一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法

技术领域

本发明涉及一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法。

背景技术

大白菜叶柄黑点症严重影响大白菜的品质，降低商品价值，给生产者、经营者和消费者造成巨大损失。引起大白菜叶柄黑点症发生的机制尚不完全清楚。前人研究表明，大白菜叶柄黑点症是一种生理性病害，是基因型和环境因素共同作用的结果，过量施用N肥是引起此症的重要因素。不同形态氮素营养对大白菜叶柄黑点症的发生也有影响，其中铵态氮促进大白菜叶柄黑点症发生的作用高于硝态氮和酰胺态氮。高晓蓉等研究发现，叶柄黑点症的发生与品种有关，因此我们有望从育种的角度解决叶柄黑点症的问题。

大白菜叶柄黑点症田间鉴定一般都在收获期时进行，费时费工，且周期较长，不能应用于抗叶柄黑点症育种工作。因此建立一套快速有效的大白菜叶柄黑点症鉴定方法，对大白菜抗叶柄黑点症研究及育种具有极其重要的作用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，该方法对大白菜叶柄黑点症抗性进行鉴定，具有省时省力，且不受环境因素限制的特点，同时鉴定结果准确可靠。

本发明是采用以下技术方案实现的：

一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，包括以下步骤：

(1)将1/2MS培养基高温灭菌后降温至50℃～60℃；然后加入硝酸铵溶液，以使得培养基中硝酸铵浓度为10mmol/L，将培养基冷却凝固后备用；

(2)挑选颗粒饱满的大白菜种子，消毒灭菌后备用；

(3)将消毒灭菌后的大白菜种子播种于步骤(1)凝固后的培养基中，然后在温度为25℃，光照强度为1200lx的组培室中进行培养；

(4)培养4～6周后，统计黑点数，以判断大白菜品种叶柄黑点症的抗性。

优选的，步骤所述灭菌温度为121℃，灭菌时间为20min。

优选的，步骤(2)采用质量浓度为75％乙醇溶液和质量浓度为10％次氯酸钠溶液对大白菜种子进行消毒灭菌。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，该方法利用组培方式鉴定大白菜叶柄黑点症抗性，相比田间鉴定及水培鉴定，更加省时省力，且不受环境因素限制，减少了环境因素的影响，获得的数据相对更加可靠。

附图说明

图1为实施例1中实验组和对照组大白菜叶柄黑点症的症状表现；

图2为实施例3中不同大白菜品种叶柄黑点症的症状表现。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，具体步骤如下：

(1)将1/2MS培养基高温灭菌(121℃，20min)后降温至50℃；然后加入硝酸铵溶液，以使得培养基中硝酸铵浓度为10mmol/L，将培养基倒入100mL培养瓶中，冷却凝固后备用；以不加硝酸铵的培养基作为对照；

(2)挑选颗粒饱满的改良青杂3号大白菜种子，消毒灭菌(75wt％乙醇溶液和10wt％次氯酸钠溶液)后备用；

(3)将消毒灭菌后的大白菜种子播种于步骤(1)凝固后的培养基中(每瓶播种5颗种子，后续间苗至每瓶保留3株植株)，然后将培养瓶在温度为25℃，光照强度为1200lx的组培室中进行培养；

(4)培养4周后，观察黑点发生情况，以判断此方法的可行性；

结果如图1所示，其中图1(a)为培养基中添加硝酸铵的实验组，图1(b)为培养基中未添加硝酸铵的对照组。从图1中可以看出组培情况下加硝酸铵可诱发叶柄黑点症。

实施例2

一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，具体步骤如下：

(1)将1/2MS培养基高温灭菌121℃20min后，待培养基降温至50-60℃，分别加入硝酸铵溶液和NaCl溶液处理培养基，并控制两种处理的终浓度皆为10mmol/L，将培养基混匀后倒入100ml左右至大号培养瓶中。硝酸铵溶液处理的培养基为高氮组、NaCl处理的为高盐组，同时留一组空白对照，所有处理组及对照组设置10瓶重复。

(2)挑选颗粒饱满的改良青杂3号大白菜种子，消毒灭菌(75wt％乙醇溶液和10wt％次氯酸钠溶液)后备用；

(3)将消毒灭菌后的大白菜种子播种于步骤(1)凝固后的培养基中(每瓶播种5颗种子，后续间苗至每瓶保留3株植株)，然后将培养瓶在温度为25℃，光照强度为1200lx的组培室中进行培养；

(4)培养5周后，统计黑点数，以判断高N和高盐对大白菜品种叶柄黑点症形成的影响；

结果如表1所示，表明高N是诱发叶柄黑点症的主要因素。

表1.不同培养基组培苗发生小黑点数据统计

实施例3

一种鉴定大白菜叶柄黑点症抗性的方法，具体步骤如下：

(1)将1/2MS培养基高温灭菌(121℃，20min)后降温至55℃；然后加入硝酸铵溶液，以使得培养基中硝酸铵浓度为10mmol/L，将培养基倒入100mL培养瓶中，冷却凝固后备用；

(2)挑选颗粒饱满的不同品种的大白菜种子，消毒灭菌(75wt％乙醇溶液和10wt％次氯酸钠溶液)后备用；

(3)将消毒灭菌后的大白菜种子播种于步骤(1)凝固后的培养基中(每瓶播种6颗种子，后续间苗至每瓶保留3株植株)，然后将培养瓶在温度为25℃，光照强度为1200lx的组培室中进行培养；

(4)培养6周后，统计黑点数，以判断不同大白菜品种叶柄黑点症的抗性。

结果如图2和表2所示，表明不同大白菜品种叶柄黑点症的抗性也不同。

表2.不同品种组培苗发生小黑点数据统计

需要说明的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例，显然本发明不仅仅限于以上实施例，还可以有其他变形。本领域的技术人员从本发明公开内容直接导出或间接引申的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。