花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺及其应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺

技术领域

本发明涉及具有治疗活性的组合物及其加工工艺技术领域，尤其涉及花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺及其应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺。

背景技术

花椒籽油中富含ω-3脂肪酸组合物，包括α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，无论作为药品的原料，还是作为保健食品的原料，均具有广阔的开发应用前景。研究表明花椒籽油中的ω-3脂肪酸组合物具有增强免疫、抗疲劳和保护器官免受自由基损伤等多方面药理作用。但至今为止，对花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物在抗肠道炎症方面的研究未见公开记载。这主要是由于ω-3脂肪酸在花椒籽油中纯度偏低，而且其本身性质不够稳定，在阳光照射、高温、潮湿、强酸碱等条件下极易发生氧化反应从而失去活性，而且ω-3脂肪酸的水溶性差、易降解、在肠道内代谢损失率高等劣势使得ω-3脂肪酸组合物的生物利用度受到了限制。

发明内容

本发明提供一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺及其应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，以解决现有技术中ω-3脂肪酸纯度低、性质不稳定、易降解、生物利用度低的问题。

本发明提供一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：步骤A：将乙醇与尿素混合后，加热回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入花椒籽油，继续加热回流，最后冷却至室温；步骤C：继续降温，在不同温度和时间下进行两次包合；步骤D：分离并纯化，即得ω-3脂肪酸组合物。

进一步地，步骤A中选用质量分数为95％的乙醇与纯度为99％的尿素，乙醇与尿素质量比为2:1-9:1，回流温度为80℃-85℃。

进一步地，步骤B中，花椒籽油与乙醇尿素混合液的体积比为1:1-1:4,回流温度为80℃-85℃，时间为20-40min，冷却至20℃-30℃。

进一步地，步骤C中，第一次包合的温度为0℃-5℃，静置时间为3-24H；第二次包合的温度为-10℃-0℃，静置时间为3-6H。

本发明还涉及将上述提取工艺获得的ω-3脂肪酸组合物应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，包括以下步骤：步骤a：将ω-3脂肪酸组合物溶于缓冲液中，得到ω-3脂肪酸组合物缓冲液；步骤b：向ω-3脂肪酸组合物缓冲液中加入包埋壁材，匀速搅拌反应，得到含有ω-3脂肪酸包埋物的混合液；步骤c：将含有ω-3脂肪酸包埋物的混合液分离并干燥，即得到ω-3脂肪酸包埋物；步骤d：取ω-3脂肪酸包埋物溶解于缓冲液中，得到包埋物缓冲液；将稳定助剂加入乙醇水溶液中，得到稳定助剂乙醇溶液；步骤e：将稳定助剂乙醇溶液加入包埋物缓冲液中，搅拌反应，得到含有缓释ω-3脂肪酸组合物的混合液；步骤f：将含有缓释ω-3脂肪酸组合物的混合液分离并干燥，即得到缓释ω-3脂肪酸组合物。

进一步地，步骤a中所用缓冲液为磷酸盐、醋酸盐或者柠檬酸的水溶液，pH值为3-5；ω-3脂肪酸组合物与缓冲液体积比为1:1-1:10；将ω-3脂肪酸组合物与缓冲液进行超声波控温处理：温度为30℃-40℃，时间为10-20min。

进一步地，步骤b中的包埋壁材为环糊精、多孔淀粉、微孔淀粉中的一种；ω-3脂肪酸组合物与包埋壁材的重量比为1:5-1:20。

进一步地，步骤b中在30℃-40℃的温度下，搅拌反应0.5H-3H。

进一步地，步骤d中所用缓冲液为磷酸盐、醋酸盐或者柠檬酸的水溶液，pH值为3-5；将包埋物和缓冲液进行超声波控温处理：温度为30℃-40℃，时间为10-20min；稳定助剂为明胶、卵磷脂、海藻酸钠中的一种或几种组合，稳定助剂乙醇溶液中稳定助剂的质量分数为1％-5％。

进一步地，步骤e中稳定助剂乙醇溶液与包埋物缓冲液的体积比为1:1-1:3，搅拌速度为20-50RPM，时间为1-3H；向包埋物缓冲液中滴加稳定助剂乙醇溶液，滴加时间为10-30min。

本发明的花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺及其应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，通过在不同温度下尿素二次包合花椒籽油中的ω-3脂肪酸组合物，提高了ω-3脂肪酸组合物的纯度，将ω-3脂肪酸组合物包埋后，再与稳定助剂耦合，提高了ω-3脂肪酸组合物的稳定性，增强了其缓释性，解决了现有技术中ω-3脂肪酸纯度低、性质不稳定、易降解、生物利用度低的问题。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例的花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺步骤示意图；

图2是本发明应用实施例2中添加0％、2.5％、5.0％缓释ω-3脂肪酸组合物后果蝇生存率的结果图；

图3是本发明应用实施例2中缓释ω-3脂肪酸组合物对果蝇肠道上皮细胞死亡的改善状况扫描图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获取的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，如图1所示，包括以下步骤：

步骤A：将乙醇与尿素混合后，加热回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入花椒籽油，继续加热回流，最后冷却至室温；

步骤C：继续降温，在不同温度和时间下进行两次包合；第一次包合得到的一次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为30-40％，第二次包合得到的二次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为40-60％；

步骤D：分离并纯化，即得ω-3脂肪酸组合物。

上述实施例中步骤D的分离纯化，采用化学领域中的常规操作即可，优选地，先离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；再用温水水洗过滤得到的二次包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。实施例中的离心过滤、蒸发、水洗、浓缩等步骤均为现有技术，也属于化学领域中的惯常操作步骤；实施例中所用花椒籽油为成品油。

本发明实施例还公开了将上述实施例中获得的ω-3脂肪酸组合物应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，包括以下步骤：

步骤a：将ω-3脂肪酸组合物溶于缓冲液中，得到ω-3脂肪酸组合物缓冲液；

步骤b：向ω-3脂肪酸组合物缓冲液中加入包埋壁材，匀速搅拌反应，得到含有ω-3脂肪酸包埋物的混合液；

步骤c：将含有ω-3脂肪酸包埋物的混合液分离并干燥，即得到ω-3脂肪酸包埋物；

步骤d：取ω-3脂肪酸包埋物溶解于缓冲液中，得到包埋物缓冲液；将稳定助剂加入乙醇水溶液中，得到稳定助剂乙醇溶液；

步骤e：将稳定助剂乙醇溶液缓慢加入包埋物缓冲液中，搅拌反应，得到含有缓释ω-3脂肪酸组合物的混合液；

步骤f：将含有缓释ω-3脂肪酸组合物的混合液分离并干燥，即得到缓释ω-3脂肪酸组合物。

上述实施例中步骤c和f的分离、干燥采用化学领域中的常规操作即可，优选地，步骤c：先将含有ω-3脂肪酸包埋物的混合液离心过滤，得到过滤物，再冷冻干燥即得到ω-3脂肪酸包埋物；步骤d可采用现有技术；步骤f：蒸发除去乙醇溶液(即乙醇和水)，浓缩后再冷冻干燥，即得到缓释ω-3组合物。实施例中步骤c、f中的离心过滤、蒸发、冷冻干燥等步骤也均为现有技术，也属于化学领域中的惯常操作步骤；步骤e中，“缓慢”加搅拌有助于增加不同溶液成分的反应面；具体流速和滴速要看操作需求和设备条件，本实施例中添加时间为10-30min。

上述实施例中所用缓冲液为磷酸盐、醋酸盐或者柠檬酸水溶液，pH值为3-5；步骤b中的包埋壁材为环糊精、多孔淀粉或微孔淀粉中的一种。

实施例1

本实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：

步骤A：将40ml质量分数为95％的乙醇与20g纯度为99％的尿素混合后，加热体系，使其在80℃-85℃下回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入60ml花椒籽油，继续在80℃-85℃下加热回流20min，最后冷却至20℃；

步骤C：将体系继续降温至0℃，然后静置3H，此时得到的一次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为30％；继续降温至-10℃，然后将体系再静置3H，此时得到的二次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为40％；

步骤D：将体系离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；用温水水洗过滤得到的二次包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。

实施例2

本实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：

步骤A：将200ml质量分数为95％的乙醇与40g纯度为99％的尿素混合后，加热体系，使其在80℃-85℃下回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入60ml花椒籽油，继续在80℃-85℃下加热回流30min，最后冷却至25℃；

步骤C：将体系继续降温至2℃，然后静置12H，此时得到的一次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为34％；继续降温至-4℃，然后将体系再静置4H，此时得到的二次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为50％；

步骤D：将体系离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；用温水水洗过滤得到的二次包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。

实施例3

本实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：

步骤A：将105ml质量分数为95％的乙醇与15g纯度为99％的尿素混合后，加热体系，使其在80℃-85℃下回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入60ml花椒籽油，继续在80℃-85℃下加热回流40min，最后冷却至30℃；

步骤C：将体系继续降温至5℃，然后静置24H，此时得到的一次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为40％；继续降温至0℃，然后将体系再静置6H，此时得到的二次包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为60％；

步骤D：将体系离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；用温水水洗过滤得到的二次包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。

对比实施例1

本实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：

步骤A：将200ml质量分数为95％的乙醇与40g纯度为99％的尿素混合后，加热体系，使其在80℃-85℃下回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入60ml花椒籽油，继续在80℃-85℃下加热回流30min，最后冷却至25℃；

步骤C：将体系继续降温至2℃，然后静置16H，此时得到的包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为36％；

步骤D：将体系离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；用温水水洗过滤得到的包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。

对比实施例2

本实施例公开了一种花椒籽油中ω-3脂肪酸组合物的提取工艺，包括以下步骤：

步骤A：将200ml质量分数为95％的乙醇与40g纯度为99％的尿素混合后，加热体系，使其在80℃-85℃下回流，使尿素全部溶解于乙醇，得到乙醇尿素混合液；

步骤B：向步骤A所得的乙醇尿素混合液中加入60ml花椒籽油，继续在80℃-85℃下加热回流30min，最后冷却至25℃；

步骤C：将体系继续降温至-4℃，然后静置16H，此时得到的包合物中ω-3脂肪酸组合物的相对重量百分比为40％；

步骤D：将体系离心过滤，将滤液蒸发回收乙醇溶剂；用温水水洗过滤得到的包合物至下层液体澄清透明无尿素，回收上层的ω-3脂肪酸组合物，然后浓缩、脱水，即得ω-3脂肪酸组合物。

实施例4

本实施例公开了将实施例1中获得的ω-3脂肪酸组合物应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，包括以下步骤：

步骤a：将20mlω-3脂肪酸组合物溶于20ml缓冲液中，缓冲液为pH值为3的磷酸盐水溶液，在30℃下，超声波控温处理10min；

步骤b：向体系中加入100g环糊精作为包埋壁材，在30℃下，匀速搅拌反应0.5H,得到混合液；

步骤c：将混合液离心过滤，得到过滤物，再对得到的过滤物冷冻干燥即得到ω-3脂肪酸包埋物；

步骤d：将ω-3脂肪酸包埋物溶解于缓冲液中，缓冲液为pH值为3的磷酸盐水溶液，在30℃下，超声波控温处理10min，得到包埋物缓冲液；将1g稳定助剂明胶加入99ml质量分数为95％的乙醇水溶液中，得到稳定助剂乙醇溶液；

步骤e：将稳定助剂乙醇溶液缓慢加入包埋物缓冲液中，滴加时间为10min，搅拌反应1H，搅拌速度为20RPM；

步骤f：蒸发除去乙醇溶液，浓缩后再冷冻干燥，即得到缓释ω-3脂肪酸组合物。

实施例5

本实施例公开了将实施例2中获得的ω-3脂肪酸组合物应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，包括以下步骤：

步骤a：将20mlω-3脂肪酸组合物溶于100ml缓冲液中，缓冲液为pH值为4的醋酸盐水溶液，在40℃下，超声波控温处理20min；

步骤b：向体系中加入200g多孔淀粉作为包埋壁材，在40℃下，匀速搅拌反应3H,得到混合液；

步骤c：将混合液离心过滤，得到过滤物，再对得到的过滤物冷冻干燥即得到ω-3脂肪酸包埋物；

步骤d：将ω-3脂肪酸包埋物溶解于缓冲液中，缓冲液为pH值为4的醋酸盐水溶液，在40℃下，超声波控温处理20min，得到包埋物缓冲液；将3g稳定助剂卵磷脂加入97ml质量分数为95％的乙醇水溶液中，得到稳定助剂乙醇溶液；

步骤e：将稳定助剂乙醇溶液缓慢加入包埋物缓冲液中，滴加时间为20min，搅拌反应3H，搅拌速度为40RPM；

步骤f：蒸发除去乙醇溶液，浓缩后再冷冻干燥，即得到缓释ω-3脂肪酸组合物。

实施例6

本实施例公开了将实施例3中获得的ω-3脂肪酸组合物应用于抗肠道炎症缓释药物的加工工艺，包括以下步骤：

步骤a：将20mlω-3脂肪酸组合物溶于200ml缓冲液中，缓冲液为pH值为5的柠檬酸水溶液，在35℃下，超声波控温处理13min；

步骤b：向体系中加入400g微孔淀粉作为包埋壁材，在35℃下，匀速搅拌反应2H,得到混合液；

步骤c：将混合液离心过滤，得到过滤物，再对得到的过滤物冷冻干燥即得到ω-3脂肪酸包埋物；

步骤d：将ω-3脂肪酸包埋物溶解于缓冲液中，缓冲液为pH值为5的柠檬酸水溶液，在35℃下，超声波控温处理15min，得到包埋物缓冲液；将5g稳定助剂海藻酸钠加入95ml质量分数为95％的乙醇水溶液中，得到稳定助剂乙醇溶液；

步骤e：将稳定助剂乙醇溶液缓慢加入包埋物缓冲液中，滴加时间为30min，搅拌反应2H，搅拌速度为50RPM；

步骤f：蒸发除去乙醇溶液，浓缩后再冷冻干燥，即得到缓释ω-3脂肪酸组合物。

应用实施例1

参照何小解等相关文献(模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响

[J].湖南农业大学学报(自然科学版)，2005，31(5):69－71.)，进行人工模拟胃肠液的配制：

人工模拟胃液：取9mL浓盐酸，加水约800mL及胃蛋白酶10g，充分溶解后，调节pH值至1.3，定容至1000mL，即为人工模拟胃液。

人工模拟肠液：称取6.8g磷酸二氢钾(KH

将实施例3获得的ω-3脂肪酸组合物和实施例5获得的缓释ω-3脂肪酸组合物分别加入人工模拟胃液和人工模拟肠液中做对比试验，结果如下：

表1ω-3脂肪酸组合物和缓释ω-3脂肪酸组合物在人工模拟胃液中不同时间下释放度比对表

表2ω-3脂肪酸组合物和缓释ω-3脂肪酸组合物在人工模拟肠液中不同时间下释放度比对表

由表1和表2中的数据可得知，在同样的时间内，缓释ω-3脂肪酸组合物在人工模拟胃液和肠液中的释放度较ω-3脂肪酸组合物大大降低，从而可以大大降低ω-3脂肪酸组合物的降解速度及其在肠道内代谢的损失率，大大提高其生物利用度。

应用实施例2

果蝇缺乏哺乳动物所具有的获得性免疫系统，也没有抗体和补体系统，只能通过天然免疫系统对病原微生物的侵染作出应答。作为模式生物，果蝇肠道结构与哺乳动物相似，而且干细胞增殖与分化机制与哺乳动物具有高度相似性，因此利用果蝇作为肠道炎症损伤模型可以快速而深入的探究缓释ω-3脂肪酸组合物对肠道炎症功能的影响。

参考李文佳(刺五加提取物对果蝇免疫功能的影响[J].中草药，2012，43(10):1997-2001.)等的方法建立果蝇培养基，用病原微生物白僵菌的孢子、绿脓杆菌和表面活性剂SDS(中文名：十二烷基硫酸钠)喂食果蝇来建立果蝇肠道炎症功能损伤模型，即诱发果蝇肠道炎症。通过比较0添加和添加2.5％、5％的缓释ω-3脂肪酸组合物对果蝇生存率、肠道上皮细胞死亡情况等指标的影响来探究缓释ω-3脂肪酸组合物对肠道炎症损伤的修复作用。结果发现缓释ω-3脂肪酸组合物具有很好的抗炎、抗氧化、清除自由基等活性，可用于制备抗肠道炎症的药物，且释放稳定，缓释性能强，如说明书附图2和3所示。