一种基于繁殖竞争原理诱导雌性灰海马自然流卵的方法

技术领域

本发明属于海马领域，特别涉及一种基于繁殖竞争原理诱导雌性灰海马自然流卵的方法。

背景技术

卵子是研究动物繁殖机制、繁殖性能、繁殖调控和人工繁殖技术等必不可少的材料。卵子质量直接关系到胚胎的发育及幼体的成活和生长。近几十年，在硬骨鱼类的人工繁育和养殖过程中，卵子质量受到越来越多的重视。灰海马(Hippocampus erectus)是小型硬骨鱼类，在我国开展规模化人工养殖已有十余年的时间，近些年陆续暴露出海马亲鱼繁殖效率低下的问题。为此，众多研究者把目光锁定在了雌海马的卵子质量上，如卵子质量有无衰退，卵子与幼体的转化率有无降低，未转化卵子的去向，以及如何改善卵子质量等。这些研究的开展，其前提条件是能顺利采集到雌海马的卵子。

海马有别于常规鱼类，其生殖方式是体内受精，体内发育。雌海马将卵子产到雄海马的育儿囊内，在育儿囊内完成受精并发育成胚胎，并由雄海马将胚胎孵育成独立的幼体，最终从育儿囊内排出体外。海马这种特殊的生殖方式决定了其不能像体外受精的鱼类那样轻松采集到卵子。目前雌海马卵子采集常见的方法有：(1)将目标雌海马与雄海马配对，寄希望于交配成功后，通过解剖雄海马育儿囊而采集到卵子。这种方法采集到的卵子一方面掺杂有精液成分，另一方面数量众多的卵子在育儿囊狭小的空间内相互挤压致使形态发生变化，甚至破裂，从而无法精准地呈现出数量、卵径、卵黄位置、脂滴大小和分布等信息。此外，更确切地讲，此法采集到的不是卵子而是受精卵。另外，此法的缺点是必须杀掉雄海马。(2)将目标雌海马解剖，取其卵巢而采集到卵子。这种方法造成目标雌海马死亡，致使其无法用于后续连贯性的科学研究，如连续繁殖性能的监测等。此外，由于时机不易把握，此法不易采集到成熟的卵子。(3)等待目标雌海马自发地将卵子直接排入水中，从而采集水中的卵子。发明人前期工作发现，性腺饱满的雌海马有时候会因某些因素的干扰将卵子直接排入水中，这种现象常称“流卵”。尽管用这种方法采集的卵子确实是严格意义上的卵子，但这种方法随机性大、可控程度低，因为雌海马将卵子直接排入水中的时机难以掌控；一些性腺饱满、但没有与雄海马配对的雌海马在一两月，甚至更长的时间内都不会发生流卵。

因此，发明出一种能诱导目标雌海马自然流卵，并且流卵时机可控，同时对目标雌海马无损伤的方法，对于研究海马的繁殖机制、繁殖性能、繁殖调控和人工繁殖技术等具重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于繁殖竞争原理诱导雌性灰海马自然流卵的方法，以克服现有技术中海马卵子采集需要解剖雌海马、卵子不纯或者流卵时机难以掌控等缺陷。

本发明提供一种诱导雌性灰海马自然流卵的方法，包括以下步骤：

(A)将腹部膨胀、性腺饱满、将要被采集卵子的目标雌海马置于养殖容器中；

(B)将已产过卵、离下次产卵均还有数天时间或者性腺尚未饱满的雌海马作为非目标雌海马，将该非目标雌海马置于步骤(A)中养殖容器中；

(C)将未处怀孕期的雄海马置于目标雌海马和非目标雌海马所在的养殖容器中；

(D)定时观察养殖容器的流卵情况。

优选地，所述步骤(A)中目标雌海尾数为1尾。

优选地，所述步骤(A)中目标雌海马进行标记以区分非目标雌海马，例如目标雌海马颈项上系有细棉线用以区分非目标雌海马。

优选地，所述步骤(A)中养殖容器的养殖条件为：养殖容器体积400-500升，含养殖用水300-400升，水深0.8-0.9米，水温24-26℃，养殖用水持续充气增氧。

优选地，所述步骤(A)中养殖容器为养殖桶。

优选地，所述步骤(B)中非目标雌海马体高与目标雌海马相同或相近。相同或相近的体高是为加剧竞争强度。

优选地，所述步骤(B)中非目标雌海马尾数为4-5尾。

上述涉及的非目标海马已产过卵或者性腺未饱满是为排除非目标雌海马流卵的可能性，从而确保养殖桶中所流的卵子只来自于目标雌海马。

优选地，所述步骤(C)中未处怀孕期的雄海马为：育儿囊发育良好、且未处怀孕期的雄海马。雄海马未处怀孕期是为确保雄海马是可孕的，从而确保雄海马一导入，雌海马就能启动繁殖竞争。

优选地，所述步骤(C)中未处怀孕期的雄海马尾数为1尾。

优选地，所述步骤(C)中雄海马体高高于目标雌海马和非目标雌海马1-2厘米。这是因为雌海马偏爱体高高于自身1-2厘米的雄海马。

优选地，所述步骤(D)中定时观察养殖容器的流卵情况为：目标雌海马和非目标雌海马以及雄海马接触后，每隔两小时(夜间18:00-06:00除外)观察养殖容器的流卵情况。

优选地，步骤(D)中若观察到容器底有卵子，则捞取目标雌海马观察其腹部饱满度；若腹部干瘪，则流卵结束；若腹部依旧饱满，则还有二次流卵的可能。

发明人在实验中发现：多尾性腺饱满的雌海马养殖在一起，由于繁殖竞争未启动(或者繁殖竞争强度较低)，雌海马基本没有流卵现象；但一旦往这些雌海马中引入一尾雄海马，由于繁殖竞争启动(或者繁殖竞争强度加剧)，雌海马流卵严重，可出现多尾雌海马同时流卵的现象；而且雌雄性比越偏离1:1(雌多雄少)，流卵越严重。因此，基于雌海马繁殖竞争的原理，以及竞争会导致雌海马流卵的现象，本发明旨在提供一种能诱导目标雌海马自然流卵的方法。

有益效果

本发明具有诱导时间短的优点，目标雌海马和非目标雌海马以及雄海马接触后，通常两天内就会流卵；也具有诱导率高的优点，诱导率高达70％；同时还具有对目标雌海马无损伤的优点。通过本发明所采集到的卵子，具有结构完整、成分纯净、数量清晰等优点。本发明对于研究灰海马的繁殖机制、繁殖性能、繁殖调控和人工繁殖技术等具重要的意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

本实施例提供一种诱导雌性灰海马自然流卵的方法，包括：

A、目标雌海马处理：将1尾腹部膨胀、性腺饱满，将要被采集卵子的目标雌海马置于养殖桶中，目标雌海马的体高为12-13厘米，其颈项上系有一根细棉线。养殖桶体积400-500升，含养殖用水300-400升，水深0.8-0.9米，水温24-26℃，养殖用水持续充气增氧。

B、竞争者导入：选取4-5尾均已产过卵，离下次可产卵均还有数天时间的非目标雌海马置于目标雌海马所在的养殖桶中。非目标雌海马的体高也均为12-13厘米，其颈项上也分别系有一根与目标雌海马不同颜色的细棉线。

C、繁殖竞争启动：将1尾育儿囊发育良好，且未怀孕的雄海马置于目标雌海马和非目标雌海马所在的养殖桶中。雄海马的体高为13-14厘米。

D、养殖期间，海马每天投喂两顿冰冻糠虾或者活糠虾。自目标雌海马和非目标雌海马以及雄海马接触后，每隔两小时(夜间18:00—06:00除外)观察养殖桶的流卵情况。若观察到桶底有卵子，采用虹吸法收集卵子；此外捞取目标雌海马观察其腹部饱满度；若腹部干瘪，则流卵结束；若腹部依旧饱满，则还有二次流卵的可能。

实施例2

诱导流卵时间和诱导率的验证：

采用上述方法，取15尾性腺饱满的雌海马(体高12.74±0.86cm)(即15个重复)置于养殖桶中，每桶1尾雌海马(即目标雌海马)。再往每个养殖桶中导入5尾非目标雌海马和1尾雄海马(体高14.22±0.75cm)，观察每桶目标雌海马的流卵情况和时间。结果显示，11尾目标雌海马成功实现流卵，诱导率为73.3％。在这11尾目标雌海马中，1尾在与非目标雌海马和雄海马接触后的6小时内流卵，1尾在接触后的22小时内流卵，4尾在接触后的26小时内流卵，4尾在接触后的28小时内流卵，1尾在接触后的46小时内流卵。综上，目标雌海马和非目标雌海马以及雄海马接触后，基本上两天内就会流卵。