高分子量修饰的dsRNA组合物

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背景技术

因为昆虫支配着支持人类生活的所有陆地环境，所以昆虫通常是人类最重要的对食物、纤维和其他自然资源的竞争者。昆虫通过咀嚼作物植物的叶片，吸出植物汁液，在根、茎或叶内钻孔和传播植物病原体而对农业食品生产具有直接影响。昆虫以天然纤维为食，破坏木质建筑材料，毁坏储藏的谷物，并加速腐烂过程。

昆虫的经济影响不仅由它们所破坏的产品的市场价值和它们所造成的损失的成本来衡量，而且还由防治害虫爆发所耗费的金钱和资源来衡量。尽管这些损失的美元价值几乎无法计算，特别是当它们影响人类健康和福祉时，但经济学家普遍认为，昆虫在大的工业化国家中消耗或破坏约10％的国民生产总值，并且在一些发展中国家中消耗或破坏高达25％的国民生产总值。

控制昆虫种群的一种可能的方法是使用RNA干扰(RNAi)，这是一种天然存在的生物过程，通过该过程，双链核糖核酸(dsRNA)以序列特异性方式沉默(敲低)靶基因表达。细胞酶使用dsRNA靶向并切割单链RNA(ssRNA)，包括信使RNA(mRNA)和非编码RNA。已知RNAi存在于许多真核生物(包括植物、昆虫、螨类(acari)、真菌和动物)中，并在选择性和有效调节基因表达方面提供巨大潜力。

dsRNA具有含有与mRNA或非编码RNA中的序列互补的序列的反义链和含有与引导链序列互补并与mRNA或非编码RNA中的序列基本上相同的序列的有义链。有义序列和反义序列可存在于分开的RNA链上或存在于单链上。当存在于单链上时，互补序列通过非杂交发夹或环状序列来连接。

使用外源供应的未修饰的dsRNA(UdsRNA)，已经实现了现有技术中描述的对影响作物的所靶向的植物、昆虫、螨类和真菌的RNAi介导的基因抑制(美国专利9,121,022；Ivashuta等人2015；美国公开号20160215290；Koch等人2016)。已经发现，当dsRNA用于在昆虫中诱导RNAi并在昆虫膳食中供应时，有时需要60个碱基对(bp)或更长的dsRNA用于有效的摄取和处理(Bolognesi等人2012)。

已经通过体外转录(Timmons 2006)以及通过发酵(Fire等人1998)实现了长于约30个碱基对(bp)的UdsRNA的制备。已经描述了用于制备和纯化UdsRNA的商业上可行的大规模方法(Arhancet等人,US 9822361 B2)。然而，UdsRNA易被环境和宿主中的核酸酶降解，从而降低抑制基因表达的功效(Baum 2016)。

通过化学合成小的(<30bp)干扰dsRNA(siRNA)，并通过化学手段修饰核苷酸，在体外和体内研究中以及针对人类治疗学(Ku等人2015)解决了dsRNA降解问题。具有经化学修饰的核苷酸的siRNA的制备涉及在延长单链RNA(ssRNA)链中添加的每个核苷酸的顺序保护-脱保护化学反应(Micura 2002)。对于长于约30bp的触发RNAi的RNA分子(RNAi触发物)而言，此类方法的复杂性和费用显著增加。尽管还描述了使用在核糖的2'-OH位置处化学修饰的核苷酸靶向昆虫的化学合成的siRNA(Gong等人2013)，但对于大于几克的量的制备，或长于约30bp的经化学修饰的dsRNA的制备，经修饰的siRNA的成本和合成复杂性既不经济可行，也没有足够的可扩展性。

Merino(2005)还描述了用于分析目的的ssRNA的转录后化学修饰。Merino将含有10％ DMSO的含水介质中的ssRNA与N-甲基靛红酸酐(NMIA)反应，以在单链核苷酸处产生N-甲基-邻氨基苯甲酸的2'aO-酯。通过这种方法进行的衍生化是低效的。反应容器中少于15％的ssRNA链被修饰，并且被修饰的那些ssRNA链平均每个ssRNA链具有NMIA的单个2'nO-酯。在这些条件下，dsRNA以低于1/80的效率反应，其中茎区域中少于0.18％的核苷酸被修饰并且仅在茎末端的一(1)个核苷酸内(例如，在单链区域的一个核苷酸内)。对于RNA与其他反应物的反应，已经观察到类似的结果(Nodin 2015)。1-甲基-7-硝基靛红酸酐(1M7)、苯甲酰氰(BzCN)、2-甲基-3-呋喃甲酸咪唑化物(FAI)和2-甲基烟酸咪唑化物(NAI)已用于转录后产生RNA的2'-核糖酯，但具有类似低百分比的修饰，其中修饰主要发生在未配对核苷酸或其紧邻的配对核苷酸的核糖处。

未修饰的多聚核糖核酸是特别不稳定的分子。与DNA不同，其在核糖的2'位处含有羟基，这使得RNA聚合物对水解敏感。2'-OH的去质子化，以及因此2'氧对主链磷的亲核攻击，是包括RNA酶A在内的各种溶核酶(nucleolytic enzyme)切割磷酸二酯键的主要分子机制(Elliot和Ladomery,2011)。稳定核酸主链以防止核溶解已成为决定成功与否的关键问题，这与基于siRNA的治疗剂的发展几乎相同(Nair等人,2014)。RNA稳定性的问题在具有负责核酸消化的各种核酸内切酶和磷酸二酯酶的富含溶核活性的肠道环境中尤其重要(Whitt和Savage,1988；Liu等人,2015)。用于稳定RNA分子的高效策略是2'-O基团的衍生化。该位置处的各种修饰已被证明可提高各种RNA分子的酶稳定性，这些分子包括纳米组装体(Liu等人2010)和RNAi沉默分子(Khvorova和Watts,2017)。这些修饰通常在小干扰RNA(siRNA)的化学合成期间应用。

尽管在dsRNA(尤其是在2'-OH位置处具有化学修饰(特别是聚烷基氧基聚合物)的那些dsRNA)的使用方面已经取得了许多进展，但是需要比过去可获得的dsRNA组合物更有效、更易溶解和更具有生物可利用性的经化学修饰的dsRNA组合物。还需要以允许大规模生产的有效方式制备这些经化学修饰的dsRNA组合物的合成方法。

发明内容

本文描述了在2'-OH位置处具有高分子量聚烷基氧基修饰的转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)。这种修饰允许化合物的更大的生物利用度、化合物的更好的稳定性，并且允许针对核酸酶的更大的稳定性。如本文所述，这些MdsRNA可以按易于扩展的方式经济地生产。

本披露描述了经修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物，该MdsRNA具有经化学修饰的核苷酸，使得MdsRNA被修饰成含有高分子量聚烷基氧基聚合物，任选地进一步包含2'-O化学修饰的核苷酸，以含有低分子量(LMW)部分(LMW修饰的核苷酸)。本披露还描述了用于有效制备这些经修饰的MdsRNA的合成方法。

因此，在一个方面，本披露提供了包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中B和R

在这方面的实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括所有核苷酸中不超过约30％用高分子量聚烷基氧基聚合物修饰。在另一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰进一步包括所有核苷酸中至少约2％用LMW部分修饰。在一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰进一步包括所有核苷酸中约2％至约50％用LMW部分修饰。在实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约3:5:2比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在另一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约3:6.5:0.5比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约1:7:2比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.5:9:0.5比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.3:4:5.7比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.01:4:5.99比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.06:0:96.4比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。

在另一方面，本披露提供了一种制备包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物的方法，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中B和R

披露了用于制备本文所述的组合物的实施例的方法。在制备组合物的方法的实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括所有核苷酸中不超过约30％用高分子量聚烷基氧基聚合物修饰。在制备组合物的方法的另一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰进一步包括所有核苷酸中至少约2％用LMW部分修饰。在一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰进一步包括所有核苷酸中约2％至约50％用LMW部分修饰。在制备组合物的方法的实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约3:5:2比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的另一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约3:6.5:0.5比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约1:7:2比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.5:9:0.5比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.3:4:5.7比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.01:4:5.99比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。在制备组合物的方法的又一个实施例中，双链RNA的转录后化学修饰包括约0.06:0:96.4比率的高分子量修饰的核苷酸与LMW修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸。

在另外的方面，本披露提供了使用本文所述的组合物、靶昆虫、真菌、杂草或螨类以及序列中的任一者来修饰昆虫、真菌、杂草或螨类中的目的多核苷酸的表达的方法。

附图说明

前述内容将从示例性实施例的以下更特别的描述中显而易见。

图1示出了施用选择的式(I)的化合物后小菜蛾幼虫的累积死亡率。

图2示出了处理C2、未修饰的dsSNF7处理NS2(PEG-dsSNF7)和经修饰的dsSNF7处理NS5(NMIA-dsSNF7)的田间中甘蓝叶片上dsRNA含量的降低。

图3示出了3天(3DA-A)和4天(4DA-A)后施用选择的式(I)的化合物后小菜蛾田间幼虫的死亡率。

图4示出了用活化的10k PEG修饰的300bp dsRNA的琼脂糖凝胶电泳分析。行：1–DNA梯；2–原始dsRNA；3–10kPEG-MdsRNA反应混合物。

具体实施方式

定义

如本文所用，本文中使用术语“约”意指大约、大致、左右或在其区域中。当结合数值范围使用术语“约”时，该术语通过扩展所阐述的数值以上和以下的界限来修改所述范围。通常，本文中使用术语“约”按向上或向下(更高或更低)例如20％的变化来修饰所述值以上和以下的数值。

如本文所用，术语“序列”或“核苷酸序列”是指连续或一定顺序的核碱基、核苷酸、和/或核苷，使用标准核苷酸命名以连续字母描述并且是本文所述修饰的核苷酸的关键。本文所述的序列从5'末端至3'末端列出。本领域技术人员将理解，反向互补链(即，从3'末端至5'末端描述)可以是完整的反向互补链或包含约11个核苷酸至约60个核苷酸长的连续核苷酸的区段的链，其中约11至约60个连续核苷酸的此类区段中的每一个区段是如本文所述的序列中相同长度的区段的反向互补链。

在一些实施例中，MdsRNA的长度为至少40、至少30、至少50、至少70、至少80、至少90、或至少100个碱基对。MdsRNA有义链含有有义序列，并且MdsRNA反义链含有反义序列。反义序列与存在于靶基因转录的mRNA或非编码RNA(即，表达的RNA)中的核苷酸序列100％(完全)互补或至少90％(基本上)互补或至少80％(部分)互补。有义序列与反义序列100％(完全)互补或至少90％(基本上)互补或至少80％(部分)互补。有义序列还可以与存在于靶基因mRNA或非编码RNA中的核苷酸序列(靶序列)100％相同、至少90％相同、或至少80％相同。有义序列和相应的反义序列彼此部分(至少80％)、基本上(90％)、或完全(100％)互补。在一些实施例中，MdsRNA与靶基因转录的mRNA或非编码RNA序列中的相应序列之间的互补(反义序列)或相同(有义序列)的区域长度是大于30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、或至少100个核苷酸。在一些实施例中，反义序列含有长度大于30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、或至少100个核苷酸的连续序列，其与靶基因转录的mRNA或非编码RNA中的相应连续序列100％互补或至少80％互补。MdsRNA有义序列和反义序列可以是相同长度，或者它们可以是60个不同长度。使用本领域易于可得的已知方法鉴定适合的有义序列和反义序列。

如本文所用，术语“核苷酸”是指包含嘌呤或嘧啶碱基配对部分的一个碱基配对单元(例如，式I的单元或未修饰的核糖)。该术语可以指具有或不具有连接的亚基间键的核苷酸单元，但当提及“带电荷亚基”时，电荷典型地存在于亚基间键内。

嘌呤或嘧啶碱基配对部分，在本文中也简称为“核碱基”、“碱基(base)”或“碱基(bases)”，可以是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶或肌苷。还包括诸如以下碱基：吡啶-4-酮、吡啶-2-酮、苯基、假尿嘧啶、2,4,6-三甲氧基苯、3-甲基尿嘧啶、二氢尿苷、萘基、氨基苯基、5-烷基胞苷(例如，5-甲基胞苷)、5-烷基尿苷(例如，核糖胸苷)、5-卤代尿苷(例如，5-溴尿苷)或6-氮杂嘧啶或6-烷基嘧啶(例如6-甲基尿苷)、丙炔、q-核苷(quesosine)、2-硫尿核苷、4-硫尿核苷、怀丁苷、怀丁氧苷、4-乙酰替丁、5-(羧基羟甲基)尿苷、5'-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿苷、β-D-半乳糖q核苷、1-甲基腺苷、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟苷、3-甲基胞苷、2-甲基腺苷、2-甲基鸟苷、N6-甲基腺苷、7-甲基鸟苷、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-甲基氨基甲基尿苷、5-甲基羰基甲基尿苷、5-甲基氧基尿苷、5-甲基-2-硫尿核苷、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺苷、13-D-甘露糖基q核苷、尿苷-5-羟乙酸、2-硫代胞苷、苏氨酸衍生物等(Burgin等人,1996,Biochemistry,35:14090；Uhlman和Peyman,同上)。在这方面，“经修饰的碱基”意指除腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)之外的核苷酸碱基，如上所述；此类碱基可在反义分子中的任何位置处使用。本领域技术人员将理解，取决于寡聚物的用途，T和U是可互换的。例如，对于其他反义化学物质，诸如更像RNA的2'-O-甲基反义寡核苷酸，T碱基可显示为U。

如本文所用，“经修饰的核苷酸”是除核糖核苷酸之外的核苷酸(2'-羟基核苷酸)。在一些实施例中，MdsRNA中至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％的核苷酸经合成后修饰。修饰的核苷酸包括但不限于具有核糖2'-OH取代的核苷酸。应当理解，“独立地”意指经修饰的核苷酸可以各自具有相同的修饰，或者它们可以具有彼此不同的修饰，这些修饰选自高分子量聚烷基氧基聚合物，以及如果存在的话，低分子量部分。

“未修饰的”dsRNA是未经化学修饰的RNA分子。

如本文所用，如本文可互换使用的术语“聚烷氧基”(polyalkoxy)或“聚烷基氧基”(polyalkyloxy)是指特征在于重复烷氧基单元的合适水溶性聚合物。此类聚合物的选择但非限制性实例是聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、泊洛沙姆、透明质酸、聚乙烯醇、聚噁唑啉、聚酸酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有机膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯基吡咯烷酮、聚氰基丙烯酸酯、聚酯或前述各项的任何衍生物。

在实施例中，本文所用的术语“聚烷氧基”或“聚烷基氧基”是指合适的直链或支链聚乙二醇(PEG)聚合物。在一些实施例中，聚烷氧基是直链或支链聚丙二醇(PPG)聚合物。在一些实施例中，聚烷基氧基是泊洛沙姆。在一些实施例中，聚合物是乙二醇-丙二醇嵌段共聚物泊洛沙姆。在另一个实施例中，聚合物是聚(乙二醇)-嵌段-聚(丙二醇)-嵌段-聚(乙二醇)即PEG-PPG-PEG泊洛沙姆。在又一个实施例中，聚合物是环氧乙烷-环氧丙烷三嵌段共聚物。在一些实施例中，聚烷基氧基具有至少约400Da、至少约1kDa、至少约5kDa或至少约10kDa的分子量。在另一个实施例中，聚烷基氧基的分子量介于约400Da与约40kDa之间或介于约5kDa与约40kDa之间。

如本文所用，术语“泊洛沙姆”是指由中央疏水的聚氧丙烯链侧面连接两条亲水的聚氧乙烯链构成的非离子型三嵌段共聚物。泊洛沙姆的选择但非限制性实例是泊洛沙姆407、338、188、184和401(即，F127、F108、L68、L64和L121

本披露的所得聚合物修饰的dsRNA的两亲性特征(即亲水基团和亲油基团均存在)调节其物理和化学性质，诸如溶解性、通过植物组织和靶细胞膜的吸收和渗透性以及对核酸酶的抗性。产生最有效的MdsRNA的聚合物具有在8至27范围内的亲水-亲油平衡(HLB)值。在一个实施例中，HLB为约2至约30。在另一个实施例中，HLB为约15至约27。

如本文所用，术语“高分子量聚烷基氧基”是指包含分子量为至少约400Da的聚烷基氧基的化合物、取代基或其他化学部分。在一些实施例中，聚烷基氧基的分子量为至少约1kDa。在一些实施例中，聚烷基氧基的分子量为至少约5kDa。在另一个实施例中，聚烷基氧基的分子量为至少约10kDa。在另一个实施例中，聚烷基氧基的分子量介于约400Da与约40kDa之间。在又一个实施例中，聚烷基氧基的分子量介于约5kDa与约40kDa之间。

如本文所用，“低分子量(LMW)修饰的核苷酸”是具有2'-OH低分子量修饰的核苷酸。低分子量修饰是1,000道尔顿或更小的部分。修饰的实例，例如如本文在式III中标识为R

不受理论的限制，据信，LMW部分的存在允许组合物更好地溶解在有机溶剂中，用于将组合物递送至植物并最终递送至靶昆虫。可以使组合物更浓缩，其量对于最终用户来说是经济的。进一步地，本申请组合物领域中的分解速率已显示通过填充MdsRNA中未用高分子聚烷基氧基聚合物修饰的空间而降低。换句话说，未用高分子量聚烷基氧基聚合物修饰的核苷酸可用低分子量部分修饰，如本文所述。用低分子量部分修饰核苷酸的程度将取决于组合物在分解速率、溶解性和浓度等方面的所需性质。

如本文所用，术语“烷基”或“烷基基团”描述通过从任何碳原子-C

如本文所用，术语“烯基”是非环状的支链或非支链烃，其具有一个碳-碳双键和通式-C

如本文所用，术语“烷氧化物”或“烷氧基”是醇的共轭碱。醇可以是直链、支链、环状的，并且包括芳氧基化合物，并且包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丁氧基等。

如本文所用，术语“炔基”是非环状的支链或非支链烃，其具有一个碳-碳三键和通式-C

如本文单独或作为另一个基团的一部分使用，术语“芳基”或“Ar”代表经任选取代的碳环芳族基团。芳基基团可以是单环或双环基团，其在环部分中含有从5至12个碳，诸如苯基、二苯基、萘基、经取代的苯基、经取代的二苯基、或经取代的萘基。

如本文单独或作为另一个基团的一部分使用，术语“杂芳基”代表经任选取代的芳族基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子。在一些实施例中，杂芳族基团在每个环中含有5或6个原子。在一些实施例中，杂芳族基团在环中含有1或2个氧原子和/或1至4个氮原子，并且通过碳连接到分子的剩余部分。示例性基团包括呋喃基、苯并呋喃基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、四唑并哒嗪基、咔唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、咪唑并吡啶基等。示例性取代基包括以下基团中的一个或多个：烃基、经取代的烃基、烷基、烷氧基、酰基、酰氧基、烯基、烯氧基、芳基、芳氧基、氨基、酰氨基、缩醛、氨基甲酰基、碳环、氰基、酯、醚、卤素、杂环、羟基、酮基、缩酮、磷、硝基和硫代基。

术语“杂原子”是指除碳和氢之外的原子。

如本文单独或作为另一个基团的一部分使用，术语“卤素”或“卤代基”是指氯、溴、氟或碘。

如本文所用，术语“更高的稳定性”是指与未修饰的dsRNA或用低分子量聚烷基氧基修饰的MdsRNA相比，本申请的化合物具有更高的稳定性。在一些实施例中，更高的稳定性意味着在农田中、植物组织中、植物叶片上持久性增加。在一些实施例中，更高的稳定性意味着体内半衰期增加。在一些实施例中，更高的稳定性意味着对生理条件的抗性增强。在其他实施例中，更高的稳定性意味着对核酸酶的抗性增强。

如本文所用，“可接受的盐”是指衍生自合适的无机和有机酸以及无机和有机碱的盐，其在合理的判断范围内适用于与人、低等动物和植物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的益处/风险比相称。

本披露的化合物的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或者在两者的混合物中进行反应来制备。

如本文所用，术语“可扩展”是指这些方法以商业上相关的量生产一定量的靶标化学品的能力。例如，本申请的方法可以允许生产数百毫克规模的化合物。在一些实例中，本申请的方法可以允许以克规模生产化合物。在一些实例中，本申请的方法可以允许以千克规模生产。在一些实例中，本申请的方法可以允许以公吨规模的生产。

如本文所用，术语“活化剂(activation agent)”或“活化剂(activating agent)”是指增加靶标部分的亲核性或亲电性的化合物。电子密度的变化可以是来自活化基团的离子键或共价键的结果。在一些实施例中，本文所述的活化剂增加靶羰基的亲电性。活化剂的非限制性实例是路易斯酸、质子和偶联试剂。偶联试剂的非限制性实例是苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、苯并三唑四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、羰基二咪唑(CDI)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐、氮杂苯并三唑四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)。

如本文所用，术语“合适的离去基团”是指在异裂键切割中脱离一对电子的分子片段。离去基团通过降低活化能有助于促进反应。合适的离去基团的非限制性实例是卤化物、甲苯磺酰化或甲磺酰化的醇、假卤化物、胺、杂环等。在一个特定的实施例中，合适的离去基团是咪唑。

如本文所用，术语“无水溶剂”是指经过物理或化学处理以降低溶剂的水含量的溶剂。无水溶剂可含有小于约1重量％的水、小于约0.3重量％的水或小于约0.1重量％的水。

组合物

MdsRNA被描述为其所有核糖环中不超过约30％在2'-OH位置处用高分子量聚烷基氧基聚合物化学修饰，以及任选地其所有核苷酸中至少约2％用LMW修饰的部分化学修饰。MdsRNA能够诸如通过RNA干扰或反义机制以序列特异性方式抑制基因表达。

因此，在一个方面，本文提供了一种包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

其中y为1-8的整数，x为12-1000的整数，a为12-1000的整数，b为12-1000的整数，并且c为12-1000的整数。

在另一方面，本文提供了包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

其中y为1-8的整数，x为12-1000的整数，a为12-1000的整数，b为12-1000的整数，并且c为12-1000的整数；并且

任选地，其中所有核苷酸中至少约2％独立地包含式(III)的LMW修饰的核苷酸：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

组合物的这一方面的实施例如下。

在实施例中，R

在另一个实施例中，x为80-1000的整数。

在另一个实施例中，x为50-900的整数。

在另一个实施例中，a为80-1000的整数。

在又一个实施例中，b为80-1000的整数。

在另外的实施例中，c为80-1000的整数。

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，a为101，b为56，并且c为101。

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，式(I)与式(III)与未修饰的核苷酸的比率为约3:5:2、3:6.5:0.5、1:7:2、.05:9:0.5、1.3:4:5.7、0.01:4:5.99、0.06:0:96.4。

在实施例中，所有核苷酸中约2％至约50％用LMW部分修饰。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫中所表达的RNA互补的序列。例如，可用于本披露的产品和方法中的有效序列或靶基因将抑制靶基因的表达，作用于昆虫的肠中部并增加死亡率或诱导生长停滞，或停止龄期发育。

在实施例中，靶昆虫是小菜蛾(Diamondback moth，Plutella xylostella)、舞毒蛾(Gypsy moth)、入侵红火蚁(Red imported fire ant，Solenopsis invicta)、秋粘虫(Fall armyworm)、科罗拉多马铃薯甲虫(Colorado potato beetle)、油菜跳甲(Canolaflea beetle)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)或西方玉米根虫(Western corn root worm，Diabrotica virgifera virgifera)。在另一个实施例中，靶昆虫是豌豆蚜(Pea aphid，Acyrthosiphon pisum)、大豆蚜(Soybean aphid)、红带椿象(Piezodorus guildinii)。在另一个实施例中，靶标是螨类，诸如瓦螨(Verroa mite)。在另一个实施例中，靶标是杂草，诸如长芒苋(Palmer amaranth)。在又一个实施例中，靶标是真菌，诸如长芒苋、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum，Gibberella zeae)或葡萄孢菌(Botrytis)。因此，本披露的组合物中使用的MdsRNA将是可抑制这些昆虫中靶基因或区域表达的核苷酸序列。例如，MdsRNA包含与小菜蛾(诸如但不限于AChE2、P450、P450 CYP6BF1v1、细胞因子受体DOMELESS、DOUX、蛋白质MESH转录物变体X1、Venom羧酸酯酶-6和VPASE-E)中的靶区域互补的序列。在另一个实施例中，MdsRNA包含与秋粘虫(诸如但不限于P450 CYP9A58、细胞因子受体DOMELESS、Dredd、VPASE、蛋白质MESH转录物变体X1、P450 CYP321A8、P450 CYP6B2样)中的靶区域互补的序列。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与西方玉米根虫(诸如但不限于SNF7)中的靶区域互补的序列。

在实施例中，MdsRNA包含选自SEQ ID No:1-269之一的序列及其反向互补链。在一个特定的实施例中，序列选自SEQ ID No:13或248-251之一及其反向互补链。在实施例中，靶昆虫是鳞翅目，并且可以使用SEQ ID No:1-269中的任一个进行靶向。在实施例中，鳞翅目使用SEQ ID No:13或248-251中的任一个进行靶向。

在另一方面，本文提供了一种包含转录后修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

任选地，其中所有核苷酸中至少约2％独立地包含式(III)的LMW修饰的核苷酸：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；并且

R

组合物的这一方面的实施例如下。

在实施例中，R

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，式(I)与式(III)与未修饰的核苷酸的比率为约3:5:2、3:6.5:0.5、1:7:2、.05:9:0.5、1.3:4:5.7、0.01:4:5.99、0.06:0:96.4。

在实施例中，所有核苷酸中约2％至约50％用LMW部分修饰。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫、杂草、真菌或螨类中所表达的RNA互补的序列，如本文、序列表和本披露的实例中所讨论的。

在实施例中，R

其中y为1-8的整数，x为12-1000的整数，a为12-1000的整数，b为12-1000的整数，并且c为12-1000的整数。

在实施例中，R

其中所有核苷酸中至少2％独立地包含如上所定义的式(III)的LMW修饰的核苷酸。

在另一个实施例中，x为80-1000的整数。

在另一个实施例中，x为50-900的整数。

在另一个实施例中，a为80-1000的整数。

在又一个实施例中，b为80-1000的整数。

在另外的实施例中，c为80-1000的整数。

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，a为101，b为56，并且c为101。

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，式(I)与式(III)与未修饰的核苷酸的比率为约3:5:2、3:6.5:0.5、1:7:2、.05:9:0.5、1.3:4:5.7、0.01:4:5.99、0.06:0:96.4。

在实施例中，所有核苷酸中约2％至约50％用LMW部分修饰。

在实施例中，MdsRNA的序列选自13或248-251之一。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫、杂草、真菌、螨类中或这些靶标中的任一者中所表达的RNA互补的序列，如本文和序列表和本披露的实例中所讨论的。

在实施例中，式(I)的化合物是

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。

在另一个实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。

在又一个实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。

在另一个实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。在另一个实施例中，末端-H可以被-CH

在另外的实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。在另一个实施例中，末端-H可以被-CH

在另一个实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。在另一个实施例中，末端-H可以被-CH

在另外的实施例中，式(I)的化合物是：

或其可接受的盐，其中每个变量如上所定义。在另一个实施例中，末端-H可以被-CH

在一些实施例中，式I的每个B是相同的。

在另一个实施例中，式I的每个B是不同的。

在一些实施例中，式I的每个R

在一些实施例中，式I的每个R

在一些实施例中，MdsRNA中的碱基对长度为至少约40、至少约50、至少约60、至少约70、至少约80、至少约90、至少约100、至少约200、至少约350、至少约400、至少约500、至少约600、至少约700、至少约800、至少约900或至少约1,000。在实施例中，MdsRNA中的碱基对介于约40个碱基对与约1,000个碱基对之间。在另一个实施例中，MdsRNA介于约50个碱基对与约900个碱基对之间。在实施例中，MdsRNA介于约70个碱基对与约800个碱基对之间。在另一个实施例中，MdsRNA介于约80个碱基对与约700个碱基对之间。在实施例中，MdsRNA介于约90个碱基对与约600个碱基对之间。在实施例中，MdsRNA介于约100个核苷酸与约500个核苷酸之间。在另一个实施例中，MdsRNA介于约200个碱基对与约400个碱基对之间。

可用于本披露的产品和方法中的靶序列将被选择以靶向靶昆虫、真菌或杂草的最低鸟嘌呤-胞嘧啶(GC)含量，诸如不超过约60％、优选约40％或更低的GC含量，以允许在温和反应条件下实现最高水平的修饰。在另一个实施例中，MdsRNA靶向具有低鸟嘌呤-胞嘧啶含量的序列。在实施例中，鸟嘌呤-胞嘧啶含量不超过约50％。在实施例中，鸟嘌呤-胞嘧啶含量为约40％或更低。在实施例中，鸟嘌呤-胞嘧啶含量介于约30％与约40％之间。在实施例中，鸟嘌呤-胞嘧啶含量为约30％、约35％、约40％、约50％或约55％。核苷酸的修饰程度将取决于dsRNA的GC含量。修饰的程度(例如，可以被修饰的核苷酸的百分比)可以在约2％至约90％的范围内，其中约2％至约30％是高分子量聚烷基氧基聚合物，并且其中约2％至约90％是低分子量填料部分。

不受理论的约束，据信，当反应条件使得dsRNA中的有义链和反义链仅部分地解离(即，仅部分地解旋)时，例如在低于60℃的温度下，或在能够解离有义链和反义链的溶剂或共溶剂的低浓度下，例如，在低于70％的DMSO浓度下，或在低于60℃的温度下和在低于70％的DMSO下，位于距离完全配对的dsRNA区段的起点或末端少于10个连续核苷酸的位置处的核苷酸中的核糖可以被优先修饰，即，与距离超过10个连续核苷酸的核苷酸中的核糖相比，它们可能被更大程度地修饰。例如，在此类部分解链反应条件下，300bp dsRNA中位于1-10位和290-300位的核苷酸中的核糖修饰程度可能大于位于11-289位的核苷酸中的核糖修饰程度。

转录后修饰的双链RNA(MdsRNA)化合物对环境和宿主中的核酸酶降解的敏感性显著降低。MdsRNA通过RNAi机制下调靶宿主中存在的多核苷酸的表达。MdsRNA化合物由UdsRNA组成，其中其2'OH基团的一些H原子被不同的化学部分替代，例如被苯甲酰基、月桂酰基、油酰基、亚油酰基、N-甲基邻氨基苯甲酰基、烟酰基或呋喃甲酰基替代(美国专利10,131,911)。这些化学部分通常是无毒的，并且在任何情况下，容易在环境中最终降解，从而减少对环境的负面影响。预计MdsRNA与UdsRNA具有类似的无毒性。

在一些实施例中，MdsRNA有义链与反义链相连接。有义链可以经由非杂交发夹或环序列与反义链相连接。环序列的长度可以为约4至约100或更多个核苷酸。在一些实施例中，环的长度为150或更多个核苷酸(Hauge等人2009)。在一些实施例中，MdsRNA进一步包含一个或多个另外的序列，包括但不限于：启动子序列、5'序列、3'序列、终止子序列和聚腺苷酸序列。

启动子是启动基因转录的DNA的区域(序列)。启动子可以是细菌启动子、古细菌启动子、真核启动子、或Pol I、Pol II、或Poll III启动子。在一些实施例中，细菌启动子包含距转录起始位点上游约35个单元的序列5'-TTGACA-3'和距转录起始序列上游约10bp的序列5'-TATAAT-3'。适用于与不同表达系统一起使用的其他启动子是本领域熟知的。

本披露的特定实施例要求较高分子聚烷基氧基聚合物共价结合至亚基间键的2'-OH位置。本披露的优选实施例要求较低百分比的整体亚基用这种聚合物取代(例如，小于约30％)。在一些实施例中，用这种聚合物取代的整体亚基的百分比为约1％。在一些实施例中，被取代的亚基的百分比为约1％至约30％。在其他实施例中，被取代的亚基的百分比为约1％至约5％。在又其他实施例中，被取代的亚基的百分比为小于约1％。在另一个实施例中，被取代的亚基的百分比介于约0.1％与约1％之间。本披露的化合物显示出与在2'-OH位置处具有较低重量聚烷基氧基聚合物的化合物相等或更优的性质。

不受任何理论的约束，本披露的化合物显示出与具有较低重量聚烷基氧基聚合物化合物的化合物相等或更优的性质，因为本发明的化合物具有更好的溶解性，增强的生物利用度，并且对核酸酶具有抗性。出乎意料的是，尽管已知PEG和类似基团可防止跨膜，但本发明的化合物易于穿过细胞膜。此外，出乎意料的是，本披露的聚烷基氧基聚合物的低百分比水平(例如，约1％至约30％)仍赋予具有显著更高百分比的PEG或PEG型取代的其他化合物有益的稳定性性质(例如，本发明的化合物在约1％至约30％下对核酸外切酶具有抗性)。

不受任何理论的约束，本披露的化合物(即，具有高分子量聚烷基氧基聚合物的化合物)对羧酸酯酶的水解具有抗性。这可能是由于聚烷基氧基聚合物在空间上对于酯酶的催化口袋来说太大。较大的聚烷基氧基聚合物可以进一步与未修饰的核苷酸的2'OH基团氢键结合，从而产生进一步的空间位阻，即使在如本文所述的低水平修饰下也是如此。最后，如本文所述，由于分子的空间位阻，MdsRNA链的修饰可以优先发生在MdsRNA链的末端。因此，MdsRNA链对核酸外切酶具有抗性，同时仍可用于核酸内切酶，使得本披露的化合物更容易进入RNAi过程。

本披露的此部分和其他部分中关于组合物、制备组合物的方法、核苷酸序列和用于靶昆虫、真菌、杂草或螨类的用途的实施例和方面旨在涵盖于本披露中。

选定序列

在实施例中，该序列是小菜蛾乙酰胆碱酯酶2mRNA，GenBank AY061975.1核苷酸#s：512-811；catatcgga ggattgcctc tatttgaaca tatgggtgcc gcagcacttg cgcgtccgtcaccatcagga caagccatta accgagcgac cgaaggttcc aatactagtg tggatttacg gcgggggttacatgagtggc acggcgacac ttgatctata taaagccgac ataatggcgt cttcgagtga tgtgatcgtagcctcgatgc agtatagggt tggcgcgttt ggatttttgt accttaacaa atatttttcc cctggtagcgaggaagcggc aggaaatatg ggcttgtggg a(SEQ ID NO:1)。

在另一个实施例中，该序列是小菜蛾乙酰胆碱酯酶1mRNA，GenBank：AY970293.1核苷酸#s：889-1188；tc acaatgtcac attgtttgga gaatcgtccg gtgcagtttc cgtgtcattacacttactgt ctccgctgtc aagaaacatg ttttctcaag ctattatgca atctgcagcc gcatctgcaccttgggccat catttccaga gaggagagtg tgataagggg catccgcctg gccgaggccg tccactgc(SEQ ID NO:2)。

在另一个实施例中，该序列是小菜蛾酪氨酸羟化酶mRNA，GenBank：JN410829.1核苷酸#s：301-600；gctgaggtcg gtggaataga cggaaatgca gatgatgatt acaccttgaccgaggaggag gtgatcttgc agaactccgc cagcgagtcc ccggaggccg agcaggcgct gcaacaagcggctttgcttc tgcgcctgcg cgacggcatg ggctcgctcg cgcgcatcct caagaccatc gacaactacaagggatgcgt tcaacacctc gagactcgcc cctccaacgc caacgacatc caattcgatg ctctcatcaaagtgagcatg tcccgtggca acctgctcca actcatccga (SEQ ID NO:3)。

在另一个实施例中，该序列是小菜蛾整联蛋白β1mRNA，GenBank：GQ178290.1核苷酸#s：531-830；tgcaggtcaa gccgcagagg gtcaagctgc agctgcgcat gaaccagatgcagaaactag acgtcgccta ttcccaagcc caagactacc cggtggacct gtactacttg atggacctgagtcgttccat gaagaacgac aaggagaagc tcagtacatt gggcagtctg ctgtccagca ctatgaggaatatcacgccc aacttccgtc ttggcttcgg ctccttcgtg gacaagctcg tcatgcccta cgtgtctactgtgcctaaga atttgatatc cccttgtgat ggctgcgcgg (SEQ ID NO:4)。

在另一个实施例中，该序列是小菜蛾带电多泡体蛋白4b样mRNA(XM_011555904.1)核苷酸#s：321-620；ccaggaaaca tggcactaag aacaaaagag cggccatcgc tgcacttaaacgcaagaagc gttacgagaa gcaactcaca cagattgacg gcacgctcag ccagatagag atgcagagagaggcattgga gggcgccaac actaacactc aagtactgaa cacgatgcga gaggccgccg cggctatgaagctcgctcac aaggatattg acgtagacaa agtgcatgat atcatggacg acatcgctga acaacatgatgtggctcgcg aaatcacgga tgccatcagc aacaatgtgg(SEQ ID NO:5)。

在另一个实施例中，该序列是小菜蛾肽聚糖识别蛋白mRNA，GenBank：EU399240.1核苷酸#s：31-330；tcagtgt tttgttgttg tgctcatgca gggtgtggcg tggtgaccagacagcagtgg gatgggctgg acccgataca gttggagtac ctgccccggc ccctggggct ggtggtggtccagcacaccg ccacccccgc gtgtgacact gacgccgcgt gtgtggagct ggtgcagaa atacagaccaatcatatgga tgtgctgaag ttttgggata ttggaccgaa cttcctgatt ggt(SEQ ID NO:6)。

在另一个实施例中，该序列是用于液泡ATP合成酶亚基E的小菜蛾mRNA，GenBank：AB189032.1(与NM_001305532.1相同)核苷酸#s：64-363；gcgctca gcgatgcaga tgtccaaaaacagatcaagc atatgatggc cttcatcgag caagaggcaa atgaaaaggc cgaagaaatc gatgctaaggctgaggagga gttcaacatc gagaaggggc gtctggtgca gcagcagcgc ctcaagatca tggagtactacgagaagaag gagaagcagg tggaactcca gaagaagatc caatcctcca acatgctgaa ccaggcccgtctgaaggtgc tgaaggtgcg cgaggaccac gtgggccacg tgttggacga gacgcgccgc cgc(SEQ IDNO:7)。

在另一个实施例中，该序列是西部玉米根虫带电多泡体蛋白4b(LOC114337301)，mRNA序列ID：XM_028287710.1；cacaactgac agataacgtc agtagttgtc tattttcactggtgactaat ttttgagaat tagtaattgg tttcgtattt ttttcttaac aaaagggcaa aatgagcttttttggaaaat tgttcggggg gaaaaaggaa gagatagccc ctagtcctgg ggaggctatt caaaaactcagagagactga agaaatgtta ataaaaaaac aggatttttt agaaaagaag atagaagaat ttaccatggtagcaaagaaa aatgcgtcga aaaataaaag agttgcactc caagccctca aaaagaagaa acgattggaaaagacccaac tacaaataga tggaaccctt acaactattg aaatgcagag ggaagccctc gaaggagctagcacaaatac tgctgtatta gattctatga aaaatgctgc agatgccctt aagaaagctc ataagaatttgaatgtagat gatgttcacg atatcatgga tgacatagcc gaacaacacg acatagccaa cgaaatcacaaacgctatta gcaatcctgt cggattcacc gacgatctgg atgacgatga attagaaaaa gaattagaagagctcgaaca agaaggattg gaagaagacc tgctccaagt gccaggtcca actcaactgc cggctgtgcctgctgatgca gttgctacta aaccaatcaa accagcagct aaaaaagttg aagatgatga cgatatgaaagaattggaag cctgggcctc gtaaaattcc tgaaatctga atatttgtaa acgaaatcac ccatctaagatgaaaacatt ataaatatat aggtaataac agctaaaaac gtttcaatgt agaacaagct tttgctgaaaaggcgtcttg caaaaaatgt tgataattta gaattctcta tatattatat atttgccctt taaggaaagatttcttttat agtcatagtt caaccaaacg tttcataaat tagaatacag gggtgtcaga attctacgtgaatttattga aaaaaaagaa ctttccttaa agttggcata atgatatttt tgaaattatg taaataggtatatgtatgct cttactaacg gttttaatat tgggtttaga agcaccttaa ttttattttt atacaaggtagtaacatttt ttcattgtaa tttgttaaaa aatattgtat aacgcaaaaa atggtgtgat aaagcaaaatattattgagt gcttattttc ttattttatt aaaagatctt atttacgtta aatctaaata tattgggtatctcagaatat gttaacaaag gtttcttgta tcaacagaaa aatacaaact tattcattat tgtggttcatttgattatgc ttgtgtatat ttaatctgcc ataaacaagt tttgataaat gtcactgctc tgta(SEQ IDNO:8)。

在另一个实施例中，该序列是豌豆蚜V型质子ATP酶亚基E Genbank#：XM_008185078.2核苷酸#s：540-724；t tagccaacac tggaataaac gtcaaaataa acattgataaaagtattaaa ttaccgactc aagaaatagg aggcgtcgtg gtcacgtcca aagatcgaag ggtacatgttgaaaatacgc ttgtagtgag attgctctat ctcacccaac aagcaatacc aataatatgc actggactgtttgg(SEQ ID NO:9)。

在另一个实施例中，该序列是入侵红火蚁(RIFA)肌动蛋白(LOC105205816，GenBank：XM_011175337.1核苷酸#465-763；gatctc tctccctcga ctctaacacc agcgaaagtaacagccaatc aagatgtgtg acgatgatgt tgcggcatta gtcgtggaca atgggtccgg tatgtgcaaggctggattcg cgggggatga tgcaccacgc gctgtgtttc ccagcatcgt cggtcgtcct cgtcatcagggtgtgatggt cggtatgggt caaaaagaca gttatgttgg cgacgaggcg caaagtaaga gaggtatattgacactaaag tatcctatag aacatg(SEQ ID NO:10)。

在又一个实施例中，该序列是禾谷镰刀菌分离物NX3细胞色素P450 51B基因GenBank：FJ216402.1核苷酸位置804-1023；cagcaag tttgacgagt ccctggccgc tctctaccacgacctcgata tgggcttcac ccccatcaac ttcatgcttc actgggcccc tctcccctgg aaccgtaagcgcgaccacgc ccagcgcact gttgccaaga tctacatgga cactatcaag gagcgccgcg ccaagggcaacaacgaatcc gagcatgaca tgatgaagca ccttatgaac tct(SEQ ID NO:11)。

在另一个实施例中，该序列是禾谷镰刀菌PH-1细胞色素P450 51NCBI参考序列：XM_011327038.1核苷酸位置163-400；attggaag caccgtacaa tatggcatcg acccgtacgcttttttcttc gactgcagag ataaatacgg cgactgcttt acctttattc tccttggcaa atcaacgactgtctttcttg gtcccaaggg caatgacttt atcctcaacg gcaaacacgc cgatctcaac gccgaggacgtttatgggaa acttaccacg cccgtgtttg gtgaggaggt tgtttatgac tgctccaatg(SEQ ID NO:12)。

通过离子溶剂化制备高分子量聚烷基氧基聚合物的方法

在另一方面，本文提供了制备包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物的方法，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

其中y为1-8的整数，x为12-1000的整数，a为12-1000的整数，b为12-1000的整数，并且c为12-1000的整数；并且

该方法包括：

(a)使式(II)的化合物：

与活化剂接触以形成式(IIA)的化合物：

其中X为合适的离去基团；以及

(b)使式(IA)的化合物：

与式(IIA)的化合物接触以形成式(I)的化合物。

在另一方面，本文提供了制备包含转录后化学修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物的方法，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(I)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

其中y为1-8的整数，x为12-1000的整数，a为12-1000的整数，b为12-1000的整数，并且c为12-1000的整数；并且

任选地，其中所有核苷酸中至少约2％独立地包含式(III)的LMW修饰的核苷酸：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

该方法包括：

(a)使式(II)的化合物：

与活化剂接触以形成式(IIA)的化合物：

其中X为合适的离去基团；

(b)使式(IA)的化合物：

与式(IIA)的化合物接触以形成式(I)的化合物；

(c)任选地使式(V)的化合物：

与活化剂接触以形成式(VA)的化合物：

其中X为合适的离去基团；

(d)任选地使式(IA)的化合物：

与式(VA)的化合物接触以形成式(III)的化合物。

在实施例中，(a)和(b)在无水溶剂中进行。

在实施例中，(c)和(d)在无水溶剂中进行。

在实施例中，无水溶剂选自DMSO或DCM。

在另一个实施例中，(a)和(b)在没有中间纯化的情况下进行。

在另一个实施例中，(c)和(d)在没有中间纯化的情况下进行。

在又一个实施例中，在(a)和(b)之间存在纯化步骤。

在另一个实施例中，在(c)和(d)之间存在纯化步骤。

在实施例中，在(a)之后添加离子溶剂。

在实施例中，在(c)之后添加离子溶剂。

在实施例中，离子溶剂选自苄基三丁基氯化铵或苄基三甲基氯化铵。

在另一个实施例中，活化剂为羰基二咪唑。

在又一个实施例中，合适的离去基团为：

其中

在又一个实施例中，合适的离去基团为：

其中

在另外的实施例中，(b)具有每dsRNA的核苷酸少于10当量的式(IIA)的化合物的比率。

在另外的实施例中，(d)具有每dsRNA的核苷酸约2当量与约50当量之间的式(VA)的化合物的比率。

在另一个实施例中，(b)具有每dsRNA的核苷酸少于2当量的式(IIA)的化合物的比率。

在另一个实施例中，(d)具有每dsRNA的核苷酸约4当量与约25当量之间的式(VA)的化合物的比率。

在另一个实施例中，式(II)的化合物为酸酐。

在另一个实施例中，式(V)的化合物为酸酐。

在又一个实施例中，R

在另一个实施例中，x为80-1000的整数。

在另一个实施例中，x为50-900的整数。

在另一个实施例中，a为180-1000的整数。

在又一个实施例中，b为80-1000的整数。

在另外的实施例中，c为80-1000的整数。

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，R

在实施例中，a为101，b为56，并且c为101。

在实施例中，R

在实施例中，存在步骤(c)和(d)。

在实施例中，步骤(b)和(d)依次进行。

在实施例中，步骤(b)和(d)同时进行。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫、真菌、杂草或螨类中所表达的RNA互补的序列，如本披露中详细讨论的，诸如但不限于靶(昆虫真菌、杂草或螨类)、靶序列和靶区域。

在另一个实施例中，R

本披露的其他部分中关于组合物、制备组合物的方法、核苷酸序列和用于靶昆虫、真菌、杂草或螨类的用途的实施例旨在涵盖于本披露中。

在一些实施例中，所披露的制备方法在成本和可扩展性方面均优于现有方法。现有合成方法需要水或另一种合适的极性质子溶剂以减少对过量溶剂稀释的需要。然而，这导致必需的聚烷基氧基聚合物酸酐的显著降解。现有方法有时每1bp dsRNA使用多达200当量的修饰基团。离子溶剂的添加提供了减少所用溶剂的量、减少起始原料的降解和允许有效合成所需产物的优异且出乎意料的益处。在该方法的一些实施例中，(b)具有每1bpdsRNA少于0.05当量的式(IIA)的化合物(例如，聚烷基氧基聚合物)的比率。在该方法的另一个实施例中，(b)具有少于0.1当量的式(IIA)的化合物的比率。在该方法的特定实施例中，(b)具有每1bp dsRNA约0.2、约0.3、约0.4、约0.5、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9或约1.0当量的式(IIA)的化合物的比率。

不希望受限于任何特定理论，离子溶剂不充当相转移催化剂。相反，出乎意料地，离子溶剂充当优异的溶剂化剂。离子溶剂还用于通过屏蔽分子上的电荷来帮助“解链”dsRNA。这种离子溶剂的使用在现有技术中从未报道过。

因此，在实施例中，离子溶剂通过屏蔽单链RNA上的所得电荷来改善dsRNA解离。

通过离子溶剂化制备低分子量修饰的方法

在另一方面，本文提供了制备包含转录后修饰的双链RNA(MdsRNA)的组合物的方法，其中该MdsRNA包含双链RNA，其中所有核苷酸中不超过约30％独立地包含式(VI)：

或其可接受的盐，其中：

B为核碱基；

R

该方法包括：

(a)使式(IV)的化合物：

与活化剂接触以形成式(IVA)的化合物：

其中X为合适的离去基团；以及

(b)使式(VIA)的化合物：

与式(IVA)的化合物接触以形成式(VI)的化合物。

在实施例中，(a)和(b)在无水溶剂中进行。

在实施例中，无水溶剂选自DMSO或DCM。

在另一个实施例中，(a)和(b)在没有中间纯化的情况下进行。

在又一个实施例中，在(a)和(b)之间存在纯化步骤。

在实施例中，在(a)之后添加离子溶剂。

在实施例中，离子溶剂选自苄基三丁基氯化铵或苄基三甲基氯化铵。

在另一个实施例中，活化剂为羰基二咪唑。

在又一个实施例中，合适的离去基团为：

其中

在另外的实施例中，(b)具有每dsRNA的核苷酸约2当量与约50当量之间的式(IVA)的化合物的比率。

在另一个实施例中，(b)具有每dsRNA的核苷酸约4当量与约25当量之间的式(IVA)的化合物的比率。

在另一个实施例中，式(IV)的化合物为酸酐。

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫、真菌、杂草或螨类中所表达的RNA互补的序列，如本披露中详细讨论的，诸如但不限于靶(昆虫真菌、杂草或螨类)、靶序列和靶区域。

本披露的其他部分中关于组合物、制备组合物的方法、核苷酸序列和用于靶昆虫、真菌、杂草或螨类的用途的实施例旨在涵盖于本披露中。

在一些实施例中，所披露的制备方法在成本和可扩展性方面均优于现有方法。现有合成方法需要水或另一种合适的极性质子溶剂以减少对过量溶剂稀释的需要。然而，这导致必需的酸酐的显著降解。现有方法有时每1bp dsRNA使用多达200当量的修饰基团。离子溶剂的添加提供了减少所用溶剂的量、减少起始原料的降解和允许有效合成所需产物的优异且出乎意料的益处。在该方法的一些实施例中，(b)具有每1bp dsRNA少于0.05当量的式(IVA)的化合物的比率。在该方法的另一个实施例中，(b)具有少于0.1当量的式(IVA)的化合物的比率。在该方法的特定实施例中，(b)具有每1bp dsRNA 0.2当量的式(IVA)的化合物的比率。

不希望受限于任何特定理论，离子溶剂不充当相转移催化剂。相反，出乎意料地，离子溶剂充当优异的溶剂化剂。离子溶剂还用于通过屏蔽分子上的电荷来帮助“解链”dsRNA。这种离子溶剂的使用在现有技术中从未报道过。

在美国专利10,131,911、10,640,769和11,174,480中描述了低分子量组合物，这些美国专利的完整传授内容通过援引并入本文。

使用方法

在本披露的另一方面，本文提供了一种修饰昆虫中的目的多核苷酸的表达的方法，该方法包括施用本披露的组合物。

在一些实施例中，选择靶基因，使得抑制靶基因的表达杀死动物、真菌或杂草，抑制其生长或食欲，或减缓其繁殖。抑制靶基因的表达可以控制、杀死、抑制动物、真菌或杂草的生长或食欲，或减缓其繁殖。在一些实施例中，昆虫、真菌或植物具有农业意义。在一些实施例中，具有农业意义的动物、真菌或植物是昆虫、真菌或杂草。在实施例中，经修饰的表达降低靶昆虫的繁殖力。在一些实施例中，所述MdsRNA可用于在农业或城市环境中控制、杀死、抑制动物、真菌或植物的生长、食欲或摄食，或减缓其繁殖。在一些实施例中，选择植物靶基因，使得抑制基因在植物中的表达增加植物生长、活力、质量或产量。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与靶昆虫中所表达的RNA互补的序列。例如，可用于本披露的产品和方法中的有效序列或靶基因将抑制靶基因的表达，作用于昆虫的肠中部并增加死亡率或诱导生长停滞，或停止龄期发育。

在实施例中，靶昆虫是小菜蛾、舞毒蛾、入侵红火蚁、秋粘虫、科罗拉多马铃薯甲虫、油菜跳甲、埃及伊蚊或西方玉米根虫。在另一个实施例中，靶昆虫是豌豆蚜、大豆蚜、红带椿象。在另一个实施例中，靶标是螨类，诸如瓦螨(Verroa mite)。在另一个实施例中，靶标是杂草，诸如长芒苋(Palmer amaranth)。在又一个实施例中，靶标是真菌，诸如长芒苋、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum，Gibberella zeae)或葡萄孢菌(Botrytis)。因此，本披露的组合物中使用的MdsRNA将是可抑制这些昆虫中靶基因或区域表达的核苷酸序列。例如，MdsRNA包含与小菜蛾中的靶区域互补的序列，诸如但不限于AChE2、P450、CYP6BF1v1、DOUX、细胞因子受体DOMELESS、蛋白质MESH转录物变体X1、Venom羧酸酯酶-6和VPASE-E。在另一个实施例中，MdsRNA包含与秋粘虫中的靶区域互补的序列，诸如但不限于P450、细胞因子受体DOMELESS、VPASE、Dredd、蛋白质MESH转录物变体X1、P450CYP9A58、P450 CYP321A8、P450 CYP6B2样。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与西方玉米根虫(诸如但不限于SNF7)中的靶区域互补的序列。

在实施例中，MdsRNA包含选自SEQ ID No:1-269之一的序列及其完全或不完全的反向互补链。在一个特定的实施例中，序列选自SEQ ID No:13或248-251之一及其完全或不完全的反向互补链。在实施例中，靶昆虫是鳞翅目，并且可以使用SEQ ID No:1-269中的任一个及其对于每个指定序列的完全或不完全反向互补链进行靶向。在实施例中，鳞翅目使用SEQ ID No:13或248-251中的任一个进行靶向。

在实施例中，靶昆虫是鳞翅目。在实施例中，鳞翅目是粘虫(army worm)、玉米穗虫(corn ear worm)、菜白蝶(cabbage butterfly)或棉铃虫(cotton boll worm)。

在另一个实施例中，MdsRNA包含与鳞翅目中的P450、CYP6FB1v1、MESH、AChE2、VPASE、DOMELESS、DOUX或Venom靶区域互补的序列。

在实施例中，处理至少约30％的靶昆虫控制。在实施例中，处理至少约50％的靶昆虫控制。在实施例中，该处理显示出大于约50％的靶昆虫控制。在实施例中，该处理显示出约50％至约90％之间的靶昆虫控制。在实施例中，该处理显示出约50％至约75％之间的靶昆虫控制。在实施例中，该处理显示出约30％至约50％之间的靶昆虫控制。

本文所述的组合物和方法在以下实例中进一步说明，以下实例以说明的方式提供并且不旨在限制。应当理解，所示组分的元素的比例变化和替换对本领域技术人员来说是显而易见的，并且在本披露的实施例的范围内。在理解申请人不希望受所呈现的理论束缚的情况下呈现理论方面。除非另有说明，否则所有份数或量均以重量计。

农业/农用化学组合物

在一些实施例中，描述了含有所述MdsRNA的组合物。在一些实施例中，将含有MdsRNA的组合物配制用于农业应用(农用化学组合物)。

如本文所用，农用化学组合物包含有效量的至少一种MdsRNA和任选地一种或多种可接受的载体或赋形剂。载体和赋形剂是除MdsRNA之外的已适当评估安全性并有意包含在组合物中的物质。赋形剂可以用于a)在制造过程中帮助处理MdsRNA，b)保护、支持或增强MdsRNA的稳定性、或生物可用性，c)帮助产物鉴定，和/或d)增强在储存或使用过程中MdsRNA递送的总体安全性、有效性的任何其他属性。可接受的载体或赋形剂可以是或可以不是惰性物质。如本文所用，“有效量”是指产生预期结果的MdsRNA的量。

载体和赋形剂包括但不限于吸收增强剂、抗粘剂、消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂(pH调节剂)、螯合剂、包被剂、着色剂、递送增强剂、葡聚糖、右旋糖、稀释剂、崩解剂、分散剂、乳化剂、增量剂、填充剂、泡沫控制剂、助流剂、保湿剂、润滑剂、油、颜料、聚合物、防腐剂、盐水、盐、溶剂、糖、表面活性剂、悬浮剂、缓释基质、甜味剂、增稠剂、张力剂、媒介物、防水剂和润湿剂。

在一些实施例中，农用化学组合物包含一种或多种助剂或表面活性剂。在一些实施例中，一种或多种助剂或表面活性剂独立地选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、抗凝聚剂、增稠剂、乳化剂、铺展剂、粘着剂、有机硅烷、脂肪酯和油。在一个特定实施例中，一种或多种助剂或表面活性剂任选地选自非离子有机硅酮表面活性剂(例如，来自海伦娜公司(Helena company)的

在一些实施例中，农用化学组合物包含一种或多种选自除草剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀螨剂和肥料的药剂。

所述MdsRNA和含有MdsRNA的组合物可以本领域技术人员已知的多种不同方式处理，以促进这种材料施加到植物上或施加到饵料中，并且用于田间或用于城市环境中。所述MdsRNA和包含本文披露MdsRNA的组合物可以包装或包括在试剂盒、容器、包装、或分配器中。

在一些实施例中，农用化学组合物含有两种或更多种不同的MdsRNA。这些MdsRNA可以具有与相同靶基因互补的不同反义序列、与相同或不同宿主中的不同靶基因互补的不同反义序列、不同或相似的长度、或不同或相似的转录后修饰。

在一些实施例中，农用化学组合物是可乳化的农业浓缩物。在一些实施例中，可乳化的农业浓缩物进一步含有至少一种药剂，其可以是但不限于载体或有机溶剂、表面活性剂、赋形剂、除草剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、肥料或其组合。

在一些实施例中，农用化学组合物含有一种或多种除草剂。适合的除草剂的非限制性实例包括但不限于咪唑啉酮、乙草胺、氟锁草醚、苯草醚、丙烯醛、AKH-7088、甲草胺、禾草灭、莠灭净、酰嘧磺隆、杀草强、氨基磺酸铵、莎稗磷、黄草灵、莠去津、唑啶草酮、四唑嘧磺隆、BAS 620H、BAS 654 00H、BAY FOE 5043、草除灵、氟草胺、呋草黄、苄嘧磺隆、地散磷、灭草松、吡草酮、甲羧除草醚、双丙氨膦、双草醚、除草定、溴丁酰草胺、杀草全、溴草腈、去草胺、抑草磷、地乐胺、丁氧环酮、苏达灭、唑酰草胺、草长灭、唑草酯、甲氧除草醚、灭草平、氯溴隆、杀草敏、氯嘧磺隆、氯乙酸、绿麦隆、氯苯胺灵、氯磺隆、二甲基敌草索、赛草青、环庚草醚、醚黄隆、烯草酮、炔草酯、广灭灵、稗草胺、二氯吡啶酸、氯酯磺草胺、草净津、草灭特、环丙嘧磺隆、噻草酮、氰氟草酯、2,4-D、香草隆、茅草枯、棉隆、2,4DB、甜菜安、敌草净、麦草畏、敌草腈、2,4-滴丙酸、精2,4-滴丙酸、禾草灵、燕麦枯甲硫酸酯、吡氟酰草胺、噁唑隆、哌草丹、二甲草胺、异戊乙净、二甲噻草胺、噻节因、卡可基酸、敌乐胺、敌螨普、地乐消酚、草乃敌、敌草快、氟硫草定、敌草隆、DNOC、EPTC、禾草畏、烯氯乐灵、胺苯磺隆、乙氧呋草黄、乙氧嘧黄隆、乙氧苯草胺、精唑禾草灵乙酯、非草隆、硫酸亚铁、氟燕灵甲酯M、啶嘧黄隆、氟甲吡啶氧酚丙酸丁酯、精吡氟禾草灵丁酯、氟消草、氟唑啶草、氟烯草酸、丙炔氟草胺、伏草隆、乙羧氟草醚、氟胺草唑、四氟丙酸、氟啶嘧磺隆钠、抑草丁、氟草同、氟咯草酮、使它隆、呋草酮、达草氟、氟磺胺草醚、蔓草磷、草铵膦铵、草甘膦、草铵膦、氯吡嘧磺隆、氟吡甲禾灵、HC-252、环嗪酮、咪草酸甲酯、咪草啶酸、灭草烟、灭草喹、咪草烟、咪唑磺隆、咪唑啉酮、茚草酮、碘苯腈、异丙隆、异噁隆、异噁酰草胺、异噁唑草酮、乳氟禾草灵、环草啶、利谷隆、MCPA、2甲4氯硫代乙酯、MCPB、2甲4氯丙酸、精2甲4氯丙酸、苯噻酰草胺、苯嗪草酮、吡唑草胺、噻唑隆、甲基胂酸、甲基杀草隆、异硫氰酸甲酯、吡喃隆、秀谷隆、异丙甲草胺、唑草磺胺、甲氧隆、嗪草酮、甲磺隆、草达灭、绿谷隆、萘丙胺、敌草胺、抑草生、草不隆、烟嘧磺隆、壬酸、达草灭、油酸(脂肪酸)、坪草丹、黄草消、丙炔噁草酮、噁草酮、环氧嘧磺隆、氧氟吩、百草枯二氯化物、克草猛、胺硝草、五氯苯酚、蔬草灭、环戊噁草酮、石油、苯敌草、毒莠定、哌草磷、丙草胺、氟嘧黄隆甲酯、氨氟乐灵、扑灭通、扑草净、毒草安、敌稗、喔草酯、扑灭津、苯胺灵、异丙草胺、炔苯酰草胺、苄草丹、氟丙黄隆、吡草醚、吡唑特、吡嘧磺隆、苄草唑、稗草畏、哒草特、嘧草醚、嘧草硫醚、二氯喹啉酸、喹草酸、灭藻醌、喹禾灵、精喹禾灵、玉嘧磺隆、稀禾啶、环草隆、西玛津、西草净、氯酸钠、STS系统(磺酰脲)、磺草酮、甲磺草胺、嘧黄隆甲酯、磺酰磺隆、硫酸、焦油、2,3,6-TBA、三氯乙酸钠、牧草胺、丁噻隆、特草定、甲氧去草净、特丁津、去草净、噻吩草胺、噻唑烟酸、噻黄隆甲酯、禾草丹、仲草丹、苯草酮、野麦畏、醚苯黄隆、三嗪氟草胺、苯黄隆甲酯、乙氯草定、草达津、氟乐灵、氟胺黄隆甲酯、灭草猛及其组合。

在一些实施例中，农用化学组合物含有一种或多种杀真菌剂。适合的杀真菌剂包括但不限于氨基甲酸酯杀真菌剂，诸如3,3'-亚乙基双(四氢-4,6-二甲基-2H-1,3,5-噻二嗪-2-硫酮)、亚乙基双(二硫代氨基甲酸)锌或锰、双(二甲基二硫代氨基甲酰基)二硫化物、丙烯基-双-(二硫代氨基甲酸)锌、双(二甲基二硫代氨基甲酰基)乙二胺、二甲基-二硫代氨基甲酸镍、1-(丁基氨基甲酰基)-2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯、1,2-双(3-甲氧基羰基-2-硫脲)苯、1-异丙基氨基甲酰基-3-(3,5-二氯苯基)-乙内酰脲、N-羟基甲基-N-甲基二硫代氨基甲酸钾以及5-甲基-10-叔丁氧基羰基氨基-10,11-脱氢二苯并(b,f)氮杂

在一些实施例中，农用化学组合物含有一种或多种杀昆虫剂。适合的杀昆虫剂包括但不限于磷酸杀昆虫剂，诸如O,O-二乙基O-(2-异丙基-4-甲基-6-嘧啶基)硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-2-[(乙基硫代)乙基]二硫代磷酸酯、O,O-二甲基O-(3-甲基-4-硝基苯基)-硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-(N-甲基氨基甲酰基甲基)-二硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-(N-甲基-N-甲酰基氨基甲酰基甲基)二硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-2-[(乙基硫代)乙基]二硫代磷酸酯、O,O-二乙基S-2-[(乙基硫代)乙基]二硫代磷酸酯、O,O-二甲基-1-羟基-2,2,2-三氯乙基磷酸酯、O,O-二乙基-O-(5-苯基-3-异噁唑基)硫代磷酸酯、O,O-二甲基O-(2,5-二氯-4-溴苯基)硫代磷酸酯、O,O-二甲基O-(3-甲基-4-甲基巯基苯基)-硫代磷酸酯、O-乙基O-对-氰基苯基苯基-硫代磷酸酯、O,O-二甲基-S-(1,2-二乙酯基乙基)二硫代磷酸酯、2-氯-(2,4,5-三氯苯基)乙烯基二甲基磷酸酯、2-氯-1-(2,4-二氯苯基)-乙烯基二甲基磷酸酯、O,O-二甲基O-对-氰基苯基硫代磷酸酯、2,2-二氯乙烯基二甲基磷酸酯、O,O-二乙基O-2,4-二氯苯基硫代磷酸酯、巯基苯基乙酸乙酯O,O-二甲基硫代磷酸酯、S-[(6-氯-2-氧代-3-苯并噁唑啉基)甲基]O,O-二乙基二硫代磷酸酯、2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙烯基二乙基磷酸酯、O,O-二乙基O-(3-氧代-2-苯基-2H-哒嗪-6-基)硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-(1-甲基-2-乙基亚磺酰基)-乙基硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-邻苯二甲酰亚氨基甲基二硫代磷酸酯、O,O-二乙基S-(N-乙氧基羰基-N-甲基氨基甲酰基甲基)二硫代磷酸酯、O,O-二甲基S-[2-甲氧基-1,3,4-噻二唑-5-(4H)-I-(4)-甲基]二硫代磷酸酯、2-甲氧基-4H-1,3,2-苯并氧杂膦2-硫化物、O,O-二乙基O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯、O-乙基O-2,4-二氯苯基硫代苯磷酸酯、S-[4,6-二氨基-均-三嗪-2-基-甲基]O,O-二甲基二硫代磷酸酯、O-乙基O-对-硝基苯基苯基硫代磷酸酯、O,S-二甲基N-乙酰基硫代磷酰胺酯、2-二乙基氨基-6-甲基嘧啶-4-基-二乙基硫代磷酸酯、2-二乙基氨基-6-甲基嘧啶-4-基-二甲基硫代磷酸酯、O,O-二乙基O-N-(甲基亚磺酰基)苯基硫代磷酸酯、O-乙基S-丙基O-2,4-二氯苯基二硫代磷酸酯以及顺-3-(二甲氧基氧膦基)N-甲基-顺-巴豆酰胺；氨基甲酸酯杀昆虫剂，诸如1-萘基N-氨基甲酸甲酯、S-甲基N-[甲基氨基甲酰氧基]硫代乙酰亚胺酯、间-甲苯基甲基氨基甲酸酯、3,4-二甲苯基甲基氨基甲酸酯、3,5-二甲苯基甲基氨基甲酸酯、2-仲丁基苯基N-甲基氨基甲酸酯、2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基甲基-氨基甲酸酯、2-异丙氧基苯基N-甲基氨基甲酸酯、1,3-双(氨基甲酰基硫代)-2-(N,N-二甲基氨基)丙烷盐酸盐以及2-二乙基氨基-6-甲基嘧啶-4-基-二甲基氨基甲酸酯；以及其他杀昆虫剂，诸如N,N-二甲基N'-(2-甲基-4-氯苯基)甲脒盐酸盐、硫酸烟碱、米尔倍霉素、6-甲基-2,3-喹喔啉二硫环S,S-二硫代碳酸酯、2,4-二硝基-6-仲丁基苯基丙烯酸二甲酯、1,1-双(对-氯苯基)2,2,2-三氯乙醇、2-(对-叔丁基苯氧基)异丙基-2'-氯乙基亚硫酸酯、氧化偶氮苯、二-(对-氯苯基)-环丙基甲醇、二[三(2,2-二甲基-2-苯基乙基)锡]氧化物、1-(4-氯苯基)-3-(2,6-二氟苯甲酰基)脲、S-三环己基锡O,O-二异丙基二硫代磷酸酯及其组合。

在一些实施例中，农用化学组合物含有一种或多种肥料。各种肥料适于包含在组合物中。肥料可以是单一养分肥料(N、P、或K)、二元肥料(例如，NP、NK、或PK)、NPK肥料、或多养分肥料(例如，可以提供钙、镁、硫、铜、铁、锰、锌、硼、硅、钴、或钒中的一种或多种)。肥料可以是天然来源或合成来源。肥料可以是液体或固体，并且可以提供缓慢释放或受控释放。

在一些实施例中，MdsRNA占组合物的少于50重量％。在一些实施例中，农业组合物中MdsRNA的量是该组合物的少于5重量％。在一些实施例中，MdsRNA以少于组合物约1重量％、少于约0.9重量％、少于约0.8重量％、少于约0.7重量％、少于约0.6重量％、少于约0.5重量％、少于约0.4重量％、少于约0.3重量％、少于约0.2重量％、少于约0.1重量％、少于约0.05重量％、少于约0.01重量％、或少于约0.001重量％的量存在于该组合物中。

在一些实施例中，该农用化学组合物被配制为液体。液体配制品可以通过以下制备：在液体中混合MdsRNA和其他试剂，直至按下述重量百分比实现所有组分的溶解。该液体可以是含水、离子、或有机液体。适合的液体包括但不限于水、醇(例如甲醇和乙醇)、酮(例如丙酮、甲基乙基酮和环己酮)、芳族烃(例如苯、甲苯、二甲苯、乙苯和甲基萘)、脂族烃(例如己烷和煤油)、酯(例如乙酸乙酯和乙酸丁酯)、腈(例如乙腈和异丁腈)、醚(例如二噁烷和二异丙醚)、酸酰胺(例如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺)以及卤代烃(例如二氯乙烷、三氯乙烯和四氯化碳)。

在一些实施例中，该液体配制品是含水配制品。在一些实施例中，含水配制品仅含有水、MdsRNA和其他试剂。在一些实施例中，向该含水配制品提供另外的化合物、溶剂、或助剂。

在一些实施例中，该农用化学组合物被配制为粉末或粉尘。该粉末或粉尘可以被粒化以适用于将该粉末或粉尘直接施加到作物(即，通过对作物喷粉)，或者它可以被粒化以用于最终溶解在溶剂(诸如水)中。在一些实施例中，该组合物是冻干物。典型地，MdsRNA和其他试剂一起冻干。在一些实施例中，一种或多种MdsRNA和其他试剂可以单独冻干。

各种适合的固体和气体载体可以用于组合物中。适合的固体载体包括但不限于以下的细粉末或颗粒：粘土(例如高岭土、硅藻土、合成的水合二氧化硅、绿坡缕石粘土、膨润土和酸性粘土)、滑石、填充剂、无机矿物质(例如绢云母、粉状石英、粉状硫、活性炭、碳酸钙和水合二氧化硅)以及化学肥料的盐(例如，硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、脲和氯化铵)。适合的气体载体包括例如丁烷气体、二氧化碳和碳氟化合物气体。

在一些实施例中，农用化学组合物包含分散剂。分散剂的实例包括但不限于甲基纤维素、聚乙烯醇、木质素磺酸钠、聚合烷基萘磺酸盐、萘磺酸钠、聚亚甲基双萘磺酸盐、中和的聚氧乙基化衍生物以及经环取代的烷基苯酚磷酸盐。还可以使用稳定剂来产生稳定的乳液。示例性稳定剂包括但不限于镁、硅酸铝和黄原胶。

在一些实施例中，农用化学组合物被配制为呈气溶胶形式的喷雾。当被配制为气溶胶喷雾时，该组合物通常与推进剂一起被装填在处于压力下的容器中。适合的推进剂的实例包括氟三氯甲烷和二氯二氟甲烷。

在一些实施例中，农用化学组合物包含种子。在一些实施例中，农用化学组合物包含抗真菌MdsRNA和种子。在一些实施例中，农用化学组合物包含MdsRNA、种子，并且进一步包含杀真菌剂。

在一些实施例中，杀真菌组合物(含有杀真菌剂的农用化学组合物)中的MdsRNA的量是该杀真菌组合物的少于约5重量％、少于约1重量％、少于约0.9重量％、少于约0.8重量％、少于约0.7重量％、少于约0.6重量％、少于约0.5重量％、少于约0.4重量％、少于约0.3重量％、少于约0.2重量％、少于约0.1重量％、少于约0.05重量％、少于约0.01重量％、或少于约0.001重量％。杀真菌组合物的重量不包括种子的重量。

在一些实施例中，杀真菌组合物存在于种皮内，或存在于种子内部。在一些实施例中，杀真菌组合物在种子上形成，这样使得它完全或部分覆盖种子的外部。用于涂覆种子的方法包括本领域已知的那些。

用于控制农业害虫的方法

在一些实施例中，将MdsRNA或含有MdsRNA的组合物用于控制农业害虫或处理农业害虫侵害。可将MdsRNA施用于害虫、被害虫占据的区域、或害虫的食物来源。

在一些实施例中，提供了用于处理或控制害虫的方法。在一些实施例中，害虫是昆虫、真菌、螨类或杂草。这些方法包括将包含一种或多种所述MdsRNA的组合物施加到有待处理的区域。在一些实施例中，MdsRNA以少于5重量％的量存在于组合物中。在一些实施例中，该组合物被直接施加到表面。在一些实施例中，该表面是所靶向的昆虫或真菌害虫进食的植物表面。

在一些实施例中，在施加MdsRNA或含有MdsRNA的组合物后，靶宿主中靶基因的基因表达水平和/或mRNA水平降低至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％。在一些实施例中，在施加MdsRNA或含有MdsRNA的组合物后，农业害虫的死亡率增加至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％。

如本文所用，控制害虫意指与不存在用MdsRNA处理的情况下所测量的损害、产量、发病率、生长、食欲、进食、或生殖降低相比，减少由害虫导致的作物损害或产量降低，或增加害虫的发病率，抑制害虫的生长或食欲或进食，或减慢害虫的生殖。

作物应用

在一些实施例中，描述了降低靶基因在除杂草以外的靶植物中的表达的方法。该方法包括将含有一种或多种所述MdsRNA的组合物施加到植物上。在一些实施例中，该植物是作物植物。作物植物是可以生长并收获以用于获益或维持生存的植物。作物植物可以是但不限于食用植物、园艺植物、花卉园艺植物、或工业植物。在一些实施例中，该植物是栽培植物。该植物可以处于实验室、温室、苗圃、田地、果园或其他农业环境、花园、或另一种自然或城市环境中。在一些实施例中，靶植物是被认为在特定情况或位置中希望的植物。

昆虫侵害

在一些实施例中，该动物是昆虫。在一些实施例中，昆虫是鞘翅目(Coleopteran)(诸如甲虫)。鞘翅目可以是但不限于树皮甲虫、榆叶甲虫、亚洲长角甲虫、窃盗甲虫、山松甲虫、椰子铁甲虫或科罗拉多马铃薯甲虫。在一些实施例中，昆虫是鳞翅目(诸如蝶或蛾)。鳞翅目可以是但不限于粘虫、玉米穗虫、菜白蝶或棉铃虫。在一些实施例中，昆虫是膜翅目(Hymenopteran)(诸如叶蜂、黄蜂、蜜蜂、蚂蚁)。膜翅目可以是但不限于火蚁、阿根廷蚂蚁、木蚁、切叶蚂蚁、军蚁、麦茎蜂、落叶松叶蜂、锯角叶蜂、或臭虫。在一些实施例中，昆虫是双翅目(Dipteran)(诸如苍蝇)。双翅目可以是但不限于苍蝇、蚊子、蚋、或潜叶蛾。在一些实施例中，昆虫是半翅目(Hemipteran)(诸如蝽象)。半翅目可以是但不限于蚜虫、跳虫、蝽、粉虱、粉蚧、或跳蚤。在一些实施例中，该昆虫是西方玉米根虫。

在一些实施例中，该昆虫是对于一种或多种常规的已知杀昆虫剂具有抗性的昆虫。在一些实施例中，该昆虫(诸如入侵红火蚁)可能对生物多样性具有负面影响(Wojcik等人2001和/或对杀昆虫剂具有抗性(Zhang等人2016)。在一些实施例中，该昆虫(诸如蚊子)可能作为疾病载体影响人健康，该疾病诸如但不限于疟疾(Malaria)、登革热(Dengue)、寨卡(Zika)和基孔肯雅热(Chikungunya)(Hemingway等人2004)。在一些实施例中，该昆虫(诸如亚洲柑橘木虱)是柑桔黄龙病的载体(Tiwari等人2011)。

已知鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、双翅目和半翅目昆虫害虫易受通过直接注射或通过进食用siRNA前体处理的植物物质引入的RNAi的影响。裸RNA的田间施加通常由于RNA对于环境特异性和非特异性降解的敏感性而是不切实际的(Baum 2016)。此外，RNA在进食过程中和通过昆虫肠道运输中高度易受降解的影响。例如，一般来讲，鳞翅目似乎比鞘翅目更积极地降解RNA，这可能解释了它们对RNAi介导的控制方法的相对较差的易感性。所述MdsRNA的稳定性用于在递送到RNAi途径之前保护MdsRNA免受宿主核酸酶的影响，并且限制非特异性环境降解。然而，所述MdsRNA是充分可生物降解的而被认为是环境上安全的。

包含一种或多种MdsRNA的组合物可以在感染之前施加到植物，以预防昆虫感染。该组合物还可以在出现感染迹象之后施加，以处理昆虫感染。该组合物可以根据有待处理的植物部分通过各种方法施加。通过举例的方式，该组合物可以在种植之前施加到植物种子，以预防种子的昆虫感染。该组合物可以在种植时或在即将种植之前施加到土壤，以预防新种植的种子(即，作为出苗前)的昆虫侵害。在一些实施例中，该组合物可以在其发芽之后施加到植物，或者在出苗之后施加到植物的叶片，以处理或预防昆虫侵害(即，作为出苗后)。在示例性实施例中，该施加在发芽阶段、幼苗生长、营养生长和生殖生长过程中发生。在一些实施例中，施加在营养和生殖生长阶段过程中发生。

将该组合物施加到出苗前种子可能涉及各种种子涂覆技术，诸如膜涂覆、制粒、封装、转筒涂覆和流化床涂覆。施加到出苗后植物可能涉及喷雾或作物喷粉技术。

有效量的该组合物可以通过本领域通常已知的若干方法施加到植物或种子。如本领域技术人员将理解的，包含“有效量”的组合物的量可以并且将根据植物及其生产阶段、真菌靶标和环境条件而变化。一般而言，对于典型的施加，将植物或其后代用足以提供约0.01mg/kg至约10重量％的活性成分浓度的量的组合物进行处理。据设想，该方法可能涉及多于一次将组合物施加到植物或其后代。例如，施加次数的范围可以为约1至约5或更多次。如本文详细描述的，这些施加可以在植物的生命周期的相同或不同阶段施加。

真菌感染

在一些实施例中，将MdsRNA用于处理或预防真菌感染。在一些实施例中，真菌可以是但不限于肉座菌属、黑星菌属、叉丝单囊壳属、白粉菌属、链核盘菌属、球腔菌属、钩丝壳属；担子菌、驼孢锈属、丝核菌属、柄锈菌属、半知菌、葡萄孢属、长蠕孢属、喙孢属、镰刀菌属、壳针孢属、尾孢属、链格孢属、梨孢属、假小尾孢属、卵菌真菌、疫霉属、霜霉属、圆梗霉属、腐霉属、单轴霉属、豆薯层锈菌、山马蝗层锈菌、大孢指疫霉菌、玉米褐条霜疫霉菌、禾生炭疽菌、玉蜀黍霜指霉、菲律宾指霜霉、甘蔗指霜霉、玉蜀黍霜指霉、玉米壳锈菌、玉蜀黍尾孢、禾生毛盘孢、肉座菌目、玉米赤霉、玉米大斑病菌、玉米眼斑病菌、玉米小斑病菌、燕麦镰刀菌、大刀镰刀霉、尖孢镰刀菌、拟分枝孢镰刀菌、或禾谷镰刀菌。在一些实施例中，禾谷镰刀菌的处理可以减少霉菌毒素的产生，基于脱甲基抑制剂(DMI)出现对杀真菌剂的抗性的风险，或关于常规DMI如戊唑醇的致癌性问题。

在一些实施例中，所述农用化学组合物可以在感染之前施加到植物，以预防真菌感染。在一些实施例中，所述农用化学组合物可以在出现感染迹象之后施加到植物，以处理真菌感染。该组合物可以根据有待处理的植物部分通过各种方法施加。通过举例的方式，该组合物可以在种植之前施加到植物种子，以预防种子的真菌感染。该组合物可以在种植时或在即将种植之前施加到土壤，以预防新种植的种子(即，作为出苗前)的微生物侵害。在一些实施例中，该组合物可以在其发芽之后施加到植物，或者在出苗之后施加到植物的叶片，以处理或预防微生物侵害(即，作为出苗后)。在示例性实施例中，该施加在发芽阶段、幼苗生长、营养生长和生殖生长过程中发生。更典型地，施加在营养和生殖生长阶段过程中发生。

将该组合物施加到出苗前种子可能涉及各种种子涂覆技术，诸如膜涂覆、制粒、封装、转筒涂覆和流化床涂覆。施加到出苗后植物可能涉及喷雾或作物喷粉技术。

有效量的该组合物可以通过本领域通常已知的若干方法施加到植物或种子。如本领域技术人员将理解的，包含“有效量”的组合物的量可以并且将根据植物及其生产阶段、真菌靶标和环境条件而变化。一般而言，对于典型的施加，将植物或其后代用足以提供约0.01mg/kg至约5,000mg/kg的活性成分浓度的量的组合物进行处理。据设想，该方法可能涉及多于一次将组合物施加到植物或其后代。例如，施加次数的范围可以为约1至约5或更多次。如本文详细描述的，这些施加可以在植物的生命周期的相同或不同阶段进行。

杂草

本披露的组合物可用于控制、预防、消除、减缓杂草的生长。杂草是被认为在特定情况或位置中不希望的植物。杂草可以是，但不限于，长芒苋、普通藜(CommonLambsquarter)、加拿大蓬(Horseweed)、牵牛花(Morning Glory)、苋菜藤子(Waterhemp)、莎草香附子(Nutsedge)、地肤属(Kochia)、普通豚草(Common Ragweed)、三裂叶豚草(GiantRagweed)或龙葵(Nightshade)。

实例

实例1.在DMSO中制备高分子量聚烷基氧基聚合物dsRNA。

PEG的活化

将1当量的PEG-乙酸以50mg/ml溶解在二甲亚砜(DMSO)中，并向该溶液中添加1.05当量的羰基二咪唑(CDI)。将反应混合物在氩气下搅拌至少2小时，优选过夜。然后在离子溶剂化后将该溶液直接添加到dsRNA中。

dsRNA与活化的PEG的反应

将苄基三乙基氯化铵(苄基-TriBA-Cl)以200mM溶解在DMSO中。将该溶液的等分试样加入到反应管中的冻干dsRNA中。将该管在振荡器中温热至65℃，持续1hr。然后将温度降至55℃，并添加催化量的吡啶，然后添加200μg/μL的DMAP溶液。以1-3份添加200ug/uL活化的PEG溶液。将混合物在55℃下保持90min，然后用500mM柠檬酸盐pH 4.5淬灭，并用水稀释至40mL。使用切向流过滤TFF纯化含有粗PEG-dsRNA的所得混合物，得到纯度>90％的MdsRNA。

根据上述程序制备以下MdsRNA：

表1：通过实例1的程序合成的经修饰的MdsRNA化合物。

a

如通过图4可以看出，活化的10k PEG/dsRNA反应混合物(线3)的琼脂糖凝胶(2％)分析证明用10k PEG聚合物的1、2、3、4等条数的链共价修饰300bp分子。最初未修饰的dsRNA分子在反应期间全部消耗。

实例2.使用用于活化反应的DCM制备高分子量聚烷基氧基聚合物dsRNA。

将1当量的PEG-乙酸以300mg/ml溶解在二氯甲烷(DCM)中，并向该溶液中添加1.05当量的CDI。将反应混合物在氩气下搅拌至少2小时，优选过夜。然后将反应混合物用新鲜的DCM稀释至5mg/ml，并用0.5倍体积的1N HCL，随后用0.5倍体积的饱和NaCl萃取。然后将水层用乙酸乙酯洗涤，随后用DCM洗涤。将合并的有机层经硫酸钠干燥，并真空蒸发溶剂，得到粘性液体。将粘性液体用2倍体积的乙腈(CAN)研磨并在氩气流下汽提以去除水，然后在高真空和P

表2：通过实例2的程序合成的经修饰的MdsRNA化合物。

a

实例3.在DMSO中制备高分子量聚烷基氧基聚合物dsRNA。

聚烷基氧基聚合物PEG的活化

将聚烷基氧基聚合物与接头反应，以在聚合物链的一端引入反应性COOH。将1当量的聚烷基氧基聚合物溶解在1,4-二噁烷中。添加DMAP(0.5当量)、DIEA(3当量)和对应的酸酐(1.5当量)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用DCM稀释并用碳酸氢钠、盐水萃取。将有机层经硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得胶状物用新鲜DCM研磨，并通过过滤收集固体聚烷基氧基-COOH。

将1当量的聚烷基氧基-COOH以50mg/ml溶解在二甲亚砜(DMSO)中，并向该溶液中添加1.05当量的羰基二咪唑(CDI)。将反应混合物在氩气下搅拌至少2小时，优选过夜。然后将该溶液直接添加到dsRNA中。

使用上述制备方法制备以下活化的聚烷基氧基聚合物，该聚烷基氧基聚合物用于产生所需的MdsRNA：甲氧基PEG乙酸(MPEGA)1K、2K、5K和10K；甲氧基PEG乙酸(MPEGA-Y)40K、Y形；甲氧基PEG琥珀酸(MPEGS)5K；甲氧基PEG谷氨酸(MPEGG)5K；甲氧基PEG 3,3-二甲基谷氨酸(MPEGM)5K；氨基甲酰基PEG 5K(CPEG)，泊洛沙姆琥珀酸L64，2,9K；泊洛沙姆琥珀酸L68；泊洛沙姆琥珀酸L121；泊洛沙姆琥珀酸F108，14K；泊洛沙姆琥珀酸F127，12.5K。

dsRNA与活化的聚烷基氧基聚合物PEG的反应

将苄基-三丁基氯化铵以200mM溶解在DMSO中。将该溶液的等分试样加入到反应管中的冻干dsRNA中。将该管在振荡器中温热至65℃，持续1hr。然后将温度降至55℃，并添加催化量的吡啶，然后添加200μg/μL的DMAP溶液。分批添加200ug/uL活化的聚烷基氧基聚合物溶液。将混合物在55℃下保持90min，然后用500mM柠檬酸盐pH 4.5淬灭，并用水稀释至40mL。使用切向流过滤(TFF)纯化含有粗M-dsRNA的所得混合物，得到纯度>90％的MdsRNA。用非变性琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶通过凝胶电泳对MdsRNA进行表征。

修饰程度(％修饰)，即用聚合物酯化的碱基数与dsRNA中碱基总数的比率，通过组合式水解/HPLC-ELSD方法确定。在99℃下加热纯化产物的水溶液和0.5MNaOH溶液的混合物时，获得MdsRNA样品的水解。使用配备有C18 100ALC柱250x 4.6mm和ELSD的Shimadzu LC-2030C HPLC对所得聚烷基氧基聚合物和RNA核苷酸进行定量。使用dsRNA起始材料和聚烷基氧基聚合物作为标准品建立校准曲线。

使用叶圆片测定来筛选MdsRNA的杀虫活性。使用甘蓝叶圆片在小菜蛾(DBM)(P.xylostella)幼虫上测试靶向DBM的MdsRNA。将MdsRNA处理与助剂一起溶解在水中，并稀释，以获得所需浓度。将所需的处理溶液喷洒在新鲜甘蓝叶圆片(3.5cm直径)的两面。每次处理重复3次，并以单独的水为对照。将圆片置于容器中的湿纸巾上。将小菜蛾卵(8-12)转移到每个经处理的圆片中，并将容器在26℃和72％相对湿度(RH)下孵育。在第2、3和4天提供新鲜处理的圆片，然后每天提供未处理的圆片。在第5天和第8天记录幼虫死亡率和发育迟缓。计算每次处理的％功效和标准偏差，并用于以1-3的标度如下评定处理：％功效：0％-30％，评级＝1；％功效：30％-50％，评级＝2，％功效：>50％，评级＝3。将评级为3的处理推进至进一步优化研究。

使用玉米叶方片(9cm2)在DBM幼虫上测试靶向秋粘虫(FAW)(S.frugiperda)的MdsRNA。将一个FAW卵置于每个玉米叶上，并如上所述孵育容器。每次处理至少重复10次，并运行阴性对照。在第4、5和6天提供新鲜处理的叶方片，然后每天提供未处理的圆片。在第8天和第11天记录幼虫死亡率和发育迟缓。计算每次处理的％功效，并用于以1-3的标度如下评定处理：％功效：0％-30％，评级＝1；％功效：30％-50％，评级＝2，％功效：>50％，评级＝3。将评级为3的处理推进至进一步优化研究。

根据上述程序制备以下MdsRNA：

表3：使用实例3中的程序合成的经修饰的dsRNA触发物。

a

实例4.高分子量聚烷基氧基聚合物-NMIA dsRNA的制备。

根据实例3中描述的程序使用甲氧基PEG乙酸10K在输入0.1下制备和纯化MPEGA-dsAChE2。将苄基-TriBA-Cl以200mM溶解在DMSO中。将该溶液的等分试样(3.4mL)添加到反应管中的冻干MPEGA-dsAChE(34mg)中。将该管在振荡器中温热至65℃，持续1hr。然后将温度降至55℃，并添加110μL吡啶，然后添加500μL的200μg/μL DMAP溶液和442μL的200μg/μLNMIA溶液。5min后，添加另外442μL NMIA溶液(输入＝10，每摩尔RNA核苷酸的NMIA摩尔数)。将混合物在55℃下保持90min，然后用500mM柠檬酸盐淬灭，并用水稀释至40mL。使用切向流过滤TFF纯化含有粗PEG-NMA-dsAChE2的所得混合物，得到纯度>90％的MdsRNA。用非变性琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶通过凝胶电泳对PEG-NMA-dsAChE2进行表征。通过HPLC的％修饰：PEG 1％，NMIA37％。

实例5.高分子量聚烷基氧基聚合物-FA dsRNA的制备。

遵循与实例4中所述程序类似的程序。使MPEGA-P450 5K(115)与活化的月桂基(LAU)、油酸(OLE)和亚油酸(LIN)脂肪酸反应，得到表4中所述的MPEGA-FA-P450材料。

表4：使用实例4中的程序合成的经修饰的dsRNA触发物。

实例6.甘蓝圆片测定

使用甘蓝叶圆片生物测定和从田间收集的DBM卵测试经修饰的dsRNA材料对DBM幼虫的杀虫活性。在第4-5阶段收集甘蓝叶。通过使用喷嘴用自来水洗涤以去除昆虫、灰尘等来制备叶片。然后用纸巾擦拭叶片。使用金属切割机从甘蓝叶穿孔出3.5cm直径的叶圆片。在500ppm或150ppm浓度下制备所需处理溶液的水溶液，并将60uL喷洒在圆片的两面上。在对叶圆片的两面施加处理之后，然后从经处理的3.5cm穿孔出四个1cm直径的圆片。将所得的经处理的1cm直径圆片用于测定中。将三个小菜蛾卵置于培养皿中的每个经处理的圆片上。将板在26℃和72％室内湿度(RH)下孵育。48小时后，只有一个新生幼虫被转移到新的(第2个)经处理的圆片上。在第2个经处理的圆片24小时后提供第三个经处理的圆片。然后每天给幼虫提供未处理的圆片，持续长达10天。从孵育后第2天开始每天记录死亡率。在实验持续期间计算每个测试的死亡率，并计算5天和7或9天后的累积死亡率。孵育7天后，将2龄或1龄幼虫的数量添加到死亡幼虫计数中。一些PEG-P450(115)实例对DBM幼虫的功效示于图1中。两个PEG-dsRNA实例对田间收集的DBM卵的功效与主要商品的功效示于图3和表5中。

表5：DBM幼虫的％控制(使用Schneider-Orelli计算)*

DA-A：侵害后的天数，侵害。*后面跟有相同字母的平均值没有显著差异(P＝0.05，LSD)

实例7.使用离子溶剂化方法制备NMA dsRNA。

将苄基-三丁基氯化铵以200mM溶解在DMSO中。将该溶液的等分试样加入到反应管中的冻干dsRNA中。将该管在振荡器中温热至65℃，持续1hr。然后将温度降至55℃，并添加110uL吡啶，然后添加200ug/uL DMAP溶液，并添加两次200ug/uL N-甲基靛红酸酐(NMIA)溶液。将混合物在55℃下保持90min，然后用500mM柠檬酸盐淬灭，并用水稀释。使用切向流过滤TFF纯化含有粗NMA-dsRNA的所得混合物，得到纯度>90％的MdsRNA。根据上述程序制备以下NMA-dsRNA：NMA-P450(115)(37％ NMA)、NMA-VPASE(7)(81％ NMA)、NMIA-AChE(1)(40％，80％ NMA)、NMA-B1(4)、NMA-TH(3)。该程序也用于制备NBA、二甲基呋喃甲酰基、-Tyr、-Trp、-Leu和辛酰基的dsRNA类似物。该程序可用于其他修饰，诸如但不限于月桂酰基、亚油酰基等。

实例8.PEG-dsRNA在田间甘蓝植物中的持久性

RNAi活性成分在田间的寿命一直是先进杀虫剂开发中的首要关注点。已知RNA是易受酶降解影响的非常不稳定的分子。在对大豆植物进行叶面施加后，dsRNA在田间范围内的半衰期估计在0.5天与0.7天之间(Bachman等人,2020)。在小地块田间试验中，研究了喷洒在甘蓝叶上的原生dsRNA和2'-O修饰的dsRNA的dsRNA序列的时间衰减。

在喷洒后的这些时间点使用叶片穿孔器收集暴露于喷雾剂的甘蓝叶样品：0天(1hr)、1、2、3和5天。每个数据点，收集来自每个地块的12个单独植物的12个叶圆片并立即在干冰上冷冻。然后应将袋子储存在干冰或-80℃冷冻器中直到准备分析。

本试验中使用的dsRNA是先前在田间消散研究中报道的dsSNF7序列(Bachman等人,2020)。QuantGene，一种由英杰公司(Invitrogen)销售的核酸检测平台，是用于定量喷洒后甘蓝植物叶片上的dsRNA序列的优选分析方法。序列和对应的Quantigene探针集先前已公开(Armstrong等人,2013)。该序列不针对小菜蛾(DBM)，并且在此仅用于分析目的。使用未处理(未修饰)dsSNF7，处理C2作为比较。

使用了以下两个修饰基团：N-甲基邻氨基苯甲酰基和PEGA。在以前的研究中，用这两个基团修饰的dsRNA显示出对DBM的优异生物活性(参见例如，实例3，表3)。处理NS2(PEGA-NMA-dsSNF7，MdsRNA90，表3)显示出与包括NS5(NMA-dsSNF7，NMA～100％)在内的所有其他dsRNA不同的特征，这暗示着存在高度稳定的MdsRNA级分，其在测试的时间范围内几乎没有表现出衰减(参见图2)。

SEQUENCES-鳞翅目的dsRNA序列。

上文提供了SEQ ID NO:1-12。

ID 1.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA。NCBI参考序列：NM_001305532.1.51-150GGCAGCAACCATG GCGC TCAGCGATGCAGATGTCCAAAAACAGATCAAGCATATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAGGCAAATGAAAAGGCCGAAGAAATC(SEQ ID NO:13)。

ID 2.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA 151-250GATGCTAAGGCTGAGGAGGAGTTCAACATCGAGAAGGGGCGTCTGGTGCAGCAGCAGCGCCTCAAGATCATGGAGTACTACGAGAAGAAGGAGAAGCAGG(SEQ ID NO:14)。

ID 3.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA251-350TGGAACTCCAGAAGAAGATCCAATCCTCCAACATGCTGAACCAGGCCCGTCTGAAGGTGCTGAAGGTGCGCGAGGACCACGTGGGCCACGTGTTGGACGA(SEQ ID NO:15)。

ID 4.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA351-450GACGCGCCGCCGCCTCGCCGAGGTGCCCAACGACCAGGGGCTCTACTCCGACCTGGTGGTCAAGCTCATCGTGCAGGCGCTGTTCCAGCTGGTTGAGCCA(SEQ ID NO:16)。

ID 5.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA 451-550ACCGTAACCCTCCGCGTGCGCGAGGCCGACAAGCCGCTGATCGACAGCCTGCTCGAGCGCGCGCAGGCGCAGTACAAGGAGAAGATCAAGAAGGATGTGA(SEQ ID NO:17)。

ID 6.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA551-650CCTTGAAGGTGGACACGGAGCACTACCTGCCGGTGGGCACCTGCGGCGGGATTGAGTTGGTCGCCGCTAGGGGCCGCATCAAGATCATCAACACCCTGGA(SEQ ID NO:18)。

ID 7.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA651-750GTCGCGCATGGAGCTGATCGCGCAGCAGCTGCTGCCCGAGATCCGCACGGCGCTGTTCGGACGGAACCCCAACCGCAAGTTCACCGACTAAACACCAACC(SEQ ID NO:19)。

ID 8.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA 1501-1600AGATTTGACTGGGCGCAGGGCGGTGTCACCCATACATCTTTCAGCTGAAAAAGACATTCCTCTTTCATGTTTCCTGTCCTGGCAATCAAATGTTTCGGCT(SEQ ID NO:20)。

ID 9.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA 1601-1700TGCTTTTAACAGTTCTATCGAAGAGCACCGTAGCTCTATAAATTACATAACGAATATAATGTTTAATCCCCATTATGGCACTGTTAAAATTCTTATGTAA(SEQ ID NO:21)。

ID 10.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA1401-1500ATACTGTTTACTATCGTGGACTTCCTGGGAATTATTTGATGCTGTAAGGTTTATGGGTGACGGCAGCATCCCGCCTTATTCCCACTGAAATCGAAGTGAA(SEQ ID NO:22)。

ID 11.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA51-166GGCAGCAACCATGGCGCTCAGCGATGCAGATGTCCAAAAACAGATCAAGCATATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAGGCAAATGAAAAGGCCGAAGAAATCGATGCTAAGGCTGAGG(SEQ ID NO:23)。

ID 12.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA1476-1649TTATTCCCACTGAAATCGAAGTGAAAGATTTGACTGGGCGCAGGGCGGTGTCACCCATACATCTTTCAGCTGAAAAAGACATTCCTCTTTCATGTTTCCTGTCCTGGCAATCAAATGTTTCGGCTTGCTTTTAACAGTTCTATCGAAGAGCACCGTAGCTCTATAAATTACATA(SEQ ID NO:24)。

ID 13.小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA序列

GGCAGCAACCATGGCGCTCAGCGATGCAGATGTCCAAAAACAGATCAAGCATATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAGGCAAATGAAAAGGCCGAAGAAATCGATGCTAAGGCTGAGGTTATTCCCACTGAAATCGAAGTGAAAGATTTGACTGGGCGCAGGGCGGTGTCACCCATACATCTTTCAGCTGAAAAAGACATTCCTCTTTCATGTTTCCTGTCCTGGCAATCAAATGTTTCGGCTTGCTTTTAACAGTTCTATCGAAGAGCACCGTAGCTCTATAAATTACATA(SEQ IDNO:25)。

ID 14.XM_038113977.1|:71-220PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNAGTGATAAGTTGTGATTCTCCGCCATTCTCGGTCTGTCTTTTCCATCTTTCTCGTCCAAAAAACAAGGTAATTGTTCAAGATGAGTCACGGGTTGAAGAGGATTGCCGATGAGGACAATGAAACCCAGTTCGGTTATGTCTTCGCTGTGTC(SEQ ID NO:26)。

ID 15.NM_001305532.1|:51-200小菜蛾V型质子ATP酶亚基E(LOC105389010)，mRNA GGCAGCAACCATGGCGCTCAGCGATGCAGATGTCCAAAAACAGATCAAGCATATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAGGCAAATGAAAAGGCCGAAGAAATCGATGCTAAGGCTGAGGAGGAGTTCAACATCGAGAAGGGGCGTCTGGTGCA(SEQ ID NO:27)。

ID 16.小菜蛾V型质子ATP酶序列涵盖亚基A和E两者GTGATAAGTTGTGATTCTCCGCCATTCTCGGTCTGTCTTTTCCATCTTTCTCGTCCAAAAAACAAGGTAATTGTTCAAGATGAGTCACGGGTTGAAGAGGATTGCCGATGAGGACAATGAAACCCAGTTCGGTTATGTCTTCGCTGTGTCGGCAGCAACCATGGCGCTCAGCGATGCAGATGTCCAAAAACAGATCAAGCATATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAGGCAAATGAAAAGGCCGAAGAAATCGATGCTAAGGCTGAGGAGGAGTTCAACATCGAGAAGGGGCGTCTGGTGCA(SEQ ID NO:28)。

ID 17.101-200PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA ACGGAGGGAGATCCTCCTTCTGTGACTATAGCGCAAGGGTCCGTTGTAGGTACTGCTGTGACCAGCTCTGGATTTACACACTATGAATTCCACGGGATAC(SEQ ID NO:29)。

ID 18.201-300PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA CGTATGCTGACTCTACTTCTGGATCTCACAGGTTCAAGGCGCCACGACCAGCACCCACATTCACACAGACTTTTGTTGCTGATCGCAAAGGAATCAAATG(SEQ ID NO:30)。

ID 19.301-400PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA TGTGAAAGCTATAAAGGGGGGATACGAGGGCACCGAAGATTGCTTGGTGGCCAACGTCTACACACCGGCCATTGATCCAGAAAAGAAATACCCAGTAATG(SEQ ID NO:31)。

ID 20.401-500PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA GTTTGGATTAAAGGGTCCGAGTTTGAGAAAACTAAGGGACCTGAACTATCTTTTAGAAATCTTATTGAAAAAGAAGTAATAGTCGTGTCTCTAAACTTCA(SEQ ID NO:32)。

ID 21.501-600PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA GAGAGTCGATTCTCGGGTATCTTTGTCTTGGAACAGAAACTGCGCCTGGTAACGCTGGATTGAAAGATATAATTGCTGGACTTCAATGGGTGAAAGATAA(SEQ ID NO:33)。

ID 22.601-700PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA CATTGAACAGTTTGGTGGAGACCCTGAGAGTATAACCCTATTTGGGCATGGTTCTGGAGCTGCGGCGGTAGATTTAGTCACACTCTCTCCAATGTCTAAG(SEQ ID NO:34)。

ID 23.801-900PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA TTGGGCATGAAATTACTGAGGAATTAGATATTGAAAAGCTTTCGGAAGTTTTTACTAGAACAAGTGTTGCCGCTCTAATGGCAGTTATAGATGAGTTGGA(SEQ ID NO:35)。

ID 24.901-1000PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNATTTAACTGATAACTCATTGGCTTTTGCTCCGTGTATCGAAAATGAGCATTTAGATGATGAAAAGTTTCTAGAAAAATCACCTTTTAGTACGCTAACTGAA(SEQ ID NO:36)。

ID 25.1001-1100PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNAGGAACTTACACTAAAATACCTATGATCTTCGGATTTGTTGAAAACGAAGGAACAATACGTTTTGATGAGGCACTAGAAGCTGATTGGCTAACAAAGATGG(SEQ ID NO:37)。

ID 25-2.351-500PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA CCAACGTCTACACACCGGCCATTGATCCAGAAAAGAAATACCCAGTAATGGTTTGGATTAAAGGGTCCGAGTTTGAGAAAACTAAGGGACCTGAACTATCTTTTAGAAATCTTATTGAAAAAGAAGTAATAGTCGTGTCTCTAAACTTCA(SEQID NO:38)。

ID 25-3.951-1100PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNATAGATGATGAAAAGTTTCTAGAAAAATCACCTTTTAGTACGCTAACTGAAGGAACTTACACTAAAATACCTATGATCTTCGGATTTGTTGAAAACGAAGGAACAATACGTTTTGATGAGGCACTAGAAGCTGATTGGCTAACAAAGATGG(SEQID NO:39)。

ID 25-4.XM_011559245.2|:小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA 351-500、951-1100 CCAACGTCTACACACCGGCCATTGATCCAGAAAAGAAATACCCAGTAATGGTTTGGATTAAAGGGTCCGAGTTTGAGAAAACTAAGGGACCTGAACTATCTTTTAGAAATCTTATTGAAAAAGAAGTAATAGTCGTGTCTCTAAACTTCATAGATGATGAAAAGTTTCTAGAAAAATCACCTTTTAGTACGCTAACTGAAGGAACTTACACTAAAATACCTATGATCTTCGGATTTGTTGAAAACGAAGGAACAATACGTTTTGATGAGGCACTAGAAGCTGATTGGCTAACAAAGATGG(SEQ ID NO:40)。

ID 26.101-250小菜蛾菌株DBM1Ac-S促有丝分裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶4同工型X1(MAP4K4)mRNA，完整cds，可变剪接AATATAAAGTGCGTGATTTTACACATGTCGAATGTCATGAGTGAAAGGATCTTTGTAGGTTTCTTTACATTGAAGTGAATTCTCGTGCTTTGTCTTCGTGTGTGATAATACTCAAAATGGCGCATCAACTGGCTCCGTCTGTGAATTGCT(SEQ ID NO:41)。

ID 27.901-1050小菜蛾菌株DBM1Ac-S促有丝分裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶4同工型X1(MAP4K4)mRNA，完整cds，可变剪接ATGGCCGAGAGTCAGCCGCCCCTGTGTGACCTTCACCCAATGAGAGCATTGTTTCTTATACCAAGAAATCCTCCACCCCGTTTAAAGTCAAAGAAATGGGCAAAGAAATTTCATAGTTTTATTGAAACTGTTCTTGTGAAAGACTATCAC(SEQ ID NO:42)。

ID 28.51-150小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TTGCTTCATGCAGAAGGGCGACGACAAGACCGTCTTCCAGATCCCGGACAACTTCTACCCAGAAAAGTACAAGAAGGTGGGCAACCAGCTGGCCGACCGG(SEQ ID NO:43)。

ID 29.301-400小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GGAATGCGTGACGTGGAGGACCTGCAGTCCGTGTGTAGCTACTGCCAGCTCCGCATCAACCCCTACATGTTCAACTACTGCCTGTCGGTCGCCATGCTGC(SEQ ID NO:44)。

ID 30.401-500小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds ACAGACCAGACACGAAGGGCCTGTCGCCGCCGACGCTGGCGGAGACGTTCCCCGACAAGTTCATGGACCCCAAGGTGTTCCGCCGCGCGCGGGAGACCTC(SEQ ID NO:45)。

ID 31.501-600小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CACCACCGCGCCTGCTGGGGACAGGATGCCAGTCCTAATCCCGGTCAACTACACGGCCTCCGACGCTGAGCCAGAACAACGCATCGCGTACTTCCGCGAA(SEQ ID NO:46)。

ID 32.601-700小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GACATCGGCATCAACCTGCACCACTGGCACTGGCACCTGGTGTACCCCTTCGAGGCGGCCGACCGCGCCGTGGTGGACAAGGACAGGCGCGGCGAGCTGCGC(SEQ ID NO:47)。

ID 33.601-700小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TGTACTACATGCACCAGCAGATCATCGCCAGATACAACGCAGAGCGTCTGTGCAACAACCTGGGCTTCGTGACGCGCTACAACGACTTCCGCGGGCCCAT(SEQ ID NO:48)。

ID 34.801-900小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CGCCGAGGGGTACTTCCCCAAGATGGACTCGCAGGTCGCCAGCAGGGCCTGGCCTCCTAGGTTCTCCGGCACCACGATCCGCGACCTGGACCGCCCCGTG(SEQ ID NO:49)。

ID 35.901-1000小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GACCAGATCCGCTCCGACGTGTCTGAGATGGAGACCTGGAGGGACCGCTTCATCCAGGCCATCGACAGCGGCACTATTGTTCTGCCCAACGGCCGCACCC(SEQ ID NO:50)。

ID 36.1001-1100小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds AGCGCCTCGACGAGGAGACCGGCATCGACGTGCTGGCCAACCTCATGGAGTCGTCCATCATCAGCCGCAACCGCGCCTACTACGGGGACCTGCACAACAT(SEQ ID NO:51)

ID 37.1101-1200小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GGGGCATGTGTTCATCTCCTATGCGCACGACCCCGACCACCGGCACTTGGAACAATTCGGCGTGATGGGAGACCCGGCCACGGCCATGAGGGACCCGATC(SEQ ID NO:52)。

ID 38.1201-1300小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TTCTACCGCTGGCACGCGTACGTCGACGACATCTTCCAGAGATACAAGGCCACACTACCAGCCTACACCAGGGAGAGGTTGGACTTCCCAGGCATCCGCG(ID SEQ ID NO:53)。

ID 40.1301-1400小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TCTCCTCCATCGCCATCTCGGGCCGCACTCCGAACCAGTTCTCGACGCAGTGGGAGCAGAGTTCAGTGAACCTGGCGCGCGGGCTGGACTTCATGCCGCG(SEQ ID NO:54)。

ID 41.1401-1500小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CGGCGCCGTGCTGGCGCGGTTCACGCATCTGCAGCATGACGAGTTTGAGTACACCATCGAGTGCGACAACACAACCGGCCAAGCAGCCATGGGCACCGTC(SEQ ID NO:55)。

ID 42.1501-1600小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CGCATATTCCTCGCCCCGACCACCGACCAGGCCGGCAACGCACTCAACTTCGAGGAGCAGAGGCGACTCATGATCGAGCTGGACAAGTTTACTCAGGGCT(SEQ ID NO:56)

ID 43.1601-1700小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TGCGCCCCGGCAGCAACACCATCCGGCGTCGCAGCATCGACTCCTCAGTTACCATCCCCTACGAGCGAACATTCCGGGACGAGTCCCAACACCCCGGAGA(SEQ ID NO:57)

ID 44.1701-1800小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CGCTGGCTCAGCTCAGTCAGCCGACTTCGACTTCTGCGGCTGCGGCTGGCCGCACCACATGCTGATACCGAAGGGGACTCAGCAGGGATGGAACTGTGT(SEQ ID NO:58)

ID 45.1801-1900小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds CTCTTCTGCATGATTACCAACTGGAATGAAGATCGGGTGGAGCAAGACACAGTAGGAACCTGCAACGACGCAGCCTCCTACTGCGGTATCCGGGACCGCC(SEQ ID NO:59)

ID 46.1901-2000小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GCTACCCGGACCGCAAGCCTATGGGATTCCCCTTCGATAGACCAGCGCCATCTACCGGCAGTTTGGGAGACTTCTTGACCCCCAACATGACTGTGCAGAA(SEQ ID NO:60)

ID 46-1.101-200小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TTACAGTGTTCGTGGTATTTTAAGCCCAAACGCTAATCCAAGATGGCGGACAAAAACAACCTGCTGCTGTTCTTCGACCGCCCCACGGAGCCCTGCTTCA(SEQ ID NO:61)

ID 46-2.小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds TCAGGTTTACTGATGCGGTCAGGCAGCGTCAGCAGCGGTAGAGTGTGGGAGGGAGACATGGTTCATACGTTACGAGAGTTCTAGCTAAACTTAAACACACAATGAAAGCTGACTGTAACTTTTGTAGATTTTGCCTTCAAAATGACAATTACTTAGGCACTAATTAGGTTCTAATTTTGTATAATTCATTTTTAGCGACA(SEQ ID NO:62)

ID 46-3.小菜蛾多酚氧化酶1序列mRNA，完整cds TTACAGTGTTCGTGGTATTTTAAGCCCAAACGCTAATCCAAGATGGCGGACAAAAACAACCTGCTGCTGTTCTTCGACCGCCCCACGGAGCCCTGCTTCATCAGGTTTACTGATGCGGTCAGGCAGCGTCAGCAGCGGTAGAGTGTGGGAGGGAGACATGGTTCATACGTTACGAGAGTTCTAGCTAAACTTAAACACACAATGAAAGCTGACTGTAACTTTTGTAGATTTTGCCTTCAAAATGACAATTACTTAGGCACTAATTAGGTTCTAATTTTGTATAATTCATTTTTAGCGACA(SEQ ID NO:63)

ID 47.151-250小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CGACCCACGGCTCCAAGTCCGTGCTGACCCCCAACCTCGACGTGCTGACCCGCTCAGGAGTGTCCCTCCACCGCTACTACACCCACGCTCTCTGCTCGCC(SEQ ID NO:64)

ID 48.251-350小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CGCCCGTACCGCTGTGCTCACCGGCAAATACGCCCACACCGTCGGTATGCAGGGTATGCCTCTGTCCAACGCTGAGGAGCGTGGTATCCCCCTAGAGGAG(SEQ ID NO:65)

ID 49.351-450小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CGCCTGATCTCTCAGTACCTACAGGACGCTGGTTACAGGACCCAGATGGTCGGAAAGTGGCACGTCGGTCACGCCTTCTTCGAGCAGCTGCCCACTTACA(SEQ ID NO:66)

ID 50.451-550小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GAGGATTCGAGAACCACTTCGGTGTCCGCGGTGGATTCATCGACTACTACGAATACAACGCTCAGGAGCAGCTTGACGGCAGGCCAGTCACTGGACTGTG(SEQ ID NO:67)

ID 51.551-650小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA TCTGTTCGACGACCTGCAGCCCGACTGGACCACCGAGGGATACATCACCGACGTCTACACCGAGAAGTCCACCACCATCATTGAGAACCACAACGTCTCC(SEQ ID NO:68)

ID 52.651-750小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GAGCCCCTGTACCTGCTGCTGACCCACCACGCTCCCCACAACGGCAACGAAGACGCTTCCCTGCAGGCCCCTCCTGAAGAGGTCCGCGCCCAGAGGCACG(SEQ ID NO:69)

ID 53.751-850小菜蛾谷胱甘肽合成酶(GSS)，mRNA TCGAGCTCCACCCCAGACGTATCTTCGCCGCTATGGTTAAGAAACTGGACGACAGTATCGGAGAAATCGTCGCTACCCTCGAGAAGAAGGGCATGCTCGA(SEQ ID NO:70)

ID 54.851-950小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GAACACCATCATCACCTTCTCCACTGACAACGGTGCCCCCACCGTCGGTCTTGGCGCCAACTCTGGTTCCAACTACCCCCTGAGAGGAGTCAAGAAGTCC(SEQ ID NO:71)

ID 54.951-1050小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CCCTGGGAGGGAGGTATCCGTGGTAACGCCATGATCTGGGCCGGTCCCGAGGTCGCCCCCGGAAACGCGTGGCGTGGAAAGGTTTACGACGGCAACATGC(SEQ ID NO:72)

ID 57.1051-1150小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA ACGCCGCTGACTGGGTCCCCACTCTGCTTGAGGCCATCGGTGAGAAGATCCCCGCCGGTCTGGACGGTATCCCCATGTGGAGCCACATCATCGAGAACAA(SEQ ID NO:73)

ID 58.1151-1250小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GCCTTCTCCCCGTACCGAGATCTTCGAGATCGACGACTACTTCAACCACTCCTCTGTCACCCTCGGCCGCCACAAGCTCGTCAAGGGAACCATCGACGAG(SEQ ID NO:74)

ID 59.1251-1350小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA TCTCTCAGCAAGCACTACGGTGAAGACCTCCGTGGCATCATCGGAACTCCCCCAGACTACAAGCAGAAGCTGCGCGACAGCAAGGCATGGGAGTCTCTGG(SEQ ID NO:75)

ID 60.1351-1450小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA AGACCATCGGCATCCCTCTGGACGCTGACGTCATGGCTGACCGCGATGAGGCTATCGTCACTTGCGGAAATGTCGTCCCCAAGCCTTGCAGTCCTTCTGC(SEQ ID NO:76)

ID 61.1451-1550小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CGAGTCTTGGTGCCTGTACGACATCATCGAGGACCCTTGTGAGCTTCGTGACCTGTCTGAGGAGCTTCCTCAGCTGGCTCAGATCCTTCTGTACCGTCTG(SEQ ID NO:77)

ID 62.1551-1650小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GAGCAGGAAGAGGCCAAGATCATCCCCAGGGAGGGCCAGTACGTCGCTGACCCCAAGTCTGCCCCCAAGTACTTCAACTACACCTGGGACGCGTACCTGT(SEQ ID NO:78)

ID 63.1651-1750小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA CCGTCGAACCCTACTCCGACTCCGAATAGACGAAGCTCAGCTCAAGCGGCGCAGTTCGCCGTGAAAGTTGTAAATGTTGATCCTGGCCTTAATTTCAGTA(SEQ ID NO:79)

ID 63-2.小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA GAGGATTCGAGAACCACTTCGGTGTCCGCGGTGGATTCATCGACTACTACGAATACAACGCTCAGGAGCAGCTTGACGGCAGGCCAGTCACTGGACTGTGTCGAGCTCCACCCCAGACGTATCTTCGCCGCTATGGTTAAGAAACTGGACGACAGTATCGGAGAAATCGTCGCTACCCTCGAGAAGAAGGGCATGCTCGACCGTCGAACCCTACTCCGACTCCGAATAGACGAAGCTCAGCTCAAGCGGCGCAGTTCGCCGTGAAAGTTGTAAATGTTGATCCTGGCCTTAATTTCAGTA(SEQ ID NO:80)

ID 64.AY904342.1:160-460小菜蛾性信息素生物合成活化神经肽(PBAN)mRNA，完整cds ATCCAGCGGGACGCCCGCGACCGCGCCTCAATGTGGTTCGGGCCGCGCCTCGGGAAGCGAGCCATGCACCTCGCGCCCGACGGTGACGGACAAGCAGTATACAGGATGCTCGAAGCTGCAGACGCGCTCAAGTACTACTACGACCAGCTCCAGTATTATGGGGCTCAGGCAGACGATCCTGAGACTAAAGTGACAAAGAAGGTGATCTTCACCCCCAAGTTGGGCCGCAACGCTGATGAAGACCAGCAGCAGTCGGTGGACTTCACGCCGAGACTAGGGCGCCGCCGGCTCAAGGACTCGG(SEQ ID NO:81)

ID 65.151-250PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA ACAACCATGAGTTTTCTGGGGAAAATATTCGGTGGTAAGAAGGAGGAGAAAGGTCCATCAACACACGAAGCTATTCAAAAATTACGCGAGACCGAAGAAT(SEQ ID NO:82)

ID 66.251-350PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA TGCTCATCAAAAAGCAGGACTTCCTGGAGAAGAAAATACAATTAGAAGTAGACACAGCCAGGAAACATGGCACTAAGAACAAAAGAGCGGCCATCGCTGC(SEQ ID NO:83)

ID 67.351-450PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA ACTTAAACGCAAGAAGCGTTACGAGAAGCAGCTCACACAGATCGACGGCACGCTCAGCCAGATAGAGATGCAGAGAGAAGCATTGGAGGGAGCCAACACT(SEQ ID NO:84)

ID 68.451-550PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA AACACTCAAGTACTGAACACGATGCGAGAGGCCGCCGCGGCTATGAAGCTCGCTCACAAGGATATTGACGTAGACAAAGTGCACGATATCATGGACGACA(SEQ ID NO:85)

ID 69.551-650PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA TCGCTGAACAACATGATGTGGCTCGCGAGATCACGGATGCAATCAGCAACAATGTGGCCTTCCCGAGTGACATTGATGATGAGGAGCTGGAGAGAGAGTT(SEQ ID NO:86)

ID 70.651-751PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA GGATGAACTGGAACAGGAGGACCTGGACAAGGAGATGCTGGGCATCAACGTGCCCACGGACCAGCTGCCCGACGTGCCGTCCGCCGAGCCCGCCGCGCCGC(SEQ ID NO:87)

ID 71.751-850PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA CGCCCCGCCAAGGCCAAGCCTGCTAGCGAAGACGACGATGATCTGGCTAAACTGCAATCGTGGGCGACATAAATGTAAGTGTTGGAAGCGAAACCGAATA(SEQ ID NO:88)

ID 72.851-950PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA CATATGTATAGTCTCCGTTACACATCCAACTACTTAGCTTATTCTAAGGCTGCGTCCCTGTAGGCAAACAGTATTCTCGTTACTAGTCTATGGTAATTTG(SEQ ID NO:89)

ID 73.951-1050PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA AGTAGAGTGAAAGAACAACTAGCTAATAAAAATAAGGAAGGCCCAAGACAGAGTGTTGTGGCGCTCCTTGGGATTGGTCTATGTCCAACATTGGACGATA(SEQ ID NO:90)

ID 74.1051-1150PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA ACAGCTTTATGACTTTAATTTATGAGGTACTGGCTATGGCAGATCTATTTACGGGCGCATCGCTTTGCGCTTTTAGGAGTTTCCCTCGGGAATTCCGGGA(SEQ ID NO:91)

ID 75.201-350PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA AGGTCCATCAACACACGAAGCTATTCAAAAATTACGCGAGACCGAAGAATTGCTCATCAAAAAGCAGGACTTCCTGGAGAAGAAAATACAATTAGAAGTAGACACAGCCAGGAAACATGGCACTAAGAACAAAAGAGCGGCCATCGCTGC(SEQID NO:92)

ID 76.826-975PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA TAAGTGTTGGAAGCGAAACCGAATACATATGTATAGTCTCCGTTACACATCCAACTACTTAGCTTATTCTAAGGCTGCGTCCCTGTAGGCAAACAGTATTCTCGTTACTA GTCTATGGTAATTTGAGTAGAGTGAAAGAACAACTAGCTA(SEQID NO:93)

ID 77.826-975PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，mRNA TAAGTGTTGGAAGCGAAACCGAATACATATGTATAGTCTCCGTTACACATCCAACTACTTAGCTTATTCTAAGGCTGCGTCCCTGTAGGCAAACAGTATTCTCGTTACTAGTCTATGGTAATTTGAGTAGAGTGAAAGAACAACTAGCTA(SEQID NO:94)

ID 78.201-350,826-975PREDICTED：小菜蛾带电多泡体蛋白4b(LOC105396929)，目的序列mRNA AGGTCCATCAACACACGAAGCTATTCAAAAATTACGCGAGACCGAAGAATTGCTCATCAAAAAGCAGGACTTCCTGGAGAAGAAAATACAATTAGAAGTAGACACAGCCAGGAAACATGGCACTAAGAACAAAAGAGCGGCCATCGCTGCTAAGTGTTGGAAGCGAAACCGAATACATATGTATAGTCTCCGTTACACATCCAACTACTTAGCTTATTCTAAGGCTGCGTCCCTGTAGGCAAACAGTATTCTCGTTACTAGTCTATGGTAATTTGAGTAGAGTGAAAGAACAACTAGCTA(SEQ ID NO:95)

ID 79.XM_038113977.1|:101-200PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GTCTGTCTTTTCCATCTTTCTCGTCCAAAAAACAAGGTAATTGTTCAAGATGAGTCACGGGTTGAAGAGGATTGCCGATGAGGACAATGAAACCCAGTTC(SEQ ID NO:96)

ID 80.201-300PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GGTTATGTCTTCGCTGTGTCCGGTCCCGTGGTCACAGCGGAGAAGATGTCCGGCTCGGCCATGTACGAGCTGGTGCGCGTCGGCTACAACGAGCTGGTCG(SEQ ID NO:97)

ID 81.XM_038113977.1|:301-400PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GAGAGATCATCCGTCTGGAGGGGGACATGGCCACCATCCAGGTGTACGAAGAGACCTCAGGCGTAACCGTCGGCGACCCCGTGCTCCGCACCGGCAAGCC(SEQ ID NO:98)

ID 82.XM_038113977.1|:401-500PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA TCTCTCCGTAGAACTGGGACCCGGCATCCTCGGCTCCATCTTCGACGGCATCCAGCGCCGCTGAAGGACATCAACGAGCTCACGCAGAGCATCTACATC(SEQ ID NO:99)

ID 83.XM_038113977.1|:501-600PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA CCCAAGGGGGTGAACGTGCCCGCGCTGGCCCGCGACACCGAGTGGGAGTTCCACCGCAGTACATCAAGGTCGGCACCCACATCACCGGCGGGGACTTAT(SEQ ID NO:100)

ID 84.XM_038113977.1|:601-700PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA ACGGGATCGTGCACGAAAACACGCTGGTGAAGCACCGCATGCTGGTGCCGCCCAAGGCCAAGGGCACCGTCACCTACATCGCGCCCGAGGGGAACTACAA(SEQ ID NO:101)

ID 85.XM_038113977.1|:1501-1600PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA CTTACAGTAAGTACATGCGCGCCCTGGACGACTTCTACGACAAGAACTACCCCGAGTTCGTGCCGCTCAGGACCAAGGTCAAGGAGATCCTGCAAGAGGA(SEQ ID NO:102)

ID 86.XM_038113977.1|:1601-1700PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GGAGGACCTGTCTGAAATCGTGCAGCTGGTCGGAAAGGCGTCCCTCGCCGAGACCGACAAGATCACCCTCGAGGTGGCCAAGCTGCTGAAGGACGACTTC(SEQ ID NO:103)

ID 87.XM_038113977.1|:1701-1800PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA TTGCAGCAGAACAGCTACTCGAACTACGACCGTTTCTGCCCGTTCTACAAGACGACCGGCATGCTGAAGAACATCATCACGTTCTACGACATGTCGCGAC(SEQ ID NO:104)

ID 88.XM_038113977.1|:1801-1900PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA ACGCTGTCGAGTCCACCGCGCAGTCCGACAACAAGGTGACGTGGAACACGATCCGTGACGCCATGGGCCCCGTGCTCTACCAGCTGTCCAGCATGAAGTT(SEQ ID NO:105)

ID 89.XM_038113977.1|:1901-2000PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA CAAGGACCCCGTGAAAGATGGAGAAGCCAAGATCAAGGCTGACTTCGACCAGATCGTCGAGGACATGGCCGCTGCCTTCCGTAACCTAGAGGACTAAGTT(SEQ ID NO:106)

ID 90.XM_038113977.1|:2001-2100PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA ATCATGCGCAATTATACTCTTTATTCTTGAAGAGGATGTTTGGGTCGGACCTCTTGCCGCGCGGTGAAAAAAATAAAACTGTCAACTTAACCATAGAGCT(SEQ ID NO:107)

ID 91.XM_038113977.1|:2101-2200PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GACAGTGTCTATGGTTAGAAATAGCGCGAAAAGATACTGGCTACTGCTAAGATAGGTTGATGTTTGAGGTCCGATCCAACATTGTTTTGTTAATAAATAT(SEQ ID NO:108)

ID 92.XM_038113977.1|:2301-2400PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA AAAGTCGTGTTTCAAATCTTGTTGAATTTCATCTTAGACGTTGAATATAAGCCGTTGACGGTGTCAATGTATTTTTTATGTAACACGCGGTCACTAGATA(SEQ ID NO:109)

ID 93.XM_038113977.1|:2401-2500PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA CTTTCTCGACAATATGATATATACATTTTGTAAATAAAGCCCCCTTTCCATTCAAGATTGTGTAATGTTATATAGAGGTACATGGTGCATCGGTCTAGTG(SEQ ID NO:110)

ID 94.XM_038113977.1|:2601-2700PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GCCCAATGATAATTGAATGATTGTTTTCGTCGGTTCATATACCCTGTTGCATTCCAGCTTATTTTTAGATAGTTAAAACAACAAATCGGTTATTTTTACT(SEQ ID NO:111)

ID 95.XM_038113977.1|:71-220PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GTGATAAGTTGTGATTCTCCGCCATTCTCGGTCTGTCTTTTCCATCTTTCTCGTCCAAAAAACAAGGTAATTGTTCAAGATGAGTCACGGGTTGAAGAGGATTGCCGATGAGGACAATGAAACCCAGTTCGGTTATGTCTTCGCTGTGTC(SEQ ID NO:112)

ID 96.XM_038113977.1|:1971-2120PREDICTED：小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，mRNA GCTGCCTTCCGTAACCTAGAGGACTAAGTTATCATGCGCAATTATACTCTTTATTCTTGAAGAGGATGTTTGGGTCGGACCTCTTGCCGCGCGGTGAAAAAAATAAAACTGTCAACTTAACCATAGAGCTGACAGTGTCTATGGTTAGAA(SEQ ID NO:113)

ID 97.300BP小菜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC105392322)，转录物变体X1，序列mRNA GTGATAAGTTGTGATTCTCCGCCATTCTCGGTCTGTCTTTTCCATCTTTCTCGTCCAAAAAACAAGGTAATTGTTCAAGATGAGTCACGGGTTGAAGAGGATTGCCGATGAGGACAATGAAACCCAGTTCGGTTATGTCTTCGCTGTGTCGCTGCCTTCCGTAACCTAGAGGACTAAGTTATCATGCGCAATTATACTCTTTATTCTTGAAGAGGATGTTTGGGTCGGACCTCTTGCCGCGCGGTGAAAAAAATAAAACTGTCAACTTAACCATAGAGCTGACAGTGTCTATGGTTAGAA(SEQ ID NO:114)

ID 98.AY971374.1|:676-975小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds ACCAATTGCAGGCGTGAAGAATGTCCTCAGATACGGCTACCCTTCCTTCTTCTACAGCGTGGGATTGGAGCTCTATTCCAGCAAAATTTACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAAACAGTCGTAACGGCGCCAAATCTTCGAGGAATGACATGGTGGATCTTATTTCCGATTGGAAGAAGAACAAATACATAACGGGAGACAGTATTGATAATGGCATAGACGGTGGAAACAAGAAGGTGCGTATCGAAGTCGACGACGAACTTTTGGTGAGCCAATGTGTGCTGTTCTT(SEQID NO:115)

ID 99.101-200小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds AACTACTGGAAGAAACAGAACGTCAAGTACTTGACGCCGATCCCTTTCCTGGGGAACGTGGCTGATGTGATCTTCCAGAGGGACACCTTCGGAGCCGTGA(SEQ ID NO:116)

ID 100.201-300小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CGCAACGGATCTGCCAGCAGTTCCCCGATGAAGCTGTGGTCGGCATGTTCTACTGCAGCAACCCTGCAGCCCTCGTACAGTGCCCTGACATGCTCAAGAC(SEQ ID NO:117)

ID 101.301-400小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds AGTCATGGTCAAGGACTACGCCTACTGCTCCAGTAAGGAGGTCTCCGTCCACAGCCACAAGGAACCCATGACCAAGAACATGTTCTTCACCTTCGGAGAC(SEQ ID NO:118)

ID 102.AY971374.1|:401-500小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsAAGTGGAAGCTCATCCGGCAGAACCTCACGCCGGTCTACACGTCCGCCAAAATGAAGAACATGTTTCCACTGGTACAGGATTGCTGCAGAATATTCCAGA(SEQ ID NO:119)

ID 103.AY971374.1|:501-600小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsAGGTTCTCGATGATGAGATAGGAAAGGGCCGGGTGGTGGAAGTGAAGTCTTTGATAGCTCGGTATACTATGGACTGTATAACTTCGTGTGCATTCGGCGT(SEQ ID NO:120)

ID 104.AY971374.1|:601-700小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsCGACTCTGGCACGATGTCGAAGGGCGAGGAAGGGAACCCTTTCACAGAAACAGGTCACCTTTTATTTGATGAAAGACCAATTGCAGGCGTGAAGAATGTC(SEQ ID NO:121)

ID 105.701-800小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CTCAGATACGGCTACCCTTCCTTCTTCTACAGCGTGGGATTGGAGCTCTATTCCAGCAAAATTTACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAA(SEQ ID NO:122)

ID 106.801-900小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds

ACAGTCGTAACGGCGCCAAATCTTCGAGGAATGACATGGTGGATCTTATTTCCGATTGGAAGAAGAACAAATACATAACGGGAGACAGTATTGATAATGG(SEQ ID NO:123)

ID 107.1201-1300小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CAAAGACTACACGCTACCGAATGGTGTGCATCTAAAGAAGGGGATGATGATACATATTCCTGTTTATCATTTGCATCACAATCCGAAGTATTTCCCGGAG(SEQ ID NO:124)

ID 108.1301-1400小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CCCGAGGTGTTTCGTCCGGAGCGGTTTTCTGAAGAAGGACGGAAAAGTATTGTCCCGTATACCTACTTGCCCTTTGGGGACGGGCCGAGGATGTGTATAG(SEQ ID NO:125)

ID 109.AY971374.1|:1401-1500小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsGCTACCGTTTCGCAAGGCTAGAGATCTTCTCCAGCCTAGCAGTTCTGTTGAAGAAATACCGAGTGGAGCTGGCCCCCCACATGCCGAGGAAGCTGCAGTT(SEQ ID NO:126)

ID 109-2AY971374.1|:700-849小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsCCTCAGATACGGCTACCCTTCCTTCTTCTACAGCGTGGGATTGGAGCTCTATTCCAGCAAAATTTACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAAACAGTCGTAACGGCGCCAAATCTTCGAGGAATGACATGGTGGATCTTAT(SEQ ID NO:127)

ID 109-3AY971374.1|:1151-1300小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds GAATCCCTCCGCATGTATCCTCCAGTCTCGGTGCTCATGAGAGAGATTTACAAAGACTACACGCTACCGAATGGTGTGCATCTAAAGAAGGGGATGATGATACATATTCCTGTTTATCATTTGCATCACAATCCGAAGTATTTCCCGGAG(SEQ ID NO:128)

ID 109-3.AY971374.1|:1151-1300小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)目的序列mRNA，完整cds CTCAGATACGGCTACCCTTCCTTCTTCTACAGCGTGGGATTGGAGCTCTATTCCAGCAAAATTTACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAAACAGTCGTAACGGCGCCAAATCTTCGAGGAATGACATGGTGGATCTTATTGAATCCCTCCGCATGTATCCTCCAGTCTCGGTGCTCATGAGAGAGATTTACAAAGACTACACGCTACCGAATGGTGTGCATCTAAAGAAGGGGATGATGATACATATTCCTGTTTATCATTTGCATCACAATCCGAAGTATTTCCCGGAG(SEQ ID NO:129)

ID 109.4.AY971374.1|:650-707小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsACAGGTCACCTTTTATTTGATGAAAGACCAATTGCAGGCGTGAAGAATGTCCTCAGAT(SEQ ID NO:130)

ID 109.5.AY971374.1|:765-822小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAAACAGTCGTAACGGCGCCAAATC(SEQ ID NO:131)

ID 109.6AY971374.1|:823-880小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsTTCGAGGAATGACATGGTGGATCTTATTTCCGATTGGAAGAAGAACAAATACATAACG(SEQ ID NO:132)

ID 109.7AY971374.1|:1159-1216小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CCGCATGTATCCTCCAGTCTCGGTGCTCATGAGAGAGATTTACAAAGACTACAC GCTA(SEQ ID NO:133)

ID 109.8AY971374.1|:1217-1274小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CCGAATGGTGTGCATCTAAAGAAGGGGATGATGATACATATTCCTGTTTATCATTT GC(SEQ ID NO:134)

ID 109.9AY971374.1|:881-938小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cdsGGAGACAGTATTGATAATGGCATAGACGGTGGAAACAAGAAGGTGCGTATCGA AGTCG(SEQ ID NO:135)

ID 109-10 939-996小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds ACGACGAACTTTTGGTGAGCCAATGTGTGCTGTTCTTCCAAGCTGGCTTCCAGCCAAG(SEQ ID NO:136)

ID 109-11 1101-1158小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds TGCAGACCGACTGCGTGACCGCCCTGCCTTTCCTCGCCCAGTGCATGGAGGAATCCCT(SEQ ID NO:137)

ID 109-11 1159-1216小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CCGCATGTATCCTCCAGTCTCGGTGCTCATGAGAGAGATTTACAAAGACTACACGCTA(SEQ ID NO:138)

ID 109-12 1217-1274小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds CCGAATGGTGTGCATCTAAAGAAGGGGATGATGATACATATTCCTGTTTATCATTTGC(SEQ ID NO:139)

ID 109-13 1275-1333小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds ATCACAATCCGAAGTATTTCCCGGAGCCCGAGGTGTTTCGTCCGGAGCGGTTTTCTGAA(SEQ ID NO:140)

ID 109-14 1334-1390小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，完整cds GAAGGACGGAAAAGTATTGTCCCGTATACCTACTTGCCCTTTGGGGACGGGCCGAGG(SEQ ID NO:141)

ID P1.101-250小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA CAGTTTATACTATCGAAATGATTTTAGCAATAATATTGTTATTAGTGATTATTATAATAACATTTTCGTTTCTACTGGGCTCCTACAATGAGTCTTACTGGGCAAAACGAAACGTTAAATACCATGGCGGGAAAAATGCCATAGCAACAT(SEQ ID NO:142)

ID P2.251-400小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA TCTCAGAGTTTTTGTTCACTAGCCGTGGCATTTTCGATATATTCGGTAACATTTACAAGCTGTACCCTGAAGAACCTGCAGTGGCCACGCCGTCGCTGCTTCAACCGGCTTTATTCGTCAAACATCCAGAAAACATACAACATGTGCTGA(SEQ ID NO:143)

ID P3.401-550小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA CAGACAATTTTAAAAACTTTTACCACAGAGGTGTTGAAATCGCTAAGAAAGATAAACTAGCACAAAATGT(SEQ ID NO:144)

小菜蛾，mRNA ACCTTTCCTGAACGGCAGTCGGTGGAAACTTATGAGACAAAAAATGACGCCGCTGTCACTAGTGCGAAGCTGAAGAACA(SEQ ID NO:145)

ID P4.551-700小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA TGCACTACATCATAGACAGATGTGCCCAAGACTACATCGGTTATCTGAAAGAACATGTCAACGATAAAAATGCTAATGCATTCGAAACATTATCTGTGTACAGCTGCTCATCGCTACTAGCCCCGATATTCGGAATCCACAGCGGACAGT(SEQ ID NO:146)

ID P5.701-850小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA CAACGGTAACTTCACCGCTTCTAAATATGGCGAGAAATGCCACGAAACCGACTTTGAAAGCAAATTTAAAATTCATTTTGAACTCTTTGTCGCCGAAAGTCTTCCAAATGCTGGGACTTAGTTTCTTTGGCGAATATGAGGAACAGTTCA(SEQ ID NO:147)

ID P6.851-1000小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA TCGGCGCGATCAGTCAAGTGATAAGACAACGTAAGGAAGAGAATGTGAAAAAGCACGATTTTGCTGACATTGCTGTGAGTTTGCAGAATGCTGGTACGATGAAAGACGAATCCAGCGGCTGTGAAATAGAGCCTACGGATGAAGTTCTAG(SEQ ID NO:148)

ID P7.751-1050小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA ACTTTGAAAGCAAATTTAAAATTCATTTTGAACTCTTTGTCGCCGAAAGTCTTCCAAATGCTGGGACTTAGTTTCTTTGGCGAATATGAGGAACAGTTCATCGGCGCGATCAGTCAAGTGATAAGACAACGTAAGGAAGAGAATGTGAAAAAGCACGATTTTGCTGACATTGCTGTGAGTTTGCAGAATGCTGGTACGATGAAAGACGAATCCAGCGGCTGTGAAATAGAGCCTACGGATGAAGTTCTAGCTGCACAAGCGTTCTTCTTCCTTATAGCAGGAGTAGATCCAGTAACAATG(SEQ ID NO:149)

ID P8.450-751小菜蛾细胞色素P450 6k1样(LOC105392167)，mRNA AGATAAACTAGCACAAAATGTACCTTTCCTGAACGGCAGTCGGTGGAAACTTATGAGACAAAAAATGACGCCGCTGTTCACTAGTGCGAAGCTGAAGAACATGCACTACATCATAGACAGATGTGCCCAAGACTACATCGGTTATCTGAAAGAACATGTCAACGATAAAAATGCTAATGCATTCGAAACATTATCTGTGTACAGCTGCTCATCGCTACTAGCCCCGATATTCGGAATCCACAGCGGACAGTCAACGGTAACTTCACCGCTTCTAAATATGGCGAGAAATGCCACGAAACCGA(SEQ ID NO:150)

ID 110.KC789751.1|:72-1432草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞色素P450CY321A8 mRNA，完整cds TGAGAGCTACTGGAAGAAGCGTGGCGTAAAGTTCTACAGTAAAAACAAAGTGATTGACCTTACTGGGATTATTTCATAACACAGCGTGCGTTGTTCGAAGTCTTAACAGACCTGTACAAAAAATATAGACATGAACCAGCTATTGGTATTGGTCAAGTCCTAACACCTGCGCTCTTTGTCATCGATCCGAAGAATGTTCAGCAAGTTTTATCAAGTGACTTCCAATCTTTTAACCACAGAGGCATTGAAAGTATTGAAGGGGATCAACTGACCGATAATATTCTCATGATGAATGGTCCAAGATGGAAGCTGATGCGACAGAATATGACTCCGTTGTTTACGGCAAACAAATTGAAGAACATGTATTACATCATGGACAAAAGTGCTCAAGACTTTGCGAACTATTTGAAAAACAACCCCAAGACGCGTGATGGTAACTTATTTGAAACTCTTATGATGTTCTGTAATGCTGCAGTTTGTGGAGCTATCTTCGGCATTGGGTCAGAGTCAATCTTTGATTCACCTTTCCTCAAGCTTGCCAAAAACATATCGCAATCCAATTTTAAGATGAGAATGAAATTCGTTATTTATAGTCTCAGTCCAAAGTTGTACAAACTGTTGAGATTACAAGCTTTCAACGAGATCGAAGACTTCTTCATTGGTTCAATAAGTCAAGTGATGAAATCAAGAGAACAAGAAAATGTAAAGAGACACGACTTTGCTGAAATTGCTGTGGCTATACAGAAAAATGGTATTATGAAAGACCGTACAACAGGTTGCGAGATAGAGCCTACTACCGGCATTTTGTCTGCACAGGCATTTTTCTTCTTTAGTGCTGGTGTAGAGCCTTGTGCTAATGCAATCTTTTCAACATTATTTCTTTTAAGCAGTCACCCAGAAATACTAGAAAGAGTTCACCAAGAAATTGACGAACATTTTGAAAAGCATAGCAACAACATAAATTACGATGTTATATGTGAAATGAAGTACACAGACAAGGTGCTGAGTGAAGCGATGAGAATGTTACCTCCAATTGGTCACTTGACAAGACAATGTGTTCAAAATACTGTCCTGCCTGTTGGTAATATCCCAGTAGAAAAGGGGACAAAAATGTTCACTCCAATTTATGCTATTCATCACGACCCAGAACTATATCCAGACCCAGAAGTGTTCGACCCGGAGCGATTTGCCAATGATAGAAAACCGAATGATAACATTTACATGCCATTTGGAATGGGCAACAGGGCATGCATAGGGGAGAGGTATGCCAAATTACAAGTACAAGCCGGTTTAGTTCACGTCTTGCGAAACTTCACTGTTAAACCGCAGAAACATGTAAAAGTAACATTTGCCCAGGAT(SEQ ID NO:151)

ID 111.301-400草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds TTTAACCACAGAGGCATTGAAAGTATTGAAGGGGATCAACTGACCGATAATATTCTCATGATGAATGGTCCAAGATGGAAGCTGATGCGACAGAATATGAAAGCTTTCAACGAGATCGAAGACTTCTTCATTGGTTCAATAAGTCAAGTGATGAAATCAAGAGAACAAGAAAATGTAAAGAGACACGACTTTGCTGAAATTCCAATTGGTCACTTGACAAGACAATGTGTTCAAAATACTGTCCTGCCTGTTGGTAATATCCCAGTAGAAAAGGGGACAAAAATGTTCACTCCAATTTAT(SEQ ID NO:152)

ID 112.701-800草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds AAGCTTTCAACGAGATCGAAGACTTCTTCATTGGTTCAATAAGTCAAGTGATGAAATCAAGAGAACAAGAAAATGTAAAGAGACACGACTTTGCTGAAAT(SEQ ID NO:153)

ID 113.1101-1200草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds TCCAATTGGTCACTTGACAAGACAATGTGTTCAAAATACTGTCCTGCCTGTTGGTAATATCCCAGTAGAAAAGGGGACAAAAATGTTCACTCCAATTTAT(SEQ ID NO:154)

ID 114.MN480661.1|:55-1500草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞色素P450CYP6AE44 mRNA，完整cds CTCGTATCAAAACGAAAATTCAGATACTGGGAACAGAAGAAAGTGCCACACCTACCACCAAAACCAATTCTGGGAAATTTCTCCGAATACATTCTCCAGCAGAAATTCTATGGACGTGTTGAACAGGAGATCTGCAACAAGTTTCCTGAAGAACCATACGTTGGCTCTTACTTGGGCACGGAACCGACCCTCATCATACAAGATCCCGAATACATCAAGACCGTCATGACCAAGGACTACTATTTCTTCAGTGGCCGTGAAGTCTCTGCATACTGTGAAAAGGAACCGTTAACTCAGAACCTATTCTTCACTTATGGCGATAAGTGGAAGGTACTGCGTCAGAACCTTACGCCTTTGTTCTCATCCGCAAAGATGAAGAACATGTTCCATTTGATCGAGAAATGTGCCCGTATCTTCGAGAACATGGTCGACCAGGAAGTACAGAAAAGTAAAGACATTGAAGTGCGAGCCCTGACGGGAAAATTCACCATGGATGCCATTGGAAATTTGCTTTTGGAGTTGAGACCCAGACGATGGTAAAGACTGACAATAATCCATTCACAAAGTTGGCGATGTTATCTTCGATACTGCCAGAATGAGAGCATTAAAGGGTGTGCTAAGAAGTATTTGGCCAGCCATGTTTTATAGTTTTGGAGGTAAAGCAGTCCCTGCTGATGTGATAGCTTTTTCTTCAATTTGATGACGAGTATCTTCAAAGGACGCAACTATAATCTGATCAAGGAACGACTTTGTGGACCTCCTATTGAAGTTCCATAACAACAAAACAGTGACTGGGGATAGTATGAGAAACTTGAAGGGTGATTCAGGAAAGAAAGTCAGTTTAGAAGTGGACGATGAGTTTTTGATTGCACAATGTTTCCTGTTCTTTGCTGCTGGGTATGAGACGTCGGCGACTACGTTGAGTTACACTTTATATGAGTTGGCAAAGAATCCTGAAGCTCAAGAGTTAGCAATTCAAGACGTGGACAACTACTTGCGTCGCAATGACAATGTGTTGAAGTACGAGTGTGTGACCGAGTTGCCTTATGTGGAAGCTTGTGTTGATGAGGCTCTTCGTCTATACCCAGTGCTAGGAGTAATTACTCGGGAGGTTATTGAGGATTATACATTCCCGACGGGATTGAAATTGGAGAAAGGACTTCGCGTGCATTTACCGGTGTACCACATGCACACAACCCTAATTACTTCCCGGAACCAGAGCAATATCGTCCGGAGCGGTTCTTGGGCGACGAGAAGAAAAATATTAAGCCGTATACATACTTCCCATTTGGCGAAGGACCTCGACTATGTATCGGAATGAGGTTCGCAAAGATGCAGATTACGGCTGGAATTATAACATTACTGAAGAAATATCGCGTAGAACTTGCGCCGGGTATGAGCGAGACAATACAGTTCGAACCTCGATCTGTAATCACCGCC(SEQ ID NO:155)

ID 115.MN480661.1|:701-1001草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞色素P450CYP6AE44 mRNA，完整cds ATAGTTTTGGAGGTAAAGCAGTCCCTGCTGATGTTGATAGCTTTTTCTTCAATTTGATGACGAGTATCTTCAAAGGACGCAACTATAATCTGACATCAAGGAACGACTTTGTGGACCTCCTATTGAAGTTCCATAACAACAAAACAGTGACTGGGGATAGTATGAGAAATTGAAGGGTGATTCAGGAAAGAAAGTCAGTTTAGAAGTGGACGATGAGTTTTTGATTGCACAATGTTTCCTGTTCTTTGCTGCTGGGTATGAGACGTCGGCGACTACGTTGAGTTACACTTTATATGAGTT(SEQ ID NO:156)

ID 116.草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA NCBI参考序列：XM_035591116.1 TATAAATGAT TCATAAGTGT TCGGACCGCG TATTTGGCCA GTCGCAACCATGGCGGCCTT ATATTTCCTC GCCGCAGTGC TAGTGTTAGT GTACGCGTTA TATTATTACT TCACAAGGACATTCAACTAC TGGAAGAGTA GAAATGTGCG AGGACCAAAA CCAGTTGCAT TATTTGGAAA CATTAAGGACGCAGCTCTTC GCAAAGAAAA TTATGGCGTC GTAATGCAAA ATATATACAA TGCATATCCA AATGAAAAAGTGGTCGGCAT ATTCAGGATG ACTTCGCCTT GTCTCCTTAT TCGAGACCTG GACATTATCA AACATATCATGATCAAAGAC TTCGAAGCCT TCAGTGATCG TGGAGTGGAA TTCAGCAAAG AAGGATTGGG ACAAAACTTATTCCACGCGG ACGGAGATAC ATGGACTGCC TTGAGGAACA GATTCACTCC CATTTTCACA ACAGGTAAATTGAAGAACAT GTTTTACCTA ATAAATGAGG GAGGCGATTC ATTTGTAGAG TACATCCGTA CAGAATGCCAAAAGAAGGAA GAATTTGATA TTCAGCCTCT CCTCCAGACG TATACTTTGT CTACGATCTC CGCCTGTGCATTCGGAATTA GCTATGACAG TCTTGATGTT AAAATGGATA CTCTGAAACT TGTGGATAAA ATATTTTCTTCACCAAGTTT TGCAGTTGAA TTGGATATGA TGTATCCCGG TCTCCTGAAA TCTCTAAACC TTTCTTTATTCCCTACCGCC ATAAAAAAGT TCTTTGATAA TCTAGTGAAT AATGTTATAG AGCAAAGAAA TGGTAAACCATCGGGTCGAA ATGATTTCAT GGATCTTATT TTGGCGCTCC GTGAAATGGG AGAGGTCACA AACTCAAAATATGACTCTGC AAAGCCAGTT GAAATAACAC CTGGTGTGAT AGCAGCGCAA GCTTTTGTGT TTTATGCGGCTGGTTATGAA ACCAGTGCTA CCACTATGAC GTACATGCTT TACCAACTAG CAATGAATCC AGACATCCAAAAGAAGTTGA CTGAAGAAAT TGACGAATCT CTCAAAGCAA ATAATGGACA AGTTACATAC GAGAGCATTAAGGAAATGAA GTATTTGAAC AAAGTGTTTG ATGAAACTCT ACGAATGTAC TCGATTGTAG AACCTCTGCAGAGGAAAGCT GTAAGAGATT ACAAAGTGCC CGGTACTGAC TTGACGATAG AAAAGAACAC AATTGTGCTGGTATCTCCGA GAGGTATCCA CTACGACGAG AAATATTACG ACAACCCTGA ACAGTTCAAC CCTGACAGATTTGACGCGGA GGAGGTGGGC AAGCGACATC CGTGCGCTTA CATGCCGTTT GGAATTGGAC AGAGAAACTGCATCGGAATG AGGTTCGGCA GACTTCAATC CCAACTGTGC ATAACCAAGT TGCTGTCTAA GTTCCAAGTGGAGCCATCGA GGAATACTGC AAGGAAGCTG GAAGTGGAAC CTTGTCGCTT TATCATCGGA CCCAAAGGAGGGATACGTCT GAATATTGTT CCAAGAAAGC TGAAGGCTTA ACACATTAAA CGCCATGGGG GGCAAATGTGACCGGCGTTA GCAGAGGATT TGCCTTCAAC AGATTTTTGT TGGCAGTCAA TGTATAACGA CTTTTAAAACTGTTTATAAA TCCATCCATC TACCAGGTAA ACTTAGGTAT ACCAATGTGT TATTTTATTT TTTTCATTGAAAATTCGACT TTGTATGTAA ATAATACGGT TGAAATCTAA TACAGAAAAC TATCAGATTG CAGTAGCTTAACCTGCTGCT CATTGTATAT AGAATATCGT TTTAAATTTG ATTCAAAATA ATAATTGTAT GTGGCCAGTTTCACCAGTCA TGTTATTATG GAGTGCGCGG ACTTAGTGGG CTACTCCTTA GGTGGCGAAC AGGGGTGAGGGGGGGGGAGG CAATTCGCCT ACGCATATGA GAATAGACAA TGATGATTGA TGACCAATCT TGAGATATCGGGAATATGAA TGGTTCAATT ATTGAAACAA AAGACAATTG AACGTATAGA ACTTTTACGC ACGCAACCAACTAGTTCCGC GCGCACTATT ATTGAGATAT TATAAGACTC ATAAAGGGAA GAAACCATCA ACAAACATCGATTACAAATC CATTCATTTG CAAATTGTAT ATAATTACTC TTAGCACATT AATCATGCAT TTAGTTTATAAGTAAGCTAT ATTTAATTAA ATTATTTAAA AACTA(SEQ ID NO:157)

ID 117.101-300PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA TATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTCGCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTAT(SEQ ID NO:158)

ID 118.1101-1200PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA AGGAAATGAAGTATTTGAACAAAGTGTTTGATGAAACTCTACGAATGTACTCGATTGTAGAACCTCTGCAGAGGAAAGCTGTAAGAGATTACAAAGTGCC(SEQ ID NO:159)

ID 119.草地贪夜蛾细胞色素P450 CYP9A58 mRNA，完整cds GenBank：MN480666.1|:101-250,1101-1250 TCAAGCCTATCCCATTGCTGGGCAATATGGGCACTGTATTGCTTCGAAGACAACACTTAGCATATAGTCTTATTGATTTGTATAATGCCTTCCCTGAAGAAAAATTTGTAGGAAGGTTTGAGTTCATGAACGAGGCAGTGCTGATCAGAGCAAGTTCGACTTCAACTCGATACAGAGCATGAAGTATATGGATAATGTGGTGTCAGATTATTACGACGATGGCCTGTAGCTGTAGCTACTGACAGAATTTGTGAAAAGGACTACAACATGGGTAAACCAAATGAAAGGCTGAGAAGGA(SEQ ID NO:160)

ID 120.101-200PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA TATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTC(SEQ ID NO:161)

ID 121.201-300PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA GCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTAT(SEQ ID NO:162)

ID 122.101-300PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA TATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTCGCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTAT(SEQ ID NO:163)

ID 123.301-400PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA TCGAGACCTGGACATTATCAAACATATCATGATCAAAGACTTCGAAGCCTTCAGTGATCGTGGAGTGGAATTCAGCAAAGAAGGATTGGGACAAAACTTA(SEQ ID NO:164)

ID 125.1201-1300PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA CGGTACTGACTTGACGATAGAAAAGAACACAATTGTGCTGGTATCTCCGAGAGGTATCCACTACGACGAGAAATATTACGACAACCCTGAACAGTTCAA(SEQ ID NO:165)

ID 126.1301-1400PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA CCTGACAGATTTGACGCGGAGGAGGTGGGCAAGCGACATCCGTGCGCTTACATGCCGTTTGGAATTGGACAGAGAAACTGCATCGGAATGAGGTTCGGCA(SEQ ID NO:166)

ID 127.101-300PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNATATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTCGCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTAT(SEQ ID NO:167)

ID 129.PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA TATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTCGCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTATAGGAAATGAAGTATTTGAACAAAGTGTTTGATGAAACTCTACGAATGTACTCGATTGTAGAACCTCTGCAGAGGAAAGCTGTAAGAGATTACAAAGTGCC(SEQ IDNO:168)

ID 130.201-300草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds ACATGAACCAGCTATTGGTATTGGTCAAGTCCTAACACCTGCGCTCTTTGTCATCGATCCGAAGAATGTTCAGCAAGTTTTATCAAGTGACTTCCAATCT(SEQ ID NO:169)

ID 133.801-900草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds TGCTGTGGCTATACAGAAAAATGGTATTATGAAAGACCGTACAACAGGTTGCGAGATAGAGCCTACTACCGGCATTTTGTCTGCACAGGCATTTTTCTTC(SEQ ID NO:170)

ID 135.1201-1300草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds GCTATTCATCACGACCCAGAACTATATCCAGACCCAGAAGTGTTCGACCCGGAGCGATTTGCCAATGATAGAAAACCGAATGATAACATTTACATGCCAT(SEQ ID NO:171)

ID.1749-2049小菜蛾菌株DBM1Ac-S ABC转运蛋白亚家族H成员1(ABCH1)mRNA，完整cds序列ID：KP260785.1 GACTACAACCCGAAGGTGGGCGACATCCCGATCGACTTCAAGGAGCCCATCTACGGCGACACCAACCCCTCCTTCACTGACTTCGTCGCTCCCGGTGTTATTCTCACTATCGTGTTCTTCCTGGCGGTGGCGCTGACGTCGTCGGCGCTGATCGTGGAGCGCATGGAGGGGCTGCTGGACCGCTCGTGGGTGGCCGGCGTGTCCCCCGGGGAGATCCTGTTCTCGCACGTCGTCACGCAGTTCGTCGTCATGTGCGGCCAGACCGCGCTCGTGCTCGTGTTCATGATACTGGTGTTCGGCG(SEQ ID NO:172)

ID 137.MN480666.1|:101-250草地贪夜蛾细胞色素P450 CYP9A58 mRNA，完整cdsTCAAGCCTATCCCATTGCTGGGCAATATGGGCACTGTATTGCTTCGAAGACAACACTTAGCATATAGTCTTATTGATTTGTATAATGCCTTCCCTGAAGAAAAATTTGTAGGAGGTTTGAGTTCATGAACGAGGCAGTGCTGATCAGAG(SEQID NO:173)

ID 138.1101-1250草地贪夜蛾细胞色素P450 CYP9A58 mRNA，完整cds CAAGTTCGACTTCAACTCGATACAGAGCATGAAGTATATGGATAATGTGGTGTCAGAATTATTACGACGATGGCCTGTAGCTGTAGCTACTGACAGAATTTGTGAAAAGGACTCAACATGGGTAAACCAAATGCAAAGGCTGAGAAGGA(SEQ ID NO:174)

ID 139.151-300PREDICTED：草地贪夜蛾ABC转运蛋白家族成员20样(LOC118270582)，转录物变体X1，mRNA GCGCCAAAATTTTGTGACAGTGACTTTTGTGATTATCTGTGACACTTTATTTTTTCTATTTTTACTTCCCTTCGGATTGTTTGAGAGATGGCGCATCCTACAGAGTTGCGCTCCGAGAGAGTGAAACAAATGTTTAGTTGGACTACGGG(SEQ ID NO:175)

ID 140.XM_035586211.1|:2801-3000PREDICTED：草地贪夜蛾ABC转运蛋白家族成员20样(LOC118270582)，转录物变体X1，mRNA TTATTTTGACAATTGTTTATATTTGATGCGTAATCTGAACAAAAACATAGTGGATTACATTTGTAAATGTTTTGGTACGATTGTAAGCTCACGGTAGGAAGGAATTAGAAGTTCAGGACCACGCCTTATAGTCAGTAAATACTTCTTCATTTAAACGGTGAAGGGCGACGAGTCAGTTTGTTGTACACTCTCGAAACTAT(SEQ ID NO:176)

ID 141.201-300PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA ATTCTTCAAACTCTTGGAAGCGGCAGACGCATTGAAATATTACTACGATCGCTTACCTTACGAGATGCAAGCGGACGAACCTGAAACCAGAGTTACCAAA(SEQ ID NO:177)

ID 142.251-350PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA GCTTACCTTACGAGATGCAAGCGGACGAACCTGAAACCAGAGTTACCAAAAAAGTGATATTTACTCCTAAATTGGGAAGGAGTTTGGCTTATGATGATAA(SEQ ID NO:178)

ID 143.351-450PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA AGTCTTTGAGAATGTTGAGTTCACACCACGGTTGGGAAGACGGTTGGCTGATGATATGCCCGCGACGCCGGCTGATCAGGAACTGTATAGACCAGACCCG(SEQ ID NO:179)

ID 144.451-550PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA GATCAGATCGACAGCAGGACGAAGTACTTCTCGCCTAGGCTCGGCAGGACCATGATTTTTCACCACGACTCGGCAGGGAATTGTCCTATGAAATGTTAC(SEQ ID NO:180)

ID 145.551-650PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA CAAGCAAACTAAGAATGGTGAGGAGTGCCAACAGAACGCAATCGACATAAACTTGACATGAGCCCGCCATCAAACATAACCTCAAAATGAGACAAACTAA(SEQ ID NO:181)

ID 146.551-700PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA CAAGCAAACTAAGAATGGTGAGGAGTGCCAACAGAACGCAATCGACATAAACTTGACATGAGCCCGCCATCAAACATAACCTCAAAATGAGACAAACTAATGTACTGTACAATGTATAAATAAATCGCTATTTTGGACGAAATAATGTAC(SEQID NO:182)

ID 147.XM_035601452.1|:201-400PREDICTED：草地贪夜蛾PBAN型神经肽(LOC118281022)，mRNA ATTCTTCAAACTCTTGGAAGCGGCAGACGCATTGAAATATTACTACGATCGCTTACCTTACGAGATGCAAGCGGACGAACCTGAAACCAGAGTTACCAAAAAAGTGATATTTACTCCTAAATTGGGAAGGAGTTTGGCTTATGATGATAAAGTCTTTGAGAATGTTGAGTTCACACCACGGTTGGGAAGACGGTTGGCTG(SEQ IDNO:183)

ID 149.151-300PREDICTED：草地贪夜蛾带电多泡体蛋白4b样(LOC118279222)，mRNA AGTTTTCTGGGGAAGTTATTCGGTGGTAAGAAGGAAGAAAAGGGCCCGACAACACATGAAGCTATTCAGAAATTACGCGAGACAGAGGAGCTCTTGCTGAAAAAACAAGAGTTTCTAGAGAAGAAAATCGATATAGAAATACAGACTGCT(SEQ ID NO:184)

ID 150.801-950PREDICTED：草地贪夜蛾带电多泡体蛋白4b样(LOC118279222)，mRNA GTCTTGGGCCACATAATGTATGCACCTCAAGTTGTAATTTTGTGATATATTATAGGTATTGTATAGCCATCCGCTTTGTTACGCACTCTTGTGGGCACAGCACGTCGATGTATACTGGTTTTGTATTGAAAATATGTAGCTTGATATGCT(SEQ ID NO:185)

ID 151.151-300和801-950提示草地贪夜蛾带电多泡体蛋白4b样(LOC118279222)，mRNA AGTTTTCTGGGGAAGTTATTCGGTGGTAAGAAGGAAGAAAAGGGCCCGACAACACATGAAGCTATTCAGAAATTACGCGAGACAGAGGAGCTCTTGCTGAAAAAACAAGAGTTTCTAGAGAAGAAAATCGATATAGAAATACAGACTGCTGTCTTGGGCCACATAATGTATGCACCTCAAGTTGTAATTTTGTGATATATTATAGGTATTGTATAGCCATCCGCTTTGTTACGCACTCTTGTGGGCACAGCACGTCGATGTATACTGGTTTTGTATTGAAAATATGTAGCTTGATATGCT(SEQ ID NO:186)

ID 152.301-450和1851-2000草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds TTGTATATTGAACATTTGGACAAACAGGTATACACATTTTACTGTAAGAATAATGTGACAAACAAACCTTGCACCACTAGAGTGCTAGTGGACGACTCTCCCTCCAATGTTACTGACTTTAGCTGCATATCAAAGAATCTTGATGAACTGAAACATAACTGATCTTAAACCTTATACAACATATCTTTTTACCCTCGCCTTAAATACTACTTATGGGTTAAAGACAATTGAAAATGCTTCCACTGGAGTGACAACTATCGAGGATACTCCCACAAGTCCAAGGAATGTACGCATTACAGA(SEQ ID NO:187)

ID 153.301-450草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds TTGTATATTGAACATTTGGACAAACAGGTATACACATTTTACTGTAAGAATAATGTGACAAACAAACCTTGCACCACTAGAGTGCTAGTGGACGACTCTCCCTCCAATGTTACTGACTTTAGCTGCATATCAAAGAATCTTGATGAACTG(SEQ ID NO:188)

ID 154.1851-2000草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds AAACATAACTGATCTTAAACCTTATACAACATATCTTTTTACCCTCGCCTTAAATACTACTTATGGGTTAAAGACAATTGAAAATGCTTCCACTGGAGTGACAACTATCGAGGATACTCCCACAAGTCCAAGGAATGTACGCATTACAGA(SEQ ID NO:189)

ID 155.201-300草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds GATCTTTTGCGTGGCTGAAAACTATACTGCTGAGAACTTGGAGTTTTACCACGGTCGAAAATTTATAGAATCAGAAAAAGTGAATGCAACCACCAGGAGG(SEQ ID NO:190)

ID 156.301-400草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds TTGTATATTGAACATTTGGACAAACAGGTATACACATTTTACTGTAAGAATAATGTGACAAACAAACCTTGCACCACTAGAGTGCTAGTGGACGACTCTC(SEQ ID NO:191)

ID 157.401-500草地贪夜蛾细胞因子受体mRNA，完整cds CCTCCAATGTTACTGACTTTAGCTGCATATCAAAGAATCTTGATGAACTGAACTGTACTTGGACTTCTCCAGAGATTTACAGCATAACTACATACCGGTT(SEQ ID NO:192)

ID 158.101-200草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds AAATAATCATTTAAAACGAGAAAATGTTTTCTGTAGACTCAGTTACCACAACACCACAAGGAATGGAAGTGGAAAATGTTATTGGAAACAGTGATATTAT(SEQ ID NO:193)

ID 159.201-300草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds GAATACTGATATGATGTCAGAAATTGAAAAAGAATTACAAGACAATCCCAGCGACTTGATATCCCTAGTGTTTCTTCTTTATGAAGTACCGGACACAGCA(SEQ ID NO:194)

ID 160.301-400草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds CCACAACGTTTAATTGTTTTTCAACGCGTTTCCAACGATGCCTGTAACTCTATTAATCTTAACATGCTACACGAGTGGTTTCGATCTACTAAGCACAACC(SEQ ID NO:195)

ID 161.401-500草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds CCAACTGGAAACATCAATTTGTGGAAGCTCTCCTTATCTGTCAACTGTACAGTATTGTCAGAAAACTTGGATTGAATGTCCCTACAGCACGCAAGTACTA(SEQ ID NO:196)

ID 162.801-900草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds GATGAATATGTTGCAACACTCATTGAATGATGAGCACAAGCCAAGTGCCTCAGCTGCTACCAGTACTCCTATGATGAAACATATGAAAGTGGATGAAACA(SEQ ID NO:197)

ID 163.901-1000草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds AATCAAGGGAAAGCTGATGACAATTATTACAATATGGATTTTAATGATGTGTTTGAAATGCTTGGAGAGTTACAGTTGGATGAAAGAATGCAAGAGTCTC(SEQ ID NO:198)

ID 164.1001-1100草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds TGAAGTCTGATAGGAAGCTACTGGACAATGATAGCTATGAAATCAAGAGTAACAAAAGGGTTGGAGTTTGTGTCATCATAAATCAGGAAACATTTTATCC(SEQ ID NO:199)

ID 165.1401-1500草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds TGATGCCAAAAAAATACACAACATGCCTAAACTTTTGATAGTTCAAGCATGCCAAGTTGATGAAAATACTCCCCAGATTGTAGTGGCTGACAGCCCAAGA(SEQ ID NO:200)

ID 166.1451-1550草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds GCCAAGTTGATGAAAATACTCCCCAGATTGTAGTGGCTGACAGCCCAAGAGATTACAATTTAAGGAAATCTAACTTCCTTGTTTACTATGCCACTGCACC(SEQ ID NO:201)

ID 167.1501-1600草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds GATTACAATTTAAGGAAATCTAACTTCCTTGTTTACTATGCCACTGCACCTGAACTAGAAGCTTACAGAAATGAAAAAAGAGGATCGATATTCATTCAGG(SEQ ID NO:202)

ID 168.1601-1700草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds TGCTATGTAGAACAATTAGAAAGTATGCTAATACTGAACATGTCTATGATATTTTTACTAAGGTCAATAATAATGTGAATTTCATTTGCCAAAAGGTGGG(SEQ ID NO:203)

ID 169.草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds GAATACTGATATGATGTCAGAAATTGAAAAAGAATTACAAGACAATCCCAGCGACTTGATATCCCTAGTGTTTCTTCTTTATGAAGTACCGGACACAGCATGAAGTCTGATAGGAAGCTACTGGACAATGATAGCTATGAAATCAAGAGTAACAAAAGGGTTGGAGTTTGTGTCATCATAAATCAGGAAACATTTTATCCTGATGCCAAAAAAATACACAACATGCCTAAACTTTTGATAGTTCAAGCATGCCAAGTTGATGAAAATACTCCCCAGATTGTAGTGGCTGACAGCCCAAGA(SEQ ID NO:204)

ID 170.草地贪夜蛾Dredd mRNA，完整cds ACACCACAAGGAATGGAAGTGGAAAATGTTATTGGAAACAGTGATATTATGAATACTGATATGATGTCAGAAATTGAAAAAGAATTACAAGACAATCCCAGCGACTTGATATCCCTAGTGTTTCTTCTTTATGAAGTACCGGACACAGCACCACAACGTTTAATTGTTTTTCAACGCGTTTCCAACGATGCCTGTAACTCTATTAATCTTAACATGCTACACGAGTGGTTTCGATCTACTAAGCACAACCCCAACTGGAAACATCAATTTGTGGAAGCTCTCCTTATCTGTCAACTGTAC(SEQ ID NO:205)

ID 171.200-300PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA ATGTTGGTCTCAACGTTACAAGTTGTGATACCGGTGTTCTGTGATCCAGAAGTGTACTACGAGAAACAGCGGTATGATGGCTGGTTCAACAACAGAGCTTA(SEQ ID NO:206)

ID 172.300-400PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA ACCCAGACTGGGGATCCGTTGGCAGTCGTCTCACACGCAAGACTCCAGCATCATACGCTGATGGGGTCTACATGATGGCAGGCGTCGATAGACCCGGCGCC(SEQ ID NO:207)

ID 173.400-500PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA CAGAACATTATCCAAACTCTTCATGAGAGGGCAAGATGGACTGCCTTCTTTAGCCAACAGGACAGCATTATTGGCGTTCTTTGGCCAGGTCGTAACCGGCG(SEQ ID NO:208)

ID 174.500-600PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA

GAGATTGTAATGGCATCCGAGTCGGGCTGTCCTATCGAGCACCATCGCATACCAGTGGACAAATGTGACCACATGTATGACCCAGAATGTAATGGAGCCAA(SEQ ID NO:209)

ID 175.PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA 4100-4200 TCACATCAAAGCACAAGGTCCCTGGACGTGGAAACTCAGGAATTACTTCGATCCCTGCAACTTTAATACTGAAGATCATCCTAAAATCAGGATCCAAGGTC(SEQ ID NO:210)

ID 176.600-700PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA AGTACATGCCGTTTCTTAGAGCAGCATATGATCGGAACACGGGGCAGAGTCCCAACAGTCCTAGAGAACAGATAAACCAAATGACTTCGTGGATCGACGGC(SEQ ID NO:211)

ID 177.2600-2700PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA CTTGGAATGAAAGCAGATGCTGTATTTGTGAAGAAAATGTTCAACATTGTCGACAAAGACGGAGATGGCAGGATCTCTTTCCAGGAATTTCTGGACACGGT(SEQ ID NO:212)

ID 178.2700-2800PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA TAGTCCTATTTTCTCGAGGAGCAACAGAAGACAAACTTCGCATTATCTTCGACATGTGTGACGATGATCGTAACGGTGTGATCGACAAGGGAGAGCTCAGT(SEQ ID NO:213)

ID 179.3800-3900PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA CTACGAACTAAGTATCTAGCACTGGATGTTTTGGAAACAGAAATGCTACCATCGGATGTGATTAAAATAAAGTTCTATAGACCACCAAATCTAAAATATTT(SEQ ID NO:214)

ID 180.3900-4000PREDICTED：草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA TATCAGGTCAATGGGTACGGTTATCTTGTACGGCGTTCAAGAAAGAAGAGTTCCACTCGTTCACATTAACCTCAGCTCCTCACGAGAACTTCTTATCGTGT(SEQ ID NO:215)

ID 181.草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA ATGTTGGTCTCAACGTTACAAGTTGTGATACCGGTGTTCTGTGATCCAGAAGTGTACTACGAGAAACAGCGGTATGATGGCTGGTTCAACAACAGAGCTTACTACGAACTAAGTATCTAGCACTGGATGTTTTGGAAACAGAAATGCTACCATCGGATGTGATTAAAATAAAGTTCTATAGACCACCAAATCTAAAATATTTCTACGAACTAAGTATCTAGCACTGGATGTTTTGGAAACAGAAATGCTACCATCGGATGTGATTAAAATAAAGTTCTATAGACCACCAAATCTAAAATATTT(SEQ IDNO:216)

ID 181.草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA CTACGAACTAAGTATCTAGCACTGGATGTTTTGGAAACAGAAATGCTACCATCGGATGTGATTAAAATAAAGTTCTATAGACCACCAAATCTAAAATATTTTATCAGGTCAATGGGTACGGTTATCTTGTACGGCGTTCAAGAAAGAAGAGTTCCACTCGTTCACATTAACCTCAGCTCCTCACGAGAACTTCTTATCGTGTTCACATCAAAGCACAAGGTCCCTGGACGTGGAAACTCAGGAATTACTTCGATCCCTGCAACTTTAATACTGAAGATCATCCTAAAATCAGGATCCAAGGTC(SEQ IDNO:217)

ID 182.草地贪夜蛾双重氧化酶样(LOC118269141)，转录物变体X1，mRNA TAAAATGGCGGCCCCGGATACGGTAGGGAGTCGAATATGGCTCCTAGTAATGTTGGTCTCAACGTTACAAGTTGTGATACCGGTGTTCTGTGATCCAGAAGTGTACTACGAGAAACAGCGGTATGATGGCTGGTTCAACAACAGAGCTTAAGCCAACAGGACAGCATTATTGGCGTTCTTTGGCCAGGTCGTAACCGGCGAGATTGTAATGGCATCCGAGTCGGGCTGTCCTATCGAGCACCATCGCATACCAGTGGACAAATGTGACCACATGTATGACCCAGAATGTAATGGAGCCAA(SEQ ID NO:218)

ID 183.101-200PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA CATGCGAGAAGAGGCTTTGATGGGTGTGAAACTATATGCTGCAGACTTCAGCCCACCGGTGCGTTCCAGCATGATGGCCCTTGATATCTTCAATGTACCA(SEQ ID NO:219)

ID 184.201-300PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA TTTGAGAAGATAACTCTCAACTTACTGAAACTGGAACACCGCACTCCAGAATATTTGGAAAAAAATCCGATTCACTCGATTCCAGTATTGGAAGATGGAG(SEQ ID NO:220)

ID 185.301-400PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA ATTTAATATTACATGATAGCCACGCAATAATGGCCTACCTCGCTGACACCTACGGAAAGGATGAGTCTTGGTATCCTAAGGACGTGAAAAAACGAGCTTT(SEQ ID NO:221)

ID 186.401-500PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA AGTTAACCAAAAACTGTTTTTCACCACAGGTGTAATTTTCCCTAGACTACGAATCATTACATACTATCTTCTAGAAAAAGGAAGAAAAGCTATAGAACAA(SEQ ID NO:222)

ID 187.501-600PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA GAATGGCTAGACAACATTGAAGAAGCCATTGGTTTTGTGGAGCAGTTCTTGTCTCGGACAAAATTCATCGCCTTGGACCATGTCACCATTGCCGATATTG(SEQ ID NO:223)

ID 188.601-700PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA CAGTGTTAAGTCACCTGTCCTCTGTGGAACCTATTCTACCCATAGATCCGAAAAAGTACCCAAAGACGGTTGCCTGGTTAGAAATTATGAAAGCGACGCC(SEQ ID NO:224)

ID 189.651-750PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA AAAAAGTACCCAAAGACGGTTGCCTGGTTAGAAATTATGAAAGCGACGCCATATTGCAAGAAATATAACGAAGAAGGTGTTAAATCTCTGACTGCTATTA(SEQ ID NO:225)

ID 190.草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA TTTGAGAAGATAACTCTCAACTTACTGAAACTGGAACACCGCACTCCAGAATATTTGGAAAAAAATCCGATTCACTCGATTCCAGTATTGGAAGATGGAGAGTTAACCAAAAACTGTTTTTCACCACAGGTGTAATTTTCCCTAGACTACGAATCATTACATACTATCTTCTAGAAAAAGGAAGAAAAGCTATAGAACAAAAAAAGTACCCAAAGACGGTTGCCTGGTTAGAAATTATGAAAGCGACGCCATATTGCAAGAAATATAACGAAGAAGGTGTTAAATCTCTGACTGCTATTA(SEQ ID NO:226)

ID 191.201-500PREDICTED：草地贪夜蛾谷胱甘肽S-转移酶1样(LOC118261931)，mRNA TTTGAGAAGATAACTCTCAACTTACTGAAACTGGAACACCGCACTCCAGAATATTTGGAAAAAAATCCGATTCACTCGATTCCAGTATTGGAAGATGGAGATTTAATATTACATGATAGCCACGCAATAATGGCCTACCTCGCTGACACCTACGGAAAGGATGAGTCTTGGTATCCTAAGGACGTGAAAAAACGAGCTTTAGTTAACCAAAAACTGTTTTTCACCACAGGTGTAATTTTCCCTAGACTACGAATCATTACATACTATCTTCTAGAAAAAGGAAGAAAAGCTATAGAACAA(SEQ ID NO:227)

ID 192.101-200PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA ACGGGCACACAATGTTCCAACACTTTAGTCGACCAGTACATTAGCGAGCCACCTGTTGTCGTGAAAATTGATAAAAAATAATGTGATGGACATTTTAATA(SEQ ID NO:228)

ID 193.201-300PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA TAAGTGTGAAAATGGGTGTTAAGGTTTTAGCTTTAATAGCACTCTTAGTTGTTAGTGTACTCGGACAAGACGTTACTGTCAGTGACAACGATGTAACAAA(SEQ ID NO:229)

ID 194.301-400PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA GGAAGTTGTGGTGGACAATTTAGCTAGTGAGGACCCGATAGTATTAGACACAGTTACAGAAGCCACAAAAGATGAAGTTGCTGAAGATGCGAACCCAGTG(SEQ ID NO:230)

ID 195.401-500PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA GAAATACTAAGTCCAACGGATGATCTGCAAGTAAGAAGCGGGAAATATCAGCTCAATGATGGGCTCGTGGGTGAAGAGCCGATGCCACTAGATGCTGTTA(SEQ ID NO:231)

ID 196.1901-2000PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA AAGGAGATTACCATCAGACCCCAGCTTGAATACATAGATATTATCGAAATGGGCGTGGCTAACACTGGAGAATATGTGATCAATCCCCAAAACTTTAGGA(SEQ ID NO:232)

ID 197.2001-2100PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA ACCGGGATAACTTCATGCACAATGATATGCAGTTCGGTTTCCTCCAGATTAATTTAACTACGCCTGAAGTCTTCAAAGGAGTCTCTATCTCGCCTGTACT(SEQ ID NO:233)

ID 198.201-350PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA TAAGTGTGAAAATGGGTGTTAAGGTTTTAGCTTTAATAGCACTCTTAGTTGTTAGTGTACTCGGACAAGACGTTACTGTCAGTGACAACGATGTAACAAAGGAAGTTGTGGTGGACAATTTAGCTAGTGAGGACCCGATAGTATTAGACA(SEQ ID NO:234)

ID 199.1901-2050PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA AAGGAGATTACCATCAGACCCCAGCTTGAATACATAGATATTATCGAAATGGGCGTGGCTAACACTGGAGAATATGTGATCAATCCCCAAAACTTTAGGAACCGGGATAACTTCATGCACAATGATATGCAGTTCGGTTTCCTCCAGATT(SEQ ID NO:235)

ID 200.201-350,1901-1050PREDICTED：草地贪夜蛾蛋白质网(LOC118271033)，转录物变体X1，mRNA TAAGTGTGAAAATGGGTGTTAAGGTTTTAGCTTTAATAGCACTCTTAGTTGTTAGTGTACTCGGACAAGACGTTACTGTCAGTGACAACGATGTAACAAAGGAAGTTGTGGTGGACAATTTAGCTAGTGAGGACCCGATAGTATTAGACAAAGGAGATTACCATCAGACCCCAGCTTGAATACATAGATATTATCGAAATGGGCGTGGCTAACACTGGAGAATATGTGATCAATCCCCAAAACTTTAGGAACCGGGATAACTTCATGCACAATGATATGCAGTTCGGTTTCCTCCAGATT(SEQ ID NO:236)

ID 202.MT544380.1|:101-400草地贪夜蛾克隆Sf_17445蛋白质网mRNA，部分cdsTGGACAATTTAGCTAGTGAGGACCCAATAGTATTAGACACAGTTACAGAAGCCACAAAAGATGAAGTTGCTGAAGATGCGAACCCAGTGGAAATACTAAGTCCTACGGATGATCTGCAAGTAAGAAGTGGGAAATATCAGCTCAATGATGGGCTCGTGGGCGAAGAGCCGATACCACTAGATGCTGTTAATTTCGACTCGAATAATGATGCCGGAGAGAGTGAGAAGCAGTTGCTCTCTCCTGGCACAACTCAAGTCACGAACAACGAGTATGCTCATATCGATGGCCGAGTTTTACCGG(SEQID NO:237)

ID 203.301-400PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA AAGTCGGACGTTATACAAAGAACGATGAGTGTGCTGAGGGGTTTTTAGTGAGAAATTGTGAAAAATAGAAAGAGTGAAGATGTCGGTAAAAGCGAGCGTT(SEQ ID NO:238)

ID 204.401-500PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA GGTTAAACAAAAAGGGTAAAAATGGCCTTCAAAGGATTCTGTGGCGAAGTGATCGGGTTTTTCCTGGCTGTGGGTTTTTGCATCATATGTCCGGAATATG(SEQ ID NO:239)

ID 205.701-800PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA AACTGCCGAGTCAAGAATTTAGGAAATAAAACGTTAAACATGCAAGTATCGTGGGTACGGCATAGAGACATCCATCTGCTGACAGTCGGCCGGTACACAT(SEQ ID NO:240)

ID 206.801-900PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA ACACGAGCGATCAAAGGTTTAGAGCTATTCACTTACCGCACTCCGAGGACTGGACTTTACAGATCAAGTATCCGCAACACAGGGATTCGGGAATTTATGA(SEQ ID NO:241)

ID 207.1351-1450PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA GTTGGTTGCCTGCCTGTTCATCGCACTCTCTTGACACATACGGATCTTTAACTAAATGTAAATACAAGGATTTTATCAACATCAGCTGCTTATATTGACA(SEQ ID NO:242)

ID 211.草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNAAAGTCGGACGTTATACAAAGAACGATGAGTGTGCTGAGGGGTTTTTAGTGAGAAATTGTGAAAAATAGAAAGAGTGAAGATGTCGGTAAAAGCGAGCGTTGGTTAAACAAAAAGGGTAAAAATGGCCTTCAAAGGATTCTGTGGCGAAGTGATCGGGTTTTTCCTGGCTGTGGGTTTTTGCATCATATGTCCGGAATATG(SEQ ID NO:243)

ID 212.401-500草地贪夜蛾V-ATP酶亚基A mRNA，完整cds AATTCAACCCCTTGAATGTTAAGGTCGGCTCCCACATCACCGGAGGAGACTTGTACGGTATCGTACACGAGAACACATTGGTTAAGCACAAGATGTTGAT(SEQ ID NO:244)

ID 213.1301-1400草地贪夜蛾V-ATP酶亚基A mRNA，完整cds TGGACAAGAAGCTCGCGCAGCGCAAGCACTTCCCCGCCATCAACTGGCTCATCTCCTACAGCAAGTACATGCGAGCGCTGGATGACTTCTATGAGAAGAA(SEQ ID NO:245)

ID 214.1501-1600草地贪夜蛾V-ATP酶亚基A mRNA，完整cds GCCGAGACTGACAAAATCACCCTTGAGGTTGCCAAGCTGCTCAAAGACGACTTCTTGCAACAAAACAGCTACTCGTCATACGATCGTTTCTGTCCGTTCT(SEQ ID NO:246)

ID 218.100-159、1-60，草地贪夜蛾V型质子ATP酶催化亚基A(LOC118267501)，转录物变体X1、X2、X3和X4 AATTCAACCCCTTGAATGTTAAGGTCGGCTCCCACATCACCGGAGGAGACTTGTACGGTATCGTACACGAGAACACATTGGTTAAGCACAAGATGTTGATTGGACAAGAAGCTCGCGCAGCGCAAGCACTTCCCCGCCATCAACTGGCTCATCTCCTACAGCAAGTACATGCGAGCGCTGGATGACTTCTATGAGAAGAAGCCGAGACTGACAAAATCACCCTTGAGGTTGCCAAGCTGCTCAAAGACGACTTCTTGCAACAAAACAGCTACTCGTCATACGATCGTTTCTGTCCGTTCT(SEQ ID NO:247)

ID 219.XM_035591116.1|:100-1600PREDICTED：草地贪夜蛾细胞色素P450 6B2样(LOC118273915)，mRNA ATATTATTACTTCACAAGGACATTCAACTACTGGAAGAGTAGAAATGTGCGAGGACCAAAACCAGTTGCATTATTTGGAAACATTAAGGACGCAGCTCTTCGCAAAGAAAATTATGGCGTCGTAATGCAAAATATATACAATGCATATCCAAATGAAAAAGTGGTCGGCATATTCAGGATGACTTCGCCTTGTCTCCTTATTCGAGACCTGGACATTATCAAACATATCATGATCAAAGACTTCGAAGCCTTCAGTGATCGTGGAGTGGAATTCAGCAAAGAAGGATTGGGACAAAACTTATTCCACGCGGACGGAGATACATGGACTGCCTTGAGGAACAGATTCACTCCCATTTTCACAACAGGTAAATTGAAGAACATGTTTTACCTAATAAATGAGGGAGGCGATTCATTTGTAGAGTACATCCGTACAGAATGCCAAAAGAAGGAAGAATTTGATATTCAGCCTCTCCTCCAGACGTATACTTTGTCTACGATCTCCGCCTGTGCATTCGGAATTAGCTATGACAGTCTTGATGTTAAAATGGATACTCTGAAACTTGTGGATAAAATATTTTCTTCACCAAGTTTTGCAGTTGAATTGGATATGATGTATCCCGGTCTCCTGAAATCTCTAAACCTTTCTTTATTCCCTACCGCCATAAAAAAGTTCTTTGATAATCTAGTGAATAATGTTATAGAGCAAAGAAATGGTAAACCATCGGGTCGAAATGATTTCATGGATCTTATTTTGGCGCTCCGTGAAATGGGAGAGGTCACAAACTCAAAATATGACTCTGCAAAGCCAGTTGAAATAACACCTGGTGTGATAGCAGCGCAAGCTTTTGTGTTTTATGCGGCTGGTTATGAAACCAGTGCTACCACTATGACGTACATGCTTTACCAACTAGCAATGAATCCAGACATCCAAAAGAAGTTGACTGAAGAAATTGACGAATCTCTCAAAGCAAATAATGGACAAGTTACATACGAGAGCATTAAGGAAATGAAGTATTTGAACAAAGTGTTTGATGAAACTCTACGAATGTACTCGATTGTAGAACCTCTGCAGAGGAAAGCTGTAAGAGATTACAAAGTGCCCGGTACTGACTTGACGATAGAAAAGAACACAATTGTGCTGGTATCTCCGAGAGGTATCCACTACGACGAGAAATATTACGACAACCCTGAACAGTTCAACCCTGACAGATTTGACGCGGAGGAGGTGGGCAAGCGACATCCGTGCGCTTACATGCCGTTTGGAATTGGACAGAGAAACTGCATCGGAATGAGGTTCGGCAGACTTCAATCCCAACTGTGCATAACCAAGTTGCTGTCTAAGTTCCAAGTGGAGCCATCGAGGAATACTGCAAGGAAGCTGGAAGTGGAACCTTGTCGCTTTATCATCGGACCCAAAGGAGGGATACGTCTGAATATTGTTCCAAGAAAGCTGAAGGCTTAACACATTAAACGCCATGGGGGGCAAATGTGACCGGCGTTA(SEQ ID NO:248)

ID 220.301-400草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds TTTAACCACAGAGGCATTGAAAGTATTGAAGGGGATCAACTGACCGATAATATTCTCATGATGAATGGTCCAAGATGGAAGCTGATGCGACAGAATATGA(SEQ ID NO:249)

ID 221.701-800草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cdsAAGCTTTCAACGAGATCGAAGACTTCTTCATTGGTTCAATAAGTCAAGTGAT GAAATCAAGAGAACAAGAAAATGTAAAGAGACACGACTTTGCTGAAAT(SEQ ID NO:250)

ID 222.1101-1200草地贪夜蛾细胞色素P450 CY321A8 mRNA，完整cds TCCAATTGGTCACTTGACAAGACAATGTGTTCAAAATACTGTCCTGCCTGTTGGTAATATCCCAGTAGAAAAGGGGACAAAAATGTTCACTCCAATTTAT(SEQ ID NO:251)

ID 223.501-600PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1，mRNA TATCATCAGCACAGCGCGAACTCGGCAAGGGTTCGCCGACTAACGCCTCCGCCACGGCATCGCCGGCCGGTTCTGTGGACAACGCGATCCGGTCCGGAGC(SEQ ID NO:252)

ID.61-360小菜蛾多酚氧化酶1mRNA，完整cds GenBank：KT006134.1cagaagggcgacgacaagac cgtcttccag atcccggaca acttctaccc agaaaagtac aagaaggtgg gcaaccagctggccgaccgg ttcggcacgg acgcgggccg catggtgccg gtgcgcaaca tcgcgctgcc ggacctcagcctgccgcagc agctgccgta ccacaaccag ttctcgctgt ttgtgccgaa acacaggcgg atggctgctaagctgattga tatatttatg ggaatgcgtg acgtggagga cctgcagtcc gtgtgtagct actgccagctccgcatcaac(SEQ ID NO:253)

ID.BI-P450小菜蛾细胞色素P450(CYP6BF1v1)mRNA，GenBank：AY971374.1nt#s471-520、556-605、629-678、752-802、856-905、1317-1366。TGGTACAGGATTGCTGCAGAATATTCCAGAAGGTTCTCGATGATGAGATAAGCTCGGTATACTATGGACTGTATAACTTCGTGTGCATTCGGCGTCGACTGAAGGGAACCCTTTCACAGAAACAGGTCACCTTTTATTTGATGAAAGACCTCCAGCAAAATTTACCGTTTCTTCCGATCTGTTATACTTGACGTTATAAATTGGAAGAAGAACAAATACATAACGGGAGACAGTATTGATAATGGCATAGCGGAGCGGTTTTCTGAAGAAGGACGGAAAAGTATTGTCCCGTATACCTAC(SEQ ID NO:254)

ID.201-500草地贪夜蛾细胞色素P450 CYP6AE44 mRNA，完整cds序列ID：MN480661.1 TGAAGAACCATACGTTGGCTCTTACTTGGGCACGGAACCGACCCTCATCATACAAGATCCCGAATACATCAAGACCGTCATGACCAAGGACTACTATTTCTTCAGTGGCCGTGAAGTCTCTGCATACTGTGAAAAGGAACCGTTAACTCAGAACCTATTCTTCACTTATGGCGATAAGTGGAAGGTACTGCGTCAGAACCTTACGCCTTTGTTCTCATCCGCAAAGATGAAGAACATGTTCCATTTGATCGAGAAATGTGCCCGTATCTTCGAGAACATGGTCGACCAGGAAGTACAGAA(SEQ ID NO:255)

ID.1601-1789小菜蛾菌株DBM1Ac-S ABC转运蛋白亚家族H成员1(ABCH1)mRNA，完整cds序列ID：KP260785.1tttggctgacactgcggacgacgagaccatcgagtcgtcagaagtgcaggtgtggctcgacatgtccaaccagcagatcggcctcatgctcaaccgagacatacagttctcatacagggacttcgctaagaacttgctgtcgacttgcgactacaacccgaaggtgggcgacatcccgatcgacttcaa(SEQ ID NO:256)

ID.332-632小菜蛾保幼激素环氧化物水解酶mRNA，完整cds GenBank：JX297814.2tagattttcggatgagatggtaaaagacttgttatatcgcatcaaccatcgccgtaaaataagaccctcactgcaagggtcaggaaaccactatgggccaaactctgcgctggtgaaacaagtattggaccactggagtcaaaaatacgatttcaaagaacgtgccaagaaactaaaccggcatcctcaatacataaccaatgttaacggcctggacatccactacatacatgttcagccttcagggaataaacgcgttgtgccaatcctgctcatccacagcgtagaatccaacagtctg(SEQID NO:257)

ID.M_011553525.1|:161-460PREDICTED：小菜蛾蛋白质网样(LOC105383478)，mRNA ACTTATTAGTGTAAGTGTAAAAGGGCAAGAGGACGCTATAATTAATGAGGACAGTTTAGTGAATGACGTCACGAGTGTAGTGAGTAATGACTTGGAGGCTCCTGTAGTTGCTGAAGCGAAAGAGGTGGGAGTGGAAGGGTTTGTGGAGGACCCTGCTCCTGTGGAAGTGATAGCCGATTCTGAAGCCGTGGCGGTGAGGAGTGGGCGGTACCAGGCGCTCAATGATGCCCTGCAGGAGGGGCCGGTGGACCTCCAGGCAGTGGACCTGGACGAGCAGCTCGGGAGGCAGCTGTTGAACCC(SEQ ID NO:258)

XM_011553525.1|:3300-3599PREDICTED：小菜蛾蛋白质网样(LOC105383478)，mRNA CGGTCCTTTGACGTATCCAGGGCCACCGAACTCTGCCAAGATTCCTACCAGTGCCGATATGACTACGGAATGACCCTCAACAGAGATATGGCTGAGTTCACCAAGAACTATTTGTCTTCTATCACAAACATCAAGGAGAAAAACGCAAGGAGAGTCATCAGTTGTGGCATCTTGGAGACACCGCGGTTTGGACGGAAGAGTAACTTCTTCTTTACTCCCGGAACTACGGTGAACTTTGAGTGCAATCAAAACTTTATCCTGATTGGTGACAAGCGCCGAGCTTGCGAGTCCGACGGCCGG(SEQ ID NO:259)

ID 25-2.351-500PREDICTED：小菜蛾venom羧酸酯酶-6(LOC105388350)，mRNA CCAACGTCTACACACCGGCCATTGATCCAGAAAAGAAATACCCAGTAATGGTTTGGATTAAAGGGTCCGAGTTTGAGAAAACTAAGGGACCTGAACTATCTTTTAGAAATCTTATTGAAAAAGAAGTAATAGTCGTGTCTCTAAACTTCATAGATGATGAAAAGTTTCTAGAAAAATCACCTTTTAGTACGCTAACTGAAGGAACTTACACTAAAATACCTATGATCTTCGGATTTGTTGAAAACGAAGGAACAATACGTTTTGATGAGGCACTAGAAGCTGATTGGCTAACAAAGATGG(SEQ IDNO:260)。

ID.4-303草地贪夜蛾V-ATP酶亚基E mRNA，完整cds

序列ID：MT707618.1 GCGCTCAGCGATGCAGATGTTCAAAAACAGATCAAGCACATGATGGCCTTCATCGAGCAAGAAGCCAATGAAAAGGCTGAGGAAATCGATGCAAAGGCCGAGGAGGAGTTCAACATCGAAAAGGGGCGTCTGGTCCAGCAGCAGAGGTTGAAGATCATGGAGTACTATGAGAAGAAGGAAAAGCAGGTCGAACTCCAGAAAAAGATCCAATCCTCAAACATGCTGAACCAGGCTCGTCTCAGGGTGCTCAAAGTACGTGAAGACCATGTACGCAACCTGTTGGACGAGGCCCGCAAGCGC(SEQ ID NO:261)

ID.用于液泡ATP合成酶亚基E的小菜蛾mRNA，GenBank：AB189032.1191-240、505-554、683-812、875-924、1091-1140、1172-1222GTCTGGTGCAGCAGCAGCGCCTCAAGATCATGGAGTACTACGAGAAGAAGGAGCGCGCGCAGGCGCAGTACAAGGAGAAGATCAAGAAGGATGTGACCTTGCCCCCCGCGCAAATATTCAACTTTCTTATTATTATTATGTAGAACTAAAAATGCGTACAACATTATTAACATGTATGAAAGAATCCGTATTAAGTCAGACTTAGCTGTAGCTTTTAGGAGACACAGTTAAATTGAAATGTTATACCGATAGCGTAAGCATTTTATTGATATAATTCTGGATTGTTGCCATAACAATTAT(SEQ ID NO:262)

ID.301-400,401-500,1351-1450PREDICTED：草地贪夜蛾未表征的LOC118263801(LOC118263801)，转录物变体X1、X2和X3，mRNA AAGTCGGACGTTATACAAAGAACGATGAGTGTGCTGAGGGGTTTTTAGTGAGAAATTGTGAAAAATAGAAAGAGTGAAGATGTCGGTAAAAGCGAGCGTTGGTTAAACAAAAAGGGTAAAAATGGCCTTCAAAGGATTCTGTGGCGAAGTGATCGGGTTTTTCCTGGCTGTGGGTTTTTGCATCATATGTCCGGAATATGGTTGGTTGCCTGCCTGTTCATCGCACTCTCTTGACACATACGGATCTTTAACTAAATGTAAATACAAGGATTTTATCAACATCAGCTGCTTATATTGACA(SEQ ID NO:263)

ID.252-491西部玉米根虫带电多泡体蛋白4b(LOC114337301)，mRNA序列ID：XM_028287710.1gcaaagaaaaatgcgtcgaaaaataaaagagttgcactccaagccctcaaaaagaagaaacgattggaaaagacccaactacaaatagatggaacccttacaactattgaaatgcagagggaagccctcgaaggagctagcacaaatactgctgtattagattctatgaaaaatgctgcagatgcccttaagaaagctcataagaatttgaatgtagatgatgttcacgatatcatggat(SEQ ID NO:264)

ID.87-386PREDICTED：小菜蛾细胞因子受体样(LOC105380229)，mRNA序列ID：XM_011549746.3Domeless：CTTCAAATTATTGTAGTGATGATCATACGGAAGCCGATTTGATAGAATTTTAATTCACATACGATACTAGCCTATATAACAGTCGATTTGTGCAGTCGGTCAGTGAGTGTTGTTTAGTGAGTCGTGCAACTCGTACCCTGCATGACTTTGGACTCCGATGCGCCATTTGGCCTCAGCTATAAAAACAAGGAATGTGTTTATCGTCTCTCCCGATTTCCCAAACGACTTTAGCTTGCAGTGATGGTGTGATAAGTGAACTTTAGTGATATTCCCCGACATGGCAATTTGTCAGAGCACTCG(SEQ ID NO:265)

ID.77-376PREDICTED：小菜蛾半胱天冬酶-8(LOC105390324)，mRNA序列ID：XM_011561609.3Dredd：ATAGGTAGTTAGCTATTTTATTTAGTATTCGGGTGTTACGATAATGTTGCAACCTGACGCTCTCAAAGGTCATGAGAATGAGGAGTTGAACAGTGTTCACAAAAACATACATAATATCACTGTTAATGTGATAGCTGAGGTACAAAGGGACTTGACTCCATACGATATCACTTCGCTGGTGTTTCTTCTATACGATATCCCGGAAACGGCGCTTCAGCGGCTTACTCTGCTGCAGAGAGTGAGCCGGGACATCAGTGGCAAGGATCTGAACTTGCTCTATGACTGGGCGGTGTACGCTCA(SEQ ID NO:266)

ID.96-395小菜蛾谷胱甘肽合成酶(Gss)，mRNA序列ID：NM_001309054.2GSS1：ACCAAGCCCCACGTCATCATGATCATGGCTGACGACATGGGATGGGACGACACCTCGACCCACGGCTCCAAGTCCGTGCTGACCCCCAACCTCGACGTGCTGACCCGCTCAGGAGTGTCCCTCCACCGCTACTACACCCACGCTCTCTGCTCGCCCGCCCGTACCGCTGTGCTCACCGGCAAATACGCCCACACCGTCGGTATGCAGGGTATGCCTCTGTCCAACGCTGAGGAGCGTGGTATCCCCCTAGAGGAGCGCCTGATCTCTCAGTACCTACAGGACGCTGGTTACAGGACCCAG(SEQ IDNO:267)

ID.PREDICTED：小菜蛾双重氧化酶(LOC105389437)，mRNA序列ID：XM_048622382.1Duox CCCCAGCTCCTGCGCCCGCGCACGAATCACTTCCGCGATCGAATACCCGCTTTCGCTCCGTAAACAGTCCGTGTGCAAATCATATTTTCCGTTTTCTCATCAACATTGCAAAACGCTAAATTGCACTTCTACACCGGCGGATGTGTTCGGTGTCAACAAATGTGGTGTTTCTTGGCGCTCGTTGGAATAATGTCTAATTGGAGTTGAGATTGAGACTATACACGATGGCGCGATGGTCCTCCAGCGAAGTGTGGACACTCGTAGCGCTCTGTGCCCTCGTCACATCCTGCCTGTCAGACC(SEQ ID NO:268)

ID.MH899215.1|:461-761小菜蛾几丁质酶5mRNA，完整cds ACCTGGACTGGGAGTACCCTGGAGCAGCCGACCGCGGCGGCTCGTTCTCCGACAAGGACAAGTTCCTGTACCTCGTCCAGGAGTTGAGACGAGCTTTCCTGAGGGTTGGGAAGGGCTGGGAGCTGACCGCTGCGGTACCGCTGGCCAACTTCCGACTGATGGAGGGGTACCATGTGCCTGAGTTGTGCCAGGAGCTGGACGCGATCCACGTGATGGCGTACGACCTGCGCGGCAACTGGGCCGGGTTCGCCGACGTGCACTCCCCGCTGTACTCCCGCCCGCACGACCAGTACGCATACTC(SEQ ID NO:269)

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