一种紫苏活性物质的分离制备方法

技术领域

本发明属于中药材领域，具体涉及一种紫苏活性物质的分离制备方法。

背景技术

紫苏是常用中草药，又是重要的经济作物，其花、叶、茎及果料都具有较高的开发利用价值。紫苏籽是紫苏的干燥成熟颗粒，富含油脂，出油率为36-50％，高于棉籽、油菜籽和蓖麻籽等，紫苏油富含α -亚麻酸，是一种很好的保健油，迄今国内外对于紫苏籽的利用多用于提取油脂，而其它方面的研究很少。从紫苏籽饼粕中提取多糖可大大提高紫苏的附加值，关于紫苏多糖的研究报道更是鲜有报道，仅有刘大川等采用热水提取紫苏饼粕中的多糖。据相关文献报道，水提多糖条件温和，多糖得率不及碱液提取高。但是采用碱液对紫苏多糖提取，其作用条件强烈，而且后续的处理工艺复杂，对环境也会造成一定的影响。常规的碱液提取紫苏多糖的方法是，紫苏饼粕→粉碎→乙醇脱脂→氢氧化钠溶液浸提→提取液用酸中和→离心→80％乙醇沉淀→离心→沉淀。

并且当前在提取时仅提取紫苏中一种物质，忽视了紫苏籽中的其他活性成分，在一定程度上造成了原料的浪费。因此当前并没有一种能同时提取紫苏多糖和紫苏中其他物质的方法。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种紫苏活性物质的分离制备方法。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种紫苏活性物质的分离制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)烘干紫苏籽经预处理后置于50～60℃烘箱干燥3～4h，粉碎后过200目筛；

(2)超声提取紫苏籽粉末以料液质量比1：12～16与溶剂混合超声4～6h；

(3)沉降分离步骤(2)中超声液体经过滤，干燥浓缩后加入三倍体积量的乙醇溶液，在特有条件下沉降，经过滤分离滤液和滤渣

(4)滤渣纯化：

滤渣水洗后后滤，经微波干燥5～8分钟即得；

(5)滤液纯化：

①滤液挥去乙醇后，添加质量分数5～8％的复合酶制剂，55～65℃下超声1.5～2h后，改变为于80～90℃加热30～40min；

②纯化液①中加入质量分数5～10％的吸附剂，80～120R/min 搅拌30～40min；

③进行超滤；

④干燥；

所述超声提取中使用的溶剂为乙醇的离子液体，乙醇含量为 20～36％，离子液体为0.6～0.9mol/L氯化铵；

所述预处理为：紫苏籽洗净后置于药液A中浸泡2～3h后置于B 药液中浸泡3～4h；

所述药液A由0.10～0.15mol/L氯化铵，0.20～0.25mol/L氢氧化钙，水组成；

所述药液B由5～8％g/g吐温80，0.5～1％g/g没食子酸， 0.20～0.0.35g/g过硫化钠，水组成；

所述特有条件为调节pH至5.5～6.5，加入5～8％硅胶干燥剂静置 5～6h，4000～6000r/min离心30～45min；

所述复合酶制剂为α-淀粉酶、蛋白酶、金属离子溶液的混合物；所述金属离子溶液为0.15～0.25mol/LFe

所述吸附剂为经预处理的坚果壳与沸石、聚丙烯酰胺质量比 5～3:2～4:1～2的混合物；

所述预处理为：坚果壳在质量为30％醋酸、10％氢氧化钙、10％碳酸钠的混合溶液中浸泡24～36h，在300～350℃下焙烧1～2h，粉碎过200目筛；

所述干燥为微波干燥5～8分钟后，转至真空干燥20～30min；

所述超声功率为120～150W；

所述超滤的超滤膜孔径大小为0.15～0.25μm；

所述微波干燥工艺参数为300～600W，液面高度2～3cm；

所述真空干燥工艺参数为温度55～65℃，真空度-0.06～-0.02MPa；

所述水为纯净水、蒸馏水或去离子水中一种。

有益效果：

1.提高了紫苏活性物质的提取效率。紫苏籽干燥前有药液A浸泡出去了部分淀粉和碱性杂质，药液B浸泡则有助于有效成分的保留，如过硫化钠通过与多酚氧化酶结合保护紫苏籽中多酚的活性。离子液体由于化学稳定性高、可调节的密度、黏度、极性等原因，与其它常见溶剂的有良好混溶性以及对各种化合物有着较强的萃取性，所以本文件选择题离子液体作为溶剂进行萃取；从可获取的难易程度和提取物质的性质出发，本文件选择了季铵盐溶液氯化铵，一方面可以发挥离子溶液的作用，另一方面可以在提取过程中中和提取出的碱性物质，有助于提取物的纯化。而离子液体的强萃取性主要是对于亲水性的物质而言的，但是不仅是紫苏籽，植物中的天然活性物质，很大一部分是疏水性物质，所以为了能提取到这部分物质，本文件选择了在离子液体中添加乙醇溶液的方法；经本文件前期研究发现，提取液中乙醇的浓度影响多糖的萃取，在20～36％浓度时能萃取到最多的紫苏多糖，所以氯化铵与乙醇的组合使得紫苏籽中的亲水和疏水性成分都得以大量萃取出，在相同的萃取条件和时间里，萃取产物的量是普通有机溶剂的4～5倍，提高了提取效率。

2.多组分同时制备，避免资源浪费。尽管紫苏多糖是紫苏籽中含量最多且药效显著的活性物质，但紫苏籽中其他组分的药用价值同样不可忽视，如酚类，联苯衍生物等，经研究表明，这些组分含有抗氧化、抗炎的活性。因此，出于对紫苏籽资源的充分利用，本文件在提取后的分离纯化组分的处理中针对物质间性质的不同，设计了不同的方法，经本文件前期研究得知40～50％乙醇能析出最多的紫苏多糖，醇沉后经过水洗并干燥得以纯化紫苏多糖，方法简便且紫苏多糖提取率理想，纯度高；醇沉后上清液的处理，本文件提供了酶解除杂-吸附纯化-超滤-干燥的技术路线，酶解除杂中提供了一种复合酶制剂，通过引入金属离子增加α-淀粉酶和蛋白酶的活性，超声辅助加快了酶解进程，增强了对液体中的淀粉和蛋白的去除效果。通过特制的吸附剂清除液体中的杂质，如皂和色素，而吸附剂中添加的金属离子有利于增强对色素的吸附，比起同等用量的活性炭具有更好的色素吸附效果；在干燥时本文件选择了微波干燥与真空干燥的组合，是由于对于微波干燥过程来说，在干燥的前期阶段大量水分得以快速除去，但后期由于水分含量减少，在除去水分的同时也会带走有效物质，因此本文件在干燥后期选择真空干燥，保护了活性组分的含量。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种紫苏活性物质的分离制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)烘干紫苏籽经预处理后置于50℃烘箱干燥3h，粉碎后过200目筛；

(2)超声提取紫苏籽粉末以料液质量比1：12与溶剂混合超声4h；

(3)沉降分离步骤(2)中超声液体经过滤，干燥浓缩后加入三倍体积量的乙醇溶液，在特有条件下沉降，经过滤分离滤液和滤渣

(4)滤渣纯化：

滤渣水洗后后滤，经微波干燥5分钟即得；

(5)滤液纯化：

①滤液挥去乙醇后，添加质量分数5％的复合酶制剂，55℃下超声1.5后，改变为于80℃加热40min；

②纯化液①中加入质量分数5％的吸附剂，80r/min搅拌40min；

③进行超滤；

④干燥；

所述超声提取中使用的溶剂为乙醇的离子液体，乙醇含量为20％，离子液体为0.9mol/L氯化铵；

所述预处理为：紫苏籽洗净后置于药液A中浸泡2h后置于B药液中浸泡3h；

所述药液A由0.10mol/L氯化铵，0.20mol/L氢氧化钙，水组成；

所述药液B由5％g/g吐温80，0.5％g/g没食子酸，0.20g/g过硫化钠，水组成；

所述特有条件为调节pH至5.5，加入5％硅胶干燥剂静置5h， 4000r/min离心30min；

所述复合酶制剂为α-淀粉酶、蛋白酶、金属离子溶液的混合物；所述金属离子溶液为0.15mol/LFe

所述吸附剂为经预处理的坚果壳与沸石、聚丙烯酰胺质量比3:2:1 的混合物；

所述预处理为：坚果壳在质量为30％醋酸、10％氢氧化钙、10％碳酸钠的混合溶液中浸泡24h，在300℃下焙烧1h，粉碎过200目筛；

所述干燥为微波干燥5分钟后，转至真空干燥30min；

所述超声功率为120W；

所述超滤的超滤膜孔径大小为0.15μm；

所述微波干燥工艺参数为300W，液面高度2cm；

所述真空干燥工艺参数为温度55℃，真空度-0.02MPa；

所述水为蒸馏水。

实施例2

一种紫苏活性物质的分离制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)烘干紫苏籽经预处理后置于60℃烘箱干燥3h，粉碎后过200目筛；

(2)超声提取紫苏籽粉末以料液质量比1:16与溶剂混合超声4h；

(3)沉降分离步骤(2)中超声液体经过滤，干燥浓缩后加入三倍体积量的乙醇溶液，在特有条件下沉降，经过滤分离滤液和滤渣

(4)滤渣纯化：

滤渣水洗后后滤，经微波干燥分钟即得；

(5)滤液纯化：

①滤液挥去乙醇后，添加质量分数8％的复合酶制剂，65℃下超声2h后，改变为于90℃加热40min；

②纯化液①中加入质量分数10％的吸附剂，120r/min搅拌 30min；

③进行超滤；

④干燥；

所述超声提取中使用的溶剂为乙醇的离子液体，乙醇含量为36％，离子液体为0.9mol/L氯化铵；

所述预处理为：紫苏籽洗净后置于药液A中浸泡3h后置于B药液中浸泡4h；

所述药液A由0.15mol/L氯化铵，0.25mol/L氢氧化钙，水组成；

所述药液B由8％g/g吐温80，1％g/g没食子酸，0.0.35g/g过硫化钠，水组成；

所述特有条件为调节pH至6.5，加入8％硅胶干燥剂静置5～6h， 6000r/min离心45min；

所述复合酶制剂为α-淀粉酶、蛋白酶、金属离子溶液的混合物；所述金属离子溶液为0.25mol/LFe

所述吸附剂为经预处理的坚果壳与沸石、聚丙烯酰胺质量比5:4: 2的混合物；

所述预处理为：坚果壳在质量为30％醋酸、10％氢氧化钙、10％碳酸钠的混合溶液中浸泡36h，在350℃下焙烧2h，粉碎过200目筛；

所述干燥为微波干燥8分钟后，转至真空干燥20min；

所述超声功率为150W；

所述超滤的超滤膜孔径大小为0.25μm；

所述微波干燥工艺参数为600W，液面高度3cm；

所述真空干燥工艺参数为温度65℃，真空度-0.06MPa；

所述水为纯净水。

实施例3

一种紫苏活性物质的分离制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)烘干紫苏籽经预处理后置于55℃烘箱干燥3.5h，粉碎后过200目筛；

(2)超声提取紫苏籽粉末以料液质量比1：14与溶剂混合超声5h；

(3)沉降分离步骤(2)中超声液体经过滤，干燥浓缩后加入三倍体积量的乙醇溶液，在特有条件下沉降，经过滤分离滤液和滤渣

(4)滤渣纯化：

滤渣水洗后后滤，经微波干燥6分钟即得；

(5)滤液纯化：

①滤液挥去乙醇后，添加质量分数6％的复合酶制剂，60℃下超声1.8h后，改变为于85℃加热35min；

②纯化液①中加入质量分数8％的吸附剂，100r/min搅拌 35min；

③进行超滤；

④干燥；

所述超声提取中使用的溶剂为乙醇的离子液体，乙醇含量为30％，离子液体为0.7mol/L氯化铵；

所述预处理为：紫苏籽洗净后置于药液A中浸泡2.5h后置于B 药液中浸泡3.5h；

所述药液A由0.12mol/L氯化铵，0.22mol/L氢氧化钙，水组成；

所述药液B由6％g/g吐温80，0.7％g/g没食子酸，0.25g/g过硫化钠，水组成；

所述特有条件为调节pH至6，加入5～8％硅胶干燥剂静置5.5h， 5000r/min离心40min。