联苄类衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药中间体技术领域，具体涉及一类联苄类衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

苔藓植物是地球上最古老的生物之一，是小型的绿色自养性陆生植物。生长于阴暗和潮湿的环境中。我国约有2800种，其中药用植物20余科50余种。苔藓植物能产生萜类、黄酮类及联苄类等多种生物活性物质,其中大部分生物活性物质能够抑制病原真菌和细菌生长,是天然抗菌药物的重要来源。

植物细胞培养技术快速、高效、不受季节、外部环境等条件的限制，同时可以有效的获得大量有生理活性的次级代谢产物，并且可以很好的控制其代谢产物的组成以及含量，利用生物反应器悬浮培养植物细胞，并通过现代方法提取其中的活性成分，可以满足工业保健药品和美容护肤用品的生产需求。植物细胞培养技术的应用可以很好的解决植物药材来源的问题。因此，利用植物细胞培养技术培养技术获得活性天然产物并研究其生物学活性有助于进一步扩大药用资源，为工业生产提供质量稳定的粗提物或者单体化合物。

发明内容

鉴于此，本发明的目的是提供一种联苄类衍生物及其制备方法与应用，该联苄类衍生物可用于作为医药中间体，也可以作为抗菌药物的活性成分。

本发明提供的联苄衍生物为7,10-Etheno-12,16-metheno-16H-dibenz[h,j]oxacyclooctadecin-1-methoxyl-13,20-diol-5,6,17,18-tetrahydro，结构式如式Ⅰ所示，为本发明首次公开的联苄新衍生物。

本发明还提供了一种上述联苄类衍生物的制备方法，包括如下步骤：

1)植物细胞培养：将植物续代细胞作为细胞种子进行植物细胞培养，得到植物细胞培养液；

2)初步提取：将所述植物细胞培养液过滤后经有机溶剂提取，室温下减压浓缩至干，得植物细胞提取物；

3)反相中低压色谱柱纯化：将步骤2)得到的植物细胞提取物溶于适量甲醇，加至装有MCI填料的色谱柱，依次采用体积浓度为50％的甲醇溶液、体积浓度为60％的甲醇溶液、体积浓度为70％的甲醇溶液、体积浓度为80％的甲醇溶液、体积浓度为90％的甲醇溶液、体积浓度为100％的甲醇溶液洗脱，取经过体积浓度为60％的甲醇溶液洗脱的流份；

4)反相高效液相色谱纯化：将步骤3)得到的经过体积浓度为60％的甲醇溶液洗脱的流份经反相高效液相色谱分离提纯，得所述联苄类衍生物，其中，流动相洗脱体系优选选择乙腈-水体系。

优选的，上述方法的步骤1)中，植物细胞培养选用的为苔藓植物伤愈组织细胞；优选采用地钱科地钱属植物地钱Marchantia polymorpha L.的续代细胞悬浮培养；

优选的，上述方法的步骤1)中，植物细胞培养条件：MSK-2培养基，添加浓度为1mg/L的生长激素，生长激素优选采用2,4-D；2,4-二氯苯氧乙酸；光照条件：2000lux；转速：100rev/min；温度：25℃。

优选的，上述方法步骤2)中有机溶剂为乙酸乙酯。

本发明还提供了一种上述联苄类衍生物或上述制备方法制备得到的联苄类衍生物在制备抗菌药物中的应用。

本发明利用现代分离纯化技术，对地钱(Marchantia polymorpha L.)续代悬浮培养细胞的次生代谢产物进行了系统分离，获得了一类新的联苄类衍生物，通过体外试验证实，这些化合物具有较好的抗菌抑菌活性，可以作为抗菌药物的活性成分，具有广泛的用途。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的化合物的高效液相分离色谱图；

图2为本发明实施例1得到的化合物的氢谱数据图；

图3为本发明实施例1得到的化合物的碳谱数据图；

图4为本发明实施例1得到的化合物的二维核磁共振数据图(COSY)；

图5为本发明实施例1得到的化合物的二维核磁共振数据图(HSQC)；

图6为本发明实施例1得到的化合物的二维核磁共振数据图(HMBC)；

图7为本发明实施例1得到的化合物的高分辨质谱(HRESIMS)数据图。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的联苄衍生物及其制备方法与应用进行详细描述。

实施例1：结构式为式I化合物的制备

本发明采用实验室培养条件下常规条件下提取，纯化等步骤，来制备本发明化合物。其中所采用的植物为地钱Marchantia polymorpha L.的续代细胞悬浮培养液的乙酸乙酯提取产物。

具体化合物的过程如下：

1)植物细胞培养

将植物续代细胞作为细胞种子在锥形瓶中进行植物细胞培养，培养4周，得到物细胞培养液，总体积为15L；

植物细胞培养条件：MSK-2培养基，添加浓度为1mg/L的生长激素(2,4-D；2,4-二氯苯氧乙酸)；光照条件：2000lux；转速：100rev/min；温度：25℃。

2)提取

将培养液过滤后，采用乙酸乙酯浸泡提取(1L*3次)，减压条件下回收有机溶剂获得乙酸乙酯提取物(11.2g)。

3)反相硅胶色谱柱纯化

将所得提取物溶于适量甲醇，加至装有120g反相硅胶(120埃，30–50目)的色谱柱，用甲醇-水系统梯度洗脱(依次采用体积浓度为50％的甲醇溶液、体积浓度为60％的甲醇溶液、体积浓度为70％的甲醇溶液、体积浓度为80％的甲醇溶液、体积浓度为90％的甲醇溶液、体积浓度为100％的甲醇溶液洗脱)，收集洗脱组分，取经过体积浓度为60％的甲醇溶液洗脱的流份。

4)反相高效液相色谱纯化

将步骤3)得到的流份用反相高效液相色谱分离提纯。分离条件为：色谱柱HederaC

化合物I为黄色无定形粉末，红外光谱主要吸收峰(IR)ν

化合物I的核磁共振氢谱以及碳谱数据如表1所示；

化合物I的高分辨ESI质谱数据：(+)-HR-ESIMS m/z 439.1921(Calcd.forC

表1.化合物I的氢谱以及碳谱数据(氘代甲醇)

以上结果表明，所得化合物结构正确。

实施例2：本发明化合物I的抗细菌活性

(1)实验材料

仪器与试剂：微生物培养箱；酶标仪(Bio-TEKELx800)；LB培养基(上海生物工程有限公司)；Malt培养基(上海生物工程有限公司)。测试所用致病细菌株：Escherichia coli(大肠杆菌)，Bacillus subtilis(变形杆菌)，Listeria monocytogenes(李斯特氏菌)，Salmonella typhimurium(鼠伤寒沙门氏菌)，Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)；测试所用真菌菌株：Aspergillusflavus(黄曲霉)，Aspergillus niger(黑曲霉)，Candadialbicans(白色念珠菌)，Trichophyton mentagrophytes(白癣菌)，均购于中国医学科学院微生物研究所。

测试样品：实施例1得到的化合物I，纯度在90％以上；同时，选取硫酸链霉素(细菌)以及灰黄霉素(真菌)为阳性对照药物，各化合物均以DMSO溶解后稀释。

(2)实验方法

配置培养液，121℃下灭菌25分钟备用，将配置稀释好的菌液加入96孔板中，每孔加入180μl，将化合物1配置为一定浓度的DMSO溶液，以倍数关系逐级稀释加入含有菌液的微孔中，使其最终浓度依次为64,32,16,8,4,2,1,0.5,0.25，0.125，0.0625μg/ml，于37℃培养箱中培养24小时，用酶标仪于600nm处读取吸光度，180μl空白培养基与20μl的DMSO混合溶液为空白对照。实验重复3次。计算各受试样品的最小抑制浓度(MIC值)。

(3)实验结果

实验结果如表2所示。

表2.测试样品(化合物I)体外抗细菌活性筛选结果

结果表明，本发明的化合物I具有良好的广谱抗菌活性，可以作为抗菌药物的活性成分。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。