一种抗肿瘤药物

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及一种抗肿瘤药物，尤其是一种含有一枝黄花总黄酮总皂苷以及芹菜素的抗肿瘤药物。

背景技术

常见的肿瘤化疗药物治疗方法效果好但副作用较大。中药辅助西药治疗肿瘤在增强化疗药物疗效、提高机体免疫力、延长生存期、降低复发转移率及减轻副作用等方面有着积极的意义。

菊科一枝黄花属含有120多个亚类，主要生长在北美洲，我国境内有4个品种，即一枝黄花、毛果一枝黄花、加拿大一枝黄花和钝苞一枝黄花，不同品种的化学成分也有所差异。一枝黄花主要含黄酮、皂苷、苯甲酸苄酯、当归酸桂皮酯、炔属化合物、苯丙酸等化学成分，其药理活性主要来源于其黄酮、皂苷组分。

一枝黄花总黄酮总皂苷(Solidago securrens total saponin and flavone，SDSF)为天然化合物，明显不同于常用细胞毒类抗肿瘤药物，且SDSF作为化疗药增效剂类的药物应用尚未见报道。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种可以提升癌症治疗效果的抗肿瘤药物。

本发明提供了一种抗肿瘤药物，用于治疗癌症，具有这样的特征，包括：一枝黄花总黄酮总皂苷以及芹菜素。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征，包括：含有一枝黄花总黄酮总皂苷的溶液以及含有芹菜素的溶液。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，含有一枝黄花总黄酮总皂苷的溶液中一枝黄花总黄酮总皂苷的浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，含有芹菜素的溶液中芹菜素的浓度为30μmol/mL-80μmol/mL。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，含有一枝黄花总黄酮总皂苷的溶液中溶剂为PBS或生理盐水。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，一枝黄花总黄酮总皂苷与芹菜素的质量比为1：(47.25-94.5)。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，一枝黄花总黄酮总皂苷的制备方法包括如下步骤：步骤1，取一枝黄花药材，粉碎，过筛，得一枝黄花粉；步骤2，向一枝黄花粉中加入乙醇溶液，回流提取，得提取液；步骤3，将提取液过滤，浓缩，除去乙醇至提取液与一枝黄花粉的体积比为1：(0.5-2)，得浓缩液；步骤4，将浓缩液通过聚酰胺柱，加水洗脱直至洗脱液的硫酸香草醛反应为阴性，收集硫酸香草醛反应为阳性的洗脱液，得水洗脱液，将水洗脱液浓缩至一枝黄花粉体积的30％-40％，冷却至室温，得水洗脱液浓缩液，向水洗脱液浓缩液中加入丙酮至丙酮的体积分数为70％-80％，静置8h-24h，过滤取固体，干燥，得总皂苷；步骤5，继续向聚酰胺柱加体积分数为20％-40％的乙醇水溶液洗脱直至洗脱液的三氯化铝反应为阳性；步骤6，继续向聚酰胺柱加氨试液洗脱直至洗脱液的的三氯化铝为阴性，收集三氯化铝反应为阳性的洗脱液，得氨试液洗脱液，将氨试液洗脱液浓缩，干燥，得总黄酮；步骤7，将总皂苷以及总黄酮混合，即得一枝黄花总黄酮总皂苷。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，在步骤1中，乙醇溶液的用量为一枝黄花粉质量的3-7倍。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，在步骤1中，乙醇溶液的体积分数为60％-80％。

在本发明提供的一种抗肿瘤药物中，还可以具有这样的特征：其中，癌症为肺癌。

发明的作用与效果

根据本发明所涉及的抗肿瘤药物，由于本发明创造性地将一枝黄花总黄酮总皂苷(SDSF)与传统的抗肿瘤化疗药芹菜素进行联合使用，因此本发明提供的抗肿瘤药物可以明显提升芹菜素治疗癌症的效果，可以进一步显著抑制肿瘤生长，诱导肿瘤凋亡。

附图说明

图1是本发明的测试例1中体外肿瘤细胞抑制增殖结果的柱状图；

图2是本发明的测试例2中体外肿瘤细胞诱导凋亡作用图；以及

图3是本发明的测试例2中体外肿瘤细胞诱导凋亡结果的作用图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本发明作具体阐述。

下述实施例中使用的原料如下：

一枝黄花，采集自宜春市郊，经宜春学院医学院药理教研室鉴定，为菊科一枝黄花属一枝黄花，拉丁学名为Solidago decurrens Lour.。

其余实际均为市售产品。

<实施例1>

一种抗肿瘤药物

本实施例提供了一种抗肿瘤药物，其由浓度为0.2g/mL的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液以及浓度为70mmol/mL的芹菜素生理盐水溶液组成，分别以体积比1:1000的比例加入稀释剂中，其中，一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液与芹菜素生理盐水溶液的体积比为1:1。在本实施例中，稀释剂为适用于细胞实验的RMPI-1640 培养基。在别的实施例中，稀释剂也可以是生理盐水或者是别的医学上可以接受的溶剂。

在本实施例中，一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液的配置方法步骤如下：

步骤1，取一枝黄花全株，粉碎，过2号筛，得一枝黄花粉；

步骤2，向一枝黄花粉中加入一枝黄花粉质量5倍的体积分数为 70％乙醇水溶液，回流提取2次，每次2h，合并2次得到的溶液，静置至室温，得提取液；

步骤3，将提取液过滤，回收滤液，浓缩，除去乙醇至提取液与所述一枝黄花粉的体积比为1：1，得浓缩液；

步骤4，将浓缩液通过聚酰胺柱(聚酰胺，30-60目(550-250μm)，沧州宝恩吸附材料科技有限公司)，加水洗脱直至洗脱液的硫酸香草醛反应为阴性，收集硫酸香草醛反应为阳性的洗脱液，得水洗脱液，将水洗脱液浓缩至一枝黄花粉体积的37.5％(即将水洗脱液浓缩至水洗脱液与一枝黄花粉的体积比为3：8)，冷却至室温，得水洗脱液浓缩液，向水洗脱液浓缩液中加入丙酮至丙酮的体积分数为75％，静置 12h，过滤取固体，减压干燥，得总皂苷；

步骤5，继续向聚酰胺柱加体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱直至洗脱液的三氯化铝反应为阳性；

步骤6，继续向聚酰胺柱加氨试液洗脱直至洗脱液的的三氯化铝为阴性，收集三氯化铝反应为阳性的洗脱液，得氨试液洗脱液，将氨试液洗脱液浓缩，减压干燥，得总黄酮；

步骤7，将总皂苷以及总黄酮混合，即得一枝黄花总黄酮总皂苷；

步骤8，取一枝黄花总黄酮总皂苷溶于适量的生理盐水中，即得 0.2g/mL的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液。

<实施例2>

一种抗肿瘤药物

本实施例提供了一种抗肿瘤药物，其由浓度为0.2g/mL的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液以及浓度为35mmol/mL的芹菜素生理盐水溶液组成，分别以体积比1:1000的比例加入稀释剂中，其中，一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液与芹菜素生理盐水溶液的体积比为1:1。在本实施例中，稀释剂为适用于细胞实验的RMPI-1640 培养基。在别的实施例中，稀释剂也可以是生理盐水或者是别的医学上可以接受的溶剂。

在本实施例中，一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液的配置方法与实施例1中的相同，在此不再赘述。

<对照例>

为了更好地展现试验效果，还设置了4组对照例，详见表1。

表1 对照组的设置

其中，对照例2中的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液与实施例1中的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液配置方法相同。

<测试例1>

抑制癌细胞增殖试验

在本测试例中采用MTT试验来检测实施例1-2提供的抗肿瘤药物的抑制癌细胞增殖的效果。

具体的试验步骤如下：

0.25％胰蛋白酶消化、吹打并收集处于对数生长期的A549人类肺癌细胞(购于中国科学院上海细胞库)，并用RMPI-1640培养基制成含有A549细胞的悬液，接种于96孔培养板(每孔细胞数在10000 个左右)，在细胞培养箱中(37℃、5％CO

避光于细胞培养箱中培养24小时后，每孔加入MTT溶液20μL，于细胞培养箱中孵育4小时后，吸去溶液，每孔加入200μL DMSO 溶液，放置于摇床上低速震荡10分钟，使结晶物充分溶解，之后使用酶标仪在波长570nm处测定各孔的吸光度OD值，并计算细胞存活率。

共进行了5次平行试验，5次试验的结果如表2以及图1所示。

表2 抑制癌细胞增殖试验细胞存活率结果表(％)

如表2及图1所示，实验结果显示，药物作用24h后，SDSF的IC50 为288.3±5.6μg/mL，芹菜素的的IC50为66.4±5.5μmol/mL。0.2 mg/mL SDSF作用24h后，细胞存活率为80.1±3.0％；35μmol/mL芹菜素作用24h后，细胞存活率为75.3±3.1％；70μmol/mL芹菜素作用24h后，细胞存活率为46.9±2.3％。0.2mg/mL SDSF与35μmol/mL 芹菜素联合应用24h后，细胞存活率为40.7±2.8％；0.2mg/mL SDSF 与70μmol/mL芹菜素联合应用24h后，细胞存活率为6.1±0.3％。显然，一枝黄花总黄酮总皂苷与芹菜素联合治疗可以增加化疗药治疗肿瘤的效果，可以显著抑制肿瘤生长。

<测试例2>

诱导细胞凋亡试验

在本测试例中采用Hoechst 33342试验来检测实施例1-2提供的抗肿瘤药物的促进癌细胞凋亡的效果。

具体的试验步骤如下：

A549细胞分别加入含有各个实施例与对照例药液，每孔总体积为3mL，对应的各个实施例与对照例中药物的质量为：对照例1，无；对照例2，0.6mg SDSF；对照例3，28.35μg芹菜素；对照例4，56.7μg 芹菜素；实施例1,0.6mg SDSF+56.7μg芹菜素；实施例2,0.6mg SDSF+28.35μg芹菜素。

培养24小时后，从37℃细胞培养箱中取出，加入1:1000比例的Hoechst 33342试剂，原位装载探针后，放入细胞培养箱中，避光孵育10-20分钟之后吸去染液，用PBS清洗3次，之后放置在荧光显微镜下观察细胞的核形态并拍照。

共进行了3次平行试验，3次试验的结果如表3以及图2-3所示。

表3 诱导细胞凋亡试验细胞凋亡率结果表(％)

如表3及图2-3所示，药物作用24h后，0.2mg/mL SDSF作用 24h后，细胞凋亡率为15.7±2.3％；35μmol/mL芹菜素作用24h后，细胞凋亡率为19.2±3.2％；70μmol/mL芹菜素作用24h后，细胞凋亡率为43.9±3.3％。0.2mg/mL SDSF与35μmol/mL芹菜素联合应用24h后，细胞凋亡率为67.4±3.3％；0.2mg/mL SDSF与70μmol/mL 芹菜素联合应用24h后，细胞凋亡率为81.9±4.1％。

显然，一枝黄花总黄酮总皂苷与芹菜素联合治疗可以增加化疗药治疗肿瘤的效果，可以显著诱导细胞凋亡。

实施例的作用与效果

根据上述实施例所涉及的抗肿瘤药物，由于本发明创造性地将一枝黄花总黄酮总皂苷(SDSF)与传统的抗肿瘤化疗药芹菜素进行联合使用，尤其将0.2mg/mL的一枝黄花总黄酮总皂苷的生理盐水溶液与 35-70μmol/mL的芹菜素生理盐水溶液联合使用，因此本发明提供的抗肿瘤药物可以明显提升芹菜素治疗癌症的效果，可以进一步显著抑制肿瘤生长，诱导肿瘤凋亡。

上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。