一种苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测方法。

背景技术

苯磺酸阿曲库铵英文名称为Atracurium besilate，是非除极型肌松药，常用作麻醉辅助剂，促进术前气管插管以及维持术间肌肉松弛，其特点是中时效，起效快；主要代谢物从尿液中排泄。在现有的工艺合成苯磺酸阿曲库铵的过程中可能会产生相关杂质，如丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯等，该类杂质会影响苯磺酸阿曲库铵的纯度及临床用药的安全。根据《中国药典》相关指导原则要求，药品质量标准对杂质和杂质残留有机溶剂应严格规定杂质的限度。目前并未有文献或药典对苯磺酸阿曲库铵原料药中的丙烯酸类提供一种准确、方便的检测方法，丙烯酸类杂质会影响苯磺酸阿曲库铵的质量，建立一种检测苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸类物质的方法十分有必要；因此本发明提供一种能够满足苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸类检测的方法。

发明内容

本发明针对苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测，提出了一种具有优异的专属性、定量限的检测方法，具体技术方案如下：

一种苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测方法，丙烯酸、丙烯酸甲酯以及丙烯酸乙酯结构分别如式I、II、Ⅲ所示：

所述检测方法是采用高效液相色谱法进行检测，所述检测包括配制空白溶液、对照品储备液、对照品溶液、供试品溶液，色谱条件均为：流速为1.0mL/min，进样体积为10μL，检测波长为202nm，柱温为35℃，所述丙烯酸的定量限为0.072μg/mL，丙烯酸甲酯的定量限0.030μg/mL，丙烯酸乙酯的定量限为0.048μg/mL。

进一步的，所述丙烯酸的检测步骤如下：

(1)空白溶液：乙醇作为稀释剂；

(2)对照品储备液：精密称定丙烯酸对照品储备液取丙烯酸对照品72.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用上述步骤(1)中的稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀即得浓度为7.2mg/mL丙烯酸对照品储备液；

(3)对照品溶液：精密称定丙烯酸对照品储备液1mL置于10mL棕色容量瓶中，用上述步骤(1)中的稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为720μg/mL丙烯酸对照品溶液；

(4)供试品溶液：精密称定苯磺酸阿曲库铵原料药52.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用上述步骤(1)中的稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为5.2mg/mL的供试品溶液；(5)采用气相色谱法对上述空白溶液、对照品溶液、供试品溶液进行检测并记录色谱图。

进一步的，所述色谱条件：采用WAT054275(4.6×250mm×5μm)色谱柱，流动相为乙腈：磷酸盐缓冲液＝5：95进行等度洗脱。

进一步的，所述丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯的检测步骤如下：

(1)空白溶液：乙腈作为稀释剂；

(2)对照品储备液：精密称定丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品50.0mg、40.0mg，分别置于25mL棕色容量瓶中，用上述步骤(1)中的稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度分别为2.0mg/mL、1.6mg/mL的丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品储备液；

(3)对照品溶液：精密称定丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品储备液各1mL，分别置于10mL棕色容量瓶中，用上述步骤(1)中的稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度分别为200μg/mL、160μg/mL丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品溶液；

(4)供试品溶液：精密称定苯磺酸阿曲库铵原料药50.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为5.0mg/mL的供试品溶液；

(5)采用气相色谱法对上述空白溶液、对照品溶液、供试品溶液进行检测并记录色谱图。

进一步的，所述色谱条件：采用WAT054275(4.6×250mm×5μm)色谱柱，流动相为乙腈：磷酸盐缓冲液＝25：75进行等度洗脱。

进一步的，所述流动相磷酸盐缓冲液的配制：精密称定磷酸氢二钠17.8g、磷酸二氢钾17.0g，加1000mL超纯水溶解，通过加入磷酸调节pH为2.0，过滤膜后超声30min。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果如下：

本申请提供的苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸类化合物的检测方法，具体为采用高效液相色谱法对原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测，达到对对丙烯酸类化合物检测的目的，该方法专属性强，定量限低，丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的定量限分别为0.072μg/mL、0.030μg/mL、0.048μg/mL，满足苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测要求，从而有效地控制该药的质量，适合实际应用和推广，具有广阔的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例技术描述中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为本发明实施例1空白溶液的高效液相色谱图。

图2为本发明实施例1供试品溶液的高效液相色谱图。

图3为本发明实施例1对照品溶液的高效液相色谱图。

图4为本发明实施例2空白溶液的高效液相色谱图。

图5为本发明实施例2供试品溶液的高效液相色谱图。

图6为本发明实施例2对照品溶液的高效液相色谱图。

图7为本发明实施例2对照品溶液的高效液相色谱图。

其中，其中图5供试品溶液为丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯供试品溶液，图6对照品溶液为丙烯酸甲酯对照品溶液，图7为丙烯酸乙酯对照品溶液。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

一种苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯及丙烯酸乙酯的检测方法，丙烯酸、丙烯酸甲酯以及丙烯酸乙酯结构分别如式I、II、Ⅲ所示：

所述检测方法是采用高效液相色谱法进行检测，所述检测包括配制空白溶液、对照品储备液、对照品溶液、供试品溶液，色谱条件均为：流速为1.0mL/min，进样体积为10μL，检测波长为202nm，柱温为35℃，所述丙烯酸的定量限为0.072μg/mL，丙烯酸甲酯的定量限0.030μg/mL，丙烯酸乙酯的定量限为0.048μg/mL。

实施例1：

(1)空白溶液、对照品储备液、对照品溶液、供试品溶液的配制，其中：

空白溶液：乙醇作为稀释剂；对照品储备液：精密称定丙烯酸对照品储备液取丙烯酸对照品72.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀即得浓度为7.2mg/mL丙烯酸对照品储备液；对照品溶液：精密称定丙烯酸对照品储备液1mL置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为720μg/mL丙烯酸对照品溶液；供试品溶液：精密称定苯磺酸阿曲库铵原料药52.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为5.2mg/mL的供试品溶液。

(2)丙烯酸的检测：采用WAT054275(4.6×250mm×5μm)色谱柱，流动相为乙腈：磷酸缓冲液(磷酸调pH至2.0)＝5：95进行等度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，进样体积为10μL，对上述(1)中的空白溶液、供试品溶液、对照品溶液进行检测，记录色谱图，其色谱图分别为图1-3所示。

(3)专属性：取实施例1制备浓度为720μg/mL的丙烯酸对照品溶液，采用高效液相色谱法进行检测，液相色谱具体条件如实施例1所述，记录色谱图。从图3可以看出，在保留时间7.187min时出现了丙烯酸对照品的色谱峰，由图1-3可知丙烯酸峰型良好，分离度均符合要求，且空白溶液对测定均无干扰。

实施例2：

(1)空白溶液、对照品储备液、对照品溶液、供试品溶液的配制，其中：

空白溶液：乙腈作为稀释剂；对照品储备液：精密称定丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品50.0mg、40.0mg，分别置于25mL棕色容量瓶中，用稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度分别为2.0mg/mL、1.6mg/mL的丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品储备液；对照品溶液：精密称定丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品储备液各1mL，分别置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度分别为200μg/mL、160μg/mL丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品溶液；供试品溶液：精密称定苯磺酸阿曲库铵原料药50.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂溶解稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为5.0mg/mL的供试品溶液；

(2)丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯的检测：采用WAT054275(4.6×250mm×5μm)色谱柱，流动相为乙腈：磷酸缓冲液(磷酸调pH至2.0)＝25：75进行等度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，进样体积为10μL，对上述(1)中空白溶液、供试品溶液、对照品溶液进行检测，记录色谱图，上述丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯检测得色谱条件为：其色谱图分别为图4-7所示。

(3)专属性：取实施例2制备浓度为200μg/mL的丙烯酸甲酯和160μg/mL的丙烯酸乙酯对照品溶液采用高效液相色谱法进行检测，液相色谱具体条件如实施例2所述，记录色谱图。

从图6和图7可以看出，在保留时间8.218min时出现了丙烯酸甲酯对照品的色谱峰，在保留时间15.707min时出现了丙烯酸乙酯对照品的色谱峰，从图4-7可以看出，丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯峰型良好，且色谱峰分离度良好，空白溶液和苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯的检测无干扰，说明本发明提供的液相色谱法专属性良好。

实施例3：

定量限：将实施例1、2制备的浓度为7.2mg/mL、2.0mg/mL、1.6mg/mL的丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯对照品储备液采用稀释剂逐级定量稀释，然后采用高效液相色谱法进行检测，液相色谱具体条件如实施例1、2所述，记录谱图，按信噪比不低于10:1，得到定量限，采用高效液相色谱法进行检测，连续进样6次，液相色谱具体条件如实施例1所述，记录谱图。结果如下表1-2所示：

表1丙烯酸定量限溶液检测结果

表2丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯定量限溶液检测结果

实施例4：

按照实施例1、2提供的苯磺酸阿曲库铵原料药中丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯的检测方法，检测6批苯磺酸阿曲库铵原料药样品中的丙烯酸的含量。结果如下表3-4所示：

表3丙烯酸酸在样品中的测定结果

表4丙烯酸酸甲酯、丙烯酸乙酯在样品中的测定结果

从表3中可以看出，6批苯磺酸阿曲库铵原料药样品中未含有丙烯酸，且符合限度规定(≤0.1％)；从表4中可以看出，6批苯磺酸阿曲库铵原料药样品中未含有丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯，且符合限度规定(≤0.1％)。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。