用于治疗淋巴瘤的EZH2抑制剂

本申请是2015年6月17日递交的申请号为201580036258.X，发明名称为“用于治疗淋巴瘤的EZH2抑制剂”的分案申请。

相关申请

本申请要求2014年6月17日提交的美国专利申请号62/013,522；和2014年8月12日提交的美国专利申请号62/036,265的权益和优先权。这些申请中每个的内容通过引用以其整体而特此并入。

背景技术

已经将EZH2(一种组蛋白甲基转移酶)与各种癌症相联系。具体地说，在一系列癌症(诸如淋巴瘤、白血病和乳腺癌)中发现了EZH2的突变和/或过度活性。持续需要作为用于在抗癌治疗中使用的EZH2抑制剂的新药剂。

发明内容

在一个方面，本披露的特征在于用于治疗或预防对其有需要的受试者的非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法。该方法包括向所述受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂。

该方法可以包括一个或多个以下特征。

在一个实施例中，NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、生发中心来源的淋巴瘤、非生发中心来源的淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、原发性纵膈大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、伯基特淋巴瘤和其他非霍奇金淋巴瘤亚型。

在一个实施例中，NHL为生发中心来源的淋巴瘤。

在一个实施例中，NHL为非生发中心来源的淋巴瘤。

在一个实施例中，NHL为滤泡性淋巴瘤。

在一个实施例中，NHL为PMBCL。

在一个实施例中，NHL为边缘区淋巴瘤。

在一个实施例中，NHL为伯基特淋巴瘤。

在一个实施例中，NHL为其他非霍奇金淋巴瘤亚型。

在一个实施例中，NHL为EZH2野生型B细胞淋巴瘤，例如，具有非突变的野生型EZH2蛋白的NHL细胞。

在一个实施例中，NHL为EZH2突变型B细胞淋巴瘤，例如，具有突变型EZH2蛋白的NHL细胞。

在某些实施例中，非生发中心来源的淋巴瘤为活化B细胞(ABC)淋巴瘤。

在一个实施例中，非生发中心B细胞淋巴瘤为EZH2野生型B细胞淋巴瘤，例如，具有非突变的野生型EZH2蛋白的淋巴瘤细胞。

在另一个实施例中，非生发中心B细胞淋巴瘤为EZH2突变型B细胞淋巴瘤，例如，具有突变型EZH2蛋白的淋巴瘤细胞。

在一个实施例中，生发中心来源的淋巴瘤为EZH2野生型B细胞淋巴瘤，例如，具有非突变的野生型EZH2蛋白的淋巴瘤细胞。

在另一个实施例中，生发中心来源的淋巴瘤为EZH2突变型B细胞淋巴瘤，例如，具有突变型EZH2蛋白的淋巴瘤细胞。

在一个实施例中，滤泡性淋巴瘤(FL)、原发性纵膈大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)为EZH2野生型生发中心B细胞淋巴瘤，例如，具有非突变的野生型EZH2蛋白的生发中心B细胞淋巴瘤细胞。

在另一个实施例中，滤泡性淋巴瘤(FL)、原发性纵膈大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)为EZH2突变型生发中心B细胞淋巴瘤，例如，具有突变型EZH2蛋白的生发中心B细胞淋巴瘤细胞。

在一个实施例中，口服给予EZH2抑制剂。

在一个实施例中，受试者是人。

在一个实施例中，EZH2抑制剂为具有以下化学式的EPZ-6438(他折司他(tazemetostat))：

或其药学上可接受的盐。

在一个实施例中，以每日大约100mg至大约3200mg的剂量向受试者给予EZH2抑制剂。

在一个实施例中，以大约100mg BID至大约1600mg BID的剂量向受试者给予EZH2抑制剂。

在一个实施例中，以大约100mg BID、200mg BID、400mg BID、800mg BID或1600mgBID的剂量向受试者给予EZH2抑制剂。

在一个实施例中，EZH2抑制剂为化合物(A)、(B)、(C)或(D)：

任何以上方面和实施例都可以与任何其他方面或实施例组合。

除非另外限定，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在本说明书中，除非上下文另外明确规定，否则单数形式也包括复数。尽管可以在本发明的实践或测试中使用类似于或等效于本文所述的方法和材料的方法和材料，但适合的方法和材料描述如下。本文提及的所有公开、专利申请、专利以及其他参考文献通过引用结合。不承认本文所引用的参考文献是所要求的发明的现有技术。在发生冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。另外，材料、方法以及实例仅仅是说明性的并不意在是限制性的。

本发明的其他特征和优点从以下详细说明和权利要求书将是清楚的。

附图说明

当结合附图时，从以下详细说明将更清楚地理解以上和其他特征。

图1示出了用他折司他(EPZ-6438)进行的首次人体内1期试验E7438-G000-001(NCT01897571)的概述。

图2示出了患者肿瘤类型。

图3示出了NHL患者人口统计数据。

图4示出了他折司他(EPZ-6438)的药代动力学。

图5示出了替代组织中的PK-PD：EZH2抑制。

图6示出了试验的不良事件。

图7示出了NHL患者中的总体最佳反应。

图8示出了靶病变活性。

图9示出了原发性纵膈B细胞淋巴瘤中的CR(完全反应)。

图10示出了具有野生型EZH2的滤泡性淋巴瘤中的CR。

图11示出了具有突变型EZH2淋巴瘤(Y646H)的DLBCL中的反应。

具体实施方式

EZH2为组蛋白甲基转移酶，它是PRC2复合物的催化亚基，PRC2复合物催化组蛋白H3上的赖氨酸27(H3-K27)的单至三甲基化。组蛋白H3-K27三甲基化是抑制接近组蛋白修饰位点的特定基因的转录的机制。已知这种三甲基化是癌症(如前列腺癌)中表达改变的癌症标记物(参见例如，美国专利申请公开号2003/0175736；通过引用以其整体并入本文)。其他研究为EZH2表达调节异常、转录抑制和致瘤性转化间的功能联系提供了证据。瓦拉姆巴利(Varambally)等人(2002)自然(Nature)419(6907):624-9科利尔(Kleer)等人(2003)美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)100(20):11606-11。

EZH2甲基化活性在生发中心B细胞的调节和活化中起重要作用。EZH2蛋白水平在B细胞活化后增加。活化后，B细胞寄居在淋巴器官的生发中心，在其中发生体细胞高频突变，一个与抗凋亡基因和检查点调节子的抑制相关的过程。EZH2甲基化事件靶向参与B细胞增殖、分化和成熟的基因，包括CDKN1A(在细胞增殖中起作用)、PRDM1(在B细胞分化中起作用)和IRF4(在B细胞分化中起作用)。

B细胞成熟并离开生发中心后，B细胞内的EZH2水平降低。然而，B细胞成熟后的EZH2存在和活性与几种淋巴瘤相关，包括生发中心B细胞淋巴瘤等等。

EZH2的异常活化或失调见于非霍奇金淋巴瘤(NHL)的许多常见亚型：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB DLBCL)、非生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(包括活化B细胞淋巴瘤(ABC DLBCL))、伯基特淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤的其他亚型。EZH2的异常活化或失调还见于滤泡性淋巴瘤(FL)、原发性纵膈大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。

EZH2基因内的遗传改变与组蛋白甲基化模式改变相关。导致氨基酸Y641(相当于Y646，催化结构域)转化为F、N、H、S或C的EZH2突变引起H3K27的超三甲基化并驱使淋巴瘤形成。影响H3K27甲基化的另外的遗传改变包括EZH2 SET-结构域突变、EZH2过表达、其他PRC2亚基过表达、组蛋白乙酰转移酶(HAT)的功能丧失突变以及MLL2的功能丧失。相对于对于EZH2蛋白纯合野生型(WT)的细胞，或相对于对于Y646突变纯合的细胞，对于EZH2 Y646突变杂合的细胞导致H3K27超三甲基化。

本发明的一个方面涉及通过向对其有需要的受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂来治疗或减轻该受试者中NHL的症状的方法。本发明的一个方面涉及通过向对其有需要的受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂来治疗或减轻该受试者中NHL的症状的方法。本发明的另一个方面涉及通过向对其有需要的受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂来治疗或减轻该受试者中GCB DLBCL的症状的方法。在又另一个方面，本发明涉及通过向对其有需要的受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂来治疗或减轻该受试者中FL、PMBCL或MZL的症状的方法。适合本文所述的治疗方法的受试者可以表达突变型EZH2或野生型EZH2，或者在EZH2基因中具有突变或具有野生型EZH2基因。

如本文所述的，抑制EZH2活性显著终止恶性细胞分裂。

在一个实施例中，口服给予EZH2抑制剂。

在一个实施例中，受试者是人。

在任何以上方面或实施例中，本发明还涉及用于检测皮肤活检中的组蛋白甲基化水平(例如，H3K27三甲基化)水平的方法。在开始治疗之前，在受试者正接受治疗时，和/或在完成治疗后检测组蛋白甲基化。

本文所述的突变型EZH2是指突变型EZH2多肽或编码突变EZH2多肽的核酸序列。在某些实施例中，突变型EZH2在其底物口袋结构域中包含一个或多个突变。例如，突变可以为取代、点突变、无义突变、错义突变、缺失或插入。用于检测EZH2突变的方法已经描述在PCT/US11/051258、PCT/US13/030565、US20150099747中，这些文献各自通过引用以其整体并入本文。

出于本申请的目的，人类EZH2的Y641突变体以及换句话说EZH2的Y641突变体应理解为指代其中对应于野生型人类EZH2的Y641的氨基酸残基被不同于酪胺酸的氨基酸残基取代的人类EZH2。

适合本文披露的方法的化合物描述在美国公开20120264734和20140107122中，这些公开的内容通过引用以其整体而特此并入。这些化合物适合作为组合疗法的一部分与一种或多种适合一起、依次或交替给予的其他治疗剂或治疗模式来给予。

在一个实施例中，适合本文披露的方法的化合物是EPZ-6438(他折司他)：

或其药学上可接受的盐。

如本文所述的，EPZ-6438或其药学上可接受的盐有效靶向WT和突变型EZH2。EPZ-6438是口服生物有效的，且与其他组蛋白甲基转移酶相比，对EZH2具有高选择性(即>20,000倍选择性，以Ki计)。重要的是，EPZ-6438具有靶甲基标记抑制作用，这导致在体外杀死遗传上确定的癌细胞。动物模型在抑制靶甲基标记后也示出持续的体内功效。本文所述的临床试验结果也证明了EPZ-6438的安全性和功效。

在一个实施例中，以每日大约100mg至大约3200mg，诸如约100mg BID至约1600mgBID(例如，100mg BID、200mg BID、400mg BID、800mg BID或1600mg BID)的剂量向受试者给予EPZ-6438或其药学上可接受的盐，以治疗NHL。在一个实施例中，剂量为800mg BID。

在一些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物(例如，EZH2抑制剂)为：

在某些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物为化合物E：

在一些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物(例如，EZH2抑制剂)为具有以下化学式的GSK-126：

在某些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物为化合物F：

在某些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物(例如，EZH2抑制剂)是化合物Ga-Gc中的任一种：

在某些实施例中，可用于此处呈现的任何方法中的化合物(例如，EZH2抑制剂)为CPI-1205或GSK343。

在一个实施例中，本文披露的化合物为化合物本身，即，游离碱或“裸”分子。在另一个实施例中，该化合物为其盐，例如，裸分子的单HCl盐或三HCl盐、单HBr盐或三HBr盐。

本文披露的含氮化合物可以通过用氧化剂(例如，3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢)处理而转化为N-氧化物，以得到适合本文披露的任何方法的其他化合物。因此，所有示出并要求保护的含氮化合物在化学价和结构允许时都被认为包括如示出的化合物及其N-氧化物衍生物(可命名为N→O或N

“同分异构现象”意指具有相同分子式但它们的原子键合顺序不同或它们的原子空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，且彼此为不重叠镜像的立体异构体被称为“对映异构体”或有时称为光学异构体。含等量具有相反手性的单独对映异构体形式的混合物被称为“外消旋混合物”。

键合到四个不相同取代基的碳原子被称为“手性中心”。

“手性异构体”意指具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可作为单独非对映异构体存在或作为非对映异构体的混合物(称为“非对映异构体混合物”)存在。当存在一个手性中心时，立体异构体可通过该手性中心的绝对构型(R或S)表征。绝对构型是指附接至手性中心的取代基的空间排列。附接至考虑中的手性中心的取代基根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(Cahn,Ingold and Prelog)顺序规则排列。(卡恩(Cahn)等人，应用化学国际版(Angew.Chem.Inter.Edit.)1966，5，385；勘误表511；卡恩等人，应用化学(Angew.Chem.)1966，78，413；卡恩和英戈尔德(Ingold)，化学学会会刊(J.Chem.Soc.)1951(伦敦)，612；卡恩等人，Experientia 1956，12，81；卡恩，化学教育杂志(J.Chem.Educ.)1964，41，116)。

“几何异构体”意指将其存在归因于围绕双键或环烷基连接子(例如，1,3-环丁基)旋转受阻的非对映异构体。这些构型的名称通过前缀顺式和反式、或Z和E加以区分，根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格规则，这些前缀指示基团在分子中双键的同侧或对侧。

应当理解的是，本文披露的化合物可以被描绘为不同手性异构体或几何异构体。还应该理解的是，当化合物具有手性异构体或几何异构体形式时，所有异构体形式均被意图包括在本披露的范围内，并且化合物的命名不排除任何异构体形式。

此外，本发明中讨论的结构和其他化合物包括其所有阻转异构体。“阻转异构体”是这样一类立体异构体，其中两种异构体的原子空间排列不同。阻转异构体将其存在归因于由于大基团围绕中心键旋转受阻而引起的旋转受限。此类阻转异构体通常作为混合物存在，然而，由于最近在色谱技术方面的进展，已经可在所选情况下分离两种阻转异构体的混合物。

“互变异构体”是平衡地存在并且易于从一种异构体形式转化成另一种形式的两种或更多种结构异构体之一。这种转化导致氢原子的形式迁移，伴随着相邻共轭双键的转换。互变异构体在溶液中作为互变异构体组的混合物存在。在可能进行互变异构化的溶液中，互变异构体将达到化学平衡。互变异构体的精确比率取决于几个因素，包括温度、溶剂和pH。可通过互变异构作用相互转化的互变异构体的概念被称为互变异构现象。

在可能存在的各种类型的互变异构现象中，通常观察到两种。在酮-烯醇互变异构现象中，电子和氢原子发生同时转移。环-链互变异构现象是由于糖链分子中的醛基(-CHO)与同一分子中的羟基(-OH)之一反应以给出环状(环形)形式而产生，如由葡萄糖所展现的。

常见的互变异构体对为：酮-烯醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、杂环中(例如，核碱基，诸如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶中)的酰胺-亚胺酸互变异构现象、亚胺-烯胺和烯胺-烯胺。如下文所示的，酮-烯醇平衡的实例在吡啶-2(1H)-酮与相应的吡啶-2-醇之间。

应当理解的是，本文披露的化合物可以被描绘为不同互变异构体。还应该理解的是，当化合物具有互变异构体形式时，所有互变异构体形式均被意图包括在本披露的范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体形式。

如果适用，本文披露的化合物包括化合物本身以及其盐和其溶剂化物。例如，阴离子与经芳基或杂芳基取代的苯化合物上的带正电基团(例如，氨基)之间可以形成盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、富马酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根和乙酸根(例如，三氟乙酸根)。术语“药学上可接受的阴离子”是指适合形成药学上可接受的盐的阴离子。同样地，阳离子与经芳基或杂芳基取代的苯化合物上的带负电基团(例如，羧酸根)之间也可以形成盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子(诸如四甲基铵离子)。经芳基或杂芳基取代的苯化合物还包括含季氮原子的那些盐。在盐形式中，应理解的是，化合物与盐的阳离子或阴离子的比率可以为1:1，或不同于1:1的任何比率，例如，3:1、2:1、1:2或1:3。

此外，本文披露的化合物(例如，化合物的盐)可以水合或非水合(无水)形式存在或作为与其他溶剂分子的溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。

“溶剂化物”意指含有化学计量量或非化学计量量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物具有在结晶固体状态下捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物的倾向。如果溶剂为水，则所形成的溶剂化物为水合物；且如果溶剂为醇，则所形成的溶剂化物为醇化物。水合物是通过组合一分子或多分子水与一分子物质形成的，其中水保持其分子状态为H

如本文所用的，术语“类似物”是指结构彼此类似但组成略有不同(如以不同元素的原子替换一个原子或存在特定官能团，或以另一个官能团替换一个官能团)的化学化合物。因此，类似物是功能和外观与参考化合物类似或相当，但结构或来源不类似或相当的化合物。

如本文所定义的，术语“衍生物”是指具有共同的核心结构，但被如本文所述的各种基团取代的化合物。例如，所有以化学式(I)表示的化合物为经芳基或杂芳基取代的苯化合物，且具有化学式(I)作为共同核心。

术语“生物电子等排体”是指通过以另一种大体上类似的原子或原子团交换原子或原子团所产生的化合物。生物电子等排替换的目的是产生具有与母体化合物类似的生物学特性的新化合物。生物电子等排替换可以基于物理化学或拓扑学。羧酸生物电子等排体的实例包括但不限于酰基磺酰亚胺、四唑、磺酸酯和膦酸酯。参见例如，帕塔尼(Patani)和拉沃伊(LaVoie)，化学评论(Chem.Rev.)96，3147-3176，1996。

本发明意图包括出现在本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但是不同质量数的那些原子。通过一般的举例但不具有限制性，氢的同位素包括氚和氘，且碳的同位素包括C-13和C-14。

在某些方面，“组合疗法”还包括给予如上文所述的治疗剂进一步与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，手术或放射治疗)组合。当组合疗法进一步包括非药物治疗时，非药物治疗可在任何合适时间进行，只要实现治疗剂与非药物治疗的组合的共同作用的有益效果即可。例如，在适当情况下，从给予治疗剂中暂时移除非药物治疗(可能数天或甚至数周)时，仍实现有益效果。

在另一方面，本文披露的组合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、类似物或衍生物可与放射疗法组合给予。放射疗法也可以与本文披露的组合物和本文所述的另一种化疗剂作为多药剂疗法的一部分来组合给予。

“药物组合物”是含有形式上适合向受试者给予的化合物的配制品。本文披露的化合物和本文所述的一种或多种其他治疗剂各自可以单独地配制或以活性成分的任何组合配制在多种药物组合物中。因此，可以基于每种药物组合物的剂型适当地选择一种或多种给药途径。可替代地，本文披露的化合物和本文所述的一种或多种其他治疗剂可以配制成一种药物组合物。

在一个实施例中，药物组合物是散装形式或单位剂型。单位剂型是多种形式中的任一种，包括例如，胶囊剂、IV袋、片剂、气溶胶吸入器上的单泵或小瓶。单位剂量组合物中的活性成分(例如，所披露的化合物或其盐、水合物、溶剂化物或异构体的配制品)的量是有效量，且根据所涉及的具体治疗而变化。本领域的技术人员应理解，有时有必要依据患者的年龄和病况对剂量进行常规改变。剂量还将取决于给药途径。考虑了各种途径，包括口服、肺部、直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、吸入、颊部、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。局部或透皮给予本发明的化合物的剂型包括粉末剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。在一个实施例中，在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载体以及需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

如本文所用的，短语“药学上可接受的”是指在合理医学判断的范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称的那些化合物、阴离子、阳离子、材料、组合物、载体和/或剂型。

“药学上可接受的赋形剂”意指可用于制备通常安全、无毒且不是生物学上或其他方面不期望的药物组合物的赋形剂，且包括兽用和人类药用上可接受的赋形剂。如说明书和权利要求书中所使用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种此类赋形剂。

本文披露的药物组合物被配制成与其预期给药途径相容。给药途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内)、皮内、皮下、口服(例如，吸入)、透皮(局部)和透粘膜给药。用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节渗透压的试剂，诸如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱调节pH，诸如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

本文披露的组合物可以许多种当前熟知用于化疗治疗的方法向受试者给予。例如，为治疗癌症，本文披露的化合物可直接注射至肿瘤中，注射至血流或体腔中，或口服或以贴剂通过皮肤施用。所选剂量应足以构成有效治疗，但没有高到引起不可接受的副作用。优选地应在治疗期间密切监测病状(例如，癌症、癌前期等)的状态和患者的健康，并在治疗后持续合理时间。

如本文所用的，术语“治疗有效量”是指药剂治疗、减轻或预防确定的疾病或病症，或呈现可检测治疗或抑制效果的量。该效果可以通过本领域已知的任何测定方法来检测。受试者的精确有效量将取决于受试者的体重、体型、和健康；病症的本质和程度；和选择给予的治疗剂或治疗剂组合。例如，EZH2抑制剂针对患有EZH2野生型生发中心B细胞淋巴瘤的患者的治疗有效量可以不同于患有EZH2突变型生发中心B细胞淋巴瘤的患者。给定情况的治疗有效量可以通过在临床医生的技艺和判断内的常规实验测定。

在某些实施例中，组合使用的每种药剂在组合使用时的治疗有效量与单独用每种药剂的单一疗法相比会更低。这种更低的治疗有效量能负担的治疗方案的毒性更低。

对于任何化合物，治疗有效量最初可以在例如致瘤性细胞的细胞培养测定中或在动物模型(通常为大鼠、小鼠、兔、狗或猪)中估算。动物模型还可用于确定适当的浓度范围和给药途径。然后这种信息可以用于确定在人类中给药的有用剂量和途径。治疗/预防功效和毒性可通过标准药学程序在细胞培养物或实验动物中测定，例如，ED

调整剂量和给药，以提供足够水平的一种或多种活性剂，或维持期望的效果。可考虑在内的因素包括疾病状态的严重性、受试者的一般健康状况、受试者的年龄、体重和性别、饮食、给药的时间和频率、一种或多种药物组合、反应敏感性和对疗法的耐受/反应。长效药物组合物可每3至4天给予、每周给予或每两周给予一次，这取决于具体配制品的半衰期和清除率。

含本文披露的活性化合物的药物组合物可以通常已知的方式来生产，例如，借助常规混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、磨细、乳化、包封、包埋或冻干工艺。药物组合物可以常规方式使用一种或多种促进将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂的药学上可接受的载体(包括赋形剂和/或助剂)来配制。当然，适当的配制品取决于所选的给药途径。

适于注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(如果为水溶性的话)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL

无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物根据需要与以上列举的成分中的一种或其组合一起掺入适当溶剂中，随后过滤灭菌来制备。通常，分散液通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备，该无菌媒介物含有基础分散介质以及来自以上列举的那些成分的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥以及冷冻干燥，所述方法从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何另外所希望的成分的粉末。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。可将它们封装在明胶胶囊中或压成片剂。用于口服治疗给药的目的，活性化合物可以掺有赋形剂，并以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。口服组合物也可以使用流体载体制备用作漱口水，其中将流体载体中的化合物口服施用、漱口(swished)并吐出或咽下。药物相容性的粘合剂和/或佐剂材料可以作为组合物的一部分被包括。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有任何以下成分或具有类似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如，淀粉或乳糖；崩解剂，诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙香精。

为了通过吸入给药，化合物从包含合适的推进剂(例如，气体如二氧化碳，或喷雾剂)的加压容器或分配器以气溶胶喷雾形式来递送。

全身给药也可以通过透粘膜或透皮方式。对于透粘膜或透皮给药，将适合欲渗透的屏障的渗透剂用在配制品中。此类渗透剂通常是本领域已知的，且例如，对于透粘膜给药而言，包括洗涤剂、胆盐和梭链孢酸衍生物。透粘膜给药可以通过使用鼻腔喷雾剂或栓剂完成。对于透皮给药，将活性化合物配制成如本领域通常已知的软膏剂、药膏、凝胶剂或乳膏剂。

活性化合物可以用将保护该化合物以便避免快速从体内消除的药学上可接受的载体来制备，例如控释配制品，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯以及聚乳酸。用于制备此类配制品的方法对于本领域的技术人员而言将是明显的。这些材料也可以从阿尔扎公司(Alza Corporation)和新星制药有限公司(Nova Pharmaceuticals,Inc.)商购获得。脂质体悬浮液(包括以抗病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染细胞的脂质体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域的技术人员已知的方法来制备，例如美国专利号4,522,811中所述的。

尤其有利的是将口服或肠胃外组合物配制成剂量单位形式，以便于给药以及剂量的均匀性。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有经计算以产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物以及所需的药物载体。本文披露的剂量单位形式的规格由活性化合物的独特特性和欲实现的特定治疗效果决定，且直接取决于它们。

在治疗应用中，本文所述的EZH2抑制剂化合物或根据本发明使用的药物组合物的剂量依据药剂、接受患者的年龄、体重和临床病况、和给予疗法的临床医生或从业人员的经验和判断、以及影响选定剂量的因素等而变化。通常，剂量应足以减缓，且优选地逆转肿瘤生长，且还优选地使癌症完全消退。剂量可以在从约0.01mg/kg/天至约5000mg/kg/天的范围内。在优选方面，剂量可以在从约1mg/kg/天至约1000mg/kg/天的范围内。在一个方面，剂量将在约0.1mg/天至约50g/天；约0.1mg/天至约25g/天；约0.1mg/天至约10g/天；约0.1mg至约3g/天；或约0.1mg至约1g/天的范围内，以单次、分开或连续剂量(该剂量可针对患者的以kg计的体重、以m

药物组合物可以同给药说明书一起被包括在容器、包装或分配器中。

本文披露的组合物能够进一步形成盐。本文披露的组合物的每个分子能够形成多于一种盐，例如单盐、二盐、三盐。所有这些形式也被考虑在要求保护的发明的范围内。

如本文所用的，“药学上可接受的盐”是指本文披露的化合物的衍生物，其中母体化合物是通过制备其酸或碱盐来改性的。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐、酸性残基如羧酸的碱盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括常规的无毒盐或例如由无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的季铵盐。例如，此类常规的无毒盐包括但不限于来源于无机酸和有机酸的那些，这些无机酸和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢酸、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、1,2-乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙二醇对氨基苯胂酸(glycollyarsanilic)、己基间苯二酸(hexylresorcinic)、海巴明(hydrabamic)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酰硫酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸(subacetic)、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、甲苯磺酸，以及常见的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。

药学上可接受的盐的其他实例包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘糠酸等。本发明还涵盖在母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替换；或与有机碱(诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等)配位时形成的盐。

应该理解的是，对药学上可接受的盐的所有提及都包括相同盐的溶剂加成形式(溶剂化物)。

本文披露的组合物也可以制备成酯，例如，药学上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸官能团可以被转化为其相应的酯，例如，甲酯、乙酯或其他酯。同样地，化合物中的醇基可以被转化为其相应的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯或其他酯。

组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物是口服、经鼻、透皮、经肺部、吸入、经颊部、舌下、腹膜内、皮下、肌内、静脉内、经直肠、胸膜内、鞘内和肠胃外给药的。在一个实施例中，化合物是口服给药的。本领域的技术人员应认识到某些给药途径的优点。

利用化合物的剂量方案是根据多种因素来选择的，包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学病症；待治疗的病症的严重性；给药途径；患者的肾功能和肝功能；和采用的具体化合物或其盐。具有普通医术的医师或兽医可以容易地确定并且开出用于阻止、对抗或停滞病症进程所需的药物有效量。

配制和给予所披露的化合物的技术可以在雷明顿：药学科学与实践(Remington:the Science and Practice of Pharmacy)，第19版，马克出版公司(Mack PublishingCo.)，伊斯顿，宾夕法尼亚州(1995)中找到。在一个实施例中，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或稀释剂组合用在药物制剂中。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填料或稀释剂和无菌水溶液或有机溶液。化合物将以足以提供在本文所述范围内的期望剂量的量存在于此类药物组合物中。

除非另外指出，否则本文使用的所有百分比和比率都以重量计。本披露的其他特征和优点从不同实例是明显的。所提供的实例说明了可用于实践本发明的不同组分和方法。这些实例并不限制要求保护的发明。基于本披露，技术人员可以识别并利用可用于实践本发明的其他组分和方法。

如本文所用的，“对其有需要的受试者”是患有NHL的受试者或患上此种障碍的风险相对于一般群体增加的受试者。对其有需要的受试者可以患有癌前病症。“受试者”包括哺乳动物。哺乳动物可以为例如任何哺乳动物，例如人、灵长类动物、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、奶牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人。

受试者包括已被诊断患有NHL、具有NHL症状或有患上NHL的风险的任何人类受试者，该NHL包括DLBCL、GCB DLBCL、非生发中心DLBCL(包括ABC DLBCL)、FL、PMBCL和MZL。本文披露的受试者包括表达突变型EZH2或WT EZH2的任何人类受试者或者在EZH2基因中具有突变或具有野生型EZH2基因。例如，突变型EZH2包括一个或多个突变，其中该突变为取代、点突变、无义突变、错义突变、缺失、或插入或本文所述的任何其他EZH2突变。

对其有需要的受试者可患有难治性或抗性癌症。“难治性或抗性癌症”意指对治疗无反应的癌症。癌症可在开始治疗时具有抗性，或者它可在治疗期间变得具有抗性。在一些实施例中，对其有需要的受试者的癌症在最近的疗法缓解后复发。在一些实施例中，对其有需要的受试者接受了所有已知用于癌症治疗的有效疗法但都失败了。在一些实施例中，对其有需要的受试者接受了至少一种先前疗法。在某些实施例中，先前疗法是单一疗法。在某些实施例中，该先前疗法是组合疗法。

在一些实施例中，对其有需要的受试者可由于先前疗法而患有继发性癌症。“继发性癌症”意指由于先前致癌疗法(诸如化疗)引起或由此造成的癌症。

受试者也可对EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂或任何其他治疗剂呈现出抗性。

本发明的特征还在于为患有淋巴瘤(包括DLBCL、GCB DLBCL、非生发中心DLBCL、ABC DLBCL、FL、PMBCL和MZL)的受试者选择疗法的方法。

该方法包括以下步骤：检测来自受试者的样品中存在或不存在一个或多个EZH2突变；并基于存在或不存在这一个或多个EZH2突变选择用于治疗淋巴瘤的疗法。在一个实施例中，该疗法包括向受试者给予治疗有效量的本文所述的EZH2抑制剂。EZH2突变或其不存在可以使用本领域已知的任何合适方法来检测。

本文所述的方法和用途可包括以下步骤：在向对其有需要的受试者给予本文披露的组合物(例如，只含本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或者含其与一种或多种第二治疗剂的组合的组合物)之前和/或之后检测来自该受试者的样品中存在或不存在本文所述的一个或多个EZH2突变。

本发明为患有生发中心来源的淋巴瘤或有患该淋巴瘤的风险的受试者提供了个性化医疗、治疗和/或癌症管理，方式是通过在该受试者体内对本文所述的一个或多个EZH2突变进行遗传筛查。例如，本发明提供了用于治疗或减轻对其有需要的受试者的生发中心来源的淋巴瘤的症状的方法，方式是通过测定受试者对疗法的反应性，且当受试者对该疗法有反应时，向该受试者给予本文披露的组合物。一旦测定到受试者的反应性，便可以给予治疗有效量的组合物，例如，只含本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或者含其与一种或多种第二治疗剂的组合的组合物。组合物的治疗有效量可以由本领域的普通技术人员来确定。

如本文所用的，术语“反应性”可与术语“有反应的”、“敏感的”和“敏感性”互换，且意味着受试者在给予本文披露的组合物时示出治疗反应，例如，受试者的肿瘤细胞或肿瘤组织经历细胞凋亡和/或坏死，和/或所展现的生长、分裂或增殖减少。这个术语还意味着受试者相对于一般群体在给予本文披露的组合物时示出治疗反应的可能性更高，例如，受试者的肿瘤细胞或肿瘤组织经历细胞凋亡和/或坏死，和/或所展现的生长、分裂或增殖减少。

所谓“样品”意思是源自受试者的任何生物样品，包括但不限于细胞、组织样品、体液(包括但不限于粘液、血液、血浆、血清、尿液、唾液和精液)、肿瘤细胞和肿瘤组织。优选地，样品选自骨髓、外周血细胞、血液、血浆和血清。样品可以由正在治疗或测试的受试者提供。可替代地，样品可以根据本领域的常规实践通过医师获得。

如本文所用的，“候选化合物”是指这样的本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，它已经在或将在一个或多个体外或体内生物测定中进行测试，以便确定该化合物是否有可能在细胞、组织、系统、动物或人类中引起研究人员或临床医生寻求的期望的生物或医学反应。候选化合物为本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。生物或医学反应可以是癌症的治疗。生物或医学反应可以是细胞增殖性障碍的治疗或预防。体外或体内生物测定可以包括但不限于酶活性测定、电泳迁移率变动测定、报告基因测定、体外细胞活力测定和本文所述的测定。

如本文所用的，“治疗(treating或treat)”描述了出于对抗疾病、病症或障碍的目的来管理和护理患者，且包括给予本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以减轻疾病、病症或障碍的症状或并发症，或消除该疾病、病症或障碍。

本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物也可以用于预防疾病、病症或障碍。如本文所用的,“预防(preventing或prevent)”描述了减少或消除该疾病、病症或障碍的症状或并发症的发作。

如本文所用的，术语“减轻”意在描述借以降低障碍的病征或症状的严重性的过程。重要的是，可以减轻但未消除病征或症状。在一个优选实施例中，给予本文披露的药物组合物导致病征或症状的消除，然而，不要求消除。预期有效剂量可降低病征或症状的严重性。例如，障碍(如癌症)的病征或症状(可出现在多个位置)得到减轻，如果多个位置中的至少一个内的癌症严重性降低的话。

如本文所用的，术语“严重性”意在描述癌症从癌前状态或良性状态转变为恶性状态的可能性。可替代地或另外地，严重性意在例如根据TNM系统(被国际抗癌联盟(International Union Against Cancer，UICC)和美国癌症联合会(American JointCommittee on Cancer，AJCC)接受)或通过其他领域内认可的方法描述癌症阶段。癌症阶段是指癌症的程度或严重性，依据是以下因素，诸如原发性肿瘤的位置、肿瘤尺寸、肿瘤数量和淋巴结转移(癌症扩散进入淋巴结)。可替代地或另外地，严重性意在通过领域内认可的方法描述肿瘤分级(参见，美国国家癌症研究所(National Cancer Institute)，www.cancer.gov)。肿瘤分级是用于依据它们在显微镜下看起来多么异常和肿瘤有可能多么快速地生长和扩散来给癌细胞分类的系统。在确定肿瘤分级时要考虑许多因素，包括细胞的结构和生长模式。用于确定肿瘤分级的具体因素随每种类型的癌症而变化。严重性也描述组织学分级(也称为分化)，是指肿瘤细胞与相同组织类型的正常细胞有多相似(参见，美国国家癌症研究所，www.cancer.gov)。此外，严重性描述细胞核分级，是指肿瘤细胞中细胞核的尺寸和形状以及正在分化的肿瘤细胞的百分比(参见，美国国家癌症研究所，www.cancer.gov)。

在另一方面，严重性描述肿瘤分泌生长因子、降解细胞外基质、变得血管化、失去对并列组织的粘附性或转移的程度。此外，严重性描述原发性肿瘤转移的位置的数量。最后，严重性包括治疗不同类型和位置的肿瘤的难度。例如，不能手术的肿瘤、更多地进入多个身体系统的那些癌症(血液肿瘤和免疫肿瘤)和最耐传统治疗的那些被认为是最严重的。在这些情况下，延长受试者的期望寿命和/或减少疼痛、减少癌细胞的比例或将细胞限制在一个系统中以及改善癌症阶段/肿瘤分级/组织学分级/细胞核分级被认为减轻癌症的病征或症状。

如本文所用的，术语“症状”被定义为疾病、疾患、损伤或身体有问题的指征。症状被经历该症状的个体感知到或注意到，但可能不容易被其他人注意到。其他人被定义为非医护专业人员。

如本文所用的，术语“病征”也被定义为身体有问题的指征。但病征被定义为医生、护士或其他医护专业人员可以看出的事物。

癌症是一组可导致几乎任何病征或症状的疾病。病征和症状将取决于癌症在哪里、癌症的尺寸和它对附近器官或结构有多大的影响。如果癌症扩散(转移)，那么症状可出现在身体的不同部位。

治疗癌症可以导致肿瘤尺寸的减小。肿瘤尺寸减小也可以称为“肿瘤消退”。优选地，治疗后，肿瘤尺寸相对于其在治疗前的尺寸减小5％或更多；更优选地，肿瘤尺寸减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小大于75％或更多。肿瘤尺寸可通过任何可重复的测量方式来测量。肿瘤尺寸可测量为肿瘤直径。

治疗癌症可以导致肿瘤体积的减小。优选地，治疗后，肿瘤体积相对于其在治疗前的尺寸减小5％或更多；更优选地，肿瘤体积减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小大于75％或更多。肿瘤体积可通过任何可重复的测量方式来测量。

治疗癌症导致肿瘤数量的减少。优选地，治疗后，肿瘤数量相对于治疗前的数量减少5％或更多；更优选地，肿瘤数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；并且最优选地，减少大于75％。肿瘤数量可通过任何可重复的测量方式来测量。肿瘤数量可通过计数肉眼可见的或以规定放大倍数可见的肿瘤来测量。优选地，规定放大倍数为2x、3x、4x、5x、10x或50x。

治疗癌症可以导致远离原发性肿瘤位点的其他组织或器官中的转移病灶的数量减少。优选地，治疗后，转移病灶的数量相对于治疗前的数量减少5％或更多；更优选地，转移病灶的数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；并且最优选地，减少大于75％。转移病灶的数量可通过任何可重复的测量方式来测量。转移病灶的数量可通过计数肉眼可见的或以规定放大倍数可见的转移病灶来测量。优选地，规定放大倍数为2x、3x、4x、5x、10x或50x。

治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的平均存活时间与只接受载体的群体相比增加。优选地，平均存活时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。群体的平均存活时间的增加可通过任何可重复的方式来测量。群体的平均存活时间的增加可通过例如计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均存活长度来测量。群体的平均存活时间的增加也可通过例如计算群体在用活性化合物完成第一轮治疗后的平均存活长度来测量。

治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的平均存活时间与未治疗的受试者群体相比增加。优选地，平均存活时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。群体的平均存活时间的增加可通过任何可重复的方式来测量。群体的平均存活时间的增加可通过例如计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均存活长度来测量。群体的平均存活时间的增加也可通过例如计算群体在用活性化合物完成第一轮治疗后的平均存活长度来测量。

治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的平均存活时间与接受用并非本文披露的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、类似物或衍生物的药物进行的单一疗法的群体相比增加。优选地，平均存活时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。群体的平均存活时间的增加可通过任何可重复的方式来测量。群体的平均存活时间的增加可通过例如计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均存活长度来测量。群体的平均存活时间的增加也可通过例如计算群体在用活性化合物完成第一轮治疗后的平均存活长度来测量。

治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的死亡率与只接受载体的群体相比下降。治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的死亡率与未治疗的群体相比下降。治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的死亡率与接受用并非本文披露的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、类似物或衍生物的药物进行的单一疗法的群体相比下降。优选地，死亡率下降多于2％；更优选地，多于5％；更优选地，多于10％；并且最优选地，多于25％。所治疗受试者群体的死亡率的下降可通过任何可重复的方式来测量。群体的死亡率的下降可通过例如计算群体在开始用活性化合物治疗后每单位时间的疾病相关死亡的平均数量来计算。群体的死亡率的下降也可通过例如计算群体在用活性化合物完成第一轮治疗后每单位时间的疾病相关死亡的平均数量来计算。

治疗癌症可以导致肿瘤生长速率的下降。优选地，治疗后，肿瘤生长速率相对于治疗前的数量下降至少5％；更优选地，肿瘤生长速率下降至少10％；更优选地，下降至少20％；更优选地，下降至少30％；更优选地，下降至少40％；更优选地，下降至少50％；甚至更优选地，下降至少50％；并且最优选地，下降至少75％。肿瘤生长速率可通过任何可重复的测量方式来测量。肿瘤生长速率可以根据每单位时间的肿瘤直径变化来测量。

治疗癌症可以导致肿瘤再生长的减少。优选地，治疗后，肿瘤再生长小于5％；更优选地，肿瘤再生长小于10％；更优选地，小于20％；更优选地，小于30％；更优选地，小于40％；更优选地，小于50％；甚至更优选地，小于50％；并且最优选地，小于75％。肿瘤再生长可通过任何可重复的测量方式来测量。例如，通过测量治疗后的居前肿瘤缩小后肿瘤直径的增加来测量肿瘤再生长。肿瘤在停止治疗后无法重新出现指示肿瘤再生长的减少。

治疗或预防细胞增殖性障碍可以导致细胞增殖速率的下降。优选地，治疗后，细胞增殖速率下降至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。细胞增殖速率可通过任何可重复的测量方式来测量。例如，通过测量组织样品中每单位时间的分裂细胞的数量来测量细胞增殖速率。

治疗或预防细胞增殖性障碍可以导致增殖细胞比例的下降。优选地，治疗后，增殖细胞比例下降至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。增殖细胞比例可通过任何可重复的测量方式来测量。优选地，例如，通过量化组织样品中分裂细胞的数量相对于非分裂细胞的数量来测量增殖细胞比例。增殖细胞比例可以等同于有丝分裂指数。

治疗或预防细胞增殖性障碍可以导致细胞增殖面积或区域的尺寸的减小。优选地，治疗后，细胞增殖面积或区域的尺寸相对于其在治疗前的尺寸减小至少5％；更优选地，减小至少10％；更优选地，减小至少20％；更优选地，减小至少30％；更优选地，减小至少40％；更优选地，减小至少50％；甚至更优选地，减小至少50％；并且最优选地，减小至少75％。细胞增殖面积或区域的尺寸可通过任何可重复的测量方式来测量。细胞增殖面积或区域的尺寸可测量为细胞增殖面积或区域的直径或宽度。

治疗或预防细胞增殖性障碍可以导致具有异常外观或形态的细胞数量或比例的减少。优选地，治疗后，具有异常形态的细胞数量相对于其在治疗前的尺寸减少至少5％；更优选地，减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；甚至更优选地，减少至少50％；并且最优选地，减少至少75％。异常细胞外观或形态可通过任何可重复的测量方式来测量。可以通过显微镜术，例如，使用倒置组织培养显微镜来测量异常细胞形态。异常细胞形态可以采取核多形性的形式。

如本文所用的，术语“选择性地”意指倾向于在一个群体中比在另一个群体中以更高的频率出现。所比较的群体可以是细胞群体。优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地作用于癌细胞或癌前细胞但不作用于正常细胞。优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地起作用，以调节一种分子靶标(例如，靶蛋白甲基转移酶)，但不显著调节另一种分子靶标(例如，非靶蛋白甲基转移酶)。本发明还提供了用于选择性地抑制酶(如蛋白甲基转移酶)的活性的方法。优选地，如果在群体A中的出现频率与群体B相比大于两倍，那么事件相对于群体B选择性地出现在群体A中。如果群体A中的出现频率大于五倍，那么事件选择性地出现。如果群体A中的出现频率与群体B相比大于十倍；更优选地，大于五十倍；甚至更优选地，大于100倍；并且最优选地,大于1000倍，那么事件选择性地出现。例如，如果与正常细胞相比在癌细胞中的出现频率大于两倍，那么就说细胞死亡选择性地出现在癌细胞中。

本文披露的组合物(例如，含本文披露的任何化合物或其药学上可接受的盐的组合物)可以调节分子靶标(例如，靶蛋白甲基转移酶)的活性。调节是指刺激或抑制分子靶标的活性。优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物调节分子靶标的活性，如果相对于分子靶标在相同条件下但只缺乏所述化合物的存在时的活性，它将分子靶标的活性刺激或抑制至少2倍的话。更优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物调节分子靶标的活性，如果相对于分子靶标在相同条件下但只缺乏所述化合物的存在时的活性，它将分子靶标的活性刺激或抑制至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍的话。分子靶标的活性可通过任何可重复的方式来测量。分子靶标的活性可在体外或体内测量。例如，可通过酶活性测定或DNA结合测定在体外测量分子靶标的活性，或者可通过测定报告基因的表达在体内测量分子靶标的活性。

本文披露的组合物不显著调节分子靶标的活性，如果相对于分子靶标在相同条件下但只缺乏所述化合物的存在时的活性，化合物的加入未将分子靶标的活性刺激或抑制大于10％的话。

如本文所用的，术语“同工酶选择性”意指与酶的第二同种型相比优先抑制或刺激酶的第一同种型(例如，与蛋白甲基转移酶同工酶β相比优先抑制或刺激蛋白甲基转移酶同工酶α)。优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在实现生物效应所需的剂量中展示出最少四倍差异，优选十倍差异，更优选五十倍差异。优选地，本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物跨抑制范围展示出这种差异，且该差异针对感兴趣的分子靶标在IC

向对其有需要的细胞或受试者给予本文披露的组合物可以调节(即，刺激或抑制)感兴趣的蛋白甲基转移酶的活性。

向对其有需要的细胞或受试者给予本文披露的化合物(例如，含本文披露的任何化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其他治疗剂如强的松的组合物)调节(即，刺激或抑制)细胞内靶标(例如，底物)的活性。可以用本文披露的化合物调节几种细胞内靶标(包括但不限于蛋白甲基转移酶)。

激活是指使物质组合物(例如，蛋白质或核酸)处于适合执行期望生物功能的状态。能够被激活的物质组合物也具有非激活状态。被激活的物质组合物可具有抑制或刺激生物功能或两者。

提高是指物质组合物(例如，蛋白质或核酸)的期望生物活性的增加。提高可通过物质组合物浓度的增加而发生。

治疗癌症或细胞增殖性障碍可以导致细胞死亡，且优选地，细胞死亡导致群体的细胞数量减少至少10％。更优选地，细胞死亡意指减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；最优选地，减少至少75％。群体的细胞数量可通过任何可重复的方式来测量。群体的细胞数量可以通过荧光激活细胞分选术(FACS)、免疫荧光显微镜术和光学显微镜术来测量。测量细胞死亡的方法是如李(Li)等人，美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci US A.)100(5)：2674-8，2003中所示的。在一个方面，细胞死亡通过细胞凋亡发生。

优选地，本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的有效量对正常细胞没有显著细胞毒性。如果给予治疗有效量的化合物不诱导大于10％的正常细胞的细胞死亡，那么治疗有效量的化合物对正常细胞没有显著细胞毒性。如果给予治疗有效量的化合物不诱导大于10％的正常细胞的细胞死亡，那么治疗有效量的化合物不显著影响正常细胞的活力。在一个方面，细胞死亡通过细胞凋亡发生。

使细胞与本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触可以在癌细胞中选择性地诱导或激活细胞死亡。向对其有需要的受试者给予本文披露的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以在癌细胞中选择性地诱导或激活细胞死亡。使细胞与本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触可以在被细胞增殖性障碍影响的一个或多个细胞中选择性地诱导细胞死亡。优选地，向对其有需要的受试者给予本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在被细胞增殖性障碍影响的一个或多个细胞中选择性地诱导细胞死亡。

本披露涉及通过向对其有需要的受试者给予本文披露的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物来治疗或预防癌症的方法，其中给予本文披露的该组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物导致以下项中的一个或多个：通过使细胞累积在细胞周期的一个或多个阶段(例如G1、G1/S、G2/M)或诱导细胞衰老或促进肿瘤细胞分化来阻止癌细胞增殖；经由细胞毒性、坏死或细胞凋亡促进癌细胞的细胞死亡，但不引起大量正常细胞的细胞死亡，动物中的抗肿瘤活性的治疗指数至少为2。如本文所用的，“治疗指数”是最大耐受剂量除以有效剂量。

本领域的技术人员可参考一般参考文本来获得本文讨论的已知技术或等效技术的详细说明。这些文本包括奥苏贝尔(Ausubel)等人，分子生物学实验指南(CurrentProtocols in Molecular Biology)，约翰·威利父子公司(John Wiley and Sons,Inc.)(2005)；萨姆布鲁克(Sambrook)等人，分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning,ALaboratory Manual)(第3版)，冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press)，冷泉港，纽约(2000)；科里根(Coligan)等人，免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)，约翰·威利父子公司，纽约；恩纳(Enna)等人，药理学实验指南(Current Protocols inPharmacology)，约翰·威利父子公司，纽约；芬戈(Fingl)等人，治疗学的药理学基础(ThePharmacological Basis of Therapeutics)(1975)，雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)，马克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州，第18版(1990)。当然，这些文本也可以在建立或使用本发明的一个方面中提及。

实例1：

EPZ-6438临床研究

1期试验征募了患有复发性/难治性实体瘤和B细胞淋巴瘤的患者。该研究采用了具有两个计划剂量扩展同龄组和临床药理学子研究的标准3+3剂量递增设计。主要终点是以标准次要终点测定推荐的2期剂量或MTD。

征募的患者包括19名NHL患者，其中13名患者患有DLBCL。原本打算对所有NHL患者进行细胞起源测试，然而，3名DLBCL患者没有足够组织来允许测定生发中心与非生发中心状态。通过

研究中的NHL患者预先进行了大量治疗，其中85％已经接受三次或更多次先前的全身疗法，且几乎一半接受四次或更多次先前的方案。37％难以用他们最近的先前方案来治疗，并且五名患者先前进行过移植。

EPZ-6438的药代动力学通过迅速吸收和3至5小时的终末半衰期来表征(图4)。药物在整个给药范围内在稳态下展示出与剂量成比例的线性PK。尽管观察到第一剂量与第15天之间的AUC减小，但在该时间以外再没有观察到全身暴露的减少，如右图中给药前C

图5示出，收集给药前和给药后的皮肤活检，以便通过免疫组织化学法测量三甲基H3K27水平来评估替代组织中的药效动力学。先前已示出三甲基H3K27水平在整个皮肤厚度上的剂量依赖性降低，如右上图所展示的那样。通过使用图像分析进一步精确地量化，以评估不同皮肤层中的H3K27信号；与没有明显变化的基底层相比，观察到棘层中的三甲基H3K27信号多得多的下降。

不同皮肤层间药效动力学反应的这些差异突出了三甲基H3K27代谢回转的动力学变化的潜力，即使在相同组织的细胞中也一样。

在整个群体中，EPZ-6438的耐受性良好，最常见的不良事件为无力、厌食、贫血、呼吸困难和恶心(图6)。

·在不足三分之一的患者中观察到3级或更高级的不良事件。

·只在5名患者中观察到3级或更高级的治疗相关不良事件。

·观察到的唯一DLT是血小板减少症，出现在1600mg下。

·一名患者因为血小板减少症要求减少剂量。一名患者因为4级中性粒细胞减少症停药。这两名患者都在800mg扩展同龄组中进行治疗。

·七名患者剂量中断。在这些患者中，6名是因为可逆毒性，并以先前剂量继续使用研究药剂，没有发生其他问题。

图7示出，在15名可评估NHL患者中，9名具有目标反应。

·在DLBCL中，9名患者中有5名看到目标反应。在这些患者中，一名患者继续留在研究中超过18个月，并且另一名具有EZH2突变的患者继续留在研究中6个月。

·在滤泡性淋巴瘤中，5名患者中有3名实现了目标反应，其中两名患者继续留在研究中12个月。

·一名患有边缘区结节性淋巴瘤的患者继续留在研究中，在治疗中逐渐改善部分反应接近一年。

EPZ-6438在NHL中的抗肿瘤活性的一个特征是肿瘤质量的逐渐但持续的下降。这导致目标反应的演变，这可出现在研究的10个月内。患者可具有延长的SD期，在变成PR之前肿瘤逐渐缩小。且在PR变成CR之前可看到同样的情况。在迄今研究的所有NHL亚型中都观察到了这种反应模式。

图9以负PET示出患有原发性纵膈B细胞淋巴瘤的23岁男性，他到第40周变成CR，尽管难以用多个密集的利妥昔单抗+化疗方案来治疗。他在第78周时保持CR。

图10示出患有多重难治性滤泡性淋巴瘤的男性作为反应演变的另一个实例。他的眶周肿瘤在第16周时达到PR的标准，并且然后到第32周达到CR的标准。他在第60周时保持CR。

图11示出带有EZH2突变的荷瘤患者。她患有侵袭性DLBCL，且预先用六种先前的方案进行了大量治疗，而且在过去3年没有目标反应。她的扫描结果显示，到第16周对他折司他有明显反应，非常大的腹部肿块减小了52％。她在研究的24周内保持PR。

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