一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法及其应用

技术领域

本发明涉及家蚕生物技术的领域，尤其是涉及一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法及其应用。

背景技术

家蚕是以桑叶为食料、吐丝结茧的经济昆虫。家蚕属于鳞翅目模式昆虫，其除了具有模式生物的基本要素外，还有自身的特殊优势，例如基础研究历史悠久、多重测序数据和已实现人为控制等。家蚕作为现代生命科学研究的模式生物，已被应用到环境安全检测、抗菌药物筛选和人类疾病模型建立等多个方面，极大地推动了基础科学研究的发展。

在对其生物机理进行研究时，往往需要对家蚕进行处理，添加一些制剂（如酶制剂或其他药剂）。而目前采用的手段，往往是对家蚕进行简单的浸染，其效果较差且所需时间较长。本申请发明人在长期的家蚕研究过程中，研究出了一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法及其应用，家蚕化蛹后对其蛹腹节处注射制剂，不仅可定量注射具有较好的效果而且操作时间较短。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法，包括以下步骤：

S1：家蚕饲养至化蛹；

S2：对蛹腹面进行消毒；

S3：对蛹腹节处进行注射；

S4：注射后进一步培养。

通过采用上述技术方案，待家蚕化蛹后消毒，并对其蛹腹节处注射制剂，注射后进一步培养，通过对家蚕化蛹后的蛹腹节处进行注射，不仅具有较好的添加制剂的效果而且操作所需时间较短。

优选的，所述步骤S2中，通过75%酒精对蛹腹面进行擦拭消毒。

通过采用上述技术方案，在对蛹腹节进行注射前，先用75%酒精对蛹腹面进行消毒，在一定程度上避免蛹腹面上残留的其他制剂或微生物对注射效果的影响。

优选的，所述步骤S3中，从底端开始数在蛹第3腹节中间由尾部向头部进行水平注射。

通过采用上述技术方案，在该位置注射制剂，可定量注射制剂，具有较好的注射效果，方便后续观察实验结果，且减小因注射位置不当引起的蚕蛹死亡概率，减小对蚕蛹生长的影响。

优选的，所述步骤S3中，在蛹第4腹节中间进行垂直注射。

通过采用上述技术方案，在蛹第4腹节中间进行垂直注射，可定量注射药剂，也具有较好的注射效果，便于后续观察实验结果，且减小因注射位置不当引起的蚕蛹死亡概率，减小对蚕蛹生长的影响。

优选的，所述步骤S3中，采用微量注射器对蛹腹进行注射。

通过采用上述技术方案，采用微量注射器进行注射，因注射位置的缘故，只需较少量的制剂即能达到较好的注射效果，且可以进行定量注射，与此同时微量注射器注射针头较小，能减小对蚕蛹生长的影响。

优选的，所述步骤S3中注射时针头进入蛹内2~3mm。

通过采用上述技术方案，控制注射时针头进入的深度，不仅能保证具有较好的注射效果，而且也能减小对蚕蛹生长的影响，保证后续能从家蚕中观察到明显且具有统计学意义的实验结果。

优选的，所述步骤S4中，注射后将蛹放置实验室温度25~26℃，相对湿度83~87%进一步培养。

通过采用上述技术方案，在注射完毕后，在实验室温度25~26℃，相对湿度83~87%进一步培养，使蚕蛹能较好地生长，进而便于后续观察相应的实验结果。

优选的，所述步骤S1中家蚕饲养至化蛹，待其蛹期第三天再进行后续消毒注射处理。

通过采用上述技术方案，选择在家蚕饲养化蛹后的蛹期第三天再进行后续消毒注射处理，减小对蚕蛹生长的影响，并且在一定程度上降低蚕蛹的死亡率。

一种如权利要求1~8任意一项所述的实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法在检测注射制剂对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化影响的应用。

通过采用上述技术方案，将该注射方法用于检测注射制剂对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化影响，不仅能在一定程度上加快试验进程，而且减小对家蚕生长的影响。

综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

家蚕化蛹后对其蛹腹节处注射制剂，且可以定量注射制剂，不仅具有较好的效果而且操作时间较短；

从底端开始数在蛹第3腹节中间由尾部向头部进行水平注射、在蛹第4腹节中间进行垂直注射，具有较好的注射效果，方便后续观察实验结果，且减小因注射位置不当引起的蚕蛹死亡概率，减小对蚕蛹生长的影响；

将该注射方法用于检测注射制剂对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化影响的应用，不仅能在一定程度上加快试验进程，而且减小对家蚕生长的影响。

附图说明

图1是实施例1中向蚕蛹注射制剂的示意图，从底端开始数在蛹第3腹节中间由尾部向头部进行水平注射；

图2是实施例2中向蚕蛹注射制剂的示意图，在蛹第4腹节中间进行垂直注射。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1

一种实验室内家蚕活体添加制剂的处理方法，包括以下步骤：

S1：家蚕饲养至化蛹，待其蛹期第三天；

S2：将蛹腹面向上，通过75%酒精对蛹腹面进行擦拭消毒；

S3：对蛹腹节处进行注射，采用微量注射器，从底端开始数在蛹第3腹节中间由尾部向头部进行水平注射，注射时针头进入蛹内2~3mm，参考图1；

S4：注射后进一步培养，注射后将蛹放置实验室温度25~26℃，相对湿度85%进一步培养。

实施例2

实施例2与实施例1的区别在于，步骤S3中对蛹腹节注射时的位置不同，在蛹第4腹节中间进行垂直注射。

包括以下步骤：

S1：家蚕饲养至化蛹，待其蛹期第三天；

S2：将蛹腹面向上，通过75%酒精对蛹腹面进行擦拭消毒；

S3：对蛹腹节处进行注射，采用微量注射器，在蛹第4腹节中间进行垂直注射，注射时针头进入蛹内2~3mm，参考图1；

S4：注射后进一步培养，注射后将蛹放置实验室温度25~26℃，相对湿度85%进一步培养。

实施例3-4

实施例3-4与实施例1的区别在于步骤S4中相对湿度不同，实施例3的相对湿度为83%，实施例4的相对湿度为87%。

应用例1

检测注射制剂对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化影响

步骤一：准备注射的制剂；

步骤二：按照实施例1中的方法将制剂注射至蚕蛹体内；

步骤三：检验蚕卵内相应制剂的影响。

其中，步骤一中准备的制剂可以是蛋白酶激活剂或抑制剂（如影响脂质代谢的PPAR，peroxisome proliferator-activated receptor信号通路的激活剂或抑制剂；或影响其他代谢途径（如蛋白质代谢）信号通路中的激活剂或抑制剂），也可以是毒性因子（如微塑料等）。

并且，步骤三中，将注射后的蛹收集，对注射后24小时、48小时、以及羽化后的腹中卵收集，使用PPAR酶联免疫试剂盒检测酶活性或检测毒性因子水平。

应用例2-4

应用例2-4与应用例1的区别在于，步骤二中采用添加制剂的处理方法不同，请见表1：

结果分析

对于一些蛋白酶激活剂或抑制剂，在步骤三的检测过程中，检测到PPAR的酶活性升高或降低，则能较好地说明该蛋白酶激活剂或抑制剂对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化有影响。

对于一些毒性因子，在步骤三的检测过程中，检测到毒性因子，能较好地说明该毒性因子对雌性家蚕生殖以及下一代的卵孵化有影响。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例作出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利范围内都受到专利法的保护。