一种消肿止痛组合物质量控制方法

技术领域

本发明涉及药品质量控制领域，具体涉及一种消肿止痛组合物质量控制方法。

背景技术

以消肿止痛酊为代表的消肿止痛组合物，其药材组成为：木香，防风，荆芥，细辛，五加皮，桂枝，牛膝，川芎，徐长卿，白芷，莪术，红杜仲，大罗伞，小罗伞，两面针，黄藤，栀子，三棱，沉香，樟脑，薄荷脑。消肿止痛酊为广西壮族自治区花红药业集团股份公司的中成药产品，为外用剂，具有舒筋活血，消肿止痛之功效。主治跌打损伤，风湿骨痛，无名肿毒及腮腺炎肿痛。

目前对于消肿止痛酊的主要研究在于通过液相色谱-质谱联用法测定马兜铃酸A、高效液相色谱法测定盐酸巴马汀和毛细管气相色谱法测定樟脑与薄荷脑含量等。消肿止痛酊可外用，擦患处，也可口服，但是对于其在透皮吸收方面的研究十分少有，所以本实验的选择通过体外透皮实验对消肿止痛酊进行研究，为消肿止痛酊的质量控制提供一种新的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种消肿止痛组合物质量控制方法。该方法依托高效液相色谱仪，通过离体大鼠皮通过尤斯室进行透皮成分提取，形成了一种新形式的消肿止痛组合物质量控制方法。

本发明的技术方案如下：

所述的消肿止痛组合物质量控制方法，包括以下步骤：

A、配制成重量百分数0.9％的生理盐水，向0.9％的生理盐水加入PEG400，充分溶解，制得接收侧溶液，备用；其中，生理盐水和入PEG400的重量比例为4-6：1的重量比混合；

B、采用尤斯室进行供试品溶液制备，将大鼠皮固定在0.5cm

C、采用液相色谱程序升温分离，然后通过紫外检测器检测；

所述的液相色谱条件为：

色谱柱为C18色谱柱；

流动相为乙腈-0.1％乙酸水，梯度洗脱：0～2min,5％乙腈；2～4min,5％～10％乙腈；4～8min,10％～30％乙腈；8～26min,30％～95％乙腈；26～30min,95％～95％乙腈；

体积流量0.1-0.5m L/min；

柱温35-45℃；

检测波长250-270nm。

优选的，所述的液相色谱条件为：

色谱柱为C18色谱柱；

流动相为乙腈-0.1％乙酸水，梯度洗脱：0～2min,5％乙腈；2～4min,5％～10％乙腈；4～8min,10％～30％乙腈；8～26min,30％～95％乙腈；26～30min,95％～95％乙腈；

体积流量0.3m L/min；

柱温40.0℃；

检测波长：262nm。

优选的，所述的液相色谱条件中，C18色谱柱规格为：150mm×3.0mm,3μm。

所述的消肿止痛组合物由以下药材制成：木香，防风，荆芥，细辛，五加皮，桂枝，牛膝，川芎，徐长卿，白芷，莪术，红杜仲，大罗伞，小罗伞，两面针，黄藤，栀子，三棱，沉香，樟脑，薄荷脑。

所述的消肿止痛提取物制备方法包括以下步骤：

取除樟脑、薄荷脑外的全部药材，进行醇提，然后加入樟脑、薄荷脑混合均匀，即得。

所述组合物制备成消肿止痛酊时，步骤B中，向给药侧容室加入消肿止痛酊5ml。

所述的步骤C中检测出的色谱图中应包含以下成分的色谱峰：

γ-氨基丁酸、补骨脂素、没食子酸丙酯、2-糠酸甲酯、DL-甘露糖醇、叶枯炔、3,4-二甲氧基苯酚、schizonepetoside E_qt、4-羟基苯甲酸、京尼平苷酸、土曲霉酸、苯乙烯、香草酸、黄芩苷、邻羟基肉桂酸、別桂皮酸、山奈酚、齐墩果酸、壬二酸、异补骨脂素)、MKN-004C、α-雌二醇、雌三醇、丁香酚、邻苯二甲酸二丁酯、花椒毒酚、1-棕榈酸单甘油酯、4,5-Di-O-咖啡酰奎尼酸、R-(+)-1-苯基-1-丙醇、2-羟基-4-甲基苯甲醛、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、苯丙炔酸、对甲氧基苯甲酸、细辛脑、京尼平苷酸、3,4-二羟基苯基-2-丙酮、2,6-二甲氧基-1,4-苯醌、马来酸、5-羟甲基糠醛。

所述的步骤C中检测出的色谱图中应包含以下成分的色谱峰：

本发明的有益效果如下：

本发明建立了一种新的消肿止痛组合物检测方法，该方法有利于进一步监控生产工艺的稳定性，保证其质量的稳定、均一、可控。

本发明提高了消肿止痛组合物，尤其是消肿止痛酊的质量监控标准，有效的避免了产品伪造，保证该品种的正常生产、流通秩序。

本发明的方法具有良好的可行性、稳定性和重现性。

附图说明

图1为实施1的消肿止痛酊高效液相色谱图；

图2为实施2的消肿止痛酊高效液相色谱图.

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。

实施例1

消肿止痛组合物质量控制方法，包括以下步骤：

A、配制成重量百分数0.9％的生理盐水，向0.9％的生理盐水加入PEG400，充分溶解，制得接收侧溶液，备用；其中，生理盐水和入PEG400的重量比例为4：1的重量比混合；

B、采用尤斯室进行供试品溶液制备，将大鼠皮固定在0.5cm

C、采用液相色谱程序升温分离，然后通过紫外检测器检测；

所述的液相色谱条件为：

色谱柱为C18色谱柱，150mm×3.0mm,3μm；

流动相为乙腈-0.1％乙酸水，梯度洗脱：0～2min,5％乙腈；2～4min,5％～10％乙腈；4～8min,10％～30％乙腈；8～26min,30％～95％乙腈；26～30min,95％～95％乙腈；

体积流量0.1mL/min；

柱温35℃；

检测波长250nm。

所述的消肿止痛组合物由以下药材制成：木香，防风，荆芥，细辛，五加皮，桂枝，牛膝，川芎，徐长卿，白芷，莪术，红杜仲，大罗伞，小罗伞，两面针，黄藤，栀子，三棱，沉香，樟脑，薄荷脑。

所述的消肿止痛提取物制备方法包括以下步骤：

取除樟脑、薄荷脑外的全部药材，进行醇提，然后加入樟脑、薄荷脑混合均匀，即得。

实施例2

消肿止痛组合物质量控制方法，包括以下步骤：

A、配制成重量百分数0.9％的生理盐水，向0.9％的生理盐水加入PEG400，充分溶解，制得接收侧溶液，备用；其中，生理盐水和入PEG400的重量比例为6：1的重量比混合；

B、采用尤斯室进行供试品溶液制备，将大鼠皮固定在0.5cm

C、采用液相色谱程序升温分离，然后通过紫外检测器检测；消肿止痛酊样品的色谱图主要峰在3.25min、8.91min、9.11min、10.99min、11.32min、11.19min和17.83min都有较高吸收。表明在消肿止痛酊的成分当中，极性大的成分略多，极性小的成分较少但是个别成分浓度较高，如下图1所示。

所述的液相色谱条件为：

色谱柱为C18色谱柱，150mm×3.0mm,3μm；

流动相为乙腈-0.1％乙酸水，梯度洗脱：0～2min,5％乙腈；2～4min,5％～10％乙腈；4～8min,10％～30％乙腈；8～26min,30％～95％乙腈；26～30min,95％～95％乙腈；

体积流量0.5m L/min；

柱温45℃；

检测波长270nm。

所述的消肿止痛组合物由以下药材制成：木香，防风，荆芥，细辛，五加皮，桂枝，牛膝，川芎，徐长卿，白芷，莪术，红杜仲，大罗伞，小罗伞，两面针，黄藤，栀子，三棱，沉香，樟脑，薄荷脑。

所述组合物制备成消肿止痛酊，步骤B中，向给药侧容室加入消肿止痛酊5ml。

高效液相连接质谱仪，对分离成分进行质谱检测，质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正、负离子模式，扫描范围m/z 100～1000；碰撞能量35e V；离子转移管温度320℃；汽化器温度350℃；正负离子喷雾电压分别为3500和3000V。

进质谱检测后，检测出的色谱图中包含以下成分：

实施例3

消肿止痛组合物质量控制方法，包括以下步骤：

A、配制成重量百分数0.9％的生理盐水，向0.9％的生理盐水加入PEG400，充分溶解，制得接收侧溶液，备用；其中，生理盐水和入PEG400的重量比例为5：1的重量比混合；

B、采用尤斯室进行供试品溶液制备，将大鼠皮固定在0.5cm2扩散室中，外表皮侧为给药侧，向给药侧容室加入消肿止痛提取物；内表皮侧为接收侧，向接收侧容室加入接收液至容室三分之二处，最后在两边容室顶端盖上保鲜膜，开启恒温水浴维持37.5℃恒温，等待36小时，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，得到供试品溶液；

C、采用液相色谱程序升温分离，然后通过紫外检测器检测；消肿止痛酊样品的色谱图主要峰在3.25min、8.91min、9.11min、10.99min、11.32min、11.19min和17.83min都有较高吸收。表明在消肿止痛酊的成分当中，极性大的成分略多，极性小的成分较少但是个别成分浓度较高，如下图2所示。

所述的液相色谱条件为：

色谱柱为C18色谱柱，150mm×3.0mm,3μm；

流动相为乙腈-0.1％乙酸水，梯度洗脱：0～2min,5％乙腈；2～4min,5％～10％乙腈；4～8min,10％～30％乙腈；8～26min,30％～95％乙腈；26～30min,95％～95％乙腈；

体积流量0.3mL/min；

柱温40.0℃；

检测波长：262nm。

所述的消肿止痛组合物由以下药材制成：木香，防风，荆芥，细辛，五加皮，桂枝，牛膝，川芎，徐长卿，白芷，莪术，红杜仲，大罗伞，小罗伞，两面针，黄藤，栀子，三棱，沉香，樟脑，薄荷脑。

所述组合物制备成消肿止痛酊，步骤B中，向给药侧容室加入消肿止痛酊5ml。

高效液相连接质谱仪，对分离成分进行质谱检测，质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正、负离子模式，扫描范围m/z 100～1000；碰撞能量35eV；离子转移管温度320℃；汽化器温度350℃；正负离子喷雾电压分别为3500和3000V。

进质谱检测后，检测出的色谱图中包含以下成分：

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。