TEAD4及其相关基因/蛋白在病毒感染疾病中的应用

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体为TEAD4及其相关基因/蛋白在病毒感染疾病中的应用。

背景技术

艾滋病是全球重大传染性疾病。尽管目前艾滋病可有效控制，但尚无方法可以清除或长期抑制艾滋病毒(human immunodeficiency virus,HIV)复制。寻找艾滋病治愈途径仍是公共卫生领域迫切需要解决的关键问题。

高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy，HAART)可抑制活跃繁殖的HIV，但无法清除或长期抑制潜伏的HIV，当HARRT中断或免疫低下时潜伏病毒可反复激活，导致艾滋病难以治愈。可见艾滋病难以治愈的主要原因是无法根除潜伏的艾滋病毒，也无法将其长期沉默。另外，由于患者需终身服药，会给国家和社会带来很大的经济负担。

因此，找到新型靶点和手段，进而长期控制病毒复制是这个领域的研究热点，也是临床治疗的重大需求。

发明内容

针对目前病毒感染疾病，尤其是HIV难以治愈的问题，本发明提供了TEAD4及其相关基因/蛋白在病毒感染疾病中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

第一方面，本发明提供了TEAD4，或TEAD4和PRMT3共同作为预防、诊断或治疗HIV及其他病毒感染疾病的药物靶点的应用。

第二方面，本发明提供了检测TEAD4，或同时检测TEAD4和PRMT3表达水平或活性的试剂在制备预防、诊断或治疗HIV及其他病毒感染疾病产品中的应用。

第三方面，本发明提供了一种复合体，所述复合体由TEAD4与病毒DNA结合形成，或由TEAD4和PRMT3共同与病毒DNA结合形成，或由TEAD4、PRMT3和P-TEFb共同与病毒DNA结合形成。

进一步，所述病毒DNA为病毒基因的启动子。

进一步，复合体中与病毒基因启动子的结合受Tat蛋白的特异性调控。

进一步，Tat蛋白调控TEAD4和PRMT3共同与病毒基因启动子的结合依赖启动子上的9+7区域。

第四方面，本发明提供了一种控制病毒复制的试剂，所述试剂为调节TEAD4表达水平或活性的试剂，或为协同调节TEAD4和PRMT3表达水平或活性的试剂，或为破坏前文所述复合体中与病毒DNA结合的试剂，或为干扰前文所述复合体中TEAD4与PRMT3和/或P-TEFb互作的试剂。

进一步，干扰前文所述复合体中TEAD4与P-TEFb互作的试剂具体为干扰TEAD4与组成P-TEFb蛋白的CCNT1和/或CDK9互作的试剂。

进一步，所述调节TEAD4表达水平或活性具体为下调TEAD4的表达水平或活性。

第五方面，本发明提供了一种控制病毒复制的试剂盒，所述试剂盒包括前文所述的控制病毒复制的试剂。

第六方面，本发明提供了一种下调TEAD4表达水平或活性的shRNA，所述shRNA靶序列如SEQ ID NO.1所示，和/或所述shRNA靶序列如SEQ ID NO.2所示；其中，所述shRNA包括如SEQ ID NO.3～4，和/或SEQ ID NO:5～6所示的核酸序列。

第七方面，本发明提供了一种非疾病诊断和治疗目的的控制病毒复制的方法，通过调节TEAD4的表达水平或活性，或通过协同调节TEAD4和PRMT3的表达水平或活性，或通过破坏前文所述复合体中与病毒DNA的结合，或通过干扰前文所述复合体中TEAD4与PRMT3和/或P-TEFb的互作实现对病毒复制的控制。

第八方面，本发明提供了前文所述控制病毒复制的试剂在制备预防、诊断或治疗HIV及其他病毒感染疾病产品中的应用。

与现有技术相比本发明具有以下有点：

本发明经过实验发现，通过调节TEAD4的表达水平或活性，或者通过协同调节TEAD4和PRMT3的表达水平或活性，或者通过破坏TEAD4与病毒DNA的结合，或者通过干扰TEAD4与P-TEFb(由CCNT1和CDK9蛋白组成)或PRMT3的等宿主蛋白的互作可有效调控病毒的复制。而且通过调控TEAD4的水平或联合调控TEAD4和PRMT3共同抑制病毒复制的效果相比其他的手段更为有效；并且，本发明通过破坏TEAD4与病毒DNA结合或干扰TEAD4与宿主蛋白复合体的互作来控制病毒复制，可有效避免因单纯敲除宿主蛋白所带来的细胞毒性。

附图说明

图1为RT-q-PCR检测TEAD4表达水平的结果图。

图2为下调TEAD4表达水平，检测luciferase激活情况图。

图3为上调TEAD4表达水平，检测luciferase激活情况图。

图4为TEAD4与LTR结合的验证结果图。

图5为TEAD4与PRMT3的转录组学分析，其中A为TEAD4与PRMT3的RNA-Seq数据比较；B、C为TEAD4与PRMT3的生物信息学分析；D为HIV LTR区域的生物信息学。

图6为通过突变TEAD4/PRMT3结合的序列，来抑制Tat激活的HIV-1转录激活结果图。

图7为双敲低TEAD4和PRMT3抑制HIV复制的结果图。

图8为TEAD4和PRMT3协同促进HIV-1转录激活的结果图。

图9为TEAD4与PRMT3蛋白互作结果图。其中A为Myc-TEAD4与PRMT3互作结果；B为Myc-TEAD4与Flag-PRMT3互作结果。

图10为TEAD4与P-TEFb蛋白复合体互作结果图。其中，A为Myc-TEAD4与组成P-TEFb蛋白复合体的CCNT1和CDK9蛋白(内源P-TEFb蛋白)互作结果图；B为Myc-TEAD4与Flag-CCNT1互作结果图。

图11为PRMT3对TEAD4与HIV-1LTR区域结合影响的结果图。

图12为激光共聚焦验证TEAD4与P-TEFb和PRMT3共定位结果图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所有的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实例1shRNA的设计与质粒的构建

通过软件设计靶向TEAD4编码区的两个shRNA序列(shTEAD4-1和shTEAD4-2)，其靶序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

shTEAD4-1，SEQ ID NO.1：CCTTTCTCTCAGCAAACCTAT

shTEAD4-2，SEQ ID NO.2：CCCGGATATTGAGCAGAGTTT

针对shTEAD4-1和shTEAD4-2的靶序列分别设计如SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～6所示的引物序列：

shTEAD4-1-F(SEQ ID NO.3):

CCGGCCTTTCTCTCAGCAAACCTATCTCGAGATAGGTTTGCTGAGAG AAAGGTTTTTG；

shTEAD4-1-R(SEQ ID NO.4):

AATTCAAAAACCTTTCTCTCAGCAAACCTATCTCGAGATAGGTTTGCT GAGAGAAAGG；

shTEAD4-2-F(SEQ ID NO.5):

CCGGCCCGGATATTGAGCAGAGTTTCTCGAGAAACTCTGCTCAATAT CCGGGTTTTTG；

shTEAD4-2-R(SEQ ID NO.6):

AATTCAAAAACCCGGATATTGAGCAGAGTTTCTCGAGAAACTCTGCT CAATATCCGGG

将shTEAD4-1和shTEAD4-2的正、反向的两个引物分别通过退火形成双链DNA，同时将PLKO.1载体使用AgeI和EcoRI双酶切，胶回收纯化切后的载体，然后通过连接酶(16度过夜连接)将双链DNA连接到PLKO.1载体上。次日，大肠杆菌转化质粒，挑单克隆，送测序鉴定得到正确的连接质粒。

实例2下调TEAD4表达可有效抑制HIV转录。

1、实施例1所设计的两个shRNA敲低TEAD4的效果评估

瞬时转染shscramble(对照)、shTEAD4-1质粒、shTEAD4-2质粒到Hela细胞中，48小时后收集细胞并使用试剂盒抽提总RNA，经反转录成cDNA后，通过Realtime q-PCR扩增TEAD4基因来检测实施例1所设计的两个shRNA敲低TEAD4的效果。

结果如图1所示，通过瞬时转染两个靶向TEAD4不同区域的shRNA质粒进入细胞可有效敲低TEAD4表达水平。

2、评价敲低TEAD4对内源性整合在宿主染色体上的HIV-1基因转录的影响

本发明采用NH1细胞体系来衡量敲低TEAD4对HIV-1基因转录的影响。该细胞系中HIV-1LTR启动子被整合在宿主染色体，并且作为luciferase基因的启动子，因此可以通过检测luciferase信号作为报告系统来检测敲低特定蛋白对HIV-1基因转录的效果。具体为：瞬时转染shscramble(对照)、shTEAD4-1质粒、shTEAD4-2质粒到NH1细胞，同时分为加Tat(HIV-1基因转录需要Tat蛋白激活)和不加Tat(作为评价细胞本底基因转录水平)两组。

结果显示，敲低TEAD4并不影响细胞本底基因转录水平，却可以特异性抑制HIV-1基因转录(见图2)。以上结果说明TEAD4为特异性调控HIV-1基因转录的宿主蛋白，该蛋白可作为有效的药物靶点，用于HIV及其他病毒感染疾病的预防、诊断和治疗。

实例3上调TEAD4可激活HIV转录。

在一个12孔板中培养NH1细胞(细胞整合有HIV-1LTR-luciferase片段)，然后瞬时转染PRK5(对照)、Myc-TEAD4到NH1细胞中，并且分为加Tat和不加Tat两组，以验证上调TEAD4可以激活HIV转录。

转染48小时后，用裂解液裂解细胞10分钟，放置-80度冷冻裂解3小时，在10μL的细胞裂解液中加入20μL(过量)的luciferase底物，测定荧光值检测HIV-1基因转录的效果。

结果显示，在加Tat时，上调TEAD4可以明显激活HIV转录，而不加Tat时，加入TEAD4的细胞本底基因转录水平与对照组并无明显差异(图3)。说明上调TEAD4可以激活HIV转录，并且TEAD4的转录激活作用依赖Tat蛋白。

实例4染色体免疫共沉淀验证TEAD4与LTR结合

在1个15cm盘中培养NH1细胞(细胞整合有HIV-1LTR-luciferase片段)，用以评价靶蛋白TEAD4确实可以结合于内源性染色体上的HIV-1LTR。

瞬时转染Myc-TEAD4蛋白入细胞，转染48小时后使用1％无甲醇甲醛固定细胞12min。加入0.125M Glycine反应5min后弃掉上清，使用预冷的PBS洗细胞两遍。每个盘加入2mL含有蛋白酶抑制剂的PBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入含有蛋白酶抑制剂和DTT的SDS裂解液重悬细胞使之均匀。

利用超声仪器打断DNA获得大小在500bp到1000bp之间的DNA；15000rpm离心后，加入Myc抗体孵育过夜后，加入Myc beads(Thermo Fisher)4℃孵育2h；将带有DNA产物的beads用Wash buffer洗涤，再用Elution buffer洗脱；过夜65℃解交联后进行RNA酶和蛋白酶处理，并用PCR片段回收试剂盒纯化DNA；通过q-PCR检测Myc-TEAD4在HIV-1LTR区域的结合情况，结果显示，相对于GADPH区域，TEAD4在LTR的区域有明显结合(见图4，图中P2、P3、P4、P5代表LTR的不同位置)，TEAD4在基因的启动子区结合与文献报道一致。

实例5转录组学分析发现TEAD4与PRMT3存在共调控的基因和保守的调控区

通过比较公开数据库里TEAD4的RNA-Seq数据与我们实验获得的PRMT3敲除后的细胞系RNA-Seq数据，我们发现有42个基因是同时受到TEAD4和PRMT3的控制(图5A)，并且生物信息学分析发现他们共同影响的一个保守的序列是“GGAAT”(图5B&C)。进一步通过生物信息学分析HIV的LTR区域发现，LTR具有2个典型的此类保守序列(图5D)，提示TEAD4和PRMT3通过与LTR中该保守序列结合可以共同调节HIV的基因表达及一小部分宿主基因的表达。

实例6突变TEAD4/PRMT3结合的序列可有效抑制Tat激活的HIV-1转录激活。

为了验证TEAD4和PRMT3可以通过与HIV保守序列互作共同调节HIV的基因表达，设计了两个LTR突变序列Δ13bp LTR和Δ9+7bp LTR。

培养Hela细胞3个12孔板，分为3组，分别瞬时转染WT LTR(HIV-1野生型LTR)，Δ13bp LTR和Δ9+7bp LTR，3组都转染control(对照)，Myc.TEAD4和Flag.PRMT3，并且分为加Tat和不加Tat组，以验证突变LTR可以抑制Tat激活的HIV转录激活。

转染48小时后，用裂解液裂解细胞10分钟，放置-80度冷冻裂解3小时，在10μL的细胞裂解液中加入20μL(过量)的luciferase底物，测定荧光值检测HIV-1基因转录的效果。

结果显示，在Δ9+7bp LTR组中，加Tat情况下，HIV转录激活效应被有效抑制，抑制程度大于不加Tat组。证明TEAD4/PRMT3激活HIV-1的转录是依赖LTR上的9+7区域(图6)。

实例7双敲低TEAD4和PRMT3可进一步抑制HIV复制

培养NH1细胞一个12孔板(细胞整合有HIV-1LTR-luciferase片段)，瞬时转染shscramble(对照)、shTEAD4和shPRMT3入NH1细胞中，并且分为加Tat和不加Tat两组，以验证敲低TEAD4和PRMT3可以抑制HIV复制。

转染48小时后，用裂解液裂解细胞10分钟，放置-80度冷冻裂解3小时，在10μL的细胞裂解液中加入20μL(过量)的luciferase底物，测定荧光值检测HIV-1基因转录的效果。

结果显示，敲低TEAD4和PRMT3可以抑制HIV复制，并且在有Tat存在条件下抑制效果更为明显(图7)。

实例8TEAD4/PRMT3可协同促进HIV-1转录激活。

为了验证TEAD4和PRMT3是否可协同促进HIV-1转录激活，培养NH1细胞一个12孔板，瞬时转染PCDNA3和PRK5(PCDNA3是Flag.PRMT3质粒的空载骨架，PRK5是Myc.TEAD4质粒的空载骨架，1:1组成对照)、Flag.PRMT3+PRK5、Myc.TEAD4+PCDNA3，Flag.PRMT3+Myc.TEAD4入NH1细胞中，并且分为加Tat和不加Tat两组，以验证共同上调TEAD4和PRMT3可以协同促进HIV转录。

转染48小时后，用裂解液裂解细胞10分钟，放置-80度冷冻裂解3小时，在10μL的细胞裂解液中加入20μL(过量)的luciferase底物，测定荧光值检测HIV-1基因转录的效果。

结果表明：在加Tat的条件下，相比单加Flag.PRMT3和单加Myc.TEAD4对HIV-1转录起激活作用，Flag.PRMT3和Myc.TEAD4双加时激活作用更明显，证明TEAD4和PRMT3可协同促进HIV-1转录激活(图8)。

实例9免疫共沉淀明确TEAD4与PRMT3互作

(1)培养293T细胞2个15cm盘，瞬时转染PcDNA3(对照)、Myc-TEAD4入细胞(为了验证Myc-TEAD4与PRMT3是否互作)，转染48小时后使用5mL PBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入1mL含有蛋白酶抑制剂和DTT的预冷全细胞裂解液重悬细胞使之均匀，置于冰上裂解30分钟，过程中多次涡旋使裂解更充分。4℃，14000rpm离心吸取上清，取60μL作为内参，取800μL加入Myc beads(Lablead)4℃孵育过夜。

将带有蛋白产物的beads用High salt wash buffer洗涤一遍，Low salt washbuffer洗涤3遍，用western blot的loading buffer 100℃下洗脱beads。蛋白样品在蛋白电泳凝胶中跑胶，甲醇转膜液中用NC膜转膜，5％的脱脂牛奶室温封闭30分钟，膜分别孵育Myc和PRMT3抗体4℃过夜。

用PBST洗膜3次，加入一抗对应的二抗室温孵育1h，PBST洗膜3次，ECL化学发光液发光，X线片显影检测Myc-TEAD4与PRMT3互作情况。结果显示：相比于对照组，加入Myc-TEAD4在PRMT3蛋白位置有明显的特异性结合(图9A)，证明Myc-TEAD4可以与内源PRMT3蛋白互作。

(2)培养293T细胞2个15cm盘，瞬时转染PcDNA3+Flag-PRMT3(对照)、Myc-TEAD4+Flag-PRMT3入细胞(为了验证Myc-TEAD4与Flag-PRMT3是否互作)，转染48小时后使用5mLPBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入1mL含有蛋白酶抑制剂和DTT的预冷全细胞裂解液重悬细胞使之均匀，置于冰上裂解30分钟，过程中多次涡旋使裂解更充分。4℃，14000rpm离心吸取上清，取60μL作为内参，取800μL加入Myc beads(Lablead)4℃孵育过夜。

将带有蛋白产物的beads用High salt wash buffer洗涤一遍，Low salt washbuffer洗涤3遍，用western blot的loading buffer 100℃下洗脱beads。蛋白样品在蛋白电泳凝胶中跑胶，甲醇转膜液中用NC膜转膜，5％的脱脂牛奶室温封闭30分钟，膜分别孵育Flag和Myc抗体4℃过夜。

用PBST洗膜3次，加入一抗对应的二抗室温孵育1h，PBST洗膜3次，ECL化学发光液发光，X线片显影检测Myc-TEAD4与Flag-PRMT3互作情况，结果显示，相比于对照组，加入Myc-TEAD4在Flag-PRMT3蛋白位置有明显的特异性结合(图9B)，证明Myc-TEAD4可以与Flag-PRMT3蛋白互作。

综合上述两个证明实验可得：TEAD4与PRMT3互作。

实例10免疫共沉淀明确TEAD4与P-TEFb互作

(1)培养293T细胞2个15cm盘，瞬时转染PcDNA3(对照)、Myc-TEAD4入细胞(为了验证Myc-TEAD4与组成P-TEFb蛋白复合体的CCNT1和CDK9蛋白是否互作)，转染48小时后使用5mL PBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入1mL含有蛋白酶抑制剂和DTT的预冷全细胞裂解液重悬细胞使之均匀，置于冰上裂解30分钟，过程中多次涡旋使裂解更充分。4℃，14000rpm离心吸取上清，取60μL作为内参，取800μL加入Myc beads(Lablead)4℃孵育过夜。

将带有蛋白产物的beads用High salt wash buffer洗涤一遍，Low salt washbuffer洗涤3遍，用western blot的loading buffer 100℃下洗脱beads。蛋白样品在蛋白电泳凝胶中跑胶，甲醇转膜液中用NC膜转膜，5％的脱脂牛奶室温封闭30分钟，膜分别孵育Myc、CCNT1和CDK9抗体4℃过夜。

用PBST洗膜3次，加入一抗对应的二抗室温孵育1h，PBST洗膜3次，ECL化学发光液发光，X线片显影检测Myc-TEAD4与CCNT1和CDK9互作情况。结果显示：相比于对照组，加入Myc-TEAD4在CCNT1和CDK9蛋白位置有明显的特异性结合(图10A)，证明Myc-TEAD4可以与内源CCNT1和CDK9蛋白互作，即Myc-TEAD4可以与内源P-TEFb蛋白互作。

(2)培养293T细胞2个15cm盘，瞬时转染PcDNA3+Flag-CCNT1(对照)、Myc-TEAD4+Flag-CCNT1入细胞(为了验证Myc-TEAD4与Flag-CCNT1是否互作)，转染48小时后使用5mLPBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入1mL含有蛋白酶抑制剂和DTT的预冷全细胞裂解液重悬细胞使之均匀，置于冰上裂解30分钟，过程中多次涡旋使裂解更充分。4℃，14000rpm离心吸取上清，取60μL作为内参，取800μL加入Myc beads(Lablead)4℃孵育过夜。

将带有蛋白产物的beads用High salt wash buffer洗涤一遍，Low salt washbuffer洗涤3遍，用western blot的loading buffer 100℃下洗脱beads。蛋白样品在蛋白电泳凝胶中跑胶，甲醇转膜液中用NC膜转膜，5％的脱脂牛奶室温封闭30分钟，膜分别孵育Myc和Flag抗体4℃过夜。

用PBST洗膜3次，加入一抗对应的二抗室温孵育1h，PBST洗膜3次，ECL化学发光液发光，X线片显影检测Myc-TEAD4与Flag-CCNT1互作情况。结果显示，相比于对照组，加入Myc-TEAD4在Flag-CCNT1蛋白位置有明显的特异性结合(图10B)，证明Myc-TEAD4可以与Flag-CCNT1蛋白互作。

综合上述两个证明实验结果可得：TEAD4与P-TEFb蛋白复合体互作。

实例11TEAD4与HIV-1LTR区域的结合需要PRMT3

为了评价PRMT3对TEAD4与HIV-1LTR区域结合的影响，采用KO-PRMT3细胞体系来衡量敲除PRMT3对TEAD4与HIV-1LTR区域结合的影响。该细胞体系是在NH1体系上敲除了PRMT3基因，该细胞系不表达PRMT3蛋白，同时该细胞系也具有NH1细胞系中的HIV-1LTR启动子。

培养NH1细胞和KO-P细胞各1个15cm盘，用以证实PRMT3缺失时TEAD4与HIV-1LTR区域结合减少。具体为：瞬时转染Myc-TEAD4和HA-Tat蛋白入细胞，转染48小时后使用1％无甲醇甲醛固定细胞12min。加入0.125MGlycine反应5min后弃掉上清，使用预冷的PBS洗细胞两遍。每个盘加入2ml含有蛋白酶抑制剂的PBS收集细胞，1600rpm离心收集细胞后加入含有蛋白酶抑制剂和DTT的SDS裂解液重悬细胞使之均匀。

利用超声仪器打断DNA获得大小在500bp到1000bp之间的DNA；15000rpm离心后，加入Myc beads(Lablead)4℃孵育过夜；将带有DNA产物的beads用Wash buffer洗涤，再用Elution buffer洗脱；65℃解交联5h，次日进行RNA酶和蛋白酶处理，RNA酶37℃孵育30分钟，蛋白酶50℃孵育4h，并用PCR片段回收试剂盒纯化DNA；通过q-PCR检测Myc-TEAD4在HIV-1LTR区域的结合情况。

结果显示：相比于NH1细胞中TEAD4与LTR的结合水平，KO-PRMT3后TEAD4与LTR结合水平明显下降，证明TEAD4与HIV-1LTR区域的结合需要PRMT3(图11，图中P2、P3、P4、P5代表LTR的不同位置)。

实例12激光共聚焦验证TEAD4与P-TEFb和PRMT3共定位

在24孔板中加入玻璃细胞爬片，培养293T细胞，分别瞬时转染Myc-TEAD4，HA-PRMT3，Flag-CCNT1-EGFP，HA-PRMT3+Myc-TEAD4，HA-PRMT3+Flag-CCNT1-EGFP，HA-PRMT3+Myc-TEAD4+Flag-CCNT1-EGFP(验证三种蛋白在细胞内的定位，EGFP蛋白激光下发出绿色荧光)。转染48小时后用PBS洗爬片3次，4％的多聚甲醛避光固定爬片15分钟，PBS洗3次，PBS配制的0.2％TritonX-100室温下避光通透20分钟，PBST(TritonX)洗爬片3次，加入3％BSA室温封闭30分钟，分别加入对应的HA，Myc，Flag抗体4℃孵育过夜。

PBST洗爬片3次，加入对应的荧光二抗避光室温孵育1h，PBST洗爬片3次，加入DAPI复染核避光孵育5分钟，PBST洗3次。在载玻片上滴适量封片剂，吸水纸吸净爬片上多余PBST，从孔板中取出爬片，倒置于封片剂上固定。应用激光共聚焦显微镜显示不同荧光颜色的蛋白在细胞内的定位情况。

通过免疫荧光可以看到TEAD4和CCNT1蛋白主要位于核内，位置高度重合，单转PRMT3蛋白主要位于胞质，当PRMT3与TEAD4和CCNT1共转染时，PRMT3向胞核转移，位置与TEAD4和CCNT1蛋白位置重合，证明TEAD4与P-TEFb和PRMT3共定位，并且提示TEAD4与P-TEFb存在时，吸引PRMT3进入核内互作(图12)。

需要说明的是：由于HIV病毒的基因编码较为简单，常被作为病毒研究的模型，本发明上述实施例所得结论也适用于其他病毒。

综合以上可得：TEAD4具有控制病毒复制的作用，其可作为有效的药物靶点，用于HIV及其他病毒感染疾病的预防、诊断和治疗。同时也证明通过协同调控TEAD4和PRMT3的表达水平或活性，或破坏TEAD4与病毒DNA的结合，或破坏TEAD4和PRMT3与病毒DNA的结合，或者通过干扰TEAD4与PRMT3和/或P-TEFb的互作，均可以显现出控制病毒复制的效果，用于HIV及其他病毒感染疾病的预防、诊断和治疗。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。