“诊断”是指检测疾病或确定疾病的阶段或程度。通常，疾病的诊断基于对指示疾病的一种或多种因素和/或症状的评价。也就是说，可以基于指示疾病或病症存在与否的因素的存在、不存在或量而进行诊断。被认为指示特定疾病的诊断的每种因素或症状不需要排他地与特定疾病有关，例如，可存在可从诊断因素或症状中推断出的鉴别诊断。同样地，可存在其中指示特定疾病存在于不具有该特定疾病的个体中的因素或症状的情况。

术语“诊断”还涵盖确定药物疗法(例如，AP疗法)的治疗效果，或预测对药物疗法的应答模式。诊断方法可以独立地使用，或者与医学领域中已知用于特定疾病的其他诊断和/或分期方法组合使用。

如本文所用，术语“鉴别诊断”是指基于对临床数据的分析确定具有类似症状的两种或更多种疾病中的哪种疾病可能导致受试者的一种或多种症状。所述术语还用于指根据患者样品中测量的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)是高于还是低于预定阈值水平或相对于一个或多个对照中的水平升高还是降低，来确定患者是否对用AP治疗敏感。

如本文所用的术语“预后”是指预测临床病况或疾病(例如，脓毒症或SA-AKI)的可能过程和结果。预后通常通过评价指示疾病的有利或不利过程或结果的疾病的因素或症状来进行。如本文所用的短语“确定预后”是指本领域技术人员可通过其预测患者的病况的过程或结果的过程。术语“预后”并不是指能够以100％的准确度预测病况的过程或结果。而是，本领域技术人员将理解术语“预后”是指某一过程或结果将发生的可能性提高；也就是说，与未表现出病况的那些个体相比，在表现出给定病况的患者中更容易出现该过程或结果。

如本文所用的术语“有利预后”和“积极预后”或者“不利预后”和“消极预后”是用于预测病况或疾病(例如，脓毒症或SA-AKI)的可能过程和/或可能结果的相对术语。有利或积极的预后相比于不利或消极的预后预测更好的结果。从一般意义上讲，“有利预后”是比可能与特定病况相关的许多其他可能的预后相对更好的结果，而不利预后预测比可能与特定病况相关的许多其他可能的预后相对更差的结果。有利或积极预后的典型实例包括肾功能提高、肾功能保持、ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)提高等。

本公开包括基于ECC(或另一种肾功能参数)的表达的变化来治疗受试者的SA-AKI的方法，或AP在基于ECC(或另一种肾功能参数)的表达的变化来治疗受试者的SA-AKI的方法中的用途。本公开提供了治疗具有SA-AKI的患者的方法，或AP在治疗受试者的SA-AKI的方法中的用途，其中所述方法包括：如果确定患者在从所述患者取得的一个或多个样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，则向所述患者施用AP。

本公开还提供了治疗具有SA-AKI的患者的方法，或AP在治疗具有SA-AKI的患者的方法中的用途，其中所述方法包括：(a)递交从患者取得的样品以测量所述样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，以及(b)如果患者在所取得的样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，则向所述患者施用AP。

还提供了治疗具有SA-AKI的患者的方法，或AP在治疗具有SA-AKI的患者的方法中的用途，其中所述方法包括：(a)递交从患者取得的样品以测量所述样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，以及(b)如果患者在所述样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，则暂停或不开始向所述患者施用AP(例如，RecAP)。

本公开还提供了一种治疗具有SA-AKI的患者的方法，或AP在治疗具有SA-AKI的患者的方法中的用途，其中所述方法包括：(a)测量从所述患者获得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)；以及(b)确定所述样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)值与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比是更高或提高，还是更低或降低。在一些方面，所述方法还包括如果确定所述患者在所述样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更低或降低的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，则向所述患者施用或建议医疗保健提供者向所述患者施用AP(例如，RecAP)；或者如果确定所述患者在所述样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更高或提高的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平，则暂停或拒绝施用AP。

还提供了一种治疗具有SA-AKI的患者的方法，或AP在治疗具有SA-AKI的患者的方法中的用途，其中所述方法包括：(a)递交从患者取得的样品以测量从所述患者获得的样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，以及(b)如果确定所述患者具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更低或降低的从所述样品测量的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)，则向所述患者施用AP；或者如果确定所述患者在所述样品中具有与预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平相比或与一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平相比更高或提高的ECC或eGFR，则暂停、不开始或拒绝向所述患者施用AP。

在一些方面，样品是从所述患者获得的尿液样品并且被递交至例如临床实验室用于测量所述样品中的ECC或eGFR的估算值。

在一些方面，通过治疗患者的医疗保健专业人员对从所述患者获得的样品进行ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)测定分析。在一些方面，根据医疗保健专业人员的指导，从患者获得样品并将所述样品递交至例如临床实验室，以测量所述样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)。在一些方面，进行测定的临床实验室将基于患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)是高于还是低于预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值或相对于一个或多个对照升高还是降低来建议医疗保健提供者关于所述患者是否可受益于用AP治疗。

本公开还提供了一种在被诊断为具有SA-AKI的患者中测量AP的功效或药效学的方法，所述方法包括：(a)进行从患者取得的第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第一测量；(b)施用AP(例如，RecAP)；以及(c)进行从患者取得的第二样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第二测量，其中与第一测量中患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相比，第二测量中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的提高表明所述患者对用AP(例如，RecAP)治疗有反应。本公开还提供了一种在被诊断为具有SA-AKI的患者中测量AP的功效或药效学的方法，所述方法包括：(a)进行从所述患者取得的第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第一测量；以及(b)在已经向所述患者提供AP(例如，RecAP)后进行从所述患者取得的第二样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第二测量，其中与第一测量中患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相比，第二测量中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的提高表明所述患者对用AP(例如，RecAP)治疗有反应。

本公开还提供了一种在被诊断为具有SA-AKI的患者中测量AP的功效或药效学的方法，所述方法包括：(a)进行从所述患者取得的第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第一测量；(b)施用AP(例如，RecAP)；以及(c)进行从所述患者取得的第二样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第二测量，其中与第一测量中患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相比，第二测量中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的减小表明所述患者对用AP(例如，RecAP)治疗没有反应。本公开还提供了一种在被诊断为具有SA-AKI的患者中测量AP的功效或药效学的方法，所述方法包括：(a)进行从所述患者取得的第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第一测量；以及(b)在已经向所述患者提供AP(例如，RecAP)后进行从所述患者取得的第二样品中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)的第二测量，其中与第一测量中患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)相比，第二测量中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)减小表明所述患者对用AP(例如，RecAP)治疗没有反应。

在一些方面，在施用AP(例如，RecAP)后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16周或在居间的时间进行第二测量。

在某些方面，在本文公开的所有治疗方法中，施用“负荷”剂量的AP以在患者中实现所需的肾功能水平。如果AP负荷剂量不显著影响患者的肾功能，则可做出终止治疗的决定，例如，改用替代疗法。

如果负荷剂量导致患者中的肾功能提高，则可做出将AP剂量大小或频率降低至“维持”剂量的决定。值得注意的是，这里提供的方法是保健提供者施用治疗的指南，而最终的治疗决定将基于保健提供者的合理判断。

在一些方面，本公开包括一种治疗具有SA-AKI的患者的方法，或者AP在治疗具有SA-AKI的患者的方法中的用途，其中所述方法包括：例如在临床实验室中测量从具有SA-AKI的患者获得的第一样品(例如，由医疗保健提供者提供的样品)中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平以及任选的一种或多种生物标志物水平，其中例如测量所述第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平；确定所述第一样品中的患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平是否低于预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值水平，或是否相对于一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平降低；以及如果患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平低于预定ECC或eGFR阈值水平，或者相对于一个或多个对照中的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)水平减小，则建议医疗保健提供者向所述患者施用AP(例如，RecAP)。

在一些方面，从患者获得样品(例如，24小时尿液样品或血液样品)，并且被递交至例如临床实验室，用于单独或与至少另一种生物标志物的水平组合的方式测量ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)；或测量所述样品中它们的组合。

在一些方面，进行测定的临床实验室将基于患者的ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)是低于还是高于预定ECC或eGFR(或另一种肾功能参数)阈值来建议医疗保健提供者关于所述患者是否可受益于用AP治疗。

根据本文公开的方法，可调节AP(例如，RecAP)的制剂、剂量方案和施用途径，以提供有效量来获得最佳治疗应答。关于AP的施用，可通过本领域已知的任何合适的手段、组合物和路径施用AP。关于剂量方案，可施用单次大剂量，可在一段时间内施用若干分次剂量，或者剂量可如由治疗情况的紧急程度所指示而按比例降低或提高。

III.碱性磷酸酶(AP)

碱性磷酸酶(AP；根据IUBMB酶命名法，EC 3.1.3.1)是催化磷酸酶单酯和H2O反应得到醇和磷酸根的酶。AP的其他名称是碱性磷酸单酯酶；磷酸单酯酶；甘油磷酸酶；碱性磷酸水解酶；碱性苯基磷酸酶；正磷酸单酯磷酸水解酶(碱性最佳)。AP的系统名称是磷酸单酯磷酸水解酶(碱性最佳)。

AP是广泛特异性酶，它还催化转磷酸化。在人和其他哺乳动物中，至少四种不同但相关的AP是已知的。它们是肠、胎盘、胎盘样和肝/骨/肾(或组织非特异性)AP。前三种一起位于2号染色体上，而组织非特异性形式位于1号染色体上。

术语“本公开的AP”是指分离的碱性磷酸酶，包括其剪接变体、同种型和多态形式。还包括重组AP和嵌合AP。在特定方面，AP是RecAP。RecAP的氨基酸序列显示在图2中。在一些方面，本文公开的AP与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性。在一些方面，所述AP是功能片段(即，AP的片段，例如，保留相应全长AP的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少70％、至少约80％或至少约90％的AP活性的AP。在一些方面，所述AP是本文公开的AP的变体或衍生物。

根据本公开使用的AP可以是商业AP酶，或包含AP酶以及能够产生本发明的上下文中的功能性AP酶的任何手段(如编码AP蛋白的DNA或RNA核酸)的任何组合物。

可将编码AP的核酸嵌入合适的载体，如质粒、噬菌粒、噬菌体、(逆转录)病毒、转座子、基因治疗载体和其他能够诱导或赋予AP产生的载体中。在本公开的上下文中，天然或重组微生物，如细菌、真菌、原生动物和酵母也可应用作为AP的来源。

根据本公开使用的含AP的组合物可包含真核AP，例如哺乳动物AP，其可以是组织非特异性AP类型，如肝-骨或肾型，或组织特异性类型，如胎盘AP、肠AP和胎盘样AP。后者(也称为生殖细胞AP)位于睾丸、胸腺和某些生殖细胞瘤中，并且与胎盘和肠形式的AP两者均密切相关。

在一些方面，哺乳动物AP是人或牛AP。人AP序列的非限制性实例可在NCBI(Genpept)集合中找到，并且包括：NP_001622(肠AP)、NP_001623(胎盘AP)、NP_112603(胎盘样AP)或NP_000469(组织非特异性AP)。在一些方面，AP包含多态性。在一些方面，AP是胎盘AP、胎盘样AP、肠AP、肝/骨/肾AP或它们的组合。在一些方面，AP是重组AP。

从构象的角度来看，AP大致由两个结构域组成：冠状结构域和活性位点结构域。活性位点结构域可分为单独的部分，如催化残基和三个金属离子位点(Zn1、Zn2和Mg3)。从一级结构的角度来看，冠状结构域侧接形成活性位点结构域的氨基酸。AP的氨基酸序列以及催化和冠状结构域的相对位置是技术人员已知的。

在本公开的一些方面，AP是包含冠状结构域和催化结构域的分离或重组AP，其中所述冠状结构域和所述催化结构域获自不同的AP，并且其中所述不同磷酸酶中的至少一种是人磷酸酶。在一些方面，AP是例如ECAP(大肠杆菌AP)或七种已知的BIAP(牛肠AP)之一。

在一些方面，AP是包含冠状结构域和催化结构域的分离或重组AP，其中所述冠状结构域和所述催化结构域获自不同的AP，并且其中所述不同的AP是人AP。如果经修饰的磷酸酶随后用于人疗法中，则这将特别有用。用于所公开的方法中的AP可进行修饰，例如，遗传修饰，不具有免疫原性或仅具有弱免疫原性的人来源的AP。

本文公开的经修饰的AP可例如在“体外”或“离体”诊断或治疗中使用。这种经修饰的磷酸酶可包括例如人AP和大肠杆菌AP，或者可由牛AP和大肠杆菌AP构成。

在本公开的一些方面，AP是包含冠状结构域和催化结构域的分离或重组AP，其中所述冠状结构域和所述催化结构域获自不同的AP，并且其中所述冠状结构域是胎盘AP(ALPP)的冠状结构域，并且其中所述催化结构域是肠AP(ALPI)的催化结构域。在一些方面，不同的AP中的至少一种是人磷酸酶。在其他方面，两种不同的AP均是人磷酸酶。

表1中列出基于人AP的适合于本文公开的方法的结构域交换突变体。

表1结构域交换的碱性磷酸酶。ALPI是肠AP，ALPP是胎盘AP，GCAP是胎盘样AP，并且TNAP是组织非特异性AP。

在一些方面，AP是ECAP或人形式(ALPI、ALPP、GCAP或TNAP)中任一种的催化结构域与BIAP的冠状结构域之间的组合。此外，还可产生BIAP的冠状结构域与ECAP或人形式中任一种的催化结构域的组合。

在一些方面，经修饰的AP是在自然条件下经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚连接至细胞膜，但进行修饰以使其不再附着于细胞膜的AP。所有同工酶均在细胞膜中具有功能活性，并且GPI锚缺陷形式并非以可检测的水平天然存在。尽管已经证明了血清AP活性，但普遍接受的是所述酶仍存在于脱落的膜部分或膜囊泡中。乳中的AP活性也存在于含有膜囊泡的部分中。GPI锚作为前体分子储存在细胞中，在细胞中它通过转酰胺酶附着至附着位点。GPI锚的主链在哺乳动物中是相同的，但是细胞类型依赖性修饰是已知的。

在一些方面，对于人受试者的治疗，AP是人AP。这主要是由于从其他物种获得的AP形式可能在人受试者中具有免疫原性，并且治疗可能引发免疫学反应和病理学副作用。在一些受试者中，甚至可能发生致命的副作用，即过敏性休克，因此优选通过使用人AP形式使免疫学副作用的风险最小化。

由于从人分离AP是不切实际的，因此可在不同的重组表达平台上常规生产AP蛋白的人重组形式。然而，众所周知，GPI修饰和膜锚定蛋白的表达和纯化是困难的；GPI蛋白难以与膜分开并且难以分离和纯化。因此，在一些方面，重组AP在GPI信号序列中包含修饰，其中所述修饰导致分泌型AP，即AP不附着至细胞膜。

不存在负责GPI锚的附着的通用序列，但是存在一些特定的共有特征：

(i)C端处的疏水段氨基酸(至少11个氨基酸，但优选多于11个氨基酸)；

(ii)在疏水区域的上游，亲水性氨基酸(5-12个氨基酸)间隔；

(iii)GPI附着至小的氨基酸：甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、丝氨酸或半胱氨酸；以及

(iv)GPI附着位点下游的2个后续氨基酸必须是小氨基酸，并且在大多数情况下，它们选自甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、丝氨酸或半胱氨酸。

在一些方面，重组AP在GPI信号序列中包含修饰，其中所述修饰导致具有生物学活性(即其显示出对生物学相关底物的活性)的分泌型AP。在一些方面，分泌型AP是人AP。在一些方面，分泌型人AP是人肝-肾-骨磷酸酶、人肠AP或人胎盘样碱性磷酸酶。

基于上述共有特征，技术人员可例如通过插入一个或多个氨基酸来引入修饰，所述修饰会破坏共有的部分，导致不能附着GPI锚的AP。因此，在一些方面，重组AP在GPI信号序列中包含导致分泌型AP的修饰，其中所述修饰包括在包含共有GPI信号序列的序列中至少一个氨基酸的突变或缺失。

在一些方面，AP是在美国专利号8,557,545中公开的AP。在一些方面，AP是嵌合AP或嵌合AP样蛋白，如在美国专利申请公开号US2017/0009216和US2014/0193388中描述的那些。在本公开的一些具体方面，AP是包含ALPI(肠碱性磷酸酶)的催化结构域和ALPP(胎盘碱性磷酸酶)的冠状结构域的重组碱性磷酸酶，例如RecAP(SEQ ID NO:1)。RecAP也称为催化ALPI/冠状ALPP、Xinplap和sALPI-ALPP-CD。在一些方面，AP是改进的RecAP，例如LVL-RecAP(对应于美国专利申请公开号US2017/0009216中的SEQ ID NO:1)。

在一些方面，本公开的AP包含(i)与人ALPP的冠状结构域具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少99％的序列同一性的序列，以及(ii)与人ALPI的催化结构域具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少99％的序列同一性的序列。

在一些方面，与ALPP的冠状结构域具有所述序列同一性的所述序列位于根据本发明的蛋白质中，与天然ALPP蛋白中的ALPP的冠状结构域处于大致相同的位置。

氨基酸或核酸序列的同一性百分比或术语“％序列同一性”在本文中定义为，在比对两个序列并在必要时引入空位以实现最大同一性百分比后，候选氨基酸或核酸序列中与参考序列中的残基相同的残基的百分比。在优选的实施方式中，在不引入空位的情况下进行所述序列同一性的至少百分比的计算。用于比对的方法和计算机程序是本领域众所周知的，例如“Align 2”或美国国家生物技术信息中心(NCBI)的BLAST服务。

V.来自治疗和诊断的不良影响的改善

除了例如治疗或改善SA-AKI的症状外，本文公开的方法还可应用于治疗和/或预防由其他疾病或病况的治疗、诊断方法等引起的肾功能丧失，其中肾功能丧失是不良影响。在一些方面，本文公开的方法可应用于必须经历肾替代、为了诊断目的而经受使用造影剂等的SA-AKI患者。

肾替代疗法：降低的肾功能可能是RRT的适应症，但在一些情况下，降低的肾功能也可能是RRT的禁忌症。这通过以下事实来解释：RRT通常伴有血管内液损耗，并且重症患者不能耐受血管内液量的波动。这最终可能导致低血容量性休克，其损害流向肾脏的血液，使肾脏遭受缺血性损伤。已在接受慢性RRT的受试者中观察到残余肾功能完全丧失。本发明现在提供了一种用于减少和/或预防接受慢性RRT的受试者的肾功能丧失(例如残余肾功能完全丧失)的方法，所述方法包括在RRT之前和/或期间施用AP，优选如本文公开的AP，例如RecAP。本发明还提供了AP在减少和/或预防接受慢性RRT的受试者的肾功能丧失(例如残余肾功能完全丧失)的方法中的用途，其中在RRT之前和/或期间施用AP，优选如本文公开的AP，例如RecAP。

造影剂：具有降低肾功能的风险的另一种治疗是使用血管内造影剂，例如碘化造影剂。特别是与(血液)血浆相比具有高度高渗性的离子型造影剂通常与肾功能下降相关。离子造影剂的影响可解释如下。高渗性造影剂可将血管外流体吸引至血管系统中，这可能导致肾脏的动脉扩张。当动脉扩张时，血管收缩剂被释放以补偿动脉扩张。这些动作可导致动脉的快速打开和关闭动作。这种动作的结果是减少肾脏的血液供应，这可导致肾脏完全关闭。也可使动脉收缩至完全闭合的程度。身体试图调节血管系统中的流体超负荷。但是，如果肾脏由于造影剂的作用或独立于造影剂而无法工作，则流体被迫寻找其他逃逸途径，从而在其他身体系统中导致发生流体超负荷。该事件的主要结果之一是肺水肿。因此，本公开提供了当使用离子造影剂时保留或改善肾功能的方法，所述方法包括施用AP，优选如本文公开的AP，例如RecAP。在这种情况下，需要造影剂的患者可在降低肾功能的风险降低的情况下接受这种必要的治疗。在具有(重度)肾功能下降的患者禁忌使用造影剂的情况下，由于可保留或改善肾功能的替代治疗，现在能够用AP(优选本文公开的AP，例如，RecAP)治疗此类患者，以使他们能够接受这种造影剂。在一些方面，可在造影剂的施用之前和/或期间和/或之后施用AP，优选如本文公开的AP，例如RecAP。如本文所用，术语“造影剂”不仅涵盖单一造影剂(contrast medium)(造影剂(contrast agent))，而且涵盖两种或更多种造影剂的组合。

心脏手术和肾移植：心脏手术也可降低肾功能。心脏手术本身是AKI的风险因素，但围手术期参数可独立地影响心脏手术后AKI的风险。这些参数是例如术前贫血、红细胞输血和手术再探查。这些参数和心脏手术本身都被认为会引起肾脏缺血。不仅心脏手术，而且例如肾脏手术或移植也可引起肾组织缺血。因此，肾移植也被认为是具有降低肾功能的风险的治疗。由于心脏手术是具有降低肾功能的风险的治疗，因此在接受心脏手术的患者中，AP，优选如本文公开的AP(例如,RecAP)的施用可改善或保留肾功能。

药物：具有降低肾功能风险的其他治疗包括例如使用某些药物(medication)或药物(drugs)。继发于药物的肾功能不全和损伤是常见的，并且可表现为轻度损伤和/或明显的肾衰竭。一些药物干扰肾灌注并引起滤过能力的丧失。其他直接损伤血管、肾小管、肾小球和间质细胞，使得肾功能的特定丧失导致临床表现，包括微血管病、范科尼综合征、急性肾小管坏死、急性间质性肾炎、肾病综合征、梗阻、肾原性尿崩症、电解质异常和慢性肾衰竭。具体而言，已知使用某些抗微生物剂(如两性霉素B、卡泊芬净、万古霉素、左氧氟沙星和氨基糖苷(如妥布霉素和庆大霉素)、其他药物(例如，化学治疗剂，如顺铂、卡铂或氨甲蝶呤)；蛋白酶抑制剂，如茚地那韦或利托那韦；金；锂；抗炎药，如非类固醇抗炎药；环孢菌素；他克莫司；西罗莫司；抗高血压药，如血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和血管紧张素受体阻断剂(ARB))；以及某些化学品，如硅酸盐、烃、重金属(如Cd、Hg、Pb)、杀虫剂、除草剂、乙二醇和细菌毒素(如破伤风、链球菌毒素)，具有降低已经服用或已经暴露于所述试剂或化学品的受试者的肾功能的风险。因此，本公开提供了一种通过向暴露于此类试剂或化学品的受试者施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)来减小这些试剂或化学品的影响的方法或AP在所述方法中的用途。还能够减少某些药物的量，因为本发明提供以下见解：根据本发明的AP的使用减少患者中共同药物的量。

在一些方面，本公开提供了用于治疗由于RRT、暴露于血管内造影剂、肾脏和/或心脏手术、肾脏和/或心脏移植、输血、红细胞输血、药物治疗和手术(再)探查而处于肾功能降低的风险的受试者的方法或AP在所述方法中的用途，其中所述方法包括向所述受试者施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)。可在RRT、暴露于血管内造影剂、肾脏和/或心脏手术、肾脏和/或心脏移植、输血、红细胞输血、药物治疗或手术(再)探查之前和/或期间和/或之后进行用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)治疗。

具有降低肾功能的风险的治疗可导致流经肾脏的血液减少。当血液供应减少时，肾脏的外部延髓特别容易受到损伤和/或细胞损伤，从而导致缺血事件。因此，当平均动脉血压小于或预期变得小于80mm Hg时，使用AP，优选如本文公开的AP(例如,RecAP)来保留或改善肾功能是特别有用的。在80mm Hg的平均动脉血压以下，肾脏处于受损伤的风险，其通常导致肾功能降低。

因此，在本公开的一些方面，在具有降低肾功能的风险的治疗中提供AP，优选如本文公开的AP(例如,RecAP)，其中所述治疗例如，由于平均动脉血压低于80mm Hg、或低于75mm Hg、或低于70mm Hg、或低于65mm Hg、或低于60mm Hg而导致或伴随肾灌注不足。在一些方面，AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)的施用能够通过预防由于平均动脉血压下降引起的肾损伤而至少部分地预防肾功能的降低。

VI.共同药物的减少

如上所述，向具有SA-AK的患者施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)导致肾功能和/或存活提高。因此，本公开提供了一种减少向具有脓毒症的患者施用的药物的量的方法，或AP在减少向具有脓毒症的患者施用的药物的量的方法中的用途，所述方法包括向所述患者施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)。

在一些方面，施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)可用于减少用于治疗除SA-AKI以外的疾病和病况的可能不利地影响受试者的肾功能的药物或共同药物的量。

在一些方面，所述药物用于治疗心脏病，如由心肌梗塞或心力衰竭引起的心脏病。因此，在一些方面，本公开提供了一种用于减少用于治疗心脏病的药物的量的方法，或AP在用于减少用于治疗心脏病的药物的量的方法中的用途，从而减少例如这种药物的不良副作用，所述方法包括向患者施用AP，例如RecAP。

在一些方面，向有需要的受试者施用AP(优选RecAP或以上公开的任何AP)可减少(共同)药物的量，从而至少部分地保持和/或提高肾功能。在一些方面，本公开提供了一种根据本公开的用于减少已经患有肾功能降低(或有患肾功能降低风险)的患者中的(共同)药物的量的方法。在另一实施方式中，本发明提供了碱性磷酸酶在根据本发明的方法中的用途，所述方法包括施用如本文公开的AP(例如RecAP)。

在一些方面，所述(共同)药物用于治疗心脏病，例如由心肌梗塞或心力衰竭引起的心脏病。在另一方面，(共同)药物是利尿药物。利尿药物通过强迫利尿来影响个体的体液平衡。利尿剂已被证明可用于治疗心力衰竭、高血压和肾病等。在另一方面，在已经患有肾功能降低的人中，利尿剂由于利尿引起的血压降低而甚至可进一步降低肾功能。然而，AP能够减少这种血压降低和/或预防或改善由这种血压降低引起的肾功能降低。

在另一方面，本公开提供了一种用于减少(共同)药物的方法或AP在用于减少(共同)药物的方法中的用途，所述方法包括施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)，其中(共同)药物是III类抗心律失常药、选择性β受体阻断剂、洋地黄糖苷、维生素K拮抗剂或选择性β-2-肾上腺素受体激动剂。

在又另一方面，本公开提供了一种用于减少(共同)药物的方法或AP在用于减少(共同)药物的方法中的用途，所述方法包括施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)，其中(共同)药物是钾、苯并衍生物、普通磺酰胺(plain sulfonamide)、镁和/或洋地黄糖苷。由于上述药物潜在对肾脏有害，因此使用AP减少这些药物的量，从而降低接受AP的患者中肾功能降低的风险。

不受理论束缚，据信在接受AP的个体中观察到的(共同)药物的减少是AP对房颤或其他心血管或血管病症风险的直接或间接有益作用。因此，在一些方面，本公开提供了一种用于预防和/或治疗房颤的方法，或AP在用于预防和/或治疗房颤的方法中的用途，所述方法包括施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)。房颤可由于例如肾功能降低和/或(共同)药物所致。

如前所论述，AP在减少(共同)药物的量和/或不良副作用方面特别有用。因此，还提供了一种用于减少(共同)药物的量的方法，或AP在用于减少(共同)药物的量的方法中的用途，所述方法包括向接受(共同)药物或有接受(共同)药物风险的受试者施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)。在一些方面，与接受安慰剂的受试者相比，施用AP，优选如本文公开的AP(例如RecAP)，不仅减少了接受AP的受试者中(共同)药物的量，而且降低了(共同)药物的不利影响。因此，本公开提供了一种用于降低接受所述(共同)药物或有接受所述(共同)药物的风险的受试者中的(共同)药物的不利影响的方法，或AP在用于降低接受所述(共同)药物或有接受所述(共同)药物的风险的受试者中的(共同)药物的不利影响的方法中的用途，所述方法包括在所述受试者接受药物之前、期间和/或之后施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)，从而降低所述受试者中(共同)药物的不利影响。

在一些方面，本公开提供了一种用于减少用于治疗心脏病(例如由心肌梗塞或心力衰竭引起的心脏病)的(共同)药物的方法，或AP在用于减少用于治疗心脏病(例如由心肌梗塞或心力衰竭引起的心脏病)的(共同)药物的方法中的用途，所述方法包括施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)。

在一些方面，(共同)药物是III类抗心律不齐药、选择性β-受体阻断剂、洋地黄糖苷、维生素K拮抗剂或选择性β-2-肾上腺素受体激动剂。

在其他方面，(共同)药物是钾、苯并衍生物、普通磺酰胺、镁和/或洋地黄糖苷。由于上述药物在暴露于它们的受试者中是潜在肾损伤性的，因此减少这些药物的量导致这些受试者中肾功能降低的风险降低。

在一方面，本公开提供了一种用于预防和/或治疗房颤的方法，或AP在用于预防和/或治疗房颤的方法中的用途，其中所述方法包括向患有房颤或有患房颤风险的受试者施用AP，优选如本文公开的AP(例如，RecAP)，从而预防或治疗所述房颤。

尽管当前申请可将特征描述为同一实施方式的部分或作为分开的实施方式的部分，但是本发明的范围还包括包含本文所述的全部或一些特征的任何组合的实施方式。

方面1.碱性磷酸酶(AP)在用于治疗有需要的受试者中的脓毒症相关的急性肾病损伤(SA-AKI)的方法中的用途，所述方法包括向所述受试者施用有效量的碱性磷酸酶(AP)，其中(i)所述受试者在用AP治疗之前具有≤60ml/min的ECC(内生肌酸酐清除)率或在用AP治疗之前具有≤60ml/min的eGFR(估算的肾小球滤过率)，

(ii)以至少一个500U/kg至2,000U/kg的剂量施用AP，并且

(iii)AP的施用导致肾功能提高。

方面2.根据方面1所述的AP的用途，其中在用AP治疗之前，所述受试者具有中度肾损伤(15ml/min-60ml/min的ECC)或15ml/min-60ml/min的eGFR。

方面3.根据方面1或方面2所述的AP的用途，其中在用AP治疗之前，所述受试者具有重度肾损伤(<15ml/min的ECC)或<15ml/min eGFR。

方面4.根据方面1-3中任一项所述的AP的用途，其中在用AP治疗之前，所述受试者不具有轻度肾损伤(>60ml/min的ECC)或>60ml/min的eGFR。

方面5.根据方面1-4中任一项所述的AP的用途，其中所述AP是人AP。

方面6.根据方面1-5中任一项所述的AP的用途，其中所述AP是重组AP。

方面7.根据方面1-6中任一项所述的AP的用途，其中所述重组AP是嵌合AP。

方面8.根据方面1-7中任一项所述的AP的用途，其中所述嵌合AP与RecAP的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。

方面9.根据方面1-8中任一项所述的AP的用途，其中肾功能提高包括相对于没有治疗情况下的ECC，ECC的提高，或相对于没有治疗情况下的eGFR，eGFR的提高。

方面10.根据方面1-9中任一项所述的AP的用途，其中在AP施用之前少于96小时检测到脓毒症。

方面11.根据方面1-10中任一项所述的AP的用途，其中在SA-AKI检测之前少于72小时检测到脓毒症。

方面12.根据方面1-11中任一项所述的AP的用途，其中在检测到脓毒症后的24小时内开始治疗。

方面13.根据方面1-12中任一项所述的AP的用途，其中在检测到SA-AKI后的24小时内开始治疗。

方面14.根据方面1-13中任一项所述的AP的用途，其中每日施用一次AP。

方面15.根据方面1-14中任一项所述的AP的用途，其中静脉内施用AP。

方面16.根据方面1-15中任一项所述的AP的用途，其中以每日三个剂量施用AP。

方面17.根据方面1-16中任一项所述的AP的用途，其中所述AP剂量是0.8mg/kg或1.6mg/kg的RecAP。

方面18.根据方面1-17中任一项所述的AP的用途，其中所述AP剂量是500U/kg或1000U/kg的RecAP。

方面19.根据方面1-18中任一项所述的AP的用途，其中至少一个剂量的AP的施用导致经历RRT的受试者中的肾替代疗法(RRT)的持续时间缩短或停止。

方面20.根据方面1-19中任一项所述的AP的用途，其中至少一个剂量的AP的施用导致所述受试者中的肾小球滤过率(GFR)或eGFR保持或提高。

实施例

实施例1

用于脓毒症相关的急性肾损伤的人重组碱性磷酸酶

脓毒症相关的急性肾损伤(AKI)不利地影响长期肾结果和存活。在临床前研究中，施用解毒酶碱性磷酸酶改善肾功能和存活。我们研究了具有脓毒症相关的AKI的患者中人重组碱性磷酸酶(RecAP)(图2)的功效和安全性。

在适应性2a/2b期STOP-AKI试验的第1部分中，患者被随机分配以接受RecAP 0.4、0.8或1.6mg/kg或安慰剂，每日一次持续3天，以确定最佳剂量。

在第2部分中，将此剂量与安慰剂进行比较。主要终点是1-7天时间校正的内生肌酸酐清除曲线下面积(AUC

与安慰剂相比，RecAP治疗导致增强和持续的肾功能恢复以及更好的存活。RecAP似乎安全并且耐受良好。

方法

I.STOP-AKI试验设计和参与者

STOP-AKI试验是在具有SA-AKI的危重成年人中进行的国际性的随机、双盲、安慰剂对照、四组、平行组、剂量探索的适应性2a/2b期试验。先前公开了所述方案(包括在纳入120名患者后实施的合格标准的细微变化)(Peters等人BMJ Open 2016；6:e012371)。

被诊断为脓毒症的年龄≥18岁的ICU患者(Levy等人Crit Care Med 2003；31:1250-6)和AKI的首次诊断(Mehta等人Crit Care 2007；11:R31)有资格参加研究。纳入和排除标准在下文提供

纳入标准

为了纳入研究，受试者

(i)已根据当地法律和法规，由患者或法定代理人或独立研究人员签署知情同意书，

(ii)年龄在18-85岁(含)之间，

(iii)收入重症监护室或中级监护室，

(iv)根据美国胸科医师协会/重症监护医学学会定义的标准(Bone等人Chest1992；101:1644-55.)，基于以下诊断患有脓毒症(首次研究药物施用前<96小时或在急性肾损伤(AKI)诊断前<72小时)：

A.经证实或强烈怀疑的细菌感染

B.在AKI诊断时间的72小时时间框架内，以下四个SIRS标准中的至少两个(注意：在研究随机分组时不要求症状同时出现)

1.核心温度>38℃或<36℃

2.心率>90bpm(除非患者具有已知提高心率的医学病况或正在接受预防心动过速的治疗)

3.呼吸频率>20次呼吸/min，PaCO

4.白细胞计数>12,000/mm

(v)根据以下AKIN标准具有AKI的首次诊断，定义为AKI阶段1或更高(注意：根据时间窗口进行调整)：

A.在无潜在原发性肾病的情况下，在适用时液体复苏后，尿排出量<0.5ml/kg/h持续>6小时，或

B.与之前48小时内的血清肌酸酐值相比血清肌酸酐提高(绝对值)>26.2μmol/l(0.30mg/dl)，或当与参考肌酸酐值(参见下文)相比时推测在之前48小时内发生血清肌酸酐提高(绝对值)>26.2μmol/l(0.30mg/dl)，或

C.(在不存在原发性潜在肾病的情况下)与之前48小时内的血清肌酸酐值相比血清肌酸酐提高(相对)>150％(>1.5倍)，或当与参考肌酸酐值相比时推测在之前48小时内发生血清肌酸酐提高(相对)>150％(>1.5倍)。

肌酸酐参考值是按以下优先顺序的血清肌酸酐值：

1.入院3个月内的最低值。如果不可获得：

2.入院时。如果不可获得：

3.入ICU时。如果不可获得：

4.入院前3个月与12个月之间的最低值

(vi)当根据AKIN血清肌酸酐标准之一做出AKI的诊断时，需要通过确定性液体校正的血清肌酸酐测量(定义为血清肌酸酐不降低≥26.2μmol/l(≥0.30mg/dl))来确认持续性AKI。结果必须在随机分组之前可用。必须在首次AKI诊断后24小时内开始施用研究治疗

(vii)当根据AKIN尿排出量标准做出AKI诊断时，在随机分组之前，少尿或无尿仍应符合AKIN尿排出量标准。必须在首次AKI诊断后24小时内开始施用研究治疗

排除标准

如果满足以下条件中的至少一个，则将受试者从研究中排除：

(i)妊娠试验阳性(血液或尿液)、怀孕或母乳喂养的有生育能力的女性

(ii)体重超过115kg(253lb)

(iii)具有维持生命的限制(例如，不要插管，不要透析，不要复苏)

(iv)已知是HIV阳性

(v)具有尿脓毒病。由于尿脓毒病期间经常观察到的泌尿生殖道阻塞也可能导致血清肌酸酐水平升高，因此无法确定哪些比例可能归因于SA-AKI。因此，尿脓毒病患者被排除。

(vi)已经进行肾替代疗法(RRT)或已决定在计划开始研究药物施用后24小时内开始RRT

(vii)正在接受免疫抑制剂治疗或正在使用长期高剂量(超过2周治疗的高剂量疗法)的类固醇，相当于泼尼松/泼尼松龙0.5mg/kg/天，包括实体器官移植患者。可包括用氢化可的松(例如3×100mg)治疗的具有脓毒性休克的患者

(viii)预期具有快速致命结果(24小时内)

(ix)具有已知的确认的真菌性脓毒症

(x)具有晚期慢性肝病，通过10-15的Child-Pugh评分(C类)确认

(xi)具有急性胰腺炎，没有确定的感染源

(xii)在招募到研究前30天内参加了另一项研究性研究

(xiii)由于除SA-AKI以外的医学病，包括癌症(未积极治疗的先前血液恶性肿瘤是允许的)、终末期心脏病、在过去30天内需要心肺复苏或无脉性电活动或心搏停止的心脏骤停、晚期肺病和晚期肝病，而预计不会存活28天

(xiv)参加之前，除当前脓毒症病况以外的原因，通过诸如MDRD或CKD-EPI的常用公式具有记录的eGFR<60ml/min的CKD既往史，已知GFR<60ml/min或持续的肌酸酐水平≥150μmol/l(1.70mg/dl)的既往史。与AKI相比，CKD是具有独特病理生理学的疾病。此外，如果eGFR受损，则用于防止进一步恶化的干预措施的机会受到限制。为了提高研究群体的同质性，因此将这些患者排除在外。

AKI，急性肾损伤；AKIN，急性肾损伤网络；CDK，慢性肾病；CKD-EPI，慢性肾病流行病学合作；eGFR，估算的肾小球滤过率；ICU，重症监护病房；IV，静脉内；MDRD，肾病饮食的改变；NSAID，非类固醇抗炎药；RRT，肾替代疗法；SIRS，全身性炎症应答综合征。

(xv)诊断具有疟疾或其他寄生虫感染

(xvi)在>20％身体表面上具有烧伤

(xvii)在研究药物施用之前，已根据AKI纳入标准具有AKI诊断持续长于24小时的时间段

(xviii)预计从第1天至第7天将用非连续性RRT治疗

(xix)在第1天到第7天期间，预计不根据每个方案标准开始或停止连续RRT

(xx)AKI最有可能归因于脓毒症以外的其他原因，如肾毒性药物(NSAID、造影剂、氨基糖苷类)和肾灌注相关的(急性腹主动脉瘤、解剖、肾动脉狭窄)

(xxi)在施用研究药物前，血清肌酸酐提高至少26.2μmol/l(0.30mg/dl)

(xxii)当替代的医学上适当的非肾毒性药物可用时，如果计划继续使用这种肾毒性药物(例如，NSAID、ACEI抑制剂、庆大霉素、妥布霉素)，则使用肾毒性药物且在筛选时符合SA-AKI纳入标准的患者不合格。

(xxiii)具有已知的静脉内药物滥用史

(xxiv)是调查人员或研究地点人员的雇员或家庭成员

(xxv)具有活跃的血液系统恶性肿瘤

在首次诊断出SA-AKI后的24小时内以及满足脓毒症标准后的96小时内，开始治疗(Levy等人Crit Care Med 2003；31:1250-6.)。在研究的第一部分期间招募的患者被随机分配以接受安慰剂或三种RecAP剂量(0.4；0.8；1.6mg/kg)中的一种，每日一次持续3天，使用1:1:1:1分配比例。

在第120位患者后，评估了干预对主要终点数据的无效性或优越性，并评估了可归因于药物(E

中期分析：对第1部分数据进行了非盲中期分析，以确定第2部分的最佳RecAP剂量。此分析比较了第1部分中四个治疗组的主要功效终点和安全性数据的选择。当从第1部分中收集了120位患者的前7天实验室数据时进行中期分析，除非患者是随机分组的，但在完成7天之前死亡或中止。

为保持盲，中期分析由位于不同地点的非盲PPD生物统计学团队进行，并向参与研究的盲PPD生物统计学人员交付。在中期分析进行了无效性分析。

最佳RecAP剂量的选择：最佳剂量被定义为与安慰剂相比，具有肌酸酐清除的最佳安全性改善的剂量。

除非DSMB具有与RecAP的特定剂量水平有关的安全性考量和/或Emax模型(主要终点的剂量-反应建模)突出显示异常趋势，否则最佳剂量将优选是最高剂量的RecAP(即1.6mg/kg)。

如果存在安全性考量和/或关于剂量-反应曲线的一些考量，则将使用以下有效性标准来选择最佳剂量。在没有安全性或/和剂量-反应建模考量的情况下，将在剂量水平中选择最佳剂量水平。

剂量水平的有效性将基于针对主要终点与安慰剂进行比较的单侧未经调整的p值确定，即，p值最小的剂量将被视为最有效的剂量。单侧未经调整的p值小于0.025的任何剂量都将被认为与安慰剂相比对肌酸酐清除的改善显著更大。然而，对于将被视为最有效的剂量的剂量，与安慰剂的比较不必在2.5％水平下显著。如果超过一种剂量似乎最有效且具有相同的效果，则应仔细检查安全性数据以及Emax剂量-反应建模以选择最佳剂量。

如统计学分析计划中所述，适应性设计指导停止两个治疗组，以使得在第2部分中，患者被随机分配以接受安慰剂或基于主要终点数据的中期分析选择的最佳剂量的RecAP

II.随机分组和研究药物

随机分组计划表按地点分层。研究药物剂量原理(Peters等人BMJ Open 2016；6:e012371)解释如下。

剂量原理和药物动力学

使用PK模拟实验，这些计划表提供了从零至无限时间的浓度-时间曲线下面积(AUC

选择最低剂量以便使谷血浆浓度达到低于估计的有效浓度。选择中等剂量和最高剂量以分别具有等于或超过估计的有效浓度的谷浓度。在首次诊断出SA-AKI之后的24小时内，以1小时静脉输注的形式施用研究药物，然后在24±1和48±1小时后施用研究药物。如推荐的那样，在可能的情况下，避免施用肾毒性药物(Okusa等人Kidney Int 2014；85:39-48)。在第1部分和第2部分期间，参与这项研究的人员对治疗分配是盲的；因此，为了保持盲，直到第14天才测量AP水平(以下显示关于盲的细节。

IV.结果量度

这项研究的主要目的是研究RecAP的最佳治疗剂量并评价其对肾功能(ECC)的影响，定义为从第1天至第7天的ECC的时间校正(即每日测量)曲线下面积(AUC)除以7以提供平均肌酸酐清除(AUC

还研究了具有SA-AKI的患者的安全性、耐受性、药物动力学(前120名患者)、免疫原性、全身和尿液生物标志物以及RecAP对生活质量的影响。计划进行先验亚组分析，以确定RecAP治疗是否在特定患者组中显示出不同水平的功效。下文将详细描述所有终点，包括非安全性和非肾次要终点。

研究终点

(a)关键次要终点：关键次要终点是从第1天(首次治疗后)至第28天(含)时间段期间的RRT发生率。

(b)其他次要终点：

肾

肾终点包括以下：

·每小时标准化的尿量(从第1天至第7天(含)每日，以及随后的访问日(如果可靠的6小时尿液收集是可能的))。

·血清肌酸酐和BUN/尿素(从第1天至第7天(含)每日，以及随后的访问日)。

·BUN/尿素清除(从第1天至第7天(含)每日，以及随后的访问日(如果可靠的尿液收集是可能的))。

·血清肌酸酐峰值和BUN/尿素峰值(从第1天至第7天(含)的时间段期间)。

·无RRT天数：从随机分组至第28天(含)存活并且不依赖于RRT的天数。如此处所述计算无支持天数。在统计分析计划中，无支持天数被定义为“患者没有接受支持(RRT/机械通气/血管加压药/正性肌力药)的天数”，其中在死亡或退出的情况下进行末次观测值结转。

·RRT的总天数(从第1天至第28天(含)的时间段期间)。RRT的天数被定义为患者在当天的任何时间段内接受任何形式的RRT(包括具有中断的RRT)的天数。

·开始RRT的原因(从第1天至第28天(含)的时间段期间)。

·如通过测量的肌酸酐清除(如果可获得)评估的第14天、第21天和第28天的肾功能，否则如通过eGFR(基于血清肌酸酐浓度，由CKD-EPI公式估算)评估的肾功能。

·如通过eGFR评估的第60天和第90天的肾功能(基于血清肌酸酐浓度，由CKD-EPI公式估算)。

·在第60天和第90天的肾功能持续丧失，由eGFR<60mL/min定义(eGFR基于血清肌酸酐浓度由CKD-EPI公式估算)。

·第60天和第90天依赖透析的发生率。

其他器官

除肾脏以外的器官的终点包括以下：

·除AP以外的肝酶(天冬氨酸转氨酶[AST]、丙氨酸转氨酶[ALT]、γ-谷氨酰基转肽酶[GGT]、乳酸脱氢酶[LDH]、胆红素)。

·如通过机械通气患者中的动脉血氧分压分数(PaO

·无机械呼吸机的天数：从随机分组至第28天(含)存活并且不依赖于机械通气的天数。无呼吸机天数定义为患者不使用呼吸机(有创或无创机械通气)的天数。

·对于在此期间开始时使用机械呼吸机的那些患者，从开始首次施用研究药物至停止机械呼吸机的时间(从第1天至第28天(含))。

·无休克的天数。从随机分组至第28天(含)，存活并且不依赖于血管加压药/正性肌力疗法的天数。如果患者未使用血管加压药或正性肌力药(包括但不限于去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴酚丁胺、多巴胺、血管加压素或依诺昔酮)，则患者被视为无休克。如此处所述计算无支持天数。在统计分析计划中，无支持天数被定义为“患者没有接受支持(RRT/机械通气/血管加压药/正性肌力药)的天数”，其中在死亡或退出的情况下进行末次观测值结转。

·对于在此期间开始时不是无休克的那些患者，从开始首次施用治疗至无休克的时间(从第1天至第28天(含))。

·ICU/中级监护室停留期间的序贯器官衰竭评估(SOFA)评分。

·如通过SOFA评分评估的功能失调器官的数量(从基线至第28天(含))。

·在90天研究期期间死亡(按记录日期)。

生物标志物

生物标志物终点包括以下：

·肾功能标志物。

·肾小管损伤生物标志物。

·全身性炎症的生物标志物。

·在研究的第1部分中，RecAP在所有三个活跃治疗组中的药物动力学。

·除RecAP PK浓度测量外，还测量基线(给药前)AP活性(中心实验室)。

其他终点

其他终点包括以下：

·三个主要不良肾事件(MAKE)复合终点：满足或不满足至少一项以下标准的患者：

οMAKE复合终点1：接受RRT或死亡(在第28天[含]之前)。

οMAKE复合终点2：第60天时eGFR<60mL/min(由CKD-EPI公式估算)；或透析依赖；或死亡(第60天之前)。

οMAKE复合终点3：第90天时eGFR<60mL/min(由CKD-EPI公式估算)；或透析依赖；因AKI新发作住院(第90天)，或死亡(第90天之前)。

·如通过免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白E(IgE)和总免疫球蛋白评估的血清学。

·安全性参数，包括(严重)不良事件、实验室评估(功效分析中未考虑的临床化学、血液学和尿液分析参数)、生命体征和ECG数据。

·生活质量，基线、ICU/中级监护室出院和第90天时通过EQ-5D问卷进行评估。

·从开始首次施用治疗至从ICU/中级监护室出院的时间，其中出院被定义为决定转移患者的时间(与实际转移的时间相对，其由于安置问题可能延迟)。

·从开始首次施用研究药物在ICU/中级监护室中的总时间(第1天至第28天(含)的时间段期间和第1天至第90天(含)的时间段期间)，使用实际转移时间。

·从开始首次施用治疗至出院的时间，其中出院被定义为决定转移患者的时间(与实际转移的时间相对)。

·从开始首次施用研究药物的住院的总时间(从第1天至第28天(含)的时间段期间和从第1天至第90天(含)的时间段期间)，使用决定患者出院的时间。

V.统计分析

根据意向治疗原则对获得知情同意并随机分组至治疗组的患者的数据进行分析。与样品量计算有关的细节如下所述。

样品量计算

样品量计划在第1部分中每个治疗组为n

进行了五万次模拟，结果表明，单侧I型错误率是2.4％(因此在单侧2.5％显著性水平下得到很好的控制)。效力定义为当一个或多个RecAP剂量组具有治疗效果(其定义为69.5ml/min的反应)时，拒绝无效假设(治疗组之间无差异)的概率。在七种情况下对此进行了调查，每种情况进行了10000次模拟。对于中等和高RecAP剂量组具有强治疗效果的情况，所选择的设计实现了介于79％与86％之间的效力；对于低剂量组的反应不同，并且当仅高剂量组具有强治疗效果时，介于66％与67％之间。由于样品量确定是基于意向性治疗(ITT)分析所需的患者数量，因此在研究完成之前随机分配并随后退出的患者将不会被替代。

对于根据研究方案接受了研究药物并且在第1天至第7天有不超过两个ECC缺失值的患者，根据方案的分析将干预组与安慰剂组进行了比较，如统计分析计划中所详述。

对于描述性统计，连续变量根据其分布表示为平均值与标准差或中值与四分位差。使用学生t检验比较正态分布的变量；曼–惠特尼U检验用于比较非正态分布的变量。分类(和二进制)变量表示为百分比数值，并使用卡方检验进行分析。用卡普兰–迈耶曲线进行的存活分析用于图形表示。使用Cox比例风险回归分析来估计在使用RecAP对比安慰剂的研究1-28天期间的存活的风险比和无RRT、无休克和无机械通气的天数。

通过方差分析进行主要功效终点的分析。对次要终点进行的所有分析仅出于探索目的，因此无需进行多重性调整。进行事后多变量分析以建立RecAP效应的稳健性。对意向性治疗群体进行的所有统计测试(SAS软件9.4版；SAS Institute Inc.,Cary,NC,U.S.A.)是双侧的(使用5％显著性水平)。

结果

I.参加者

在通过初始筛选的326名患者中，招募了欧盟和北美11个国家的53个地区的301名患者(图4)。患者接受RecAP 0.4mg/kg(n＝30)，0.8mg/kg(n＝32)，1.6mg/kg(在第1部分中n＝29并且在第2部分中n＝82)或安慰剂(在第1部分中n＝30并且在第2部分中n＝86)。除了各组之间肾功能的轻微基线差异外，随机分组导致人口统计学特征和患者特征平衡良好(图5)。

II.功效结果

在试验的剂量探索第1部分中，与安慰剂组中46.2ml/min相比，用RecAP 0.4、0.8、1.6mg/kg治疗的患者的中值AUC

在中期分析后，DSMB建议以RecAP 1.6mg/kg继续研究。根据统计分析计划，在主要分析中仅将RecAP 1.6mg/kg组的效果与安慰剂组的效果进行了比较。当合并来自第1部分和第2部分的RecAP 1.6mg/kg组的数据(n＝111)时，与安慰剂(n＝116)相比，未观察到recAP治疗的主要功效结果(AUC

随着AKI诊断后尽快开始研究药物输注，在第0天获得不到一半的患者清除数据。在图9A和图9B中，从第1天开始计算ECC和BUN清除的差异。与接受安慰剂的患者相比，在28天内ECC(P＝0.036)(图9A)以及BUN清除(P＝0.033)(图9B)的改善在RecAP治疗的患者中增强(基于从第21天开始发生的差异)。

与安慰剂相比，用RecAP治疗不会影响MAKE

RecAP组与安慰剂组相比，到第28天的全因死亡率在统计学上显著降低(分别为14.4％对比26.7％；P＝0.022)。图10示出直至第90天的死亡率(有利治疗，P＝0.030)。在RecAP 0.8mg/kg剂量组中观察到类似的存活益处。参见图11，其示出所有组的KaplanMeier存活曲线。

RecAP治疗对炎症和肾损伤生物标志物以及其他非肾终点没有显著影响。参见图12(呈现所有组的主要和次要终点的表)和图13A至图13E。

按方案分析产生可比较的结果。

为了检验RecAP对存活的效果的稳健性，进行了事后多变量分析，包括序贯器官衰竭评估(SOFA)亚组和研究组作为协变量。用RecAP治疗仍然与存活显著相关(风险比0.50，95％CI 0.28–0.90；P＝0.02；参见图14)。

III.亚组分析

在先验定义的亚组中，未观察到对主要终点和关键次要终点的统计学显著影响。参见图15A至图15L。基线和第1天ECC与AUC

IV.安全性

在43％的接受RecAP 1.6mg/kg的患者和50％的接受安慰剂的患者中报告了治疗中出现的严重不良事件。参见图16。未观察到在不良事件(AE)的发生率和性质方面的RecAP剂量依赖性。在用RecAP治疗的9例患者中，抗药物抗体滴度刚好高于检测限。

讨论

在这项涉及具有SA-AKI患者的跨国双盲、随机分组对照试验中，观察到将RecAP添加至护理标准中对存活产生重大影响，与改善的和持续的肾功能恢复以及长期临床结果(包括复合MAKE终点)相关。由于这是剂量探索原理验证的2期试验，因此其被设计为包括与肾功能障碍(例如短期ECC)以及长期、更以患者为中心的临床结果(例如MAKE

功能是与死亡的竞争终点，因此可能与临床结果不同(Billings等人NephronClinical practice 2014；127:89-93)。在当前研究中，未使用关于功能性措施的死亡的罚分，因此存活曲线的分离使非存活者的功能更加难以解释，这可解释观察到的短期与长期治疗功效之间的差异。

在脓毒症中，众所周知，整个肾脏的损伤是异质的，斑块状的肾小管损伤是最常见的组织学发现(Kellum等人Nat Rev Nephrol 2018)。相比之下，肾功能是整体量度。因此，器官功能的急性测量可能掩盖潜在器官损伤，所述损伤只有在以后才变得明显。RecAP减少肾脏损害和促进器官功能可能在几周后表现出来。对于观察到的RecAP对短期ECC及其对长期临床结果的积极影响，还有若干其他原因是合理的。首先，肌酸酐及其清除被认为在估计肾功能方面的准确性有限(Shemesh等人Kidney International 1985；28:830-8；Perrone等人Clin Chem 1992；38:1933-53)，然而目前不可获得可行的替代方法。其次，尽管随机分组，但组之间的肾功能存在略微不平衡。先前的工作(Kellum等人Am J Respir Crit CareMed 2017；195:784-91)以及当前试验表明，初始肾功能障碍的程度决定肾恢复和存活的程度，因为更严重的肾衰竭与更差的结果相关。因此，肾功能受损更严重一些可能是第一周ECC没有改善的原因。第三，从第21天开始，治疗组之间的ECC恢复的统计学显著差异出现。第四，RecAP治疗组的显著更高存活率可能影响主要结果和关键次要结果，因为治疗组中的最重症、但存活的患者的差的肾功能可能减弱ECC。令人感兴趣的是，治疗组的存活益处并未不利地影响任何其他终点，如生活质量。为了进一步探索RecAP对存活的影响的稳健性，进行了事后多变量分析，包括已知影响存活的SOFA亚组。在此分析中，随机分组至治疗组仍然是存活的重要相关因素。

在当前更大的试验中，评估了适用于广泛临床使用的人重组AP。尚不清楚通过对肾小管细胞的直接作用或全身作用间接预防对肾脏的损害在多大程度上介导了肾保护作用，或是否作为改善脓毒症的一般作用而改善肾功能。在一方面，AP在缺血性损伤后肾脏中耗尽(Khundmiri等人Am J Physiol 1997；273:849-56)，并且RecAP减弱分离的人近端肾小管细胞中的炎症反应(Peters等人Br J Pharmacol 2015；172:4932-45)。在另一方面，全身排毒性质可导致循环炎症标志物更迅速正常化(Pickkers等人Crit Care 2012；16:R14)间接使肾脏受益。似乎对肾脏组织的直接作用是重要的。用RecAP治疗可减轻肾脏炎症，并且由此影响其有害长期效应，和/或RecAP可能能够增强从AKI的肾脏恢复，与预防原发性损伤本身相反。

总之，RecAP治疗被认为是安全且耐受良好的。在具有AKI的脓毒症患者中，观察到RecAP治疗提供长期肾功能、MAKE

根据按照基线ECC或基线eGFR定义的肾病的严重程度对患者进行分层的事后分析，揭示了由向中度至重度损伤患者以及重度肾损伤患者施用RecAP产生的明显效果。参见图17。轻度SA-AKI不提高患者的死亡率，并且AP的施用似乎对所述群体的存活没有影响。在中度至重度SA-AKI组观察到了同样的情况。出人意料地，关于在死亡率方面受益于AP施用，呈现有基线eGFR<60ml/min的患者与ECC<15ml/min组类似。参见图22。在另一方面，用AP治疗的重度SA-AKI(如通过ECC<15ml/min确定)个体的存活率与AP治疗或安慰剂治疗的中度至重度损伤和轻度损伤组相当。相比之下，用安慰剂治疗的SA-AKI患者的存活率低得多。在脓毒症发作后三天期间用1000U/kg剂量的RecAP对若干SA-AKI的患者进行治疗导致治疗后至多90天的显著存活提高(>20％)。此外，在治疗后第21天和第28天，在中度至重度SA-AKI中观察到肾功能的统计学显著提高(肌酸酐清除提高)。在重度SA-AKI组中观察到肾功能提高。还参见图18、19和20。在图18中呈现的模型拟合统计数据(如R平方和对数似然比(LR)检验)证明，与少一个参数的分类模型(模型2)相比，连续模型(模型1)的可比较但略好的拟合；然而，分类模型提供可解释为风险比(HR)的系数。

实施例2

RecAP酶活性和蛋白质浓度的测定

活性测定：

recAP酶活性的测定是基于将4-硝基苯酚磷酸盐转化(水解)为黄色的4-硝基苯酚。每单位时间在405nm处的光密度变化是碱性磷酸酶活性的量度。测定缓冲液由25℃的0.25M甘氨酸缓冲液(pH 9.6)与2mM MgCl

recAP的单位(U)定义(表示为U/mL)是在pH 9.6和25℃下每分钟引起1μmol的4-硝基苯酚磷酸盐水解的酶的量。

蛋白质浓度：

RecAP药物物质和药物产品中总蛋白质浓度的测定通过UV/Vis分析进行。在280nm处分析RecAP溶液，并且吸光度是使用以下公式用于蛋白质含量(mg/mL)的量度：

浓度(mg/mL)＝[A/(a x b)]x DF，其中A＝A280；b＝路径长度；a＝1.01mL mg-1cm-1的质量消光系数；DF是稀释因子。

***

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