一种具有抗衰老功效的含松茸提取物的组合物及其应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域。更具体地，涉及一种具有抗衰老功效的含松茸提取物的组合物及其应用。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，其最重要的作用就是屏障功能，即防止外界刺激对皮肤产生伤害，同时防止皮肤内部水分散失。随着自然衰老，在衰老过程中发生进行性线粒体功能障碍，会增加ROS(活性氧)生成，后者会进一步导致线粒体功能恶化和细胞整体损害。正常情况下，皮肤细胞内的自由基受相应的调控机制作用，使之维持在一定的阈值范围之内，保持动态平衡。一定量的自由基在能量传递、炎症消除和清除坏死细胞等方面有着重要作用，然而，当生物体处于不利环境中，或者细胞长期处于缺氧状态，或强光或高温环境中等，过多的ROS不能够被及时清除，在机体内累积下的自由基将对细胞造成多方面的危害，多余的活性氧自由基容易引发过氧化反应，破坏生物膜结构，对细胞内的内环境和稳态构成直接威胁，同时它也能够氧化大分子蛋白，使蛋白质产生交联积聚，甚至导致功能蛋白丧失原有生物活性。

此外，过量的DPPH活性氧自由基容易损伤线粒体DNA，致使线粒体遗传信息不能正常表达，严重影响能量转换酶作用系统的运转，对于细胞核内的DNA而言，自由基能够使其产生聚积，改变基因序列，诱发基因突变。在细胞内由过量ROS诱发的氧化应激反应使细胞功能异常，对机体的生理功能造成不同程度的伤害，进而引发人体衰老以及相关疾病的发生。

其中，在自然的衰老过程中，最为常见的就是紫外辐射(UVB)造成的皮肤损伤，UVB可损伤至真皮层，胶原蛋白受损，弹力纤维出问题，皮肤变得松弛，出现皱纹，光老化严重时，皮肤出现皱纹很难通过护肤品来恢复，表情纹日积月累，使皮肤呈现老态，表情纹是皮肤呈现衰老状态的一个重要的因素。

目前大部分的抗光老化产品的主要成分为非天然成分和辅料进行混合使用。其采用的非天然成分多为视黄醇，然而第一次使用视黄醇的人可能会经历脱皮，这也是视黄醇的最常见副作用之一，这种不良影响会在皮肤适应产品后自行消失；另一个常见的不良反应是皮肤干燥和瘙痒，这类问题虽然可以通过保湿液或其他保湿成分得使用能够解决，但是还是会对皮肤产生一定影响。而现有技术中有采用天然植物提取物进行复配得到的抗衰老产品，具有绿色安全，副作用低的特点，虽然能够避免非天然成分对皮肤带来的影响，但主要以补充皮肤维生素为主要作用，其抗衰效果有限。因此，开发和选择更多有效的、制备简单的天然植物取提取物进行复配使用，制备可有效延缓皮肤氧化、对抗因UV照射导致的衰老的皮肤问题的产品是当前亟需的。

发明内容

本发明为了克服上述问题，提供一种具有抗衰老功效的含松茸提取物的组合物及其应用，该组合物能够有效缓解皮肤氧化，抗衰老的肌肤问题，修护皮肤的屏障功能，使皮肤恢复健康状态，旨在提供更多高效的抗衰老产品。

本发明的目的是提供一种具有抗衰老功效的组合物。

本发明另一目的是提供含松茸提取物的组合物的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供一种具有抗衰老功效的组合物，包括如下组分：松茸提取物、麦角硫因和补骨脂酚。本发明研究显示，将松茸提取物、补骨脂酚、麦角硫因复配得到的组合物，其效果明显优于各组分单独使用或两种组分配合使用的简单叠加，具有显著的协同增效作用，能够显著抑制非酶糖基化，具有很好地抗衰老作用；对UV诱导的皮肤光老化损伤的具有很好地修复效果，能避免出现皮肤干燥、红斑、粗糙皱纹和表皮增厚等损伤状态，能显著降低氧化应激和炎症因子IL-1β、IL-6、COX-2、TNF-α的水平，减轻皮肤炎症，避免引起皮肤光损伤，有效改善皮肤氧化，修护皮肤屏障功能，保护皮肤。

进一步地，所述松茸提取物、补骨脂酚和麦角硫因的质量比为：(1～10)：(0.1～1)：(0.01～0.05)。

优选地，所述松茸提取物、补骨脂酚和麦角硫因的质量比为：(5～10)：(0.5～1)：(0.01～0.03)。

优选地，所述松茸提取物、补骨脂酚和麦角硫因的质量比为：(5～7.5)：(0.5～0.75)：(0.01～0.02)。

更优选地，松茸提取物、补骨脂酚和麦角硫因的质量比为：5:0.5:0.01。

本发明提供的具有抗衰老作用的组合物，通过天然提取物：松茸提取物、麦角硫因、补骨脂酚各组分的科学配比，其中，松茸提取物能够清除线粒体末端DPPH自由基，麦角硫因具有清除自由基，解毒，维持DNA的生物合成功效，补骨脂酚具有抗氧化作用。本发明提供的组合物通过抑制非酶糖基化反应、清除自由基、强化皮肤屏障等多个途径，各组分协同增效，相辅相成，修护皮肤屏障功能，从而达到抗衰老的功效。

松茸提取物由松茸制备得到，松茸(TMP)是一种药食同源真菌，含有极为丰富的糖类、氨基酸与多肽、挥发性物质类、维生素及矿物质类、脂类物质等成分。松茸具有抗辐射、调节免疫作用、美白护肤、抗光老化、抗糖尿病、抗高血压、调节肠胃、抗氧化、抗癌抗肿瘤等药理作用，具有很高的食用及药用价值。近年来，有诸多研究将松茸或松茸提取物用于化妆品研发中，证明松茸提取物中的活性成分对皮肤抗衰老、抗氧化、美白抗皱方面有显著的影响，市场前景广阔。因此将松茸提取物应用于化妆品中，符合现代化妆品安全天然绿色的发展趋势。

本发明采用的松茸提取物的制备方法为：采用干燥的松茸，料液比按照1:(5-15)加入75-85％的乙醇溶液，在70-80℃下，水浴加热提取1-3h，提取2-3次，再经过滤、浓缩、稀释得到松茸提取物。

进一步优选地，松茸提取物的制备方法为：采用干燥的松茸，料液比按照1:10加入75％的乙醇溶液，在80℃下，水浴加热提取2h，提取2次，再经过滤、浓缩、稀释得到。

麦角硫因(巯基组氨酸三甲基内盐，ergothioneine，EGT)是一种天然抗氧化剂安全，无毒，麦角硫因主要来源于蘑菇、西兰花、球芽甘蓝等植物，具有清除自由基，解毒，维持DNA的生物合成，细胞的正常生长及细胞免疫等多种生理功能；在人体内可以对细胞起到保护作用，是机体内的重要活性物质。天然抗氧化剂已经成为研究的热点。

优选地，本发明采用的麦角硫因可以通过本领域常规方法制备得到，也能够直接通过购买产品使用，麦角硫因的纯度不低于98％。

补骨脂酚来源于豆科植物补骨脂的成熟果实，具有控油抗痘、抑菌抗炎的功效，能用于治疗肌肤暗黄和炎症后的色素沉积，其美白原理是抑制络氨酸单酚酶和二酚酶的活性，起到一定的美白效果。另外，补骨脂酚具有良好的抗氧化、抗衰老功效，它是一种比维生素E更强的脂溶性抗氧化剂，可以抑制自由基诱导的脂质过氧化，同时还能预防紫外线对肌肤的破坏，延缓细胞的凋亡。

优选地，本发明采用的补骨脂酚可以通过本领域常规方法制备得到，也能够直接通过购买产品使用，补骨脂酚的纯度不低于98％。

本发明提供上述组合物在制备抗衰老、抗光老化的产品中的应用。

本发明提供上述组合物在制备非酶糖基化抑制剂中的应用。

本发明还提供一种抗衰老、抗光老化的产品，含上述组合物及辅料。

特别地，本发明研究显示该组合物在抗衰老、抗光老化方面具有很好的作用效果，在原则上采用组合物的用量越多其效果会越好，但是用于制备不同的产品需要考虑其他辅料的使用，以及平衡效果与成本，把控各原料之间效果以及适配性，本发明不限定所述产品中含有的组合物的用量，但可预见的，在不影响本发明组合物作用效果的前提下，以该组合物制备的产品是能够发挥相应作用的。

优选地，所述辅料包括保湿剂、抗氧剂、润肤剂、防腐剂中的至少一种。

优选地，所述产品为护肤品或化妆品；更优选地，所述护肤品为护肤水、乳液、霜、面膜或精华液等。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供一种具有抗衰老功效的组合物，包括如下组分：松茸提取物、麦角硫因和补骨脂酚。本发明研究显示，将松茸提取物、补骨脂酚、麦角硫因进行复配，其效果明显优于各组分单独使用或两种组分配合使用的简单叠加，具有显著的协同增效作用，能够显著抑制非酶糖基化，具有很好地抗衰老作用。本发明提供的组合物对UV诱导的皮肤光老化损伤的具有很好地修复效果，能避免出现皮肤干燥、红斑、粗糙皱纹和表皮增厚等损伤状态，能显著降低氧化应激和炎症因子IL-1β、IL-6、COX-2、TNF-α的水平，减轻皮肤炎症，避免引起皮肤光损伤，有效改善皮肤氧化，修护皮肤屏障功能，保护皮肤。同增效作用。

本发明提供的组合物为天然的植物提取物，物料成本及制备成本适中，制备简单，毒副作用较低，容易获取，价格便宜，为化妆品领域提供更多高效的抗衰老产品。

附图说明

图1为不同组合物对小鼠光老化皮肤修复结果图((a)为小鼠背部光老化和给药组修复情况；(b)为小鼠背部光老化pasi量化评分；(c)为小鼠背部皮肤HE染色处理20X放大扫描图片(d)为小鼠组织表皮平均厚度pasi量化评分；C空白组，MC模型组，D实施例1组合物，F实施例3组合物，Y案例6组合物，G案例1组合物)。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

本发明采用的以下实施例中采用的干燥松茸、补骨脂酚、麦角硫因均为市购，实验小鼠：KM小鼠(周龄6-8周)，由红萝卜-卡洛特生物公司提供。

实施例1组合物的制备

松茸提取物：取200g干燥的松茸，按照1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，在85℃下，水浴加热提取3h，提取2-3次，再经过滤、浓缩、稀释得到松茸醇提物。

补骨脂酚：购自格林生物有限公司，98％纯度。

麦角硫因：购自麦克林公司，98％纯度。

本实施例提供的组合物，按照以上步骤分别得到松茸提取物、补骨脂酚、麦角硫因后，将三种组分按质量比5:0.5:0.01进行混合后即得，具体采用5g松茸提取物、0.5g补骨脂酚、0.01g麦角硫因。

实施例2组合物的制备

松茸提取物：取200g干燥的松茸，按照1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，在85℃下，水浴加热提取3h，提取2-3次，再经过滤、浓缩、稀释得到松茸醇提物。

补骨脂酚：购自格林生物有限公司，98％纯度。

麦角硫因：购自麦克林公司，98％纯度。

本实施例提供的组合物，按照以上步骤分别得到松茸提取物、补骨脂酚、麦角硫因后，将三种组分按质量比7.5:0.75:0.02进行混合后即得，具体采用7.5g松茸提取物、0.75g补骨脂酚、0.02g麦角硫因。

实施例3组合物的制备

松茸提取物：取200g干燥的松茸，按照1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，在85℃下，水浴加热提取3h，提取2-3次，再经过滤、浓缩、稀释得到松茸醇提物。

补骨脂酚：购自格林生物有限公司，98％纯度。

麦角硫因：购自麦克林公司，98％纯度。

本实施例提供的组合物，按照以上步骤分别得到松茸提取物、补骨脂酚、麦角硫因后，将三种组分按质量比10:1:0.03进行混合后即得，具体采用10g松茸提取物、1.0g补骨脂酚、0.03g麦角硫因。

实施例4不同组分组合物的制备

本发明同时研究并制备了多种不同组分以及含量的组合物用于后续检测研究，具体组分及其含量如下表1所示，松茸提取物的制备方法同实施例1，补骨脂酚购自格林生物公司，98％纯度；麦角硫因购自麦克林公司，98％纯度。

表1不同组分的组合物含量

测试例1不同组合物对非酶糖基化反应的抑制实验

向100mL pH＝7.4的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中加入19.82g葡萄糖、0.4024g牛血清白蛋白和0.39g叠氮化钠，混匀后即形成反应液。

将实施例1～3以及案例1～11制备得到的组合物，分别采用蒸馏水配置为不同浓度的待测液，配置浓度为50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL。

取14支试管，分别向每支试管中依次加入4mL反应液、1mL不同浓度的待测液，使所有试管中溶液总体积均为5mL。采用荧光分光光度计测定所有试样的初始荧光值，然后将所有试管置于37℃水浴中避光保存7d，再测定各试管中试样的荧光值；又继续将所有试管在37℃水浴中避光保存7d后测定荧光值。测试条件为：激发波长370nm，狭缝5nm；发射波长范围380～500nm，狭缝5nm；光源电压700V。

不同组合物对非酶糖基化反应的抑制结果如下表2所示，经测定表明实施例1～3及案例1～11的组合物均具有抑制非酶糖基化反应的活性，但对非酶糖基化反应的抑制能力存在差异；其中，实施例1～3的组合物在不同浓度下对非酶糖基化反应的抑制率较好，抑制率在63.46～78.94％之间，在相同的浓度下显著优于其他案例组合物，且实施例1的组合物的配比效果最佳，抑制率能达到78.94％。而在只含有一种组分的案例1～3中，对非酶糖基化反应的抑制效果较差。在案例4～9中，采用两两种组分的组合物对非酶糖基化反应的抑制效果，对比案例1～3稍微提高了，但其效果还是显著低于实施例1～3组合物，就算将其两两组分与单一组分的效果简单相加其效果也没有实施例1～3的组合物效果好。在案例10～11中，通过调整松茸提取物的添加比例复配得到的组合物对非酶糖基化反应的抑制效果相比案例1～9在逐步上升，比单一组分和两两组分的效果好，但还是不及本发明实施1～3效果优异。

表2不同组合物对非酶糖基化反应的抑制率

综上，表明本发明将松茸提取物，补骨脂酚、麦角硫因复配得到的组合物具有较好的非酶糖基化反应抑制作用，具有很好地抗衰老作用，药效明显优于各组分单独使用或两种组分配合使用的简单叠加，具有显著的协同增效作用。

测试例2组合物对于UVB诱导衰老的保护作用

分别选用上述实施例1、3和案例1、6制备得到的组合物进行评价对UVB诱导昆明小鼠皮肤损伤的保护作用：通过皮肤组织学和病理切片观察组合物对小鼠皮肤的影响。分别取正常饲养的小鼠(KM小鼠(周龄6-8周)，将其背部区域脱毛，对该区域进行照射紫外(UVA照射强度累计为148.47J/cm

分别将不同的组合物溶解在30％的乙醇水溶液中作为实验药物，并控制各组药物的浓度相同。其中空白对照组(C)和模型对照组(MC)直接给予涂抹30％的乙醇水溶液2mL；组合物低剂量组(D)为采用实施例1的组合物(5％松茸提取物+0.5％补骨脂酚+0.01％麦角硫因)配置的药物溶液2mL进行涂抹；组合物高剂量组(F)为采用实施例3的组合物(10％松茸提取物+1％补骨脂酚+0.03％麦角硫因)配置的药物溶液2mL进行涂抹；药物处理组(Y)为采用案例6组合物(0.5％补骨脂酚+0.01％麦角硫因)，涂抹2ML溶液；药物处理组(G)为采用案例1组合物(5％松茸提取物)，涂抹2ML溶液。每次在UVB照射后15min涂抹药物。每周对小鼠进行处理，观察小鼠情况；并通过现有技术结合实验样品情况优化了小鼠光老化评分标准，如表2所示，进一步评价小鼠皮肤的变化。

表2小鼠光老化评分标准

结果如图1所示，在图1a中，通过观察小鼠皮肤的皱纹、干燥、红斑情况，可以看出，在局部使用组合药物治疗的小鼠中，UVB辐射引起的这些变化具有明显改善，与正常对照组(C)的健康背部皮肤相比，紫外线照射的模型组(MC)会促进皮肤干燥、红斑、粗糙皱纹，甚至出现明显的肉色皮损；在实施例1组合物(D)外用后，有抑制UVB引起的大面积红斑和皮革样外观的趋势。其效果明显优于F和Y组，而仅涂抹松茸提取物药物的G组对光老化损伤的修复效果优于不含松茸提取物的Y组，但效果仍不及D组组合物显著。可以比较容易的看出，使用了实施例1的组合物能够有效的改善UVB带来的皮肤损伤。结合表2评价小鼠背部结果如图1b所示，显示小鼠背部表皮增厚。

此外，进一步通过HE染色来对表皮组织进行平均厚度量化分析来验证UV多表皮增厚的影响。结果如图1c所示，不难看出D组的表皮平均密度相较于模型组有了明显的改善，而F组的修复效果略差于D组，G组的修复效果更次之，而不添加松茸提取物的Y组修复效果不明显。结合表2评价小鼠皮肤厚度结果如图1d所示，显示D组和F组明显降低了小鼠表皮肤厚度。

综上结果显示实施例1和实施例3的组合物处理组能够显著减轻UVB诱导的小鼠背部皮肤红斑、皱纹、水肿以及表皮增厚等现象，对UVB辐射诱导的小鼠皮肤损伤具有保护的作用。

测试例3组合物对于氧化应激和炎症的保护作用

氧化应激和炎症是引起皮肤光损伤的主要因素。进一步通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)进行研究，取空白组、模型组、实施例1组合物处理组(D)的小鼠的皮肤组织，并设置维生素E组为阳性对照(对照处理按照实施例6中处理方法条件进行)并取处理后的小鼠皮肤组织，将各组皮肤组织进行匀浆取上清液，测定皮肤组织匀浆液中IL-1β、IL-6、COX-2、TNF-α水平，具体操作严格参照试剂盒说明。

结果如表4所示，显示在UVB诱导下，与空白组相比，模型组皮肤中炎症因子IL-6和TNF-α显著增加(P<0.01)，且IL-1β、COX-2也具有上升趋势。值得注意的是，与空白组相比，实施例1组合物能够使皮肤中IL-1β显著降低(P<0.05)，使皮肤中IL-6显著下降为63.55±42.81pg/mL(P<0.05)，COX-2显著下降为3.53±2.22ng/mL(P<0.05)、TNFα显著降低到5.95±3.39pg/mL(P<0.01)。与模型组相比，维生素E能够显著降低COX-2和TNF-α水平(P<0.05)。与维生素E组相比，实施例1组合物组IL-1β、IL 6、TNFα、COX-2均有下降趋势，其效果优于维生素E组。

表4受试物对UVB诱导ICR小鼠光老化皮肤中炎症因子的影响

注：*表示组间有显著性差异。

综上结果显示本发明提供的实施例1组合物能够显著降低氧化应激和炎症因子IL-1β、IL-6、COX-2、TNF-α的水平，避免引起皮肤光损伤，对UVB辐射诱导的小鼠皮肤损伤具有保护的作用。

实施例5

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中料液比不同：按照1:5的料液比提取得到松茸醇提物。

实施例6

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中料液比不同：按照1:15的料液比提取得到松茸醇提物。

实施例7

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中提取温度不同：在70℃下水浴提取得到松茸醇提物。

实施例8

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中提取温度不同：在80℃下水浴提取得到松茸醇提物。

实施例9

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中采用的乙醇溶液不同：采用75％的乙醇溶液提取得到松茸醇提物。

实施例10

本对比例设置同实施例1，唯一区别在于松茸提取物的提取方法中采用的乙醇溶液不同：采用85％的乙醇溶液提取得到松茸醇提物。

采用上述实施例5～10的组合物进行非酶糖基化反应活性测定，测定方法同测试例1，评价对比例实施例5～10的抗衰效果；结果显示，实施例5～10调整松茸提取物的提取条件，制备得到的松茸提取物对非酶糖基化反应的抑制效果均低于实施例1，其抑制效果还是优于实施例4中案例1-9所述单一组分或两两组分的组合物，也具较好的抗衰老作用。

进一步将本发明提供的组合物用于制备面霜、乳液、精华液等护肤品或化妆品，其护肤品或化妆品也同样具有消除皱纹、抗氧化，修复光老化损伤的效果，且本发明提供的组合物与其他原料组分之间的适配性良好，能发挥其组合物的抗衰老作用效果，保护皮肤。

实施例11

本发明提供一种含实施例1的抗衰老护肤品--面霜，含有如下的质量百分比成分：实施例1组合物0.3wt％，神经酰胺0.3wt％、卵磷脂类1.0wt％、植物甾醇类0.5wt％、多元醇7.5wt％、螯合剂0.3wt％、增稠剂3wt％、乳化剂3.5wt％、润肤剂20.0wt％、脂肪醇5wt％、皮肤调理剂3wt％、抗氧化剂0.01wt％、防腐剂0.01wt％、香精1.0wt％、去离子水至100.0wt％，所述卵磷脂类选自卵磷脂、氢化卵磷脂、羟基化卵磷脂中的一种或几种。

实施例12

本发明提供一种含实施例1的抗衰老护肤品--乳液，含有如下的质量百分比成分：实施例1组合物1.0wt％，甘油30.0wt％、硬脂酸山梨醇4.0wt％、椰油酸蔗糖酯3.0wt％、碳酸二辛酯5.0wt％、石蜡2.0wt％、柠檬酸3.0wt％、维生素C0.1wt％、硬脂酸钠1.0wt％、去离子水至100.0wt％。

实施例13

本发明提供一种含实施例1的抗衰老护肤品--精华液，含有如下的质量百分比成分：实施例1组合物5.0wt％，丁二醇40.0wt％；去离子水至100.0wt％。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。