一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法

技术领域

本发明属于多肽粉合成领域，尤其涉及一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法。

背景技术

作为世界上生猪出栏数最多的国家，我国每年生猪出栏数为7.1亿头，每头猪肺的平均质量约为1.5kg，大约可得到106.5万吨猪肺，资源非常丰富。国内动物内脏深加工和综合利用率还相当低，一方面是由于没有先进的生产加工技术和设备，无法形成产业链，使得大部分动物内脏没有经过任何加工直接出售，几乎没有其他附加值；另一方面是由于猪肺自身血腥味重、色泽差以及适口性差等原因，大多数猪肺的开发利用受到限制，经济效益较差，不仅造成大量资源的浪费，而且污染环境。目前，仅有10％猪肺被用作菜品的原料，少部分被用作提取肝素等生物药品的材料，大部分猪肺未被合理利用。

猪肺主要含蛋白质、脂肪、碳水化合物、胆固醇、灰分、维生素A、硫胺素、核黄素、尼克酸、维生素E、钙、磷、钾、钠、镁、铁、锌、硒、铜、锰等成分，是一种理想的饲料蛋白质原料。猪肺的蛋白质含量较高，具有补虚损的功效，适用于气血虚损、身体瘦弱者食用。主要用于治疗肺虚咯血，肺虚咳嗽，痰浓气臭，咽喉炎，支气管炎，痔疮发炎肿痛等症状。

我国蛋白质资源紧缺，开发利用现有的和潜在的蛋白质资源对缓解我国蛋白质资源现状具有重要意义。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的目的在于提出一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法，包括如下步骤：

(1)取新鲜猪肺，切块后浸泡于浓度为1000～3000ppm的维生素C溶液中得到混合物，维生素C溶液的体积为猪肺体积的0.5～5倍；然后将混合物绞碎得到猪肺肉糜，在猪肺肉糜中加入浓度为1000～3000ppm的维生素C溶液，维生素C溶液的体积为猪肺肉糜体积的1～10倍，得到猪肺肉糜浸泡液；

(2)对步骤(1)所述的猪肺肉糜浸泡液进行超声处理，得到去脂破壁猪肺液；调节去脂破壁猪肺液的pH为8.5～9.5，温度为50～60℃，然后加入碱性蛋白酶进行酶解反应，反应结束后，保持温度为50～60℃，再加入中性蛋白酶进行酶解反应，酶解结束后进行灭酶处理，得到酶液；

(3)在20～30℃下对步骤(2)所述的酶液进行离心处理，得到上清液，上清液经浓缩、除菌和干燥后得到所述富硒抗氧化猪肺多肽粉。

优选的，步骤(2)所述超声处理的频率为55～65kHz，超声处理的时间为10min。

优选的，步骤(2)所述碱性蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶，其从枯草芽孢杆菌中获得。

优选的，步骤(2)所述加入碱性蛋白酶进行酶解反应的时间为0.5～1.5h。

优选的，步骤(2)所述碱性蛋白酶的加入量占猪肺质量的0.2±0.02％。

优选的，步骤(2)所述中性蛋白酶为诺维信中性蛋白酶，其从枯草芽孢杆菌中获得。

优选的，步骤(2)所述中性蛋白酶的加入量占猪肺质量的0.2±0.02％。

优选的，步骤(2)所述加入中性蛋白酶进行酶解反应的时间为1.5～2.5h。

优选的，步骤(2)所述灭酶处理的方式为：将体系温度升温至90℃并维持10min。

优选的，步骤(3)所述离心处理的方式为：在大于20000r/min的转速下，采用管式离心机离心10min。

优选的，步骤(3)所述浓缩的方式为：经过100～300D的透析膜过滤，浓缩至固形物含量20％以上。

优选的，步骤(3)所述除菌的方式为：采用孔径为0.22μm的除菌过滤器过滤。

优选的，步骤(3)所述干燥为喷雾干燥，其进风温度为190～210℃，出风温度为85～95℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果包括：

本技术通过生物酶解、分离纯化的等手段，将猪肺开发成有利于肠道吸收的富硒抗氧化多肽产品，对缓解我国动物蛋白紧张现状及提高猪肺资源利用价值具有重要的意义。本方法采用生物蛋白酶酶解的方式，既能在温和条件下提取其内的有效活性成分，又能获得较高收率。

附图说明

图1为实施例1制得的富硒抗氧化猪肺多肽粉配置成不同浓度的溶液对应的DPPH自由基清除率的柱状图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法，步骤如下：

(1)取500g鲜猪肺，切块后浸泡于浓度为3000ppm的维生素C溶液中得到混合物，维生素C溶液的体积为猪肺体积的3倍；然后将混合物绞碎得到猪肺肉糜，在猪肺肉糜中加入浓度为3000ppm的维生素C溶液，维生素C溶液的体积为猪肺肉糜体积的5倍，得到猪肺肉糜浸泡液；

(2)对步骤(1)所述的猪肺肉糜浸泡液进行超声处理(超声的频率为55kHz，时间为10min)，得到去脂破壁猪肺液；调节去脂破壁猪肺液的pH为8.5，温度为60℃，然后加入1g碱性蛋白酶进行酶解反应1h，反应结束后，保持温度为60℃，再加入1g中性蛋白酶进行酶解反应2h，酶解结束后将体系温度升温至90℃并维持10min，灭酶，得到酶液；

(3)在30℃下对步骤(2)所述的酶液进行离心处理，离心转速为25000r/min，采用管式离心机离心10min，得到上清液，上清液经过300D的透析膜过滤，浓缩至固形物含量20％以上，然后采用孔径为0.22μm的除菌过滤器过滤；最后喷雾干燥(进风温度为190℃，出风温度为85℃)后得到所述富硒抗氧化猪肺多肽粉。

实施例1制备得到的富硒抗氧化猪肺多肽粉的收率为30％。

实施例2

一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法，步骤如下：

(1)取500g新鲜猪肺，切块后浸泡于浓度为1000ppm的维生素C溶液中得到混合物，维生素C溶液的体积为猪肺体积的0.5倍；然后将混合物绞碎得到猪肺肉糜，在猪肺肉糜中加入浓度为1000ppm的维生素C溶液，维生素C溶液的体积为猪肺肉糜体积的2倍，得到猪肺肉糜浸泡液；

(2)对步骤(1)所述的猪肺肉糜浸泡液进行超声处理(超声的频率为55kHz，时间为10min)，得到去脂破壁猪肺液；调节去脂破壁猪肺液的pH为9.0，温度为55℃，然后加入1g碱性蛋白酶进行酶解反应1.5h，反应结束后，保持温度为55℃，再加入1g中性蛋白酶进行酶解反应2.5h，酶解结束后将体系温度升温至90℃并维持10min，灭酶，得到酶液；

(3)在30℃下对步骤(2)所述的酶液进行离心处理，离心转速为25000r/min，采用管式离心机离心10min，得到上清液，上清液经过100D的透析膜过滤，浓缩至固形物含量20％以上，然后采用孔径为0.22μm的除菌过滤器过滤；最后喷雾干燥(进风温度为200℃，出风温度为90℃)后得到所述富硒抗氧化猪肺多肽粉。

实施例2制备得到的富硒抗氧化猪肺多肽粉的收率为25％。

实施例3

一种富硒抗氧化猪肺多肽粉的制备方法，步骤如下：

(1)取500g鲜猪肺，切块后浸泡于浓度为2000ppm的维生素C溶液中得到混合物，维生素C溶液的体积为猪肺体积的5倍；然后将混合物绞碎得到猪肺肉糜，在猪肺肉糜中加入浓度为2000ppm的维生素C溶液，维生素C溶液的体积为猪肺肉糜体积的10倍，得到猪肺肉糜浸泡液；

(2)对步骤(1)所述的猪肺肉糜浸泡液进行超声处理(超声的频率为60kHz，时间为10min)，得到去脂破壁猪肺液；调节去脂破壁猪肺液的pH为9.5，温度为50℃，然后加入1g碱性蛋白酶进行酶解反应0.5h，反应结束后，保持温度为50℃，再加入1g中性蛋白酶进行酶解反应1.5h，酶解结束后将体系温度升温至90℃并维持10min，灭酶，得到酶液；

(3)在25℃下对步骤(2)所述的酶液进行离心处理，离心转速为30000r/min，采用管式离心机离心10min，得到上清液，上清液经过200D的透析膜过滤，浓缩至固形物含量20％以上，然后采用孔径为0.22μm的除菌过滤器过滤；最后喷雾干燥(进风温度为210℃，出风温度为95℃)后得到所述富硒抗氧化猪肺多肽粉。

实施例3制备得到的富硒抗氧化猪肺多肽粉的收率为22％

一、硒含量的测试

采用氢化物发生-原子荧光法测试

仪器工作条件：灯电流80mA；负高压270V；原子化器温度200℃；原子化器高度8mm；载气流量300mL/min；屏蔽气流量800mL/min；读数时间10s；延迟时间1.5s；注入量1mL；测量方法为校准曲线法；读数方式为峰面积法。

样品处理：精确称取0.5000g样品于锥形瓶中，再向其中加入混酸(硝酸：高氯酸体积比为3：2)15mL，盖住瓶口过夜，然后将锥形瓶放在电热板消解，调节温度160℃，持续加热，待瓶中液体剩余体积为2mL，样品完全消解停止加热，冷却。再加入50％盐酸溶液5mL，置于沸水浴中加热20min，取下锥形瓶，冷却至室温，过滤，用一级水冲洗滤渣至少3次，清洗液合并至25mL容量瓶中，定容至刻度线，混匀，同时做空白试验(空白实验除了不加样品，其他均与样品处理方法相同)。与标准曲线在同一条件下进行测定。

标准曲线的绘制：准确吸取20g/L硒标准工作液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，用10％盐酸溶液定容至10mL容量瓶中，在原子荧光光度计上测定荧光度并绘制标准曲线。结果表明，硒的浓度在0～20g/L，浓度(C)与荧光度(I)呈良好的线性关系，其线性回归方程为I＝86.6651C+14.1737，相关系数r＝0.9996。

将处理好的实施例1的样品上机检测，硒含量为2.6mg/kg。

应用上述方法，测试实施例1～3所述的硒含量见表1。

表1硒含量一览表

二、抗氧化能力测试

通过分光光度计法对本发明实施例1所得富硒抗氧化猪肺多肽粉的抗氧化能力进行测试，结果见图1。

DPPH·(即，1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)，其为稳定的自由基，在甲醇或乙醇溶液中显示为紫色，在517nm有较强的紫外吸收峰。当DPPH·溶液中存在抗氧化剂时，DPPH·中的孤对电子被配对，溶液的颜色由紫色变为黄色，在517nm的吸收值降低。通过DPPH·法对不同富硒抗氧化猪肺多肽粉的抗氧化能力进行测试，具体测试过程如下：

(1)将DPPH·溶解至95％乙醇中制成浓度为0.1mmol/L DPPH·(95％乙醇)溶液；

(2)将实施例1的富硒抗氧化猪肺多肽粉的样品分别用蒸馏水溶解，配制成浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml的样品溶液；

(3)将1.5mL蒸馏水加入1.5mL含0.1mmol/L DPPH·的(95％乙醇)中，混匀并在25℃保温30min，在517nm处测量吸光度值，计为A

图1为实施例1制得的富硒抗氧化猪肺多肽粉配置成不同浓度的溶液对应的DPPH自由基清除率的柱状图，通过图1可以看出，实施例1中随着富硒抗氧化猪肺多肽粉质量浓度的减小，DPPH自由基清除率缓慢减小，始终保持在60％以上。

以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。