一种舒缓抗敏组合肽及其应用

本申请主张中国在先申请，申请号：202210851178.1，申请日2022年7月19日的优先权；其所有的内容作为本发明的一部分。

技术领域

本发明属于护肤品技术领域，涉及一种舒缓抗敏组合肽及其应用。

背景技术

随着环境污染和精神压力日益增加，敏感性皮肤在世界各国的发生率也逐渐增高，严重影响人们的生活质量，尤其是在日本、美国等发达国家，皮肤敏感已经成为了影响人类健康的社会问题。据不完全统计，全球自我感觉敏感性肌肤的人群越来越多，其中男性占38％，女性占61％。由此可见，针对敏感肌的护肤具有巨大的市场需求。

敏感性皮肤，亦称敏感性皮肤综合征，即耐受性差，反应性高或易致敏的皮肤。据报道，大约70％的人群认为自己具有敏感皮肤的特征，而其中有50％人群表现出皮肤过敏症状。主要发生于面部，表现为受到物理、化学、精神等因素刺激时皮肤容易出现灼热、刺痛、瘙痒及紧绷感等主观症状，有时伴随着还有红斑、鳞屑、毛细血管扩张等客观体征。

敏感性皮肤被普遍认为是机体内在和外在因素的相互作用，目前针对敏感性肌肤形成机制主要理论是肌肤屏障功能受损，进一步引起敏感肌皮肤感觉信号传入增强，耐受阈值降低，对外界微弱刺激反应过度，同时刺激激活皮肤不同细胞类型诱导释放促炎细胞因子和趋化因子，炎性细胞浸润导致皮肤出现一系列敏感症状。但是导致皮肤敏感症状的原因非常多，比如：

一是敏感肌肤的神经源高反应性通常与瞬时受体电位通道香草醛亚型-1(TRPV1)和神经肽的释放作用有关。前者为非选择性阳离子通道(主要是钙离子)，可被各种外因性及内因性的物理及化学刺激所激发，如温度超过43℃、pH值低(酸性环境)以及辣椒素(辣椒的有效成分)，与炎症的发生相关和传递疼痛信号；后者涉及的神经肽有降钙素基因相关肽(CGPR)。

二是促炎细胞因子生成，促使皮肤出现红肿热痛现象。敏感性肌肤受到紫外线等刺激，诱导皮肤表皮的角蛋白细胞产生促黑激素前体(POMC)和促黑激素(α-MSH)，后者进一步促进促炎细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的产生。IL-8是一种趋化性细胞因子，可以促进炎症细胞趋化和诱导细胞增殖。TNF-α是一种强效的促炎性细胞因子，促使血管通透性增加，皮肤出现水肿和红血丝。另一些内源性炎症因子如缓激肽、神经生长因子、前列腺素类(如PGE2)、蛋白酶激活受体(如PAR-2，可导致血管舒张)也与炎症发生有关。而且炎症因子的种类也有非常多种，引起皮肤过敏的机理同样非常复杂。

可见引起皮肤敏感症状的原因非常多，不能随意选择具有舒缓效果的任意功效物来缓解，而必须针对不同靶点位置的刺激，针对性地找到相应的针对该靶点的舒缓物质才能有效舒缓敏感。比如辣椒素会引起TRPV1的释放，因此必须找到能抑制TRPV1释放的物质才能有效舒缓辣椒素引发的皮肤敏感；比如紫外光照射会引发皮肤多种炎症因子(包括IL-1α、IL-8、PGE2和TNF-α等)的生成，需要找到能抑制相应炎症因子表达的物质才能有效舒缓紫外光引发的皮肤敏感；再比如抗衰原料视黄醇会同时引起TRPV1的释放和多种炎症因子的生成，必须找到既能抑制TRPV1的释放、又能抑制多种相应的炎症因子表达的物质，才能有效舒缓视黄醇引发的皮肤刺激。

另外，现有的舒缓抗敏物质的舒缓效果通常都比较有限，单独一种物质难以达到理想的舒缓效果，因此针对不同靶点引起的皮肤过敏，有必要找到对应该靶点的具有协同增效作用的组合物，从而有效提高针对该靶点引起的皮肤过敏的舒缓效果，才能真正解决针对该靶点引起的皮肤敏感问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种舒缓抗敏组合肽及其应用，所述舒缓抗敏组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。该组合肽在抑制TRPV1蛋白生成、抑制炎症因子IL-1α和TNF-α的表达等方面都具有明显的协同增效作用，即能更好地抑制TRPV1的释放，又能更好地抑制促炎细胞因子的生成，舒缓抗敏效果明显好于现有护肤品原料，在护肤品行业具有广阔的市场前景。

一方面，本发明提供了一种组合肽，其特征在于，包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

根据现有报道，棕榈酰三肽-8针对炎症因子TNF-α具有舒缓作用：棕榈酰三肽-8具有与α-MSH相似的亲和性，易与MC1-R结合，与α-MSH相比只有很弱的黑色素活性。在角质细胞中，棕榈酰三肽-8通过结合和激活MC1-R受体，有效减少由UVB诱导并产生的炎症介质。同时，棕榈酰三肽-8可以干扰TNF-α的生成，阻止水肿和红血丝等神经性皮炎症状。

乙酰基二肽-1鲸蜡酯能够刺激原内啡肽的释放，让皮肤舒适和放松，改变皮肤对外界刺激所产生的不适感。增加能够抑制神经和肌肉活动的神经肽，并降低刺激细胞收缩的神经递质。但是现有技术中尚未对乙酰基二肽-1鲸蜡酯的抗敏舒缓机理进行研究，并不知晓乙酰基二肽-1鲸蜡酯具体能通过哪些靶点位置实现抗敏舒缓效果。

本发明经研究证明，棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯对抑制TRPV1蛋白生成和抑制炎症因子表达都具有一定的效果；更令人意外的是，包含棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合肽，在抑制TRPV1蛋白生成、抑制炎症因子IL-1α和TNF-α的表达方面还具有非常明显的协同增效作用，可以更有效舒缓从TRPV1、IL-1α或TNF-α这三种靶点引起的刺激，但是在抑制炎症因子IL-8和PGE2的表达上，却不但没有协同增效，反而效果还不如单独的乙酰基二肽-1鲸蜡酯或棕榈酰三肽-8。可见棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合肽可以更有效舒缓辣椒素、紫外光照射等等引起的皮肤敏感，尤其适合用于视黄醇引起的刺激。

进一步地，所述棕榈酰三肽-8的含量为0.01～5％，乙酰基二肽-1鲸蜡酯的含量为0.001～5％。

另一方面，本发明提供了一种组合肽用于制备抑制TRPV1蛋白生成的制剂的用途，所述组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

进一步地，所述棕榈酰三肽-8的含量为0.01～5％，乙酰基二肽-1鲸蜡酯的含量为0.001～5％。

进一步地，所述棕榈酰三肽-8的含量为0.05～0.1％，乙酰基二肽-1鲸蜡酯的含量为0.3％。

再一方面，本发明提供了一种组合肽用于制备抑制炎症因子IL-1α表达的制剂的用途，所述组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

再一方面，本发明提供了一种组合肽用于制备抑制炎症因子TNF-α表达的制剂的用途，所述组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

再一方面，本发明提供了一种组合肽用于制备舒缓抗过敏制剂的用途，所述组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

进一步地，所述舒缓抗过敏包括抑制TRPV1蛋白生成；

进一步地，所述舒缓抗过敏还包括抑制炎症因子IL-1α、PGE2和TNF-α的表达。

本发明提供的组合肽，能够抑制TRPV1蛋白生成、抑制炎症因子IL-1α和TNF-α的表达，因此只要刺激源是从TRPV1、IL-1α或TNF-α这三种靶点引起的刺激，都可以采用该组合肽，能够获得更好的舒缓效果。

再一方面，本发明提供了一种组合肽用于制备抗炎制剂的用途，所述组合肽包括棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

进一步地，所述抗炎包括抑制炎症因子IL-1α和TNF-α的表达。

因此本发明提供的是一种既能抑制TRPV1的释放，又能抑制促炎细胞因子IL-1α和TNF-α的生成，并且相比现有的舒缓物质，具有更好的舒缓抗敏效果，从不同靶点发挥协同作用以缓解皮肤敏感，改善皮肤红肿、灼热、瘙痒等各类肌肤不适症状，能用于制备护肤品，满足多种敏感性肌肤的需求。

本发明的有益效果为：

(1)发现棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯对抑制TRPV1蛋白生成和抑制炎症因子表达都具有一定的效果；

(2)提供了一种包含棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合肽，在抑制TRPV1蛋白生成、抑制炎症因子IL-1α和TNF-α的表达等方面都具有明显的协同增效作用；适合用于舒缓从TRPV1、IL-1α或TNF-α这三种靶点引起的刺激；可以用于舒缓辣椒素、紫外光照射等等引起的皮肤敏感，尤其适合用于视黄醇引起的刺激；

(3)即能更好地抑制TRPV1的释放，又能更好地抑制促炎细胞因子的生成，有效调控感觉神经过度反应和减少炎症反应，是一种理想且全面的舒缓抗敏产品；

(4)舒缓抗敏效果明显好于现有护肤品原料，在护肤品行业具有广阔的市场前景。

附图说明

图1实施例1提供的抑制TRPV1蛋白生成的效果测试结果图；

图2实施例2提供的抑制炎症因子IL-1α的效果测试结果图；

图3实施例2提供的抑制炎症因子IL-8的效果测试结果图；

图4实施例2提供的抑制炎症因子PGE2的效果测试结果图；

图5实施例2提供的抑制炎症因子TNF-α的效果测试结果图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的优选实施例作进一步详细描述，需要指出的是，以下实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用，本发明的实施例中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均能够以任何方式组合。

实施例1：棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯对抑制TRPV1蛋白生成的效果测试1、测试材料

1.1测试系统

本实施例进行的测试采用3D表皮皮肤模型

1.2主要试剂

EpiGrowth培养液(博溪生物)、PBS(博士德)、TRPV1抗体(Abcam)、辣椒素CAP(沃凯)、trans-4-tert-butylcyclohexanol(梯希爱)、多聚甲醛(国药)。

1.3主要设备

CO

2、测试方法

2.1工作液配置

配液：按照测试方案(表1)配置受试物工作液。

表1、测试方案

3、操作步骤

1)根据表2测试方案，将模型转移到6孔板中(提前添加0.9mL EpiGrowth培养液)，在6孔板上标注测试组编号。

2)BC组不做任何处理，NC组、PC组和样品组液下添加含15μM辣椒素CAP的EpiGrowth培养液，PC组液下添加相应浓度的样品工作液，样品组表面添加相应浓度的样品工作液，将样品均匀分布于模型表面，置于CO

3)孵育结束后，用无菌PBS溶液清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签拭去模型内、外残留液体。

4)TRPV1检测：用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定30min后，进行辣椒素受体(TRPV1)的免疫荧光检测(IOD值)，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。

4、数据处理分析

应用GraphPadPrism作图，结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异，P<0.01认为具有极显著差异。

测试结果如图1所示。

由图1可以看出，与NC组相比，样品组A、样品组B、样品组C、样品组D和样品组E的TRPV1蛋白含量显著下降，可见都具有一定的抑制TRPV1蛋白释放的效果。

与单独采用0.05％棕榈酰三肽-8(样品组A)，和单独采用0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组C)相比，同时含有0.05％棕榈酰三肽-8和0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组D)时，TRPV1蛋白含量显著下降，可见0.05％棕榈酰三肽-8和0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯组合对抑制TRPV1蛋白释放产生了明显的协同增效作用。

与单独采用0.1％棕榈酰三肽-8(样品组B)，和单独采用0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组C)相比，同时含有0.1％棕榈酰三肽-8和0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组E)时，TRPV1蛋白含量显著下降，可见0.1％棕榈酰三肽-8和0.3％乙酰基二肽-1鲸蜡酯组合对抑制TRPV1蛋白释放产生了明显的协同增效作用。

同时，本实施例还对0.01～5％的棕榈酰三肽-8和0.001～5％的乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合进行测试，发现其相对于单独的棕榈酰三肽-8或单独乙酰基二肽-1鲸蜡酯，在抑制TRPV1蛋白释放方面都具有一定的协同增效作用。

实施例2：棕榈酰三肽-8和乙酰基二肽-1鲸蜡酯对抑制炎症因子的效果测试

1、测试材料

1.1测试系统

本实施例进行的测试所用细胞为角质形成细胞，批号：Ep21072702，由广东博溪生物科技有限公司提供。

1.2主要试剂

KC2500(广东博溪)、PBS(索莱宝)、MTT(Sigma)、DMSO(Sigma)、IL-1αELISA试剂盒(abcam)、IL-8ELISA试剂盒(Abcam)、PGE2 ELISA试剂盒(Abcam)、TNF-αELISA试剂盒(Abcam)。

1.3主要设备

CO2培养箱(Thermo，150i)、超净工作台(苏州安泰，SW-CJ-1F)、酶标仪(BioTek，Epoch)、倒置显微镜(Olympus，CKX41)。

2、测试方法

2.1工作液配置

配液：按照测试方案(表2)配置受试物工作液。

表2、测试方案

2.2操作步骤

1)细胞接种：角质形成细胞按8×10

2)试验分组：根据测试方案，待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，每孔加样2mL，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％ CO

3)UVB照射：PBS清洗细胞后，根据测试方案，对有UVB照射的组别进行300mJ/cm

4)后孵育：PBS清洗细胞后，将6孔板放置在培养箱(37℃、5％ CO

5)收集细胞上清：孵育培养24h后，收集细胞培养上清液于EP管中，置于-80℃冰箱冷冻保存。

6)ELISA检测：根据ELISA检测试剂盒的操作说明书进行检测分析。

2.3数据处理分析

应用GraphPad Prism作图，结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异，P<0.01认为具有极显著差异。

2.4测试结果

(1)IL-1α测试结果

IL-1α的测试结果见图2，从图2可以看出，与NC组相比，样品组A、样品组B、样品组C的IL-1α含量均显著下降，可见棕榈酰三肽-8、乙酰基二肽-1鲸蜡酯，及两者的组合都能在一定程度上抑制炎症因子IL-1α的表达。

与单独采用0.1％棕榈酰三肽-8(样品组A)，和单独采用0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组B)相比，同时含有0.1％棕榈酰三肽-8和0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组C)时，炎症因子IL-1α含量显著下降，可见0.1％棕榈酰三肽-8和0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯组合对抑制炎症因子IL-1α的表达方面都产生了明显的协同增效作用。

同时，本实施例还对0.01～5％的棕榈酰三肽-8和0.001～5％的乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合进行测试，发现其相对于单独的棕榈酰三肽-8或单独的乙酰基二肽-1鲸蜡酯，在抑制炎症因子IL-1α的表达方面都具有一定的协同增效作用。

(2)IL-8测试结果

IL-8的测试结果见图3，从图3可以看出，与NC组相比，样品组B、样品组C的IL-8含量均显著下降，而样品组A与NC组相比没有明显下降，可见棕榈酰三肽-8对抑制炎症因子IL-8的表达效果并不理想，而乙酰基二肽-1鲸蜡酯，或棕榈酰三肽-8与乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合，都能在一定程度上抑制炎症因子IL-8的表达，且棕榈酰三肽-8与乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合对抑制炎症因子IL-8表达的效果要低于单独采用乙酰基二肽-1鲸蜡酯的效果。

(3)PGE2测试结果

PGE2的测试结果见图4，从图4可以看出，与NC组相比，样品组A、样品组B、样品组C的PGE2含量均显著下降，但与样品组A、样品组B相比，样品组C的PGE2含量并没有显著区别，可见棕榈酰三肽-8、乙酰基二肽-1鲸蜡酯都具有抑制炎症因子PGE2表达的效果，但是棕榈酰三肽-8与乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合在抑制炎症因子PGE2表达方面却没有协同增效的作用，抑制炎症因子PGE2表达的效果在两者组合后无法进一步提升，甚至效果还不如单独的棕榈酰三肽-8或乙酰基二肽-1鲸蜡酯。

(4)TNF-α测试结果

TNF-α的测试结果见图5，从图5可以看出，与NC组相比，样品组A、样品组B、样品组C的TNF-α含量均显著下降，可见棕榈酰三肽-8、乙酰基二肽-1鲸蜡酯，及两者的组合都能在一定程度上抑制炎症因子TNF-α的表达。

与单独采用0.1％棕榈酰三肽-8(样品组A)，和单独采用0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组B)相比，同时含有0.1％棕榈酰三肽-8和0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯(样品组C)时，炎症因子TNF-α含量显著下降，可见0.1％棕榈酰三肽-8和0.006％乙酰基二肽-1鲸蜡酯组合对抑制炎症因子TNF-α的表达方面都产生了明显的协同增效作用。

同时，本实施例还对0.01～5％的棕榈酰三肽-8和0.001～5％的乙酰基二肽-1鲸蜡酯的组合进行测试，发现其相对于单独的棕榈酰三肽-8或单独的乙酰基二肽-1鲸蜡酯，在抑制炎症因子TNF-α的表达方面都具有一定的协同增效作用。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。