用于稳定与拔下的人毛发一起使用的比色分析的方法

相关申请的交叉引用

本专利申请涉及并要求于2022年5月17日提交的第63/364,837号美国临时专利申请的优先权的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本申请涉及使用适用于该目的的装置用拔下的人毛发进行比色分析的设备。还公开了用于使比色化学分析稳定，使得其可以被运输并用作用于使用拔下的人毛发进行比色化学分析的家用装置的方法。

背景技术

即时护理(point-of-care)(POC)诊断装置通常被用于分析不同的人健康或疾病状态的生物标志物。例如，妊娠试验是报告尿液中人绒毛膜促性腺激素(hCG)的β亚基的存在的侧流POC。hCG是由受精卵的滋养层细胞产生的生物标志物。因此，尿液中hCG的存在可以通过在装置中产生可见的颜色或变化的化学反应报告给装置的使用者，指示使用者怀孕。目前许多不同的POC装置是可用的，通常使用体液作为底物(例如，血液、尿液或唾液)。每种装置具有类似的特征：它们通常是便携式的、手持式的并且由塑料制成。大多数POC仅可以使用一次并且被认为是一次性的。

目前，存在用于测量拔下的人毛囊中的生物标志物磺基转移酶1A1(SULT 1A1)的基于实验室的测试(参见美国专利10,633,688和8,691,518)。该方法包括使用将随时间(通常几天或几周)自发地显色的化学组合物。通过冷藏测试溶液可以减缓该自发反应。在SULT1A1酶的存在下，反应速率增加(催化)，并且在短得多的时间(几小时)内产生颜色。以这样的方式设置该测试，使得在给定量的时间(例如，24小时)内产生的颜色的量指示毛囊中存在的SULT 1A1酶的量。

SULT 1A1是催化磺基从供体分子转移至受体醇的酶。该酶具有广泛的人体组织分布，包括肝脏和毛囊的外根鞘(ORS)。磺化能力的个体间变化在确定个体对某些生物异源物质的代谢中是重要的。米诺地尔是一种需要磺化以具有功效的药物。个体的ORS的磺化能力可用于排除用于治疗雄激素性脱发的5％米诺地尔的无响应者。

发明内容

本文描述了包括用于测量包含在一根或多根拔下的人毛发中的SULT 1A1生物标志物的即时护理装置的实施方案。装置的化学物质以这样的方式被布置成两部分，使得其不会自发地反应。因此，所描述的装置具有增加的稳定性并且可以在室温下储存。所描述的装置可以用于测量一根或多根拔下的人毛发中的磺基转移酶活性，以预测药物米诺地尔用于治疗雄激素性脱发的有效性。

在本发明的一个实施方案中，制备两部分化学组合物，使得反应剂被隔离和稳定化。在一个实施方案中，反应剂是对硝基苯基硫酸钾(PNPS)。在一个实施方案中，两部分化学组合物的一个部分(部分A)通过将PNPS添加到稳定化溶液中来制备。在一个实施方案中，使用含有pH 9至pH 11缓冲剂的水溶液以使PNPS稳定。在一个实施方案中，缓冲剂是含有碳酸氢钠和碳酸钠的碳酸盐缓冲液(pH 10)。在本发明的另一个实施方案中，使用非质子极性溶剂使PNPS溶液稳定。在又另一个实施方案中，非质子极性溶剂是乙腈。在另一个实施方案中，使用质子非水性溶剂使PNPS稳定。在另一个实施方案中，质子非水性溶剂是异丙醇或乙醇。

在本发明的一个实施方案中，将两部分化学组合物的一个部分(部分A)沉积在反应容器中。在另一个实施方案中，将溶剂去除，仅留下部分A的稳定化的溶质。在另一个实施方案中，通过风干和真空去除溶剂。在又另一个实施方案中，使用台式浓缩器(例如，speedvac)从稳定化的部分A溶液中去除溶剂。在又另一个实施方案中，使用冻干法去除溶剂。

在本发明的一个实施方案中，使50mM PNPS溶液在10mM碳酸盐缓冲液(pH 10)中稳定化。在又另一个实施方案中，将10μL在10mM碳酸盐缓冲液(pH 10)中稳定化的50mM PNPS溶液添加到反应容器(例如，500μL管)中，并在真空下使水蒸发。在另一个实施方案中，使用台式浓缩器(speedvac)从稳定化的PNPS溶液中去除水。

在本发明的一个实施方案中，两部分化学组合物的第二部分(部分B)通过将所有非反应性成分添加到溶液中来制备。在一个实施方案中，两部分化学组合物的第二部分含有50mM磷酸盐缓冲液(pH 8)、100μM米诺地尔和5mM MgCl

在本发明的一个实施方案中，制备含有两部分化学组合物的部分A和部分B的试剂盒。在另一个实施方案中，将部分A和部分B组分组合以制备功能装置。在又另一个实施方案中，将通过组合部分A和部分B组分所产生的功能装置用于测试酶的存在。在又另一个实施方案中，酶是SULT1A1。

在一个实施方案中，可以将如以上所描述的装置用于预测性评价个体对药物米诺地尔有利地响应的可能性。米诺地尔需要通过米诺地尔磺基转移酶进行生物化学活化，以形成活性米诺地尔硫酸盐代谢物。基于米诺地尔治疗雄激素性脱发的确切作用机制尚未被完全了解。然而，体外研究已经证明米诺地尔硫酸盐是米诺地尔的活性代谢物。对米诺地尔治疗雄激素性脱发的响应与头皮磺基转移酶活性，特别是磺基转移酶1A1(SULT 1A1)的差异有关。因此，具有高水平的SULT 1A1活性的受试者将产生更多的米诺地尔硫酸盐，并且因此将可能对米诺地尔治疗雄激素性脱发具有良好的响应。另一方面，具有低水平的SULT1A1活性的受试者将不会产生太多的米诺地尔硫酸盐，并且将可能对米诺地尔治疗雄激素性脱发具有差的响应。

根据本文所述的一种方法，可以获得受试者的毛囊样品。优选地，可以获得至少两个毛囊，使得如果仅分析一个毛囊，则如果需要的话将存在至少一个备用毛囊。在本发明的一个实施方案中，将一根毛发添加到通过将两部分化学物质的部分A和部分B组分组合而产生的功能装置中。在又另一个实施方案中，添加两个毛囊。在又另一个实施方案中，将至少3个毛囊添加到功能装置中。

在一个实施方案中，该反应可以在除了本文具体描述的容器以外的容器中进行。例如，它可以是具有盖子或其他开口的透明容器，毛囊样品可以插入其中。在一个非限制性实例中，分析容器中液体的总量可以是约0.1ml。

作为以上反应的一部分，应理解，在米诺地尔磺基转移酶活性的存在下，对硝基苯基硫酸盐被转化为比色对硝基苯酚。

在一个实施方案中，可以将反应混合并且然后在室温下温育大约4至24小时，这取决于分析中所使用的毛囊的数目。混合可以通过本领域中已知的任何混合手段进行，包括摇动容器。在一个实施方案中，更大数目的毛囊可能需要更短的温育时间。在一个实施方案中，使用一个毛囊的分析可以温育大约24小时。在另一个实施方案中，使用两个毛囊的分析可以温育大约16小时。

温育之后，用分光光度计在约405nm处读取对硝基苯酚的吸光度。吸光度可以解释如下：(a)小于0.4吸光度单位(AU)的吸光度意味着米诺地尔将不太可能起作用；(b)等于0.4AU的吸光度意味着模棱两可的测试；或(c)大于0.4AU的吸光度意味着米诺地尔可以起作用。供选择地，可以将对硝基苯酚的颜色强度与具有对应于SULT 1A1活性的强度范围的参考色卡进行比较。具有相对高水平的磺基转移酶活性的受试者将会具有相对强的比色读数，导致相对显著的颜色变化。相比之下，具有相对低水平的磺基转移酶活性的患者将会具有相对弱的比色读数，并且相应地，具有相对最小的颜色变化。预期具有强比色分析响应的患者会响应于用于毛发再生长或保持的米诺地尔。然而，预期具有弱比色分析响应的患者会对米诺地尔具有差的响应。

附图说明

本发明的以上和其他目的、方面、特征、优点以及可能的应用将从结合以下附图所呈现的以下更具体的描述变得更加显而易见。

图1示出了可以用于用拔下的人毛发进行比色分析的示例性试剂盒。

图2是示例性两部分化学组合物的部分A和部分B组分的示例性示意图。

图3是分析的示例性反应方案。

具体实施方式

本文在用于测量来自拔下的人毛发的生物标志物的即时护理诊断装置的上下文中描述了实施例。以下描述仅是说明性的并且不旨在以任何方式进行限制。受益于本申请的那些技术人员将容易地想到其他实施方案。现在将详细参考示例性实施方案的实施。

为了清楚起见，未示出和描述本文所描述的实施方式的所有常规特征。在任何这样的实际的实施方式的开发中，为了实现开发者的特定目标，诸如符合与应用和商业相关的约束，必须做出许多特定于实施方式的决定，并且这些特定目标将从一种实施方式到另一种实施方式以及从一个开发者到另一个开发者而变化。此外，尽管这种开发努力可能是复杂且耗时的，但是对于受益于本申请的本领域普通技术人员而言将会是常规的工程任务。

术语“示例性的”在本文中仅用于意指“充当实例、示例或说明”。本文描述为“示例性的”的任何实施方案不必被解释为优选于或有利于其他实施方案。

参考图1-3，实施方案涉及用于测量毛囊中磺基转移酶活性的试剂盒100。试剂盒100可以包括容器102和反应容器104。试剂盒100可以包括作为单独部件的容器102和反应容器104。例如，试剂盒100可以包括作为一个单元的容器102和作为单独且不同单元的反应容器104。在替代方案中，试剂盒100可以包括作为单个部件的一部分的容器102和反应容器104。例如，试剂盒100可以包括壳体或其他结构，所述其他结构包括作为单个单元的容器102和反应容器104。试剂盒100可以包括任何数目的容器102和/或反应容器104。可以存在用于一个或多个反应容器104的一个容器102、用于每个单独的反应容器104的单独的容器102等。如本文将解释的，容器102的内容物将被引入反应容器104中。这可以通过将容器102的内容物倒入反应容器104中，允许(例如，重力进料、渗透运动、毛细管作用运动等)内容物经由导管103从容器102流动到反应容器104，迫使(例如，经由泵、非平衡动力学运动等)内容物经由导管103从容器102流动到反应容器104等来实现。导管103可以是例如包括容器102和反应容器104的流动管或流动路径(如果容器103和反应容器104是单个单元，则其可以在壳体或其他结构中形成)。导管103可以被配置成将容器102放置成与反应容器104流体连通。一些实施方案可以包括致动器106(例如，阀、电磁阀等)以控制内容物从容器102到反应容器104的流动。致动器106可以包括处理器、控制模块、开关等，其被配置成控制泵、阀等的方面。致动器106可以是机械式操作的、机电式操作的等。试剂盒100的其他方面可以包括膜、过滤器、垫片、开关、计时器等，以促进内容物的适当控制和流动、流速和量的控制、流动开始和停止时间的控制等。因此，试剂盒100可以被配置成使得容器102经由致动器106与反应容器104选择性流体连通，使得反应性部分108的内容物和非反应性部分110的内容物在致动器106致动时被引入反应容器104中。应当理解，对于给定的试剂盒100，可以存在一个或多个致动器106。

容器102可以被配置成容纳两部分化学组合物。两部分化学组合物可以具有反应性部分108和非反应性部分110。例如，容器102可以是具有形成反应腔和非反应腔的分叉结构109的容器(例如，瓶、器皿、罐、烧瓶等)，每个腔被配置成容纳和保留内容物(例如，化学组合物)。预期每个部分108、110的内容物是流体。分叉结构109可以是被配置成物理地和/或化学地分开反应性部分108的内容物和非反应性部分110的内容物的壁。容器102的材料可以将反应性部分108的内容物与非反应性部分110和容器102外部的环境物理地和/或化学地隔离–例如，防止可渗透运动、防止光进入、防止各自的内容物混合等。容器102的材料可以将非反应性部分110的内容物与反应性部分108和容器102外部的环境物理地和/或化学地隔离–例如，防止可渗透运动、防止光进入、防止各自的内容物混合等。

容器102和反应容器104可以各自包括入口112和出口114以有助于内容物的进出。容器102可以具有用于每个部分108、110的单独的入口112，用于每个部分108、110的单独的出口114等。在一些实施例中，入口112充当入口112和出口114两者。反应容器104可以具有入口112和出口114，或者其入口112可以充当入口和出口114两者。容器102或反应容器104的入口112或出口114中的任一者可以具有盖子109或塞子以选择性地覆盖入口112或出口114。对于其中容器102与反应容器104分开的实施方案，使用者可以用他们的手来操纵容器102，并且将内容物从每个部分108、110经由出口114倒入反应容器104的入口112。另外地或在替代方案中，转移装置，诸如液滴移液管(pipette droplet)，可以用于转移内容物–例如，使用者可以将移液管引入容器102的出口114，以恢复内容物的体积并将内容物分配到反应容器104的入口112。另外，具有导管103管线(延伸至入口112和出口114以及从入口112和出口114延伸)的泵可以用于将内容物从容器102转移到反应容器104。对于其中容器102是与反应容器104相同的单元的一部分的实施方案，致动器106可以被致动以引起/允许内容物从容器102的出口114流动到反应容器104的入口112。

预期反应性部分108的内容物不与非反应性部分110的内容物混合或组合，直到各自的内容物被引入反应容器104中。因此，内容物转移的方法，导管103、转移装置、阀、致动器106等的布置和配置可以使得在将内容物引入反应容器104之前不发生内容物的混合或组合。

反应容器104可以被配置成用于组合或混合反应性部分108的内容物和非反应性部分110的内容物。例如，反应容器104可以是具有腔的容器，当内容物被允许/被迫使从容器102流动到反应容器104时，该腔接收容器102的内容物。该腔允许组合或混合反应性部分108的内容物与非反应性部分110的内容物。这可以经由在内容物进入反应容器104时的自由混合、被迫混合、其他形式的搅拌等。

预期反应性部分108的内容物包括对硝基苯基硫酸钾。反应性部分108的内容物还可以包括稳定化溶液。稳定化溶液使对硝基苯基硫酸钾稳定以形成稳定化的对硝基苯基硫酸钾。需要氢以将对硝基苯基硫酸钾(PNPS)转化为对硝基苯基钾(PNP)和SO

预期非反应性部分110的内容物包括米诺地尔、氯化镁和磷酸盐缓冲液。SULT1A1酶促反应在约pH 8下被优化，并且因此磷酸盐缓冲液可以具有约8的pH。

反应容器104可以包括被配置成接收至少一个毛囊的开口116。在一些情况下，该开口116可以与反应容器104的入口相同。反应容器104可以被配置成接收毛囊的至少一部分(例如，毛囊的仅一部分被插入反应容器104内)或整个毛囊(例如，整个毛囊被插入反应容器104内)。预期将毛囊放置成与内容物的混合物或组合(反应性部分108的内容物与非反应性部分的内容物的混合物或组合)接触。这可以包括使得与混合物或组合接触、浸没在混合物或组合的浴内等。反应容器104可以被配置成可以经由一个开口116或经由多个开口116接收多于一个毛囊。

实施方案可以涉及用于确定米诺地尔制剂在需要毛发再生或保持的受试者中是否有效的方法。该方法可以包括将两部分化学组合物的反应性部分108的内容物与非反应性部分110的内容物组合或混合，以形成混合物或组合。反应性部分的内容物可以包括对硝基苯基硫酸钾。反应性部分108的内容物还可以包括稳定化溶液。稳定化溶液使对硝基苯基硫酸钾稳定以形成稳定化的对硝基苯基硫酸钾。稳定化溶液可以是包含水溶液和缓冲剂、非质子极性溶剂或质子非水性溶剂的溶剂。预期使用纯溶剂用于非质子极性或质子非水性溶剂。对于基于水的溶液，预期使用50mM碳酸盐缓冲液。范围可以是10至100mM和100mM至1M缓冲液；然而，可能使PNPS稳定的最低量是优选的。内容物可以包括稳定化的对硝基苯基硫酸钾，其中溶剂被去除以便仅留下稳定化的溶质。溶剂可以经由风干、真空(例如，使用台式浓缩器、冻干法等)被去除(例如，被去除90％-100％)。例如，可以使内容物在真空(例如，20至0.1托)下经受20分钟的风干。

非反应性部分的内容物可以包括米诺地尔、氯化镁和磷酸盐缓冲液。

该方法可以包括将来自受试者的毛囊放置成与混合物或组合接触。该方法可以包括将毛囊与混合物或组合混合和/或温育。混合可以包括搅拌，使用磁力混合器、摇动、其他形式的搅动等。混合和/或温育可以包括混合和/或温育一段时间，这取决于被放置成与混合物或组合接触的毛囊的数目。例如，预期用于给定实施方式的毛囊越多，需要的混合和/或温育越少。例如，对于2个毛囊，温育时间可以是24小时，对于4个毛囊，培养时间可以是12小时等。反应容器104中所使用的内容物的体积还可以取决于被放置成与混合物或组合接触的毛囊的数目。例如，使用100uL的反应体积的温育时间将会是如果使用50uL的反应体积的温育时间的两倍。

对硝基苯酚产物的存在与毛囊的磺基转移酶酶活性正相关，并且因此该方法可以包括测量混合物或组合内对硝基苯酚产物的存在。该方法可以包括将所测量的对硝基苯酚产物的存在与预定水平进行比较。预定水平可以是用作受试者将会对米诺地尔治疗具有良好响应的指示的阈值水平。例如，大于预定水平的对硝基苯酚产物的存在可以指示磺基转移酶酶活性的水平，所述水平显示受试者将会对米诺地尔治疗具有良好的响应。小于预定水平的对硝基苯酚产物的存在可以指示磺基转移酶酶活性的水平，所述水平显示受试者将不会对米诺地尔治疗具有良好的响应。

在米诺地尔磺基转移酶活性的存在下，对硝基苯基硫酸盐被转化为比色对硝基苯酚。因此，测量对硝基苯酚产物的存在可以包括使用分光光度计118(例如，具有用于收集通过溶液的光的电磁发射的传感器和用于解析或量化所收集的电磁发射的处理器的光谱仪)测量对硝基苯酚产物在约400nm-410nm(优选地405nm)处的吸光度。在示例性实施方案中，吸光度可以解释如下：(a)小于0.4AU的吸光度可以指示米诺地尔将不太可能起作用；(b)等于0.4AU的吸光度可以指示模棱两可的测试；或(c)大于0.4AU的吸光度可以指示米诺地尔可以起作用。

另外地或在替代方案中，测量对硝基苯酚产物的存在可以包括将对硝基苯酚产物的颜色强度与具有对应于磺基转移酶酶活性的强度范围的颜色强度参考卡进行比较。例如，可以将对硝基苯酚的颜色强度与具有对应于SULT1A1活性的强度范围的参考色卡进行比较。具有相对高水平的磺基转移酶活性的受试者将会具有相对强的比色读数，导致相对显著的颜色变化(由于任何对硝基苯基硫酸盐转化为比色对硝基苯酚引起的混合物的颜色变化)。相比之下，具有相对低水平的磺基转移酶活性的受试者将会具有相对弱的比色读数(由于任何对硝基苯基硫酸盐转化为比色对硝基苯酚引起的混合物的颜色变化)，并且相应地具有相对最小的颜色变化。预期具有强比色分析响应的受试者将会响应于用于毛发再生长或保持的米诺地尔。然而，预期具有弱比色分析响应的受试者将会对米诺地尔具有差的响应。颜色强度参考卡可以是基于来自先前测试的数据预先制作的实体卡或虚拟卡(例如，计算机图形用户界面)。比色读数与颜色强度参考卡的比较可以通过人目视检查、通过计算机算法检查等进行。

因此，如果毛囊含有SULT1A1(或足够量的SULT1A1)，则对硝基苯基硫酸盐被转化为比色对硝基苯酚(或足够量的对硝基苯基硫酸盐被转化为比色对硝基苯酚)，以便指示磺基转移酶酶活性的足够水平，其可以用作受试者将会对米诺地尔治疗具有良好响应的预测因素。

尽管已经示出和描述了实施方案和应用，但是对于受益于本申请的本领域技术人员而言将会显而易见的是，在不背离本文所公开的发明构思的情况下，可以进行比以上所提及的更多的修改。因此，除了所附权利要求的精神之外，本发明不受限制。

实施例1：米诺地尔响应测试(MRT)，两部分化学制剂

实施例程序使用以下试剂：磷酸钠缓冲液(500mM)、碳酸钠、碳酸氢钠、对硝基苯基硫酸钾、米诺地尔、MgCl

实施例程序用于产生1000个单位的MRT反应。制备PNPS沉积的样品管(部分A)，以及重构溶液(溶液B)。通过将100μL的溶液B添加到PNPS沉积的样品管(部分A)中产生单个MRT反应单元。

制备程序

1.0溶液1：PNPS缓冲液10mM(pH 10)

表1–PNPS缓冲液10mM(pH 10)制备

根据表中所指示的计算量如下配制溶液：将纯水添加到适当大小的容器中，添加碳酸氢钠和碳酸钠并在磁力搅拌板上混合直至溶解。

测量最终溶液的pH(pH 10)。

2.0溶液2：对硝基苯基硫酸钾(PNPS)50mM(pH 10)

表2–对硝基苯基硫酸钾(PNPS)50mM(pH 10)制备

根据表中所指示的计算量如下配制溶液：将PNPS缓冲液添加到适当大小的容器中，添加对硝基苯基硫酸钾并在磁力搅拌板上混合直至溶解。

3.0溶液3–100mM米诺地尔储备溶液

表3–100mM米诺地尔储备溶液制备

根据表中所指示的计算量如下配制溶液：将甲醇添加到适当大小的容器中，添加米诺地尔并在磁力搅拌板上混合直至溶解。

储备溶液在约-20℃下储存最长达1年。

4.0PNP沉积的管(部分A)

表4–溶液2计算

步骤4.0中的材料包括：溶液2(PNPS 50mM，pH 10)和样品管(500μL)。

进行以下步骤：(1)将10μL的溶液2添加到MRT样品管中，(2)将开口管置于speedvac中并在真空下风干，同时旋转直至所有液体已蒸发(大约20min)，以及(3)在环境温度下储存。

所有体积应当在规格的5％内。应当确定所使用的每个仪器(speedvac)蒸发液体所需的最短时间。过度干燥会降低部分A的稳定性。

5.0溶液B

步骤5.0中的材料包括：500mM磷酸盐缓冲液，pH 8.0；1M氯化镁溶液；100mM米诺地尔储备溶液和水。

表5–溶液B制备

根据表中所指示的计算量配制溶液，然后在磁力搅拌板上混合直至均匀。

所有体积应当在规格的5％内。所有重量应当在规格的5％内。pH应为8±0.5。

实施例2：加速稳定性方案

测试组分

制备两(2)个验证批次(批号)的对硝基苯基硫酸钾(PNPS)沉积的管并在升高的温度下储存。每个批号总共含有二十四(24)个PNPS沉积的管。在加速稳定性研究的过程期间，将从升高的温度取出每个批号的3个样品，并用两部分化学物质的第二部分(溶液B)重构。重构24h之后，目视检查样品呈黄色。

模型的合理性说明

使测试装置经受极端温度条件旨在模拟产品随时间的降解，但速率加快。使用阿伦尼乌斯方程，保存寿命数据可以外推作为产品性能的预测测量值。阿伦尼乌斯方程将化学反应速率(k)与绝对温度(T)关联起来：

d(Ink)/dT＝ΔE

其中E

表6-用于米诺地尔敏感性分析的阿伦尼乌斯模型

在20千卡下，使用阿伦尼乌斯模型，如果在50℃下56.2天、或在40℃下112.3天之后满足规格，则测试试剂在理论上将会持续1年具有令人满意的性能。

注释：在50℃条件对于测试样品而言太极端的情况下，40℃样品作为应急措施运行。在测试样品在50℃下保持稳定56.2天的情况下，终止40℃实验。

假定储存条件

当在50℃和40℃下储存时，评价PNPS沉积的管的性能。所有储存位置均符合应用生物学QSR，以确保在研究期间满足适当的温度范围。

测试的目标和目的

在50℃和40℃下的稳定性测试的目的是生成数据以确定产品的保存寿命。数据用作最终产品形式的稳定性的预测因素。

测试试剂盒储存条件

将试剂盒(试剂)储存在50℃和40℃(对于所有温度均±2℃)下。

分析之间的间隔

表7–米诺地尔敏感性分析加速稳定性研究

如表7中所描述的，对储存在50℃±2℃和40℃±2℃下的米诺地尔敏感性分析试剂进行加速稳定性。一式三份地测试试剂。如果测试日落在周末或假日，则测试点被取消(取决于测试间隔)或在计划时间后的第一个工作日测试。

稳定性标准

加速稳定性研究最初必须通过表8中详述的接受目标。

表8–米诺地尔敏感性分析特异性释放测试和稳定性规格

注释：

(1)在用溶液B重构之后24小时评估结果。

(2)试剂对于在50℃下56.2天或在40℃下112.3天必须符合以下规格(#4)，以得到预计的在23℃下12个月的保存寿命。

(3)在特定温度下的失效可能不是保存寿命的指示，因为更高的温度可能不利地影响溶液化学。因此，在50℃下处理时可能不会预计到1年的保存寿命，而在40℃下处理时可以预计到1年的保存寿命。

(4)当在两(2)个连续测试时间点上观察到失效时，时间点被视为失效。失效时间可以从第一时间点失效的时间推迟。如果存在无效的测试结果，则可以重新测试一次测试以确认结果。也可以重新测试一次失效以确认结果。如果在重新测试时，失效未被确认，则可以运行另外的测试以评估时间点的状态。

附表A

注释：

应当一式三份地评价样品。

如果测试日落在周末或假日，则测试点被取消(取决于测试间隔)或在计划时间后的第一个工作日测试。

1年预计稳定性：50℃＝56.2天，40℃＝112.3天

结果

表X–制剂(pH 7.5-9.5)的加速稳定性报告

制剂G2(pH 7.5-9.5)

表Y–制剂(pH 9.5-10.5)的加速稳定性报告

实施例3：重构的部分A和部分B的功能测试

使来自实施例2的被认为稳定的样品，即，在24h的重构之后保持澄清的那些样品，与两个人毛囊反应以测试重构的化学物质是否具有功能。

规格

结果

表X–制剂(pH 7.5-9.5)的加速稳定性报告

制剂G2(pH 7.5-9.5)

表Y–制剂(pH 9.5-10.5)的加速稳定性报告