白杨梅萃取物用于抵抗老化或减重的用途

技术领域

本发明涉及一种白杨梅萃取物的用途，特别是关于白杨梅萃取物用于制备抵抗肌肤老化或减重组合物。

背景技术

杨梅(学名：Myrica rubra)是杨梅科Myricaceae杨梅属Myrica亚热带的乔木植物。喜湿，耐阴寒，生长于温带、亚热带。一般的杨梅是红色果实，具有白色果实的白杨梅是属于杨梅内较稀少的品种。

杨梅在本草纲目记载：“盐藏食，去痰止呕哕，消食下酒。干作屑，临饮酒时服方寸匕，止吐酒。止渴，和五脏，能涤肠胃，除烦愦恶气。烧灰服，断下痢，甚验。盐者常含一枚，咽汁，利五脏下气”。

发明内容

有鉴于此，为了更积极了解白杨梅的应用，故而提出一种白杨梅萃取物，其可应用于制备抵抗肌肤老化或减重组合物。

在一些实施例中，一种白杨梅萃取物的用途，其是用于制备抗肌肤老化的组合物，白杨梅萃取物是以水为溶剂提取自白色的杨梅果实。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以促进胶原蛋白分泌。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少肌肤泛红。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少肌肤皱纹。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少肌肤纹理。

在一些实施例中，一种白杨梅萃取物的用途，其是用于制备减重的组合物，白杨梅萃取物是以水为溶剂提取自白色的杨梅果实。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少脂肪细胞内油滴堆积。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少体重。

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少体脂肪。

在一些实施例中，组合物为食品组合物，且组合物内至少包含白杨梅萃取物0.4mL/日。

在一些实施例中，一种杨梅苷(Myricitrin)的用途，其是用于制备提升新陈代谢的组合物。

在一些实施例中，杨梅苷可以提升粒线体活性。

综上所述，任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备抵抗肌肤衰老的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备促进胶原蛋白分泌、减少肌肤泛红、减少肌肤皱纹、减少肌肤纹理的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备减重的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备减少脂肪细胞内油滴堆积、减少体重、减少体脂肪的组合物。

附图说明

图1是白杨梅萃取物促进胶原蛋白分泌量测试结果图。

图2是白杨梅萃取物减少脂肪油滴含量测试结果图。

图3是白杨梅萃取物人体测试减少肌肤皱纹测试结果图。

图4是白杨梅萃取物人体测试减少肌肤泛红测试结果图。

图5是白杨梅萃取物人体测试减少体重测试结果图。

图6是白杨梅萃取物人体测试减少BMI指数测试结果图。

图7是白杨梅萃取物人体测试减少全身体脂肪率测试结果图。

图8是白杨梅萃取物人体测试减少躯干体脂肪率测试结果图。

图9是一实施例的活性化合物TCI-MR-01之指纹分析图谱。

图10是一实施例的白杨梅萃取物之指纹分析图谱。

图11是杨梅苷促进粒线体活性测试结果图。

其中，附图标记：

TCI-MR-01:生物活性物质

具体实施方式

如本文中所使用，术语“萃取物”系指藉由萃取作用所制备之产物。该萃取物可以溶于溶剂中之溶液形式呈现，或萃取物可为不含或大体上不含溶剂之浓缩物或精华呈现。

如本文所用“白杨梅原料”通常系指白杨梅植物的全果实，果实包括球形果核，果核外部密生多数囊状体果肉，其中果肉颜色为淡粉色至白色的浅色。果实可包含原始、冷冻、冷藏、干燥或以其他物理方式加工以利于处理之果实，其可进一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式经加工以影响原物料之大小及实体完整性之果实。

在一些实施例中，白杨梅原料是指将白杨梅果实(含果核及果肉)搅打至分裂为粉状以制得。举例而言，粉碎可以采用果汁机、调理机或均质机。在一些实施例中，白杨梅原料是指将白杨梅果实(含果核及果肉)粉碎后以12mm网目(mesh)筛网将其过筛以制得。

在一些实施例中，白杨梅萃取物是以水为溶剂对白杨梅原料进行萃取所制得。在一些实施例中，白杨梅萃取物是以水为溶剂对白杨梅原料进行加热萃取所制得，加热萃取是指将水与白杨梅原料混合后加热到85±5℃之间维持60分钟。在一些实施例中，水与白杨梅原料的重量比为1～3：5～20。在一些实施例中，水与白杨梅原料的重量比为1：5。

在一些实施例中，白杨梅萃取物是以水为溶剂对白杨梅原料进行萃取后，通过筛网以将溶剂内的固体滤除所制得。举例而言，筛网可以是400网目(mesh)的筛网。

在一些实施例中，白杨梅萃取物是以水为溶剂对白杨梅原料进行萃取后，通过筛网以将溶剂内的固体滤除，再进行减压浓缩以制得。举例而言，减压浓缩是指在60℃±5℃下进行减压浓缩至溶液的白利糖度值(Degrees Brix，°Bx)为8±0.5°Bx时停止浓缩以制得白杨梅萃取物。

在一些实施例中，白杨梅萃取物至少包含活性成分杨梅苷(Myricitrin)35.4ppm。

杨梅苷之结构式如下式I所示：

在一些实施例中，白杨梅萃取物可以制备抗肌肤老化的组合物。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由促进胶原蛋白分泌达成抗肌肤老化。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由减少肌肤泛红达成抗肌肤老化。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由减少肌肤皱纹达成抗肌肤老化。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由减少肌肤纹理达成抗肌肤老化。

于此，所指的老化(Aging)是指肌肤随着时间变化而发生各种机能下降或变化的过程。

在一些实施例中，一种白杨梅萃取物可以制备减重的组合物。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由减少脂肪细胞内油滴堆积达成减重。在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少体重。在一些实施例中，白杨梅萃取物可以减少体脂肪。

在一些实施例中，上述组合物为食品组合物，且组合物内至少包含白杨梅萃取物0.4mL/日。

在一些实施例中，一种杨梅苷(Myricitrin)的用途，其是用于制备提升新陈代谢的组合物。在一些实施例中，白杨梅萃取物经由提升粒线体活性达成减重。

在一些实施例中，前述之组合物可为医药品。换言之，此医药品包含有效含量的白杨梅萃取物。

在一些实施例中，前述之医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠道或口服的投药剂型。这些投药剂型包括，但不限于：锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似之物。

在一些实施例中，前述之医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠道(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型，这些投药剂型包括，但不限于：注射品(injection)、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(externalpreparation)以及类似之物。在一些实施例中，该医药品可以一选自于由下列所构成之群组中的非经肠道途径(parenteral routes)来投药：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。

在一些实施例中，医药品可进一步包含有被广泛地使用于药物制造技术之医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，医药上可接受的载剂可包含下列的试剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelaying agent)、脂质体(liposome)以及类似之物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。

在一些实施例中，医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成之群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)。

在一些实施例中，前述之组合物可为可食用组合物。在一些实施例中，此可食用组合物可以制成食品产品或可为食品添加物(food additive)，意即藉由现有技术方法于食材制备时添加而制得食品产品，或是于食品产品的制作过程中添加。于此，食品产品可以是与可食性材料配制成供人类或动物摄食的产品。

在一些实施例中，食品产品可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。

例一：测试样品的制备

1-1制备白杨梅萃取物：将白杨梅(学名：Myrica rubra)的白色果实(含果核及果肉，产地为中国的烘干果实全果)搅打至分散为粉状后，以12mm网目(mesh)筛网将其过筛以制得白杨梅原料。于此，采用osterizer品牌的10speed blender进行粉碎。接着，以水为溶剂，将白杨梅原料与水以1：5的重量比例混合后在85℃下萃取1小时。于此，萃取是将白杨梅原料浸泡在水中。后续，将萃取完成的白杨梅原料及水通过400网目的筛网以形成过滤液。接着，于60℃下对过滤液进行减压浓缩至溶液的白利糖度值为8±0.5°Bx时停止浓缩以制得白杨梅萃取物。于此，采用厂牌/型号：BUCHI-Rotavapor R-100的减压浓缩设备。

1-2制备红杨梅萃取物：将一般杨梅(学名：Myrica rubra)的红色果实(含果核及果肉，产地为中国台湾的烘干果实全果)搅打至分散为粉状后，以12mm网目(mesh)筛网将其过筛以制得红杨梅原料。接着，以水为溶剂，将红杨梅原料与水以1：5的重量比例混合后在85℃下萃取1小时。于此，萃取是将红杨梅原料浸泡在水中。后续，将萃取完成的红杨梅原料及水通过400网目的筛网以形成过滤液。接着，于60℃下对过滤液进行减压浓缩至溶液的白利糖度值为8±0.5°Bx时停止浓缩以制得红杨梅萃取物。

例二：白杨梅萃取物促进胶原蛋白分泌测试

材料与设备说明：

细胞株：人类皮肤纤维母细胞CCD-966Sk(Human skin fibroblast CCD-966Sk)，取自美国标准生物品收藏中心(简称ATCC)保存编号Cat.CRL-1881，以下简称纤维母细胞。

细胞培养基：为添加有10％的胎牛血清(fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，编号10437-028)、1％的青霉素-链霉素(Antibiotic-Antimycotic)(Gibco公司，Cat.15140122)及1mM的丙酮酸钠(sodium pyruvate，Gibco公司，编号11360-070)的最低限度必需培养基(Minimum essential medium，简称MEM，以下称MEM培养基)(Gibco公司，编号11095080)。

可溶性胶原蛋白检测套组(Biocolor公司；编号Cat.S1000)。

溶剂：1XDPBS(Gibco公司，Cat.14200-075)。

测试流程：

首先，以2×10

将纤维母细胞分为实验组、对照组及空白组。移除各组别的细胞培养基并更换为500μl/well测试培养基，然后置于37℃下分别接续培养48小时。

其中，实验组的测试培养基为含有0.125％的例一中所得到的白杨梅萃取物的细胞培养基。对照组的测试培养基为含有0.125％的例一中所得到的红杨梅萃取物的细胞培养基。空白组的实验培养基为单纯的细胞培养基。

收集1mL的上述各组的测试培养基，并以可溶性胶原蛋白检测套组处理以形成各组的待测溶液，接着以分光亮度计测量其在555nm下之各组吸光值，测试结果如图1所示。

图式中显示的胶原蛋白分泌量采相对倍率呈现，其中使用Excel软件之STDEV公式计算标准偏差，并在Excel软件中以单尾学生t检验(Student t-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中「*」代表p值小于0.05，「**」代表p值小于0.01。当「*」越多时，代表统计上的差异越显著。

请参阅图1。将空白组的数值视为100％。相较于空白组，实验组的胶原蛋白的相对分泌量为131％，具有统计学上的显著差异。而对照组的胶原蛋白的相对分泌量为118.7％，虽然也有增加，但并未达到统计学上的显著差异。

换言之，白杨梅萃取物能显著促进人类皮肤纤维母细胞分泌胶原蛋白，并显著的提高达31％。由此可知，白杨梅萃取物能使人类肌肤细胞能有效地分泌胶原蛋白，进而改善肌肤状态，使肌肤更具弹性及保持湿度，达到肌肤光滑透亮年轻化的状态。

例三：白杨梅萃取物促进脂肪分解测试

三酸甘油脂的利用是藉由脂肪分解(lipolysis)作用，将三酸甘油脂分解为脂肪酸及甘油。基此，本次试验分析处理后细胞内游离甘油的含量，藉以确认脂肪是否被分解，意即所量测到的游离甘油量愈高则其促进脂肪分解的效果愈好。

材料与设备说明：

细胞株：小鼠骨髓基质细胞(后续简称OP9细胞)，OP9细胞购自美国典型培养物保存中心(American Type Culture Collection，

培养基：90％之MEMAM(Minimum Essential Medium Alpha Medium，购自Gibco，美国)细胞培养液、20％之胎牛血清(Fetal Bovine Serum，购自Gibco，美国，Cat#10437-028)，且加入0.1％之青霉素/链霉素(Penicillin-streptomycin，购自Gibco，美国)。

甘油检测套组(Glycerol cell-based assay kit，购自Caymano)。

ELISA读取仪(厂牌：BioTek)。

测试流程：

首先，取24孔培养盘将每孔接种8×10

然后，将分化完成的脂肪细胞分为三组：实验组、对照组与空白组。

实验组：依照每孔500μL培养基含有62.5μL的例一制得的白杨梅萃取物的比例(即，浓度为0.125％)将白杨梅萃取物添加至培养基中，在37℃下培养7天。在7天的细胞处理期间每隔3天更换培养基。

对照组：依照每孔500μL培养基含有62.5μL的例一制得的红杨梅萃取物的比例(即，浓度为0.125％)将白杨梅萃取物添加至培养基中，在37℃下培养7天。在7天的细胞处理期间每隔3天更换培养基。

空白组：不作任何处理，即不额外添加其他化合物至培养基中，在37℃下培养7天。此7天的细胞处理期间每隔3天更换培养基。

接下来，收集每孔上述各组的测试培养基，并以甘油检测套组处理以形成各组的待测溶液，接着以ELISA读取仪测量其在540nm下之各组吸光值，测试结果如图2所示。

其中，利用Excel软件进行student t-test以决定两个样本群体之间是否在统计上具有显著差异，如图2所示(图式中「*」代表p值小于0.05，代表统计上的具有显著差异)。

参考图2。将空白组的游离甘油量视为100％时，相较于空白组，实验组的游离甘油量为113.6％，具有统计学上的显著差异。而对照组的游离甘油量为100.7％，虽然也有增加，但并未达到统计学上的显著差异。意即经由白杨梅萃取物处理之后能显著地提升13.6％的脂肪分解量。此结果显示，白杨梅萃取物能有效协助促进脂肪分解的进行，进而协助减重的进行。

例四：人体实验

样品：采用例一所制备的白杨梅萃取物。

受试者：8位受试者。各受试者年龄层为20岁以上，55岁以下。其中，男性体脂大于25％，女性体脂大于30％。

测试项目包括：肌肤皱纹、肌肤泛红、体重、BMI指数、全身体脂肪率、躯干体脂肪率。

其中，肌肤皱纹是以高阶肌肤分析仪(VISIA Complexion Analysis System品牌Canfield scientific,USA)的可见光(白光)拍摄受试者面部的肌肤高分辨率之肌肤图像，并以内建软件根据皱纹之长度与深度进行分析计算。

其中，肌肤泛红是以高阶肌肤分析仪(VISIA Complexion Analysis System品牌Canfield scientific,USA)的RBX偏振光技术进行脸拍摄受试者面部的肌肤，侦测肌肤深层血管或血红素。测量数值越高，说明肌肤泛红状况越严重。

其中，体重、BMI指数、全身体脂肪率、躯干体脂肪率是以身体组成分析仪(型号：InBody 770)进行量测。

测试流程：

令8位受试者每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物，并每天持续摄入四周。于开始摄入前(即第0周，又称对照组)及饮用四周后(即第4周，又称为实验组)分别进行以上述设备进行量测。

于此，于饮用前、后进行仪器检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对肌肤所造成的影响。

测试结果：

请参阅图3。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均肌肤皱纹量从100％(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至89.4％(第4周)。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均肌肤皱纹量可以减少10.6％。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有减少面部肌肤皱纹。

请参阅图4。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均肌肤泛红量从100％(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至91％(第4周)。其中，改善人数比例为75％，意即。8位受试者中，有6位的肌肤泛红量明显下降。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均肌肤泛红量可以减少9％。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有改善面部肌肤泛红的状况。

请参阅图5。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均体重从78.1kg(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至76.4kg(第4周)。其中，改善人数比例为75％，意即。8位受试者中，有6位的体重明显下降。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均体重差异达1.7kg。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有效降低体重。

请参阅图6。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均BMI指数从26.9(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至26.3(第4周)。其中，改善人数比例为75％，意即。8位受试者中，有6位的BMI指数明显下降。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均BMI指数可以减少0.6。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有效降低身体BMI指数。

请参阅图7。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均全身体脂肪率从31.5％(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至30.6％(第4周)。其中，改善人数比例为87.5％，意即。8位受试者中，有7位的全身体脂肪率明显下降。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均全身体脂肪率差异达0.9％。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有效降低体脂肪。

请参阅图8。经过四周的每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物后，8位受试者的平均躯干体脂肪率从32.9％(第0周)在维持日常饮食与运动量的情况下降至31.7％(第4周)。其中，改善人数比例为87.5％，意即。8位受试者中，有7位的躯干体脂肪率明显下降。使用本发明之白杨梅萃取物仅四周，其前后的平均躯干体脂肪率差异达1.2％。意即，每日摄取0.4mL的白杨梅萃取物可以有效降低躯干体脂肪。

由上述数据可知，第0周受试者的平均体重是78.1kg，并且平均全身体脂肪率从31.5％，其可换算出第0周时受试者是体脂重量约为24.6kg，第4周受试者的平均体重是76.4kg，并且平均全身体脂肪率从30.6％，其可换算出第4周时受试者是体脂重量约为23.4kg，意即第0周到第4周受试者的体脂重量减少1.2kg。而，第0周到第4周受试者的体减少1.7kg，可见所减少的体重中，有70％以上是脂肪重量，而非肌肉重量，明显达成增肌减脂的效能。

例五：白杨梅萃取物的生物活性物质成分分析及指纹图谱HPLC分析

天然植物的萃取物通常包含多种成分，非属纯物质。不同的化合物在不同的溶剂中溶解度具有差异性，本试验利用相互不相溶的溶剂，将白杨梅萃取物中的某一特定成分转移到另一溶剂中。

设备仪器、设定方式与设备来源说明如下：

核磁共振光谱仪(Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer,NMR)。1D与2D光谱使用Ascend 400MHz,Bruker Co.,Germany，以δ表示化学位移(chemical shift)，单位为ppm。

质谱仪(Mass Spectrometer,MS)串联质谱-二维离子阱串联傅立叶变换质谱及ESI-MS/MS：使用Bruker amaZon SL system测定，单位为m/z。

中压液相层析仪(Medium pressure liquid chromatography,MPLC)：

分析管柱：

管柱层析(Column Chromatography)填充材料：Sephadex LH-20(Pharmacia,Piscataway,NJ,USA).Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.,Japan)Merck Kieselgel60(40-63um,Art.9385)Merck

薄层色层分析(Thin-Layer Chromatography)采用TLC aluminium sheets(Silica gel 60F254,0.25mm,Merck,Germany)及TLC aluminium sheets(RP-18F254-S,0.25mm,Merck,Germany)。

采用溶剂(solvent)及其来源说明：正己烷(n-hexane)、乙酸乙酯(ethylacetate)、丙酮(acetone)、甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)、乙腈(acetonitrile)(采购至默克中国台湾)、氯仿-d1(deuteration degree99.5％)、甲醇-d4(deuteration degree99.5％)、重水deuterium oxide(deuteration degree>99.8％)、Dimethyl sulfoxide-d6(deuteration degree>99.9％)(默克中国台湾)。

分析流程：

首先，取例一制得的白杨梅萃取物10公升(L)经由正丁醇与水等比例液相分配的方式进行分离，分别取得正丁醇层萃取液与水层萃取液。于此，高极性物质在正丁醇层萃取液，水溶性物质就留在水层萃取液。

接着，将正丁醇层萃取液经减压浓缩干燥可得正丁醇萃取物28.5克。水层萃取液经减压浓缩干燥可得水萃取物892.2克。

后续，依据生物活性导引分离方法(Bioassay guided fractionation)，择DiaionHP-20为层析材料，起始冲提液为纯水，尔后增加甲醇比例至100％甲醇，总共分离得到3个划分层，分别为MRB-F1分层、MRB-F2分层以及MRB-F3分层。

其中，MRB-F3分层进一步以中压管柱层析仪(MPLC)分离后，再经薄层层析片(TLC)点片合并，得到7个划分层(MRB-F3-1～7)。7个划分层中的MRBF3-1利用RP-HPLC纯化，以甲醇与水(3：2)移动相得到化合物TCI-MR-01，经氢-核磁共振光谱(

杨梅苷之结构式如下式I所示：

后续，再进一步利用高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography，HPLC)来对例一所制得的白杨梅萃取物进行分析。

上述液相色谱的相关设定：使用以甲醇和水并额外添加0.1％的甲酸为溶剂，流速为1ml/min，冲提条件：0分钟时甲醇：水＝2：98；10分钟时甲醇：水＝2：98；40分钟时甲醇：水＝70：30；50分钟时甲醇：水＝100：0；60分钟时甲醇：水＝100：0，样品浓度为50mg/ml，注射量为10μL，测试时，管柱温度为40℃。

液相色谱法得到结果如图10，图10为对例一所制得的白杨梅萃取物的HPLC图谱。其中，在时间为33分附近解析出TCI-MR-01生物活性物质的波峰。同时，根据层析图中出现的峰值时间，以及其面积值，对分析物种作出定量与定性分析，得到TCI-MR-01生物活性物质含量达35.4ppm。

例六：杨梅苷促进粒线体活性测试

为探讨杨梅苷对皮肤细胞粒线体功能的影响，本例以流式细胞仪评估人类皮肤纤维母细胞CCD-966sk经杨梅苷处理后，其粒线体活性的变化。测试中以JC-1聚集能力作为粒线体活性之指标，在膜电位正常的健康粒线体中，JC-1以多聚体(polymer)形式存在，而当粒线体膜电位降低时，JC-1会变成单体(monomer)，其可当作粒线体活性评估的指标。

材料与设备：

细胞株：人类皮肤纤维母细胞CCD-966sk(BCRC No.60153)，后续简称纤维母细胞。

细胞培养基：含有10vol％FBS(购自Gibco)之基础培养基。。其中，基础培养基是由Eagle’s最低限度基本培养基(Eagle’s minimum essential medium(MEM)，购自Gibco，产品编号15188-319)额外添加成分使其含有1mM丙酮酸钠(sodium pyruvate，购自Gibco)、1.5g/L碳酸氢钠(sodium bicarbonate，购自Sigma)及0.1mM非必需胺基酸(non-essentialamino acid solution，购自Gibco)所配制而成。

磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)：购自Gibco。

粒线体膜电位侦测套组(BDTM MitoScreen(JC-1)kit，型号551302)。其中，粒线体膜电位侦测套组具有JC-1染料(冻干)及10X分析缓冲液。于使用前，以1X PBS将10X分析缓冲液稀释10倍，以形成1X分析缓冲液。加入130μL DMSO至JC-1染剂(冻干)中，以形成JC-1储备溶液。然后，再以1X分析缓冲液稀释JC-1储备溶液，以形成JC-1工作试剂(JC-1workingsolution；即JC-1粒线体特异性染剂)。稀释倍率为JC-1储备溶液比1X分析缓冲液为1：100。

胰蛋白酶：10X Trypsin-EDTA(购自Gibco)以1X PBS溶液稀释10倍。

流式细胞仪：购自BD Pharmingen公司，型号BDTM Accuri C6 Plus。

测试流程：

首先，将纤维母细胞以每孔1×10

将各组孔中的培养基更换成2mL实验培养基。其中，实验组的实验培养基为含有5μL的杨梅苷之细胞培养基(意即杨梅苷浓度为0.25％)。空白组的实验培养基为单纯的细胞培养基(即不含杨梅苷)。并且将更换实验培养基后的培养盘置于环境含5％CO

接下来，移除培养盘中的实验培养基并以1mL的1X PBS溶液润洗2次后，将200μL胰蛋白酶加至每孔中并在暗处反应5分钟。反应后，添加细胞培养基终止反应。将各孔中之细胞与细胞培养基收集至个别对应的1.5mL离心管内，并将含有细胞与细胞培养基之离心管以400xg离心5分钟。

后续，于离心后移除上清液，再以1mL的1X PBS溶液冲洗纤维母细胞，再次将含有细胞悬浮液的离心管以400xg离心5分钟。

于离心后移除各离心管中的上清液并加入100μL的JC-1工作试剂至各离心管，并将各离心管中的细胞沉淀物与JC-1工作试剂涡旋均匀并在避光处理下静置15分钟。

15分钟后，将各离心管以400xg离心5分钟，并于离心后，移除各离心管中的上清液、以1mL的1X PBS溶液回溶各试管中的细胞沉淀物并以400xg离心5分钟。接着，再次移除各离心管中的上清液、以1mL的1XPBS溶液回溶各离心管中的细胞沉淀物并以400xg离心5分钟。最后，移除各离心管中的上清液、以500μL的1X PBS重新悬浮细胞，以得到待测细胞液。

后以流式细胞仪量测各孔的待检测细液中细胞粒线体的膜电位，以进行粒线体活性分析。因实验系进行三重复，故将各组的三重复实验之结果平均以得平均值，然后以空白组的平均值为100％之相对JC-1聚集量，将实验组的平均值换算为相对JC-1聚集量，如图11所示。其中，利用Excel软件进行student t-test以决定两个样本群体之间是否在统计上具有显著差异(图式中「*」代表p值小于0.05意即统计上具有显著差异)。

测试结果：

参阅图11，其为经杨梅苷处理之实验组与未经处理之空白组之JC-1聚集相对量比较直方图。由该图可知，实验组之相对JC-1聚集量约为121.9％。换言之，与空白组相较之下，实验组的人类皮肤纤维母细胞的粒线体活性提升21.9％。显示杨梅苷可提升纤维母细胞之粒线体活性，而达到提升皮肤细胞活性之效果。

综上所述，本发明任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备抵抗肌肤衰老的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备促进胶原蛋白分泌、减少肌肤泛红、减少肌肤皱纹、减少肌肤纹理的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备减重的组合物。任一实施例的白杨梅萃取物可用以制备减少脂肪细胞内油滴堆积、减少体重、减少体脂肪的组合物。

当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。