喹唑啉类衍生物在制备抗衰老的产品中的用途

技术领域

本发明属于医药、功能性食品以及化妆品技术领域，具体涉及喹唑啉类衍生物在制备在哺乳动物中抗衰老(尤其是减轻或预防皮肤衰老、细胞衰老或光老化)的产品中的用途。

背景技术

生物体中的细胞、组织和器官会伴随着年龄的增长而逐渐老化，从而使机体表现为多系统的整体性衰老。细胞衰老是与衰老相关的最重要的体内机制之一。衰老细胞通过自然老化导致的不可修复的细胞损伤损害组织功能，从而限制寿命。复制性衰老是细胞衰老的主要原因，在培养物中大约60轮细胞分裂后观察到，其是每次分裂后端粒逐渐侵蚀的结果。这种进行性侵蚀导致端粒功能障碍和不可逆的细胞周期停滞。

衰老过程最直观的表现是皮肤衰老，皮肤是人体最大的器官，占体重的15％，成人约有2平方米的皮肤面积。皮肤从解剖学上一共分为三层：表皮层、真皮层、皮下层。表皮层是皮肤最外层的屏障，角质细胞是表皮层最主要的细胞类型，表皮层还包含朗格汉斯细胞、T细胞和梅克尔细胞等。真皮层主要的细胞类型是成纤维细胞。

皮肤具有重要的屏障作用，防御有害微生物和毒素的入侵，保护机体免受紫外线辐射，且不具渗透性的角质层阻碍水分的丢失。此外，皮肤还有免疫调节、体温调节、合成维生素D和分泌排泄等生物功能。然而，皮肤处在复杂的外部环境，易受到各种外界刺激而老化。皮肤老化是一个多因素过程，会影响其组织形态和生物学功能，由内在因素如年龄，遗传，激素等和外在因素如紫外线暴露，环境污染等多种因素导致。皮肤衰老伴随着明显的迹象，如皮肤变得薄而干燥，细皱纹，弹性下降，色素沉着，头发变白和脱发等。

表皮层的角质细胞是紫外线照射的主要靶细胞之一。受不同紫外强度的影响，角质细胞会发生细胞衰老或细胞死亡。真皮层的成纤维细胞主要受到紫外线中的UVA影响，可发生细胞衰老或死亡。大量证据显示，衰老的角质细胞和成纤维细胞在自然衰老和光老化皮肤中积累，导致衰老相关的皮肤改变，包括皮肤变薄，变干，细纹，弹性降低，色素异常沉着等。因此，减少皮肤衰老细胞的积累将延缓皮肤衰老相关的表型。

尽管目前市场上的抗衰老产品种类繁多，但是实质上大部分产品的效果都差强人意，因此研究开发新型抗衰老方法和策略以及寻找新型抗衰老活性成分具有重要的社会意义和商业价值。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷以及丰富现有技术，本发明提供了一种延缓衰老的方法，尤其涉及喹唑啉类衍生物在制备在哺乳动物中抗衰老的产品中的用途。

具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：

本发明提供了喹唑啉类衍生物在制备在哺乳动物中抗衰老的产品中的用途，所述喹唑啉类衍生物包含4-氨基-6,7-二甲基喹唑啉环结构。

作为可选的方式，在上述用途中，所述喹唑啉类衍生物选自哌唑嗪或其药学上可接受的盐、特拉唑嗪或其药学上可接受的盐、多沙唑嗪或其药学上可接受的盐或者阿呋唑嗪或其药学上可接受的盐。

优选地，喹唑啉类衍生物选自特拉唑嗪或其药学上可接受的盐。

更优选地，所述药学上可接受的盐是盐酸盐或甲磺酸盐。

作为可选的方式，在上述用途中，所述抗衰老包括减轻或预防皮肤衰老、细胞衰老或光老化。

作为可选的方式，在上述用途中，所述哺乳动物是灵长类。

优选地，所述哺乳动物是人。

作为可选的方式，在上述用途中，所述产品是口服产品或外用产品。

作为可选的方式，在上述用途中，所述产品是药品、功能性食品、饮料、营养补充剂或化妆品。

作为可选的方式，在上述用途中，所述产品是口服溶液、液体混悬剂、注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、膜剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂、糖浆剂、饮料、营养品、零食、能量棒、口香糖、糖果、面膜、面霜、精华、乳液、爽肤水或彩妆。

作为可选的方式，在上述用途中，在所述产品中还包含药品、功能性食品、饮料、营养补充剂或化妆品中常用的辅料或赋形剂。

作为可选的方式，在上述用途中，以重量百分比计，所述喹唑啉类衍生物在所述产品中的用量为0.5％-20％。

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

本发明首次发现包含4-氨基-6,7-二甲基喹唑啉环结构的喹唑啉类衍生物能够缓解年龄相关的皮肤自然衰老和外界不良因素导致的皮肤加速衰老，并且没有明显的副作用。另外，所述喹唑啉类衍生物可用于制备抗衰老相关的食品、保健品、医药品及其组成物以及化妆品，具有广阔的应用市场。

附图说明

图1：特拉唑嗪对皮肤角质细胞(HACAT)不具有细胞毒性。

图2：特拉唑嗪对皮肤成纤维细胞(HFF)不具有细胞毒性。

图3：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤角质细胞(HACAT)衰老具有抑制作用。

图4：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤成纤维细胞(HFF)衰老具有抑制作用(β-gal染色)。

图5：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤成纤维细胞(HFF)衰老具有抑制作用(qPCR检测)。

图6：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤成纤维细胞(HFF)氧化应激具有抑制作用。

图7：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤角质细胞(HACAT)死亡具有抑制作用(CCK8检测)。

图8：特拉唑嗪对紫外线诱导皮肤角质细胞(HACAT)死亡具有抑制作用(ATP检测)。

具体实施方式

在上面的发明内容和具体实施方式，以及权利要求书中，提到了本发明的特定特征，应当理解，本发明的说明书中公开了包括这些特定特征的所有可能的组合。例如，当在本发明的特定方面或实施例或特定权利要求中公开了特定特征时，则该特征也可以尽可能的和/或与本发明的其他特定方面和实施方式结合使用。

皮肤衰老是一个复杂的过程。宏观上，皮肤衰老表现为细纹、失去弹性、橘皮或皮肤暗沉、表皮和真皮厚度减少。微观上，皮肤衰老的典型特征包括表皮萎缩、基底角质细胞有丝分裂率降低、增殖能力降低和细胞衰老、真皮细胞外基质萎缩和结缔组织生理特性改变。

以下对于本发明中涉及到的几种活性成分，进行简要说明：

哌唑嗪(Prazosin)又名脉宁平、降压嗪。哌唑嗪是在20世纪60年代末发现的第一个选择性的α1受体拮抗剂，临床用于治疗各种病因引起的高血压和充血性心力衰竭。

特拉唑嗪(Terazosin)是美国Abbott公司20世纪80年代开发的一种长效抗高血压药，具有阻滞外周突触后α1-肾上腺素受体的作用，从而引起血管扩张，外周血管阻力减小而降低血压。本品具有对心输出量影响极小、不引起反射性心跳加快、不减少肾血流量或肾小球过滤等优点。由于α1-肾上腺素受体阻滞而使膀胱颈、前列腺、前列腺包膜平滑肌松驰，尿道阻力和压力、膀胱阻力减小，从而减轻尿道症状，因此盐酸特拉唑嗪也是目前治疗男性良性前列腺增生下尿路症状的一线药物。

多沙唑嗪(Doxazosin)是一种α1选择性α阻断剂，其抑制去甲肾上腺素(从交感神经末梢释放)与血管平滑肌细胞膜上的α-1受体的结合。这种抑制的主要作用是放松血管平滑肌张力(血管舒张)，其减少外周血管阻力，导致血压降低。临床用于治疗与良性前列腺增生(BPH)相关的高血压和尿潴留。

阿呋唑嗪(Alfuzosin)具有类似哌唑嗪和罂粟碱二者的作用，兼有阻断突出后膜α1受体和直接扩张血管平滑肌作用，故有良好的降压效果。降压时不引起反射性心率加快。可阻断膀胱三角区、尿道和前列腺包膜中α1受体，降低尿流阻力，改善排尿。可用于治疗高血压，治疗良性前列腺增生的某些功能性症状。

本领域技术人员认识到，即使该迹象或状况没有完全根除或预防，但其或其症状和/或效果在受试者中得到部分改善或减轻，该量仍可被认为是“有效的”。

术语“药学上可接受的”是指药学上、生理学上、饮食上和/或营养学上可接受的，是指在合理的医学判断的范围内的那些组合物或试剂、材料或组合物和/或其剂型的组合，其适用于与人类和动物的组织接触，与组合物的其他成分相容，没有过多的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“哺乳动物”指代可以应用或施用本公开的用途和产品的任何动物。动物可能患有病痛或其他疾病，但动物不需要生病才能受益于本公开的用途和产品。因此，任何动物都可以利用所公开的产品或成为所公开用途的接受者。“哺乳动物”包括但不限于小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、狗、猫、绵羊、山羊、牛、马、灵长类动物，例如猴子、黑猩猩和猿，特别是人类。尽管动物受试者优选是人，但是本发明的方法和组合物同样适用于兽医学。

下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。

下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。

实施例1：特拉唑嗪对皮肤相关细胞的安全性评价

在皮肤角质细胞HACAT和成纤维细胞HFF中(以上两种细胞均购自上海中乔新舟生物科技有限公司)，评价特拉唑嗪的安全性。

两种细胞的完全培养基均为DMEM+10％FBS+0.5％青链霉素混合液，培养条件为37摄氏度，5％ CO

如图1-图2所示，结果显示，300μM，100μM，30μM，10μM特拉唑嗪均不能对两种细胞的存活产生影响(One-way ANOVA，Dunnett’s multiple comparisons test，各组统计均不显著)。该结果提示，特拉唑嗪在较高浓度条件下，对皮肤细胞不具有毒性，安全性高。

实施例2：特拉唑嗪对皮肤衰老的拮抗作用

使用紫外老化箱(上海本亭)用紫外线UV照射诱发HACAT和HFF细胞衰老。两种细胞的完全培养基均为DMEM+10％FBS+0.5％双抗，培养条件为37摄氏度，5％ CO

如图3-图4所示，结果显示，UV照射能够引起β半乳糖苷酶染色阳性的HACAT细胞比例显著升高(One-way ANOVA，Dunnett’smultiple comparisons test,P＝0.0012；*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,****p<0.0001)，说明UV照射能够引发细胞衰老；特拉唑嗪(TZ)处理后，β半乳糖苷酶染色阳性的细胞比例显著降低(One-way ANOVA，Dunnett’smultiple comparisons test,P＝0.0039)。UV照射能够引起β半乳糖苷酶染色阳性的HFF细胞比例显著升高(One-way ANOVA，Dunnett’s multiple comparisons test,p<0.0001)，说明UV照射能够引发细胞衰老；特拉唑嗪(TZ)处理后，β半乳糖苷酶染色阳性的细胞比例显著降低(One-way ANOVA，Dunnett’s multiple comparisons test,p＝0.0007)。这些结果表明：特拉唑嗪对UV照射引起的角质细胞和成纤维细胞衰老都能够显著抑制。

为进一步对细胞衰老进行量化，使用实时荧光定量PCR(qPCR)方法针对细胞衰老标志物之一P21进行检测。引物信息如下表1所示：

表1：P21的qPCR检测的引物信息表

HFF细胞的完全培养基为DMEM+10％FBS+0.5％双抗，培养条件为37摄氏度，5％CO

如图5所示，结果显示，UV照射能够显著提高HFF细胞的P21水平(One-way ANOVA,Dunnett’s multiple comparisons test,p<0.0001)，使用特拉唑嗪(TZ)处理后，P21的转录水平能够显著降低(One-way ANOVA,Dunnett’s multiple comparisons test,p<0.0001)。该结果进一步表明：特拉唑嗪能够显著抑制UV照射引起的成纤维细胞衰老。

实施例3：特拉唑嗪降具有抗氧化作用

氧化应激在衰老进程中扮演极为重要的角色。因此，实施例3检测了UV照射诱导衰老条件下细胞内的活性氧水平，使用ROS探针(Invitrogen，Image-iT

如图6所示，HFF细胞的完全培养基为DMEM+10％FBS+0.5％双抗，培养条件为37摄氏度，5％ CO

实施例4：特拉唑嗪抑制UV照射引起的细胞死亡

过量的紫外照射会引起皮肤细胞的死亡，从而诱发相关的衰老表型。实施例4在HACAT细胞中，使用较高强度的紫外照射诱导HACAT细胞发生细胞死亡。将HACAT细胞铺板至96孔细胞培养板中进行评价，初始铺板细胞数量为每孔0.8-1.2万个细胞。铺板24小时后，UV照射(UV-A 95％，UV-B 5％，UV-A 1.5W/m

同时，还使用ATP检测(Promega,Cell

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。